CC BY
36
медщинскаяи^унолот* Оригинальные статьи
© 2004, СПб РО РААКИ
ОЦЕНКА ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО ЭФФЕКТА ТЕРАПИИ С ПРИМЕНЕНИЕМ ЭРИТРОПОЭТИНАУ БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ
Кожевников B.C., Коненкова Л.П.,
Сизиков А.Э., Зонова Е.В., Королёв М.А.,
Пронкина Н.В., Евсюкова Е.В., Меняева Е.В.,
Фролов Н.И., Козлов В.А.
ГУ НИИ клинической иммунологии Сибирского отделения РАМН, Россия
Резюме. Целью данной работы явилась попытка оценки иммуномодулирующей активности эритропоэ-тина у больных ревматоидным артритом. До и после курса эритропоэтина определяли клинические и лабораторные показатели, включая процент основных субклассов лимфоцитов, функциональную активность фагоцитов и эффекторов ГЗТ, концентрацию IgG в сыворотке. Сравнение средних величин до и после лечения не выявили достоверных отличий. Корреляционный анализ между величинами до лечения и некоторыми производными величинами, оценивающими направленность изменений показателей после лечения, выявил высокую достоверную отрицательную корреляцию для многих показателей иммунного статуса. Наибольшее количество таких корреляций было выявлено при использовании в качестве производной величины частного от деления величин после лечения на исходные величины. Полученные данные свидетельствуют о высокой иммуномодулирующей активности эритропоэтина у больных ревматоидным артритом, проявляющейся в снижении высоких и повышении низких показателей иммунного статуса, а также позволяют рекомендовать представленный метод анализа для оценки иммуномодулирующих свойств лекарственных препаратов в клинических исследованиях.
Ключевые слова: эритропоэтин, иммуномодуляция, ревматоидный артрит.
Kozhevnikov V.S., Konenkova L.P., Sizikov А.Е., Zonova E.V., Korolev M.A., Pronkina N.V.,
Evsyukova E.V., Meniaeva E.V., Frolov N.I., Kozlov V.A.
THE ESTIMATION OF IMMUNOMODULATORY EFFECT OF THERAPY
WITH ERYTHROPOIETIN IN RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS
Abstract. The aim of the investigation was to estimate an immunomodulatory activity of erythropoietin in rheumatoid arthritis patients. Clinical and laboratory data including a percent of main lymphocyte subclasses, phagocyte and DTH-effector activity and a serum concentration of IgG were checked-up before and after the course of erythropoietin. No significant differences were obtained between these mean values before and after the treatment. Correlation analysis revealed high significant negative correlations for many immune parameters between values before the treatment and some derived quantities that estimate the direction of changes in values tested after the treatment. The most number of the correlations were obtained when the quotient (values after the treatment were divided to values before the treatment) was used as a derived quantity. Our data show that erythropoietin can act as immunomodulator in rheumatoid arthritis patients. Its activity in these patients is reflected as
-------------------------------------- increasing low and decreasing high values of immune
Адрес для переписки: parameters during the therapy. The data allow us to
Кожевников B.C., 630099, Новосибирск-99, consider the correlation analysis in modifications pre-
ул. Ядринцовская, 14, ГУ НИИКИ СО РАМН. sented here as a method for statistical estimation of im-
Тел.: (3832)-28-21-20. munomodulatory features of drugs in clinical investiga-
Факс (3832)-25-05-22. tions as well. (Med. Immunol., 2004, vol.6, № 6, pp
E-mail: vslki@ngs.ru 557-562)
Рекомбинантный человеческий эритропоэтин начал применяться в качестве терапевтического препарата для лечения анемии при почечной недостаточности с 1988 [15], и несколько позже была доказана его эффективность в лечении анемии, хронического воспаления [7,13] и снижении активности ревматоидного воспаления [12]. Одним из первых экспериментальных доказательств иммуносупрессив-ных свойств эритропоэтина (ЭП) явилось опосредованное им снижение антителообразования у постги-поксичных мышей [1]. Позже была описана и способность ЭП стимулировать некоторые функции им-мунокомпетентных клеток, включая продукцию цитокинов [5, 6, 8, 9, 14]. Эти данные позволяют отнести ЭП к препаратам, обладающим иммуномодулирующей активностью, проявляющейся разнонаправленным действием (супрессивным или стимулирующим) в отношении разных функций иммунной системы. Вместе с тем, в работе William J. с соавт. (1998) представлены данные, демонстрирующие отсутствие достоверных отличий исследованных ими параметров иммунного статуса до и после применения ЭП, а также большую вариабельность некоторых из этих параметров (например, концентрации сывороточного IL-6). Применяя ЭП в лечении больных ревматоидным артритом, мы также отметили значительные, намного превышающие ошибку метода, изменения многих параметров иммунного статуса у больных после лечения. Такие разнонаправленные (в сторону увеличения или уменьшения) изменения, при их статистической значимости, могли бы свидетельствовать об иммуномодулирующем эффекте ЭП, заключающемся в снижении высоких и повышении низких показателей функций иммунной системы больных.
Целью данной работы явилась попытка оценки иммуномодулирующей активности эритропоэтина в отношении показателей иммунного статуса больных ревматоидным артритом (РА), которые, разнонап-равлено изменяясь в процессе лечения, достоверно не различались по средним величинам до и после применения эритропоэтина.
Материалы и методы
В исследование включено 17 пациентов (16 женщин, 1 мужчина) в возрасте от 20 до 67 лет (средний возраст 46,4 года), страдающих ревматоидным артритом (диагноз верифицирован в соответствии с критериями ACR, 1987 г), госпитализированных в ревматологическое отделение ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН. Длительность заболевания в исследуемой группе составляла от 2 до 15 лет. У всех пациентов регистрировалась активность ревматоидного воспаления II-III степени (продолжительность утренней скованности более 60 минут, количество припухших суставов более 9, количество бо-
лезненных суставов более 10, уровень боли по визуальной аналоговой шкале (ВАШ) более 6 см, высокий уровень СОЭ - более 28 мм/ч и СРВ - более 18 мг/л). У двух пациентов в момент исследования определялась II рентгенологическая стадия заболевания, у пяти - III и у десяти - IV. Все пациенты, включенные в исследование, имели анемию (гемоглобин < 120 г/л) в качестве одного из системных проявлений основного заболевания. У 10 пациентов (58,8%) имела место анемия легкой степени (НЬ 119 - 90 г/ л), у 7 (41,2%) - средней степени (НЬ 89 - 70 г/л) тяжести. В 100% случаев анемия носила нормоци-тарный, норморегенераторный характер. У 8 пациентов (47%) анемия имела гипохромный характер. В течение всего времени исследования, все пациенты получали метотрексат в дозе 10 мг в неделю, дик-лофенак 100 мг в сутки, препараты железа (сорби-фер-дурулес или ферроплекс в стандартных суточных дозах), препараты кальция.
После получения информированного согласия на участие в исследовании, пациентам назначался рекомбинантный эритропоэтин-бета (Рекормон, Boeh-ringer Mannheim) в дозе 20 МЕ/кг в сутки подкожно ежедневно в течение 10 дней. Перед началом исследования и после завершения курса терапии эритро-поэтином, проводилась оценка состояния пациента по клиническим и лабораторным показателям.
Периферическую кровь здоровых доноров и больных забирали разовым шприцем из локтевой вены и 10 мл добавляли в пробирку с 200 Ед. раствора гепарина, перемешивали, забирали 50 мкл для определения количества лимфоцитов и 3 мл для оценки продукции перекиси водорода моноцитами. Затем добавляли 10% р-р желатина (до 1% концентрации) и инкубировали 35 мин при 37°С. Из отстоявшейся лейковзвеси забирали 50 мкл для тестирования фагоцитоза, 1 мл для определения продукции перекиси водорода гранулоцитами, 1 мл для поверхностного маркирования и 1 мл для оценки активности клеточных эффекторных функций.
Кровь для определения лимфоцитоза переносили в пластиковые пробирки для иммуноцитометрии, содержащие 450 мкл лизирующе-фиксирующего раствора (ЛФР, Becton Dickinson, USA), содержащего этидиум бромид (ЭБ) в разведении 1 : 107, перемешивали и инкубировали при комнатной температуре 15 мин, после чего хранили в течение дня при 4°С до исследования. Количество лейкоцитов считали в камере Горяева, а процент лимфоцитов определяли с помощью проточного цитометра FACS-Calibur (Becton Dickinson, USA) в программе CellQuest (Becton Dickinson, USA), используя параметры прямого (FSC), бокового (SSC) светорассеяния и канала флюоресценции (FL-2). Комбинации регионов, соответствующие распределению лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов графика FSC против SSC, и ядерных клеток (окрашенных ЭБ) гра-
фика РЬ-2 против БЭС комбинировали в гейты соответственно лимфоцитов, моноцитов и гранулоци-тов. Соотношение гейтов приводили к 100%, высчитывали % лимфоцитов и, через содержание лейкоцитов, - абсолютное их количество.
Лейковзвесь для исследования фагоцитоза помещали в лунки планшета для иммунологических реакций (МЕДПОЛИМЕР, Санкт-Петербург), содержащие по 10 мкл латекса, нагруженного гамма глобулином (Биопрепарат, Санкт-Петербург), меченного ФИТЦ. Планшет инкубировали 1 час при 37°С во влажной камере, клетки суспендировали и переносили в цитометрические пробирки, содержащие 450 мкл ЛФР. После 15 мин инкубации при комнатной температуре материал хранили при 4°С в течение дня до исследования. Иммуноцитометрию проводили с использованием параметров светорассеяния (ЕБС и Б5С) для выделения областей моноцитов и гранулоцитов, из которых строили гистограммы по каналу флюоресценции ФИТЦ для определения процента светящихся клеток.
Лейковзвесь для поверхностного маркирования переносили в пробирку с 5-ю мл холодного забуфе-ренного физиологического раствора с pH 7,4 (ЗФР), осаждали центрифугированием (1000 об./мин 5 мин), удаляли надосадочную жидкость и ресуспен-дировали в 1 мл ЗФР с 0,1% азида натрия, 0,02% ЭДТА и 10% пулированной АВ сыворотки (ЗФР-С).
В лунки планшетов для иммунологических реакций (МЕДПОЛИМЕР, Санкт-Петербург) разносили моноклональные антитела, меченные флюоресцеином изотиоцианатом (ФИТЦ) и/или фикоэритрином (ФЭ), в количестве, рекомендуемом производителем (Сорбент и МедБиоСпектр, Москва, Россия; моноклональные антитела для выявления НАЕ-9+ эрит-роидных клеток любезно предоставлены доктором Мечетнером Е.Б.), и 50 мкл лейковзвеси. Планшет инкубировали в темном месте при комнатной температуре 15 мин и клетки дважды отмывали ЗФР-С: в лунки добавляли по 150 мкл ЗФР-С, центрифугировали 5 мин при 1000 об./мин, надосадок удаляли, осадок клеток суспендировали встряхиванием планшета на шейкере и повторяли процедуру, используя 200 мкл ЗФР-С. После удаления надосадка осадок клеток ресуспендировали и переносили в пробирки для
иммуноцитометрии с 450 мкл ЛФР, перемешивали, инкубировали 15 мин при комнатной температуре и хранили при 4°С в течение дня до исследования.
Иммуноцитометрию проводили с использованием параметров светорассеяния для определения областей лимфоцитов и моноцитов, из которых строили графики каналов флюоресценции ЕЬ-1 (ФИТЦ) и ЕЬ-2 (ФЭ). Уровень экспрессии НЬА-БК на моноцитах оценивали с помощью гистограммы, в которой устанавливали дополнительный маркер, разделяющий пик позитивных клеток на высоко- и низкоэкспрессирую-щие клетки, ориентируясь на средние данные, полученные при исследовании здоровых доноров.
Данные методы выполняли в соответствии с описаниями, представленными в инструкциях производителей антител и рекомендациями к проточному цитометру.
Активность ГЗТ-эффекторов исследовали в соответствии с методом, подробно представленным нами ранее [3, 4]. Лейковзвесь дважды отмывали ЗФР и один раз средой 11РМ1 1640 с 10% пулированной сывороткой человека IV группы (все отмывки - 200g, 5 мин). Надосадок сливали и 5 мкл клеточного осадка суспендировали в 1 мл среды 11РМ11640 с 20% инактивированной сыворотки крупного рогатого скота. Данную клеточную взвесь разносили по 50 мкл в круглодонные лунки 96-луночных планшетов для иммунологических реакций, содержащие 50 мкл среды 11РМ1 1640 (контроль), 50 мкл среды с 10 мкг/мл (опыт 1) и 50 мкг/мл (опыт 2) фитогемагглютинина (01£со, США). После инкубаций при 4°С (1 час) и при 37°С (18 часов) во влажном воздухе с 5% С02 планшет инкубировали 15 мин при комнатной температуре под углом к горизонтали примерно в 80°. Клетки, собравшиеся на нижних стенках лунок (не прилипшие во время инкубации) удаляли. Для учета прилипших клеток в лунки добавляли 80 мкл холодной среды, инкубировали при 4°С 1 час, энергично суспендировали, добавляли 40 мкл 10% уксусной кислоты и подсчитывали количество клеток в камере Горяева.
Оценку активности клеточных эффекторных функций проводили с помощью трёх показателей, вычисляемых с использованием полученного в лунках количества клеток (использовали среднее значение результатов двух однотипных лунок - дублей): индек-
Табл.1. ДИНАМИКА КЛИНИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ РАУ ПАЦИЕНТОВ ИССЛЕДУЕМОЙ ГРУППЫ НА ФОНЕ ЛЕЧЕНИЯ
Показатель До лечения (в среднем по группе) После лечения (в среднем по группе)
Продолжительность утренней
скованности (мин) 150±6,78 45±5,39*
Количество припухших суставов 15+8,51 11 ±7,24*
Количество болезненных суставов 18±3,47 13+1,76*
Уровень боли по ВАШ (см) 6,7±0,97 3,5±0,72*
Примечание: * - достоверные изменения (р < 0,05)
са миграции (ИМ), индекса ингибиции миграции (ИИМ) и показателя эффекторных функций (ПЭФ).
ИМ представляет собой частное от деления количества клеток в опыте 1 (с низкой дозой ФГА, стимулирующей миграцию гранулоцитов и моноцитов) на таковое в контроле и характеризует подвижность клеток в ответ на стимул. ИИМ равен частному от деления количества клеток в опыте 2 (с оптимальной дозой ФГА, стимулирующей продукцию лимфоцитами факторов ингибиции миграции) на таковое в контроле и характеризует потенциальную активность лимфоцитов - продуцентов факторов ингибиции миграции (эффекторов гиперчувствительности замедленного типа). ПЭФ - интегральный показатель активности ГЗТ-эффекторов (лимфоцитов и гранулоцитов с моноцитами), представляющий собой частное от деления ИМ на ИИМ.
Результаты и обсуждение
Клинические и лабораторные исследования, основные результаты которых представлены в таблицах 1 и 2, позволяют говорить о достоверном улучшении показателей красной крови и снижении активности ревматоидного воспаления у пациентов исследуемой группы после проведения курса терапии эритропоэтином. Эти данные полностью соответствуют данным литературы [7,12,13], посвященным применению ЭП при ревматоидном артрите, в связи с чем подробно нами не обсуждаются. Основное наше внимание, в соответствии с целью работы, было уделено исследованию возможного иммуномодулирующего действия ЭП.
В табл. 3 представлены результаты сравнения средних величин, характеризующих исследованные
Табл.2. ДИНАМИКА ЛАБОРАТОРНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ПАЦИЕНТОВ ИССЛЕДУЕМОЙ ГРУППЫ НА ФОНЕ ЛЕЧЕНИЯ
Показатель До лечения (в среднем по группе) После лечения (в среднем по группе)
Эритроциты (х 1012/л) 3,84+0,89 4,49±0,32*
Гемоглобин (г\л) 95,87±16,29 109,93±12,11*
Гематокрит (%) 26,18±3,13 29,93±1,85*
РеТИКуЛОЦИТЫ (°/оо) 4,18±2,22 12,31 ±5,87*
СОЭ (мм\ч) 42,8±11,14 33,1±10,23*
СРБ (мг\л) 46,5±7,97 22,8±4,96*
Сывороточное железо (мкМоль\л) 10,7+4,55 9,8±2,18
ОЖСС (мкМоль\л) 62,1 ±5,82 59,8±5,51
Примечание: * - достоверные изменения (р < 0,05)
Табл. 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СРАВНЕНИЯ СРЕДНИХ ВЕЛИЧИН ИССЛЕДОВАННЫХ ПАРАМЕТРОВ ИММУННОГО СТАТУСА ДОНОРОВ И БОЛЬНЫХ РАДО И ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ
Исследованный параметр Доноры Больные
до лечения после лечения
CD3 67+0,5 (89) 63+2,7* 66±2,1
CD4 39±0,6 (109) 41 ±3,3 41±2,9
CD8 25±0,6 (100) 23±2,3 25±1,9
CD20 11+0,3 (76) 13+2,4 12±2,0
НАЕ-9 1,4±0,07 (28) 2.2±0,35** 1,9±0.21**
ПЭФ 4,3±0,25 (86) 2.6±0,29** 2,8±0,34*
Фагоцитоз (Мн) 69+0,8 (83) 56±3,0*** 52±3,4***
ПАМ 3,2±0,14 (57) 2,8+0,28 3,0+0,37
DR+ Мн 89+0,6 (85) 91±1,1 91±1,0
DR+ в/э Мн 0,52+0,02 (26) 0,5±0,01 0,4+0,02***
Фагоцитоз (Гр) 81 ±0,9 (83) 59±6,2*** 57±4,1***
ПАН 3,4±0,16 (84) 3,1+0,45 4,5±0,57
Примечание: *,**,***. достоверность различий средних величин от группы доноров соответственно Р<0,05; <0,01; <0,001 (критерий I Стъюдента); достоверных различий между представленными средними величинами до и после лечения не было выявлено ни параметрическим, ни непараметрическим критериями (Стъюдента и Вилкоксона) для зависимых выборок.
количественные и функциональные параметры иммунной системы больных РА до и после применения ЭП. Достоверных отличий между величинами до и после лечения не было выявлено, независимо от того, были показатели до лечения в пределах нормы или вне нормативных значений.
Учитывая возможное существование изменений, отражающих модуляции иммунных параметров в результате лечения ЭП (по принципу: высокие показатели снижаются, низкие - повышаются), мы провели корреляционный анализ между исходными значениями показателей (обозначив их как ряд значений «X»), их значениями после лечения («У») и двумя производными величинами, отражающими тенденции изменения показателей. В качестве таких производных величин мы использовали разность между значениями, полученными после лечения, и таковыми до лечения («Y-Х»), и частное от деления показателя после лечения на таковое до лечения («Y/ X»). Такой метод статистического анализа был применен потому, что, во-первых, многие показатели менялись на величины, значительно превышающие ошибку метода, и, во-вторых, направленность изменений у разных пациентов была прямо противоположна.
Таким образом, мы попытались ответить на вопрос, отражают ли полученные изменения и тенденции возможный иммуномодулирующий эффект ЭП, или есть эффект случайного распределения изменений показателей иммунной системы до и после лечения.
Результаты корреляционного анализа представлены в табл. 4. Высокие положительные достоверные коэффициенты корреляции между величинами до и после лечения (rX;Y) были получены для всех основных популяций лимфоцитов (CD3-, CD4-, CD8- и
СВ20-позитивных клеток). В отсутствие достоверных различий между средними величинами эти результаты могут свидетельствовать только о том, что исходно высоким величинам до лечения соответствуют высокие после, а исходно низким - низкие после, причем изменяться они могут как в большую, так и в меньшую сторону случайным образом. Сам разброс данных величин до лечения (процент СО-позитивных клеток) у разных больных зависит, скорее всего, от «предлечен-ности» цитостатиками. Для остальных исследованных параметров достоверных корреляций между величинами до и после лечения выявлено не было.
Оценка тенденций изменений показателей в зависимости от их исходной величины выявила высокие отрицательные коэффициенты корреляции для большинства исследованных параметров. Параметрический метод расчета взаимосвязи между исходной величиной и разностью между величиной после лечения и исходной (гХ;У-Х) выявил 6 достоверных коэффициентов корреляции, при этом все они совпали с результатами параметрического метода расчета гХ;У/Х (между исходной величиной и частным от деления величины после лечения на исходную), однако последний метод выявил ещё две достоверных корреляции. Это связано с тем, что ряд производных величин, представляющих собой частное от деления показателей, чаще имеет правильное распределение, чем ряд их разностей. В обоих случаях непараметрический метод выявил по 5 достоверных корреляций, из которых по 1 не совпали с результатами параметрического метода, выявив, тем самым, дополнительную корреляционную зависимость.
Таким образом, вычисление гХ;У/X параметрическим и непараметрическим методом позволило в отсутствие достоверных изменений средних величин
Табл. 4. КОРРЕЛЯЦИОННЫЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ВЕЛИЧИН ИССЛЕДОВАННЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ДО И ПОСЛЕ ЛЕЧЕНИЯ
Исследованный параметр r/(X/Y) r/(X/(Y-X) (п /нп)) r/(X/(Y:X) (п /нп))
CD3 0,68* -0,63* / -0,57* -0,75* / -0,69**
CD4 0,88** -0,50/-0,35 -0,63* / -0,47
CD8 0,76** -0,59 / -0,49 -0,51 /-0,39
CD20 0,88** -0,53/-0,42 -0,33/-0,36
НАЕ-9 -0,31 -0,81 **/-0,69** -0,79**/-0,71**
ПЭФ 0,01 -0,64* / -0,75* -0,73* / 0,47
Фагоцитоз (Мн) -0,20 -0,43/-0,76* -0,78* / -0,76**
ПАМ 0,22 -0,47/-0,13 -0,38/-0,76**
DR+Mh 0,30 -0,66/-0,60 -0,65 / -0,61
DR+ в/эМн -0,72 -0,92** / -0,80** -0,87* / -0,79**
Фагоцитоз (Гр) 0,22 -0,80** / -0,20 -0,75* / -0,54
ПАН 0,22 -0,50 / -0,41 -0,48/-0,41
igG 0,25 -0,75*7-0,26 -0,637-0,16
Примечание: * - Р<0,05 и ** - Р<0,01 для параметрических и непараметрических (соответственно п/нп) коэффициентов корреляции между величинами до и после лечения - гХ/У, величинами до лечения и разностью «после минус до» - гХ/(У-Х), величинами до лечения и частным от деления «после на до» - гЭДУ:Х).
выявить высокую отрицательную зависимость эффекта лечения от исходного уровня 9 из 13 исследованных параметров иммунной системы. Эти данные свидетельствуют о снижении исходно высоких и повышении исходно низких величин иммунных параметров под влиянием лечения с применением ЭП.
В случае, когда изменяются и средние величины, интерпретация данных может быть иной. Например, для показателей гемоглобина, гематокрита и ретику-лоцитов, средние значения которых достоверно возросли после лечения (см. табл. 2), коэффициенты корреляции составили соответственно -0,89 (Р<0,01), 0,88 (Р<0,01), -0,66 (Р<0,05). Эти данные свидетельствуют о том, что увеличение показателей гемоглобина, гематокрита и ретикулоцитов под влиянием ЭП тем больше, чем меньше их исходный показатель. В случае увеличения среднего показателя без достоверных корреляций (например, концентрации эритроцитов), речь может идти о том, что прирост этого показателя под влиянием ЭП не зависит от исходного уровня. Такие изменения показателей красной крови вполне закономерны, если учесть, что ЭП - специфический для эритропоэза гормон, стимулирующий пролиферацию и дифференцировку эритроидных клеток [8,11].
Выявленные модуляции показателей эритроидных клеток НАЕ-9+, Т-клеток, ^С, фагоцитоза, продукции перекиси водорода и уровня экспрессии Б11-молекул моноцитами свидетельствуют об изменениях не только в эритропоэзе, но и в клеточном, гуморальном и макрофагально-фагоцитарном звеньях иммунной системы. Это может быть результатом прямого действия ЭП не только на эритроидные, но и на иммунокомпетентные клетки, имеющие специфические рецепторы для ЭП [9,10]. Широкий спектр активности ЭП может быть обусловлен и его, опосредованным через другие гомеостатические системы, действием на иммунокомпетентные клетки [2].
Таким образом, однонаправленное улучшение показателей красной крови в сочетании со статистически достоверной модуляцией количества клеток НАЕ-9+ и основных параметров иммунной системы отражает, скорее всего, как эритропоэз-восста-навливающее, так и иммуномодулирующее действие ЭП, что вместе с достоверной положительной динамикой клинических признаков позволяет рассматривать ЭП в качестве средства патогенетической терапии РА.
Список литературы
1. Журавкин И.Н., Лозовой В.П., Козлов В.А. Антителообразующая способность клеток селезенки мышей после гипоксической гипоксии и введения эритропоэтина // Бюлл. экспер. биол. мед.-1978,-№5.-С.565-567.
2. Козлов В.А. Иммуномодулирующая и другие неэритроидные функции эритропоэтина // Имму-нология.-2003.-№1.-С.54-58.
3. Кожевников B.C., Набиуллин P.P., Богидаев С.В. Способ оценки клеточных иммунных реакций in vitro // AC № 1575711,1990
4. Лозовой В.П., Кожевников B.C. Методы оценки клеточных эффекторных функций гиперчувствительности замедленного типа. Методические рекомендации М3 СССР// Москва,1990.-11с.
5. Повещенко А.Ф., Абрамов В.В., Козлов В.А. Эритропоэтин и его функции в лимфоидной и нервной ткани //Аллергология и иммунология.-2001.-Т.2,№1.-С.68-75
6. Bryl Е., Mysliwska J. Recombinant human erythropoietin stimulates production of interleukin 2 by whole blood cell cultures of hemodialysis patients // Artif. Organs.-2000.-V.23,N9.-P.809-816.
7. Gudbjornsson B., Hallgren R., Wide L. et al. Response of anaemia in rheumatoid arthritis to treatment with subcutaneous recombinant human erythropoietin // Annals of the Rheumatic Diseases.-1992.-V.51,-P.747-752.
8. Kelley L.L., Koury M.J., Bondurant M.C. Survival or death of individual proerythroblasts results from differing erythropoietin sensitivities: a mechanism for controlled rates of erythrocyte production // Blood/-1993/-V.82,N8.-P.2340-2352.
9. Kimata H., Yoshida A„ Ishioka C., Mikawa H. Erythropoietin enhances immunoglibulin production and proliferation by human plasma cells in a serum-free medium // Clin. Immunol. Immunopathol.-1991.-V.59,N3/-P/459-501.
10. Kimbal P.M., Kerman R.H. Erythropoietin: a potent immunomodulator? //Transplantation Proceed-ings.-1991.-V.23,Nl.-P.336.
11. Liboi E., Carrol М., D Andrea A. Erythropoietin receptor signals both proliferation and erythroid-spe-cific differentiation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA-1993,-V.90,N23.-P.l 1351-11355.
12. Peeters H.R., Jongen-Lavrencic М., Vreugden-hil G. Effect of recombinant human erythropoietin on anaemia and disease activity in patients with rheumatoid arthritis and anaemia of chronic disease: a randomised placebo controlled double blind 52 weeks clinical trial // Annals of the Rheumatic Diseases.-1996.-V.55.-P.739-744
13. Smith M.A., Knight S.M., Maddison P.J., Smith J.G. Anaemia of chronic disease in rheumatoid arthritis: effect of the blunted response to erythropoietin and of interleukin 1 production by marrow macrophages // Annals of the Rheumatic Diseases.-1992.-V.51.-P.753-757.
14. William J., Saad N., Salib M. The acute effect of intravenously administered recombinant human erythropoietin on the immune response of uremic patients maintained on regular hemodialysis // Artif. Organs.-2000.-V.22,N3.-P.192-196
15. Winearls C.G. Recombinant human erythropoietin: 10 years of clinical experience // Nephrol. Dial. Transpant.-1998.-V.13 (Suppl.2).-P.3-8.
поступила в редакцию 03.02.2004 принята к печати 28.02.2004
