CC BY
56
УДК 619: 616-076:579.882.11:636.2
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РСК И ИФА ПРИ ВЫЯВЛЕНИИ ХЛАМИДИЙНЫХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКАХ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Банзузи Б.А.С., Равилов Р.Х., Герасимов В.В.*
ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной
медицины им. Н.Э.Баумана»
Республиканский центр профилактики и борьбы со СПИД и ИЗ
Минздрава РТ*
Ключевые слова: РСК, ИФА, антитела, хламидиоз, крупный рогатый скот.
Key words: RSK, IFA, antibodies, chlamydiosis, cattle.
Хламидийные инфекции наносят существенный экономический ущерб различным отраслям животноводства и птицеводства.
Хламидийные инфекции часто протекают в виде стертых, латентных, смешанных и вторичных инфекций, что в значительной степени затрудняет правильную оценку эпизоотической ситуации. В связи с этим при диагностике хламидиозов широко используют серологические методы.
Ретроспективная диагностика хламидиоза у животных в настоящее время осуществляется с помощью РСК, которая из-за низкой чувствительности и специфичности не позволяет в полной мере оценивать динамику противохламидийных антител.
В последнее время широкое распространение в ретроспективной диагностике инфекционных заболеваний получил иммуноферментный анализ (ИФА). ELISA-тест отличается высокой специфичностью, превышающую в несколько раз рутинные методы ретроспективной диагностики инфекционных болезней. Чувствительность фермент-зависимых методов исследования позволяет обнаруживать минимальные количества антител. Антитела в ИФА определяются в первые 2-3 дня и отслеживаются в организме на протяжении 10-12 месяцев после взаимодействия с антигеном. К преимуществам ИФА, кроме этого, относят также: экспрессность, возможность исследовать антикомплементарные сыворотки, воспроизводимость, простота постановки реакции и учета результатов, стабильность реагентов при хранении, автоматизация некоторых операций и т.д.
ИФА широко применяется в практике медицинских диагностических лабораторий для диагностики хламидиоза. Применение
иммуноферментного метода ветеринарными специалистами во многом сдерживается отсутствием в достаточном количестве необходимых
компонентов (тест-систем и оборудования), но, учитывая его диагностическую важность, можно утверждать, что в перспективе ИФА станет достоянием ветеринарных лабораторий.
Целью наших исследований являлась сравнительная оценка эффективности реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа для индикации хламидийных антител в сыворотках крови крупного рогатого скота.
Материалы и методы исследований. РСК проводили общепринятыми методами, согласно “Методическим указаниям по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных“, утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 30.06.99 г. (№ 13-7-2/643).
ИФА выполняли по непрямому методу, на отечественных микротитрационных планшетах из полистирола, изготовленных на ПО ВНИИ медицинской техники (г. Москва). В качестве конъюгата использовали белок А, меченный пероксидазой хрена, который получали из НПО “Пептоскрин-2“ (г.Электросталь).
Исследуемые и контрольные сыворотки разводили 1:100. Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра Multiskan.
Результат подлежал учету, если среднее значение ОП отрицательных контролей (ОП ср. К-) не превышало 0,2 оптические единицы (о.е.), а среднее значение ОП положительных контролей (ОП ср. К+) составляло не менее 0,8 о.е. Положительными считали образцы исследуемых сывороток, ОП которых превышала критическое значение ОП (ОП крит.), которое рассчитывали по формуле: ОП крит.= ОП ср. К- + 0,2.
Результаты исследований. В наших опытах в РСК и ИФА параллельно были испытаны 1153 пробы сывороток крови крупного рогатого скота, подозрительного по заболеванию хламидиозом.
Результаты этих исследований представлены в таблице 1.
1. Исследования сывороток крови крупного рогатого скота, подозрительного по заболеванию хламидиозом, в РСК и ИФА
РСК+/ИФА+ РСК+/ИФА- РСК-/ИФА+ РСК-/ИФА- Общее количество проб
кол- во % кол-во % кол-во % кол-во %
14 1,2 2 0,2 368 31,9 769 33,1 1153
Из 1153 сывороток крови крупного рогатого скота в РСК с хламидийным антигеном прореагировали положительно и сомнительно 16 проб (1,4%).
При исследовании в ИФА было установлено, что из 16 реагирующих в РСК сывороток, 14 (1,2%) были также позитивными в ИФА, а 2 сыворотки (0,2%) дали отрицательный результат в иммуноферментном тесте.
В ИФА реагировали положительно 368 проб (31,9%), ранее негативных в РСК.
Общее количество реагирующих в ИФА проб составило 382 (33,1%).
Отрицательными и в РСК, и в ИФА оказались 769 сыворотка крови (66,7%) крупного рогатого скота. Общее число отрицательных в ИФА проб составило 771 (66,9%).
Количество сывороток, результаты которых совпали в обоих реакциях составило 785 (68,3%).
Значение показателя "РСК отрицательно / ИФА положительно", равное 31,9%, говорит о более высокой чувствительности иммуноферментного теста.
Таким образом, установлено, что разработанная нами “Иммуноферментная тест-система для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота” показывает высокую по сравнению с РСК чувствительность и специфичность в производственных условиях.
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ РСК И ИФА ПРИ ВЫЯВЛЕНИИ ХЛАМИДИЙНЫХ
АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКАХ КРОВИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
Банзузи Б.А.С., Равилов Р.Х., Герасимов В.В.
Резюме
Разработанная нами иммуноферментная тест-система для выявления хламидийных антител у крупного рогатого скота показала высокую по сравнению с РСК чувствительность и специфичность в производственных условиях.
ESTIMATION OF EFFICIENCY COMPLIMENT FIXATION REACTION AND ELISA-
TEST AT REVEALING OF CHLAMYDIAL ANTIBODIES IN CATTLE BLOOD SERA
Banzouzi B.A.S., Ravilov R.Kh., Gerasimov V.V.
Summary
Developed by us ELISA-test for indication of clamydial antibodies at cattle has shown the high sensitivity and specificity in comparison with a complement fixation test.
