CC BY
47
© Коллектив авторов, 2008 УДК 612.014.1.001.8
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНТОКСИКАЦИОННОЙ ТЕРАПИИ ПО РЕЗУЛЬТАТАМ ЦИТОХИМИЧЕСКОГО
исследования крови белых мышей
ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТОГО УГЛЕРОДА
О.В. Логвиненко, В.И. Ефременко, М.В. Костюченко,
С.М. Руднев, А.И. Бондаренко
Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт
Четыреххлористый углерод является одним из наиболее изученных токсинов химической природы, при отравлении которым развивается острая печеночная недостаточность. Развитие интоксикации сопровождается нарушением обменных процессов в организме -липидного, углеводного, белкового.
При проведении дезинтоксикационной терапии используют различные лекарственные препараты, которые способствуют коррекции гомеостаза, стимулируют иммунную систему [2]. Однако в ряде случаев эффективность использования некоторых лекарственных препаратов оказывается низкой, что обусловлено кратковременностью пребывания в организме, невозможностью преодолеть клеточные барьеры и токсичностью некоторых из них. В связи с вышеизложенным перспективным направлением является заключение лекарственных препаратов в какой-либо «контейнер», выполняющий не только функцию «транспортера», но и протектора.
По данным литературы, таким «контейнером» могут быть липосомы, которые, помимо направленного транспорта лекарственных веществ к очагу воспаления в силу своих физико-химических свойств, обладают протективным действием [3]. Традиционно о тяжести развивающегося токсического процесса и об эффективности дезинтоксикационной терапии судят по результатам биохимических анализов сыворотки крови. Однако в литературе остается недостаточно освещенным вопрос действия четыреххлористого углерода на неспецифические факторы естественной резистентности организма и влияния на последние препаратов в интактной и липосомальной формах при проведении дезинтоксикационной терапии.
К настоящему времени накопилось много данных о механизмах, реализующих эффекторное действие полиморфноядерных лейкоцитов. Нейтрофильные гра-нулоциты как «зеркало» гомеостатической системы организма чутко реагируют на малейшие изменения постоянства внутренней среды [1, 5]. Функция нейтро-фильных гранулоцитов связана с наличием большого количества ферментов и основных белков, которые содержатся в специфических и азурофильных гранулах.
В норме полиморфноядерные лейкоциты находятся в инертном состоянии. Активация специфических гранул происходит под воздействием различных факторов, в результате чего в кровоток секретируется большое количество биологически активных веществ, выполняющих цитотоксическую функцию, регулирующих воспалительные реакции.
Для оценки функционально-метаболической активности ферментов нейтрофильных гранулоцитов используют цитохимические методы исследования, которые получили широкое распространение, благодаря своей доступности и относительной простоте выполнения.
В эксперименте изучали уровень миелоперокси-дазы (МПО) и кислой фосфатазы (КФ) в нейтрофилах крови белых мышей. МПО является представителем кислородзависимой микробицидной системы. Развитие интоксикации сопровождается нарушением кровообращения, следовательно, формируется дефицит кислорода в клетках крови, что естественно влечет за собой изменение активности данного фермента. Некоторые исследователи [10] указывают на то, что КФ является маркером тяжести протекающего в организме токсического процесса.
Целью исследования было:
- изучить в динамике химической интоксикации функциональные изменения в клетках крови, включающие определение активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы;
- изучить действие дезинтоксикационных препаратов в свободной и липосомальной формах на функционально-метаболическую активность нейтрофильных гранулоцитов.
Материал и методы. Объектом исследования служили беспородные белые мыши массой 18-20 г выращенные в питомнике СтавНИПЧИ. Мышам внут-рибрюшинно однократно вводили четыреххлористый углерод в дозе 0,2 мл в 50% масляном растворе, что составляло 0,25 LD50. Для коррекции гомеостаза использовали смесь аскорбиновой кислоты, L-токоферола, эссенциале, селенита натрия и АТФ, которую вводили в свободной и заключенной в липосомы форме. Дозу лекарственных препаратов рассчитывали в
И оригинальные исследования. экспериментальная медицина
сцп U-1,4 -
U
0,6
0.4
0,2
о1--------------------------------------------.
Зсут. 10 сут. 20 сут. 30 сут.
---Контроль ----Без лечения
...Интактные препараты-----Липосомальные препараты
Рис.1. Влияние интактных и липосомальных форм лекарственных препаратов на активность МПО в нейтрофилах крови белых мышей при воздействии четыреххлористого углерода.
соответствии с фармакопейными данными с учетом массы тела животного. Липосомы готовили методом «выпаривания и обращения фаз» из фосфатидилхоли-на, холестерина и дицетилфосфата в молярных соотношениях 7:2:1. Животных умерщвляли декапитацией. Кровь на исследование брали на 3, 10, 20 и 30 сутки после начала дезинтоксикационной терапии. В полиморфноядерных лейкоцитах цитохимически выявляли МПО и КФ. Контролем служили интактные животные.
При определении активности КФ мазки фиксировали в растворе спирт-формалина. Фермент выявляли при помощи нафтол As-Bi-фосфата, ядра докрашивали 1% раствором метилового зеленого.
При изучении уровня МПО мазки крови фиксировали в указанном выше растворе. В качестве субстрата использовали бензидин. Уровень активности ферментов оценивали, рассчитывая средний цитохимический показатель (СЦП) по формуле, предложенной В.Е. Пи-гаревским [8]. Статистическую обработку полученных данных проводили по И.А. Ойвину [7].
Результаты и обсуждение. Развитие токсического процесса, вызванного введением четыреххлористого углерода, сопровождалось резким угнетением
... Интактные препараты Липосомальные препараты
Рис.2. Влияние интактных и липосомальных форм лекарственных препаратов на активность КФ в нейтрофилах крови белых мышей при воздействии четыреххлористого углерода.
активности МПО (0,83±0,04) на 3 сутки после введения токсина. В последующие сроки прослеживалась тенденция к недостоверному снижению данного цитохимического показателя (0,79±0,02; 0,76±0,04). При использовании дезинтоксикационных препаратов активность исследуемого фермента оставалась сниженной (1,0±0,05; 0,99±0,03), однако, цифровые значения полученных результатов были выше, чем у животных, не подвергшихся лечению. При использовании липосомальной формы лекарственных препаратов средний цитохимический показатель составлял на 3 сутки 0,87±0,05, на 30 сутки - 1,3±0,03.
В результате проведенных исследований установлено, что у не леченных белых мышей активность КФ возрастала на 3 сутки постановки опыта (1,53±0,07). В последующие сроки активность фермента продолжала увеличиваться (1,59±0,05). При коррекции гомеостаза дезинтоксикационными препаратами в свободной и липосомальной формах на 3 сутки наблюдения активность КФ была максимальной (1,41±0,04; 1,35±0,01), в дальнейшем прослеживалась тенденция к снижению значений показателя (1,25±0,07; 1,17±0,04). На 30 сутки активность фермента была достоверно ниже, чем у животных, не получавших лекарственные препараты, но превышала показатели в контрольной группе.
Заключение. При введении четыреххлористого углерода происходит изменение содержания ферментов в нейтрофильных гранулоцитах - повышение активности КФ и снижение уровня МПО.
Применение дезинтоксикационных препаратов сопровождается тенденцией к восстановлению исследуемых цитохимических показателей, более выраженной в группе животных, получавших липосомальную форму препарата.
Проведенные исследования позволяют говорить о том, что при использовании дезинтоксикационных препаратов происходит восстановление энзиматических механизмов в нейтрофильных гранулоцитах.
Литература
1. Бережная, М.Н. Нейтрофилы и иммунологический гомеостаз / М.Н. Бережная. - Киев, 1988. - 192 с.
2. Виноградова, Л.Ф. Экспериментальная терапия антиоксидантами при токсическом повреждении печени четыреххлористым углеродом и хлоксиколом / Л.Ф. Виноградова, Ж.А. Мирзоян, Е.В. Хармицкая, Т.П. Бекетова // Пат. физиология и экспериментальная терапия. - 1989.
- №4. - С. 52-56.
3. Ефременко, В.И. Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине) / В.И. Ефременко. - Ставрополь, 1999. - 236 с.
4. Локтев, Н.А. Практическая цитохимия / Н.А. Локтев. -Ставрополь, 2001. - 116 с.
5. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. - Новосибирск: Наука, 1989.
- 343 с.
6. Михеев, А.Г Зависимость цитохимических показателей лейкоцитов и их морфологических особенностей в сравнительном аспекте при анафилоксии: Автореф. дис. ... докт. мед. наук / А.Г Михеев. - Новосибирск, 1996. - 39 с.
7. Ойвин, И.А. Статистическая обработка результатов экспериментальных исследований / И.А. Ойвин // Пат. физиология. - 1960. - №4.- С. 76-85.
8. Пигаревский, В.П. К методике применения лизосомаль-но-катионного теста в лабораторной диагностической практике / В.П. Пигаревский, Н.Н. Мазинг // Лаб. дело.
- 1981. - №10. - С. 17-19.
9. Тотолян, А.А. Клетки иммунной системы. / А.А. Тотолян, И.С. Фрейдлин - СПб.: Наука, 2000. - 231 с.
10. Юлиу Шутеу. Шок, терминология и классификация. Шоковая клетка, патофизиология и лечение / Юлиу Шутеу Траян Бэндинэ, Атансие Кафрицэ, Александру Иоан Букур, Василе Кындя. - Бухарест: Военное изд., 1981. - 387 с.
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ
ДЕЗИНТОКСИКАЦИОННОЙ ТЕРАПИИ
ПО РЕЗУЛЬТАТАМ ЦИТОХИМИЧЕСКОГО
исследования крови белых мышей
ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТОГО
УГЛЕРОДА
О.В. ЛОГВИНЕНКО, В.И. ЕФРЕМЕНКО,
М.В. КОСТЮЧЕНКО, С.М. РУДНЕВ,
А.И. БОНДАРЕНКО
Цель исследования: изучить в динамике химической интоксикации функциональные изменения в клетках крови, включающие определение активности миелопероксидазы и кислой фосфатазы; и действие на функционально-метаболическую активность нейтрофильных гранулоцитов дезин-токсикационных препаратов в свободной и липосомальной формах.
Беспородным белым мышам внутрибрюшинно однократно вводили четыреххлористый углерод в дозе 0,2 мл в 50% масляном растворе. Для коррекции гомеостаза использовали смесь аскорбиновой кислоты, L-токоферола, эссенциале, силинита натрия и ATO вводили в свободной и заключенной в липосомы форме.
При введении четыреххлористого углерода обнаружено изменение содержания ферментов в нейтрофильных гранулоцитах - повышение активности кислой фосфатазы (КФ) и снижение уровня миелопероксидазы (МПО).
Применение дезинтоксикационных препаратов сопровождалось тенденцией к восстановлению исследуемых цитохимических показателей, более выраженной в группе животных, получавших липосомальную форму препарата.
Проведенные исследования позволяют говорить о том, что при использовании дезинтоксикационных препаратов происходит восстановление энзиматических механизмов в нейтрофильных гранулоцитах.
Ключевые слова: четыреххлористый углерод, липосо-мы, нейтрофильный гранулоцит, кислая фосфатаза, миело-пероксидаза
ESTIMATION OF EFFICIENCY OF DESINTOXICATON THERAPY BY RESULTS OF CYTOCHEMICAL RESEARCHES OF BLOOD OF WHITE MICE AT INFLUENCE OF FOUR-CHLORIDE CARBON
LOGVINENKO О.V., EFREMENKO V.I.,
KOSTYUCHENKO М.V., RUDNEV S.M.,
BONDARENKO A.I.
The purpose of research: to study in dynamics of chemical intoxication the functional changes in the blood cells, including definition of activity of myeloperoxidase and oxiphosphatase; and effect on functional-metabolic activity of neutrophilic granulosytes of desintoxication preparations in free and liposome forms.
Not purebred white mice were injected intraperitoneally by four-chloride carbon in a doze of 0,2 ml of 50% oil solution unitary. For correction of a homeostasis, a mix of ascorbic acid, L-toco-pherol, Essentiale, Silin-sodium was used, and ACE was injected in free and included in liposomes form.
At introduction of four-chloride carbon, change of the contents of enzymes in neutrophilic granulosytes - increase of oxiphosphatase activity and decrease in a level of myeloperoxydase is revealed.
Application of desintoxication preparations was accompanied by the tendency to restoration of researched cytochemical parameters, more expressed in group of the animals receiving liposome form of preparation.
The carried out researches allow speaking that at use of desintoxication preparations, there is a restoration of enzymatic mechanisms in neutrophilic granulosytes.
Key words: four-chloride carbon, liposomes, neutrophilic granulosyte, oxiphosphatase, myeloperoxidase
6З
