Оценка диагностической эффективности оптимизированной ИФР при трихинеллезе свиней Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

highly efficient anthelmintics against the most important helminthoses of cattle and deers.

ОЦЕНКА ДИАГНОСТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ОПТИМИЗИРОВАННОЙ ИФР ПРИ ТРИХИНЕЛЛЕЗЕ СВИНЕЙ

Написанова Л.А., Малахова Е.И.

ГНУ ВНИИ гельминтологии им. К.И.Скрябина

Введение. Прижизненная диагностика трихинеллеза, основанная на иммунологических реакциях, имеет важное практическое значение в комплексной программе борьбы с этим социально опасным гельминтозом. Поэтому, для своевременного выявления этого заболевания актуальна не только разработка новых эффективных методов иммунодиагностики, но и усовершенствование уже имеющихся тест-систем.

В настоящее время наиболее распространены в практике

диагностические тест-системы на основе иммуноферментной реакции или иммуноферментного анализа. Ранее в ВИГИСе была разработана подобная тест-система, дающая высокую диагностическую эффективность /4,3,2,1/. Мы поставили цель - усовершенствовать данную тест-систему с тем, чтобы упростить ее постановку и сократить время проведения реакции. Для этого необходимо оптимизировать параметры и режимы постановки ИФР, не снижая, по-возможности, эффективности реакции.

Материалы и методы. Экскреторно-секреторный антиген для

исследований получали по модифицированной нами методике, на которую имеется патент (№ 2322994).

Сыворотки использовали, частично, из нашего банка, частично, полученные при экспериментальных заражениях, а также в неблагополучном по трихинеллезу Талдомском районе Московской области.

Постановку ИФР проводили в непрямом варианте. Определение оптимальной концентрации антигена, минимального диагностического титра сывороток и рабочего разведения конъюгата осуществляли методом двукратных последовательных разведений.

Результаты и обсуждение. В ходе отработки параметров и режимов постановки усовершенствованной ИФР определили оптимальное разведение антигена - 1:64. При сенсибилизации планшетов антигеном, для разведения последнего использовали карбонатно-бикарбонатный буфер рН=9,6. Оптимальный режим сенсибилизации планшетов - 18-20 часов (т.е. в течение ночи) при +40С. Отмывочный раствор готовили на дистиллированной воде с 0,05% содержанием твина-20. В качестве белкового стабилизатора разводящих растворов для образцов сывороток и конъюгата использовали бычий сывороточный альбумин, хорошо зарекомендовавший себя для этих целей в

272

концентрации 0,05% и 0,5%, соответственно. Для разводящих растворов использовали фосфатно-солевой буфер рН=7,2-7,4.

Минимальный диагностический титр иммуноферментной реакции для образцов в ходе экспериментов был выбран 1:10. Титр позволяет в данных условиях достигнуть наибольшей разницы в экстинкции (или окраске при визуальном учете) между сыворотками от животных с трихинеллезом, с одной стороны, и здоровых, а также с гетерологичной инвазией, с другой, стороны.

Режим постановки ИФР несколько изменили: инкубацию с сыворотками, проводили 30 минут, а с конъюгатом - 15 минут в прежних температурных условиях 370С.

Снижение титра до 1:10 упрощает постановку реакции и сокращает ее время, так как отпадает необходимость предварительной раститровки испытуемых сывороток на отдельных планшетах с последующим переносом их на рабочий планшет.

Несмотря на значительное снижение диагностического титра от обычного, данное разведение образца позволяет выявить низкий уровень антител в сыворотке без потери достаточно высокого уровня специфичности при трихинеллезе, что было установлено в ходе комиссионной проверки диагностической эффективности оптимизированной ИФР.

Комиссионную оценку диагностической эффективности оптимизированной тест-системы на основе ИФА провели в сравнении с разработанной нами ранее базовой тест-системой. Для этого использовали 80 сывороток от свиней из хозяйств Талдомского района, неблагополучного по трихинеллезу.

Неспецифические положительные и дважды сомнительные ответы, которые относили также к ложноположительным, в обеих тест-системах дали 6 сывороток, из которых: одна - от животного с эхинококкозом и 5 - от условно - здоровых животных при этом 4 из них показали дважды сомнительный результат.

Таким образом, ложноположительные результаты зарегистрированы как в оптимизированной, так и в базовой тест-системе в 7,5%-ах случаев. Специфичность составила - 92,5%. Чувствительность достигала в обеих реакциях 100%, так как сыворотки крови взяты от свиней с экспериментальным трихинеллезом в период после 30 дня инвазии.

Заключение. На основании проведенных исследований, считаем возможным рекомендовать оптимизированную ИФР для диагностики трихинеллеза и оценки эпизоотической ситуации, так как данная тест-система сопоставима по диагностической эффективности с базовой и при этом позволяет существенно сократить время анализа, а также более удобна в постановке.

Литература: 1.Бережко В.К.,Белозеров С.Н., Шеховцов Н.В., Написанова Л.А.,Успенский А.В. //Мат. 5-й Всесоюз. Конф. по пробл. трихинеллеза чел. и животных. 14-16 сент., 1988.- Новочеркасск.- С 21-22. 2. Бережко В.К.,

273

Написанова Л.А., Шеховцов Н.В., Успенский А.В. //Мат. докл. 7й науч. конф. по трихинеллезу человека и животных. М., 1996.- С. 7-10. 3. Написанова Л.А., Бессонов А.С. //Ветеринария. -1999.-№3.- С.27-30. 4. Шеховцов Н.В., Написанова Л.А., Бережко В.К, Клименко В.В., Бенедиктов И.И. Временное наставление по применению набора для диагностики трихинеллеза свиней иммуноферментным методом (ИФА), от 30.03.04г. №13-5-02/0977.

Evaluation of diagnostic efficacy of the improved ELISA procedure at Trichinella infection of swine. Napisanova L.A., Malachova E.I. All-Russian K.I. Skryabin Institute of Helminthology.

Summary. Based on the results of the carried out investigations the authors consider possible to recommend the improved ELISA procedure for diagnostics of Trichinella infection and evaluation of epizootic situation as this test system is comparable with the base one according to the diagnostic efficacy. The specificity appears to be 92,5% and the sensitivity is 100%; this procedure is convenient in performance and significantly reduces the time of analysis.

МОРФОЛОГИЯ И ГИСТОХИМИЯ ЖЕЛТОЧНИКОВ ТРЕМАТОД, ПАРАЗИТИРУЮЩИХ В КИШЕЧНИКЕ РАЗЛИЧНЫХ ПОЗВОНОЧНЫХ

Начева Л.В., Гребенщиков В.М.

ГОУ ВПО Кемеровская государственная медицинская академия

Введение. Желточники трематод, паразитирующих в кишечнике различных позвоночных животных, исследованы микроморфологически и гистохимически. Желточные фолликулы разнообразны по форме, размерам, обладают положительными гистохимическими реакциями: толуидинофилией, бромфенолофилией, Шик-фуксинофилией, а также окрашиваются на липоидный компонент суданом черным и кислые белки Кумасси бриллиантовым синим.

Исследование желточников трематод представляет большой интерес с различных точек зрения. В данной работе мы попытались рассмотреть некоторые вопросы микроморфологии и гистохимии желточников трематод, паразитирующих в кишечнике позвоночных животных.

Материалы и методы. В качестве материала для выполнения данной работы были использованы трематоды, обитающие в кишечнике различных позвоночных животных: Alaria alata (Schranc, 1788), Azigia robusta (Odhner, 1911), Quinqueserialis quinqueserialis (Barker et Lauglin, 1934), Cotylurus platycephalus, (Szidat, 1928), Strigea strigis (Schranc, 1788). Материал был обработан стандартными гистологическими и гистохимическими методами:

274