CC BY
131
УДК 612.014.466:636
Острая токсичность антисептического средства бактерицид
В.П. Николаенко, д. в. н.
Р.В. Турченко, м. н. с.
В.Е. Погорелый, Л.М. Макарова
Пятигорская фармакадемия
В качестве бактерицидных веществ, используемых в настоящее время за рубежом и у нас, всё больше применяют четвертичные аммониевые соединения и другие катионные детергенты.
Они хорошо растворимы, бесцветны, практически без запаха, а высокая бактерицидная и поверхностная активность у них сочетается с низкой токсичностью, отсутствием раздражающего действия и иных побочных эффектов. Благодаря этим уникальным свойствам, их применяют в медицине, ветеринарии, косметологии, бытовой химии, молочной, мясной, пищевой и других отраслях промышленности (Терчук М.П., Эрскаев В.П., 1961; Кочерина Е.А., 1992).
Поэтому разработка и изучение новых четвертичных аммониевых соединений (ЧАС) имеет в настоящее время немаловажное значение на фоне продолжающейся интервенции в Российскую Федерацию различных лекарственных, антисептических и дезинфицирующих препаратов.
Препараты, завозимые в РФ, не всегда отличаются хорошим качеством и эффективностью, в то время как стоимость их значительна и не по средствам многим хозяйствам.
Многие годы у нас в стране различные фирмы продают импортные препараты, такие как септабик, бромосепт, виркон, которые отличаются высокой реализационной ценой и низким содержанием в своём составе солей 4-замещённого аммония (8-12%), а также отсутствием пролонгированного бактерицидного действия.
Таким образом возникла крайняя необходимость синтеза, разработки и внедрения новых высокоэффективных антисептических средств на основе
катионных детергентов и углублённого изучения их бактерицидных, вирулицидных, токсико-биологических и других свойств, чему до настоящего времени не придавалось должного внимания.
В литературе имеются сведения по оценке токсичности низших и некоторых высших алкиламинов (Демешкевич Н.Г.,1963; Кулагина Н.К., 1963). Учитывая изложенное, нами была поставлена цель изучить токсичность нового антисептика на основе ЧАС - препарата бактерицид. Препарат бактерицид представляет собой высококонцентрированное органическое соединение, содержащее 75% активнодействующего вещества.
Изучение острой токсичности
При оценке острой токсичности ЛД50 дозу, вызывающую смерть у 50% животных, рассчитывали по методу Кербера - одному из методов, рекомендуемых для определения токсичности веществ.
ЛД50=ЛД100 - Е^ х D):m, где D-интервал между каждыми двумя смежными дозами;
Z-среднее арифметическое из числа животных, у которых наблюдался учитываемый эффект под влиянием каждых двух смежных доз; т-число животных в каждой группе.
Для расчёта величины стандартной ошибки использовали формулу Гэддама.
С _ л/ К х S х d
^д-50 _ У п ,
где S-стандарт распределения, который находили на графике, построенном на основании частот, непосредственно выявленных в эксперименте, и рассчитанном по формуле:
8=(ЛД84-ЛД16) : 2
d-интервал между испытываемыми дозами; п-число животных в каждой группе; к - постоянный множитель, равный 0,564.
В процессе наблюдения за животными, получавшими препарат,
оценивали действие вещества по следующим функциональным показателям:
1. Поведенческие реакции:
- двигательная активность - оценивалась по скорости и силе движений, способности животного оставаться в данной позе;
- возбудимость - оценивалась по ступору или настороженности животного, проявлению необычных резких и быстрых движений головы или туловища;
- реактивность - по характеру реакции животных на изменение окружающей обстановки (перемещение на открытый стол);
- агрессивность - по поведению между самцами, реакциям на прикосновение при проведении стандартных манипуляций с животными.
2. Нервно-мышечные реакции:
- тремор, судороги, расстройство походки;
- рефлексы положения тела в обычной позе и после придания неудобной позы;
- хвостовая реакция Штрауба - оценивали по степени подъема хвоста;
- реакция на прикосновение - оценивали по интенсивности избавления животного от легкого поглаживания тела с трех сторон;
- сила хватки - оценивали по силе хватательного сопротивления животного на решетке.
3. Вегетативные реакции:
- размер зрачка - оценивали площадь, занятую зрачком;
- саливация - по влажности и орошению слюной ротовой полости;
- температура тела - определяли электротермометром;
- цвет кожи - оценка интенсивности окрашивания подошвенной поверхности передних лап, ушей (синюшность, покраснение);
- темп дыхания - оценивали частоту дыхательных движений в минуту в покое. Половой чувствительности при исследовании острой токсичности таблеток
метронидазола, изготовленных ООО « Фармаконтракт», выявлено не было, т.е. токсическое воздействие как на самцов, так и на самок было идентичным. Полученные данные по острой токсичности у животных представлены в виде таблиц (табл. 1-4).
Определение острой токсичности бактерицида на крысах-самках
Исследуемые показатели Д оза, мг/кг
800 900 1000 1100 1200
Общее количество животных 6 6 6 6 6
Количество выживших животных 6 4 4 1 0
Количество погибших животных 0 2 2 5 6
% погибших животных 0 33,3 33,3 83,3 100,0
Ъ 1,0 2,0 3,5 5,5
Б 100 100 100 100 100
БЪ 100 200 350 550
ЛД50 бактерицида для самок крыс составила 1000,0±35,0 мг/кг массы животного. По классификации токсичности К.К. Сидорова бактерицид при введении в желудок можно отнести к IV классу соединений, т.е. к малотоксичным соединениям
[4].
Таблица
2
Влияние бактерицида на общие функциональные показатели крыс-самок при оральном введении в субтоксической дозе
Показатели Время наблюдений (часы)
6 24 72
1. Поведенческие реакции:
- двигательная активность -3 -2 -1
- возбудимость -3 -2 -1
- реактивность -3 -3 -2
- агрессивность -3 -1 -1
2. Нервно-мышечные реакции:
- тремор 0 0 0
- судороги 0 0 ' 0
- расстройство походки -3 -3 -1
- реакция на болевое раздражение -2 -1 -1
-сила хватки -2 -1 0
3. Вегетативные эффекты:
- размер зрачка без изменений
- частота дыхания уменьшение
-состояние волосяного покрова взъерошенность шерсти
-окраска слизистых оболочек синюшная
- количество фекальных масс незначительное увеличение
-консистенция фекальных масс полужидкая
-частота мочеиспускания незначительное увеличение
-окраска мочи без изменений
-частота сокращений сердца без изменений
Здесь и далее (табл. 4) обозначено: 0- отсутствие эффекта 1-есть эффект 1 -значительный эффект
со знаком "+" - усиление, а со знаком "-" - торможение эффекта.
Таблица
3
Определение острой токсичности бактерицида на крысах-самцах
Исследуемые показатели Доза, мг/кг
800 900 1000 1100 1200
Общее количество животных 6 6 6 6 6
Количество выживших животных 6 5 4 2 0
Количество погибших животных 0 1 2 4 6
% погибших животных 0 16,6 33,3 66,7 100,0
Ъ 0,5 1,5 3,0 5,0
Б 100 100 100 100 100
БЪ 50 150 300 500
ЛД50 бактерицида для крыс-самцов составила 1033,0±34,3 мг/кг. По классификации токсичности К.К. Сидорова бактерицид при введении в желудок можно отнести к IV классу соединений, т.е. к малотоксичным [4], а по Г0СТ12.1.07.76 данное антисептическое средство относится к 3 классу опасности и токсичности.
Половых различий при исследовании острой токсичности бактерицида выявлено не было, т.е. токсическое воздействие как на самцов, так и на самок было идентичным.
Токсический эффект больших доз бактерицида проявлялся спустя 1-3 ч.
после перорального введения и выражался одышкой и угнетением центральной нервной системы. Большинство животных погибало в течение 24 ч. Другие животные погибали в течение последующих 72 часов. У животных, оставшихся в живых, двигательная реакция была угнетена в течение последующих 36-48 часов.
При введении субтоксических доз бактерицида отмечались выраженные изменения со стороны функциональных показателей экспериментальных животных: угнетение поведенческий реакций (выраженное снижение
двигательной активности, возбудимости, реактивности и агрессивности), расстройства походки, снижение реакции на прикосновение и болевое раздражение, снижение силы хватки. Со стороны вегетативных реакций изменения были связаны лишь с изменением частоты дыхания.
Дальнейшее наблюдение в течение 2-х недель за выжившими животными, которым вводили бактерицид, показало, что у наблюдаемых животных присутствовали признаки интоксикации (общее угнетение, скученность, мышечные подергивания). В течение всего времени наблюдения (14 дней) было также зафиксировано и улучшение состояния некоторых животных.
4
Влияние бактерицида в субтоксической дозе на общие функциональные показатели крыс - самцов при оральном введении
Показатели Время наблюдений (часы)
6 24 72
1. Поведенческие реакции:
- двигательная активность -3 -2 -1
- возбудимость -3 -2 -1
- реактивность -3 -3 -2
- агрессивность -3 -1 -1
2. Нервно-мышечные реакции:
- тремор 0 0 0
- судороги 0 0' 0
- расстройство походки -3 -3 -1
- реакция на болевое раздражение -2 -1 -1
-сила хватки -2 -1 0
3. Вегетативные эффекты:
- размер зрачка без изменений
- частота дыхания уменьшение
-состояние волосяного покрова взъерошенность шерсти
-окраска слизистых оболочек синюшная
- количество фекальных масс незначительное увеличение
-консистенция фекальных масс полужидкая
-частота мочеиспускания незначительное увеличение
-окраска мочи без изменений
-частота сокращений сердца без изменений
Симптомы отравления животных при введении в субтоксической дозе выражались в следующем: через 1-3 ч. после введения токсических доз
препарата животные были угнетены, вялы. Симптомы отравления не исчезали, и на следующий день по внешнему виду они существенным образом отличались от интактных животных.
Выводы
1. Бактерицид по классификации токсичности К.К. Сидорова является малотоксичным соединением. По ГОСТ 12.1.07-76 и ГОСТ 17.4.1.02-83 данное вещество относится к 3 классу опасности и токсичности.
2. В течение эксперимента у животных, получавших в субтоксической дозе бактерицид, выявлены изменения в поведении и в общем состоянии.
3.Бактерицид по показателям острой токсичности оказывает однотипное действие на самцов и самок.
Литература
1. Методические рекомендации по оценке качества лабораторных животных для медико-биологических исследований /Составители А.М. Беспалов, Р.Ф. Кузина. - М., 1985. -63 с.
2. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых
фармакологических веществ. - М., 2000. - 398 с.
3. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии /Л.Н.
Сернов, В.В. Гацура. -М., 2000.-352с.
4. Сидоров, К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения /К.К. Сидоров //Токсикология новых промышленных веществ. - М.:Медицина, 1973.-475 с.
