CC BY
58
2. Установлено, что основным путем развития зародышей маслины в культуре in vitro является прямой органогенез с формированием полноценных проростков. Показана высокая частота прорастания у сортов Никитская и Обильная.
3. Использование культуры зародышей маслины позволяет провести ювенили-зацию растений и получить сеянцы, характерной особенностью которых является быстрый рост. Полученные проростки могут представлять интерес для селекционной работы.
Список литературы
1. Митрофанова И.В. Клональное микроразмножение субтропических и тропических плодовых культур (обзор литературы) // Тр. ГНБС. - Ялта, 1997. - Т. 119. -С. 63-95.
2. Николаева М.Г. Физиология глубокого покоя семян. - Л.: Наука, 1967. - 207 с.
3. Николаева М.Г. Некоторые итоги изучения покоя семян // Ботан. журн. - 1977. -Т. 62, № 9. - С. 1350-1368.
4. Орехоплодные и субтропические плодовые культуры: Справ. изд. / Ядров A.A., Синько Л.Т., Казас A.K и др. - Симферополь: Таврия, 1990. - 160 с.
5. Слизик-Маслова Л.Н. Растения крымских парков. Четыре времени года. -Севастополь: Библекс, 2008. - 256 с.
6. Шевченко С.В., Шолохова ВА, Мязина Л.Ф. Эмбриокультура маслины европейской (Olea europaea L., сем. Oleaceae) // Бюл. ГНБС. - Ялта, 2009. - Вып. 99. -С. 97-100.
7. In vitro germination of three Tunisian olive varieties / Maalej M., Drira N., Chaari-Rkhis A., Trigui A. // Acta Horticulturae. - 2002. - №586. - P. 903-906.
8. Monnier M. Croissance et developpement des embryons globularies de Capsella bursa-pastories cultives in vitro dans du milleu a base d une nouvelle solution minerale // Bull. Soc. Bot. France Memories, Coll. Morphologie. - 1973. - P. 179-194.
9. New perspective for biotechnologies in olive breeding: morphogenesis, in vitro selection and gene transformation / Rugini E., Gutierrez-Pesce P., Spampinato P.L., Ciarmiello A., D'Ambrosio C. // Acta Horticulturae. - 1999. - №474. - P. 107-110.
10. Rugini E. Somatic embryogenesis and plant regeneration in Olive (Olea europaea L.) // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. - 1988. - V. 14., №3.- P. 207-214.
Рекомендовано к печати д.б.н., проф. Шевченко С.В.
ОСОБЕННОСТИ ВВЕДЕНИЯ В КУЛЬТУРУ IN VITRO НЕКОТОРЫХ СОРТОВ САДОВОЙ ГРУППЫ МИНИАТЮРНЫХ РОЗ
ТИ.СИДЕНКО;
И.В.МИТРОФАНОВА, доктор биологических наук
Никитский ботанический сад - Национальный научный центр
Введение
Садовая роза широко используется в озеленении и занимает одно из ведущих мест в декоративном цветоводстве. В Никитском ботаническом саду имеется богатейшая коллекция садовых роз. Важной биологической особенностью миниатюрных роз является раннее, длительное и многократно повторяющееся
цветение, длящееся в условиях ЮБК до 200 дней (с середины апреля до декабря-января), что делает их незаменимыми в озеленении садов и парков, где они могут быть использованы для создания низких бордюров и рабаток, а также карликовых штамбов. Миниатюрные розы хороши также в горшечной культуре [2].
Основным способом традиционного размножения миниатюрных роз является черенкование (зелеными и одревесневшими черешками). Успешное размножение миниатюрных роз возможно с применением методов культуры органов и тканей, что позволяет не только оздоровить растения, но и получить посадочный материал в большом количестве, в более сжатые сроки, чем при использовании традиционных методов размножения [1].
Исследования, проводимые в отделе биотехнологии и биохимии растений НБС-ННЦ, показали возможность введения в культуру in vitro некоторых перспективных сортов роз из 9 садовых групп. Были изучены условия введения вегетативных почек в условиях in vitro и индукции побегообразования перспективных сортов роз для последующей их закладки на длительное холодное хранение [4]. Также были изучены особенности клонального микроразмножения (получение асептической культуры, регенерации первичных эксплантов и собственно микроразмножение) в условиях in vitro двух сортов миниатюрных роз [3].
Имеется целый ряд сообщений об исследованиях декоративных роз как отечественными, так и зарубежными учеными. Основная часть публикаций посвящена получению безвирусного посадочного материала и сырья для парфюмерной промышленности. В этих работах указывается, что состав питательной среды подбирали путем оптимизации концентраций микроэлементов, витаминов и регуляторов роста. Для введения в культуру in vitro использовали апикальную меристему [6, 7].
Целью нашей работы являлось выявление морфогенетического потенциала органов и тканей и разработка этапов клонального микроразмножения перспективных сортов миниатюрных роз для получения посадочного материала, трудноразмножаемого в обычных условиях.
Объекты и методы исследования
Объектами настоящего исследования служили перспективные сорта садовой группы миниатюрных роз из коллекции НБС-ННЦ. Сорта селекции НБС-ННЦ: Мальчик-с-Пальчик, Гранатовый Браслет, Крымский Гном. Сорта иностранной селекции: Бэби Бантинг, Цвёргкёниг, Мистер Блюбёрд, Санмайд, Рулети, Синдерелла, Попкорн, Бигуди, Мандарин.
В качестве исходных эксплантов использовали сегмент побега (средняя часть) с пазушной почкой. Отбор растительного материала осуществляли на протяжении всего периода вегетации.
Стерилизацию сегментов побега проводили в несколько этапов. Растительный материал промывали в проточной водопроводной воде с мыльным раствором, затем ополаскивали проточной водопроводной водой, дистиллированной водой и протирали марлевой салфеткой, смоченной в 70%-м этаноле. Срезав листья, черенки помещали в стерильные стаканы и последовательно обрабатывали растворами стерилизующих агентов (табл. 1).
Экспланты помещали в пробирки на агаризованную питательную среду. В качестве базовой среды использовали среду Мурасиге и Скуга [8], pH 5,7, с добавлением цитокинина БАП (0,25 и 0,5 мг/л). Экспланты находились в культу-ральной комнате с температурой 24±1°С, 16-часовым фотопериодом и интенсивностью освещения 2000-3000 лк.
Таблица 1
Схема стерилизации первичных эксплантов миниатюрных роз
Этап стерилизации Стерилизующий раствор Производитель Экспозиция
1 70% C2H5OH Септол, Украина 1 мин
2 2,5% NaClO Domestos, Россия 10 мин
3 5-кратная промывка в дистиллированной воде
Результаты и обсуждение
Экспланты исследуемых сортов, отобранные в течение летнего периода, после стерилизации высаживали на модифицированную среду МС. Количество инфицированных эксплантов варьировало от 0 до 50% в зависимости от сорта и сроков введения в летние месяцы (рис.).
Рис. Зависимость развития эксплантов от сроков отбора и введения в культуру
in vitro
В осенние месяцы процент развившихся эксплантов, введенных в культуру in vitro, достигал 80-90% у сортов: Гранатовый Браслет, Мальчик-с-Пальчик, Санмайд, Попкорн, Бэби Бантинг, Рулети, Крымский Гном.
Наблюдая процессы регенерации, мы отметили, что у сегментов побегов с почками, введеных в культуру in vitro в июле, микропобеги развивались у таких сортов, как Мистер Блюбёрд, Бэби Бантинг. Вместе с тем через три недели культивирования образовывались листья у сортов Рулети, Синдерелла, Гранатовый Браслет. У эксплантов, введенных в культуру in vitro в августе, микропобеги развивались на 12-е сутки
культивирования (Мальчик-с-Пальчик, Мандарин). При этом листья формировались у сортов Гранатовый Браслет, Попкорн, Мистер Блюбёрд (табл. 2).
Таблица 2
Зависимость развития эксплантов от сроков отбора и введения в культуру
in vitro
Сорт Частота регенерации, %
июль август октябрь ноябрь
Гранатовый Браслет 50 0 83 100
Мальчик-с-Пальчик 92 33 80 86
Санмайд 83 0 0 100
Цвёргкёниг 50 0 0 60
Попкорн 88 100 0 80
Бэби Бантинг 100 0 0 80
Рулети 100 0 100 60
Синдерелла 91 0 0 20
Мистер Блюбёрд 86 100 67 20
Бигуди 63 100 67 40
Мандарин 0 100 50 0
Крымский Гном 0 100 0 100
Среди введенных эксплантов сортов Санмайд и Рулети некоторые образовывали конгломераты микропобегов, которые трудно было разделить. Активное образование каллуса в основании эксплантов происходило у таких сортов, как Санмайд, Мальчик-с-Пальчик, Крымский Гном. У некоторых эксплантов отмечали угнетение развития. У сорта Мандарин наблюдали активное каллусообразование в основании экспланта, однако его развитие не прекращалось.
Выводы
Таким образом, изучены особенности введения в культуру in vitro 12 сортов садовой группы миниатюрных роз. Показана зависимость развития эксплантов от их генотипа и сроков отбора.
Список литературы
1. Бутенко Р.Г. Культура изолированных тканей и физиология растений. - М.: Наука, 1964. - 272 с.
2. Клименко З.К. Розы. - М.: ЗАО «Фитон», 2001. - 176 с.
3. Кондратенко О.В., Митрофанова И.В. Особенности клонального микроразмножения двух сортов миниатюрных роз // Бюл. Никит. ботан. сада. - 2002. - Вып. 86. -С. 38-40.
4. Кондратенко О.В., Митрофанова О.В. Микроразмножение миниатюрных роз in vitro // Ученые записки Таврического ун-та им. В.И.Вернадского. Серия Биология. -2001. - Т. 14, №1. - С. 109-114.
5. Введение в культуру in vitro перспективных сортов роз различных садовых групп для создания растущих коллекций / Мовчан О.П., Митрофанова И.В., Климен -ко З.К., Работягов В.Д. // Бюл. Никит. ботан. сада. - 2006. - Вып. 92. - С. 9-12.
6. Cigdem Alev Ozel, Orhan Arslan. Efficient Micropropagation of English Shrub Rose "Heritage" under in vitro Condition. Gazi Univvtrsity Gazi Eitim Fakulty, Biyoloji Anabilim
Dali, K Blok B-07, Teknikokullar-Ankara, Turkey // Int. J. Agri. Biol. - 2006.-V. 8, №5. - Р. 626-229.
7.Kanchanapoom K. et al. in vitro Flowering from Cultured Nodal Explants of Rose (Rosa hybrida L.) // Not. Bot. Hort. Agrobot. Cluj. - 2009.-V. 37, №2. - P. 261-263.
8.Murashige T., Skoog F. A revized medium for rapid growth and bioassays whith tobacco tissue culture // Phisiologia plantarum. - 1962. - V. 15. - P. 437-497.
Рекомендовано к печати д.б.н. Митрофановой О.В.
БИОХИМИЯ РАСТЕНИЙ
К ВОПРОСУ ОПТИМИЗАЦИИ ПРОБОПОДГОТОВКИ И МЕТОДА АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ФЕНОЛЬНОЙ ПРИРОДЫ
СТОЛОВОГО ВИНОГРАДА
Н.АППАЗОВА;
В.БОЙКО;
Е.А.СЛАСТЬЯ, кандидат биологических наук;
А.Э.МОДОНКАЕВА, кандидат сельскохозяйственных наук НИВиВ «Магарач», г. Ялта
Введение
Для оценки качества столового винограда определение содержания и состава фенольных соединений является одним из основных параметров. Фенольные соединения винограда определяют его вкусовые качества и внешний вид, однако основной особенностью этих веществ является их биологическая активность. Относительно биологической активности фенольных соединений винограда на протяжении последних трех десятилетий ведется активная полемика, начало которой положено явлением так называемого французского парадокса. Весомые аргументы в пользу ключевой роли фенольных соединений в проявлении биологической активности были получены лишь недавно благодаря исследованиям с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Важным компонентом химического состава столового винограда являются флавоноиды. Они играют доминирующую роль как в обмене веществ, так и в формировании диетических свойств, окраски и вкусовых достоинств винограда. Практически все флавоноиды обладают Р-витаминной и антиокислительной активностью, являясь важнейшим регулятором протекающих внутриклеточных свободнорадикальных процессов [1 -4]. Антоцианы, процианидины, катехины и флавонолы, характеризуясь небольшой молекулярной массой, являются наиболее важными флавоноидными соединениями виноградной ягоды и проявляют выраженную биологическую активность. Анализ этих групп соединений играет ключевую роль в определении качества столового винограда.
Многие годы основными методами выделения, очистки и концентрирования определяемых веществ были экстракция, осаждение, центрифугирование, бумажная, колоночная и тонкослойная хроматографии. Такая подготовка образцов является длительным и многоступенчатым процессом, требующим расхода большого количества особо чистых растворителей и реактивов, дополнительного оборудования и трудозатрат. С появлением оборудования для ВЭЖХ анализ фенольных соединений
