Особенности цитокинового профиля при маточных кровотечениях пубертатного периода Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКИЙ /^ЯНОГО ЦЕНТРА РАМН 1-2007 I

КЛИНИЧЕСКАЯ МЕДИЦИНА

УДК 618:14-005.1:612.661:612.017

ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОГО ПРОФИЛЯ ПРИ МАТОЧНЫХ КРОВОТЕЧЕНИЯХ ПУБЕРТАТНОГО ПЕРИОДА

Л. С. Сотникова

Сибирский государственный медицинский университет, г. Томск, НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН, г. Томск

Маточные кровотечения пубертатного периода (МК ПП) в структуре гинекологической патологии подростков занимают I место (10-37 %) [1, 2, 3]. Затяжное и рецидивирующее течение заболевания, наличие осложнений при маточных кровотечениях обусловливает тяжелое состояние ребенка и требует длительного лечения. Основным осложнением МК ПП является развитие хронической постгеморрагической железодефи-цитной анемии (ЖДА) [4, 5, 11, 13]. Цитокиновый профиль при МК ПП, сопровождающийся изменением субпопуляционного состава лимфоцитов, в настоящее время не изучен [1, 3, 6, 7, 11, 13]. В связи с этим большой интерес вызывает проведение комплексной и сравнительной оценки иммунного ответа у пациенток с МК ПП как без, так и с развитием анемии для получения новых данных фундаментального характера о степени вовлечения иммунной системы в патологический процесс [9, 10, 12].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Изучить продукцию цитокинов при МК ПП.

МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования явились 120 девушек-подростков. Основную группу составили 80 пациенток с МК ПП. Контрольную группу составили 40 практически здоровых девушек без нарушения менструального цикла, сопоставимых с основной группой по возрасту. Критериями отбора в основную группу были: наличие на момент обследования маточного кровотечения; возраст от 13 до 18 лет; наличие в анамнезе 3 и более эпизодов маточного кровотечения; инфекционный индекс < 2-2,5; отсутствие острых и хронических воспалительных заболеваний; в момент исследования пациентки не принимали половые стероиды.

В зависимости от наличия анемического синдрома пациентки с МК ПП были распределены на две группы: I группа (n = 42) - девушки с МК ПП без развития анемии (гемоглобин > 120 г/л); II группа (n = 38) - девушки с МК ПП с развитием железодефицитной анемии средней степени [гемоглобин - (92±1,6) г/л].

Оценка состояния иммунного статуса проводилась в период кровотечения. Определение общего количества лейкоцитов и подсчет их отдельных морфологических форм проводили стандартными гематологическими методами (Меньшиков В.В., 1987). Определение CD3+-, CD4+-, CD8+- и CD72+-лимфоцитов проводили иммуно-цитохимическим методом с использованием набора реагентов фирмы "Dako" (Дания). Определение уровня IFNy, IL-2, IL-4 и IL-10 в суперна-тантах проводили с использованием твердофазного иммуноферментного "сэндвичевого" метода. Процедуру выполнения иммуноферментного анализа проводили по инструкциям, предлагаемым производителями тест-систем ("Procon", Россия; "Cytimmune", США). Учет результатов имму-ноферментого анализа производили с помощью фотометра для микропланшетов "Multiscan EX" ("ThermoLabSystems", Финляндия) при длине волны 450 нм (для IFNy, IL-2 и IL-4) и 490 нм (для IL-10). Концентрацию цитокинов вычисляли по калибровочной кривой. Данные выражали в пг/мл.

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с использованием пакета программ "Statistica 5.0" для "Windows". Определялись среднее арифметическое X и ошибка среднего арифметического m. Уровень статистической значимости различий сравниваемых показателей устанавливали с использованием t-кри-терия Стьюдента в случаях, когда распределение подчинялось нормальному закону, и непарамет-

БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН

I 1-2007

рического ^-критерия Манна-Уитни в случаях отклонения распределений от нормального [8].

Анализ клинического материала показал, что средний возраст пациенток с МК ПП в исследовании составил (14,8±0,2) года. Средний возраст появления менархе был (13,4±0,3) года. У 63 % (51) девушек цикл к моменту кровотечения не установился. Менструации были нерегулярными, через 2-3 месяца по (6±1) день. У 37 % (29) девушек менструальный цикл до момента кровотечения был регулярным в течение 1-2 лет, через (28±2) дня по (4±1) дня. На момент обследования 60 % (48) имели гиперполименорею, 22 % (17) -гиперменорею и 18 % (15) пациенток - полименорею. Длительность кровотечения варьировала от 14 до 46 дней - в среднем (18±2) дня. Циклические кровотечения наблюдались у 35 % (28) больных, ациклические - у 65 % (52). В контрольной группе средний возраст девушек был (14,2±0,2) года, возраст менархе - (13,5±0,3) года. На момент исследования менструальный цикл был через (28±1,2) дня по (4±1) дней, кровянистые выделения были умеренными по количеству и безболезненными.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Определение количества лимфоцитов, несущих поверхностные маркеры клеточной дифферен-цировки, установило, что относительное и абсолютное содержание Т-лимфоцитов у здоровых девушек составляло (64,26±3,12) % и (1,38±0,15)-109/л соответственно. При этом относительное и абсолютное количество СЭ4 положительных лимфоцитов в контрольной группе соответствовало значениям (40,12±3,22) % и (0,70±0,08)-109/л. Процентное содержание СЭ8+-лимфоцитарных клеток регистрировалось на уровне (25,06±1,24) %, что в абсолютных величинах составляло (0,44±0,02)-109/л. Иммунорегуляторный индекс (СЭ4+/С08+) определялся на уровне 1,52±0,14. Популяция В-лимфоцитов (СЭ72+) в периферической крови здоровых девушек составляла (14,21±1,06) % клеток, что в абсолютных числах соответствовало (0,36±0,08)-109/л.

Результаты иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови у пациенток с маточными кровотечениями пубертатного периода продемонстрировали значительное снижение процентного содержания СЭ4+-клеток, проявляющих хелперную активность, как у пациенток с МК ПП без развития анемии, так и у больных с наличием ЖДА по сравнению со значениями аналогичных параметров у здоровых доноров -(26,12±3,46) % (р < 0,05) и (20,70±1,34) % (р < < 0,05) соответственно. Напротив, относительное количество цитотоксических Т-лимфоцитов достоверно возрастало (р < 0,05) у пациенток I группы до (32,24±3,02) % и во II клинической группе до (38,28±2,12) %, в контроле - (25,06±1,24) %. Соответственно контрольному показателю (р < 0,05)

снижалось значение иммунорегуляторного индекса. Интерпретируя данные результаты, нельзя не отметить, что более выраженные изменения суб-популяционного состава Т-лимфоцитов регистрировались у пациенток с МК ПП, осложнившимися развитием анемии. При исследовании уровня В-лимфоцитов отмечалось статистически значимое повышение (р < 0,01) по сравнению с таковым в группе контроля абсолютного числа СЭ72-позитивных лимфоцитарных клеток у обследованных пациенток с МК ПП как без, так и с развитием анемии.

Таким образом, результаты исследования суб-популяционного состава лимфоцитов периферической крови при МК ПП демонстрируют факт нарушения функционирования клеточного звена иммунитета. Согласно современным представлениям активация ТЬ1-лимфоцитов, сопряженная с продукцией ключевых цитокинов РИ-у и 1Ь-2, усиливает клеточный иммунитет, детерминация иммунного ответа по гуморальному типу осуществляется при доминирующем влиянии ТЬ2-цито-кинов, дискриминантными из которых являются 1Ь-4 и 1Ы0 [9, 10, 12].

Как показало проведенное исследование, спонтанная и стимулированная фитогемагглюти-нином продукция РИ-у мононуклеарными лейкоцитами периферической крови у здоровых девушек составила (104,02±12,76) и (272,33±22,04) пг/мл соответственно. Индекс стимуляции выработки данного цитокина оказался равным (2,52±0,24) усл. ед. Изучение продукции мононук-леарами 1Ь-2 в контрольной группе показало, что базальная секреция этого цитокина оказалась равной (40,62±6,34) пг/мл, а ФГА-индуцированная -(192,20±16,42) пг/мл. Средняя величина индекса стимуляции секреции 1Ь-2 составила (5,24±1,02) усл. ед. Спонтанная и стимулированная продукция 1Ь-4 у здоровых девушек соответствовала (58,64±8,24) и (142,04±16,14) пг/мл, индекс стимуляции этого цитокина оказался равным (2,82±0,18) усл. ед. Конституциональная и ФГА-индуцированная секреция мононуклеарными клетками 1Ь-10 у лиц контрольной группы оказалась равной (62,18±4,62) и (156,62±16,42) пг/мл соответственно, индекс стимуляции продукции данного интерлейкина -(2,62±0,26) усл. ед.

Детальное изучение цитокин-продуцирующей функции мононуклеаров периферической крови у пациенток с МК ПП позволило констатировать факт изменения изучаемых показателей. Так, в ходе исследования уровня продукции мононуклеа-рами 1РИу было выявлено значительное снижение его спонтанной и ФГА-стимулированной секреции по сравнению с таковыми у здоровых девушек в 1,2 раза у пациенток без анемии и в 1,4 раза - с развитием ЖДА. Причем индекс стимуляции продукции РИу у обследованных нами пациенток соответствовал контрольным значениям.

БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН_1-2007 I

Таблица

Продукция питокинов у пациенток с МК ПП, Х±т

Продукция цитокина Группы обследованных

Контрольная группа I группа МКПП без ЖДА II группа МК ПП с ЖДА

1Ь-2 Спонтанная, пг/мл 40,62±6,34 48,66±6,42 р1 > 0,05 52,24±12,14 р1,2 > 0,05

ФГА-стимулированная, пг/мл 192,20±16,42 102,46±14,42 р1 < 0,01 96,24±8,82 р1 < 0,01, р2 > 0,05

Индекс стимуляции, усл. ед. 5,24±1,02 2,12±0,68 р\ < 0,01 2,36±0,21 р1 < 0,01, р2 > 0,05

У Спонтанная, пг/мл 104,02±12,76 86,62±14,12 р\ < 0,01 75,16±6,56 р1 < 0,05, р2 > 0,05

ФГА-стимулированная, пг/мл 272,33±22,04 152,04±22,46 р1 < 0,05 127,03±24,38 р1 < 0,05, р2 > 0,05

Индекс стимуляции, усл. ед. 2,52±0,24 2,48±0,22 р1 > 0,05 2,56±0,25 р:.2 > 0,05

1Ь-4 Спонтанная, пг/мл 58,64±8,24 92,62±12,14 р1 < 0,05 118,24±9,67 р1 < 0,001, р2 < 0,01

ФГА-стимулированная, пг/мл 142,04±16,14 204,26±16,25 р1 < 0,05 238,42±12,14 р1 < 0,01, р2 > 0,05

Индекс стимуляции, усл. ед. 2,82±0,18 2,32±0,24 р1 > 0,05 2,06±0,14 р1,2 < 0,05

10 Спонтанная, пг/мл 62,18±6,62 52,12±11,14 р1 > 0,05 56,46±8,04 р1,2 > 0,05

ФГА-стимулированная, пг/мл 156,62±16,42 126,23±6,42 р1 > 0,05 134,26 ±12,02 р:,2 > 0,05

Индекс стимуляции, усл. ед. 2,62±0,26 2,82±0,44 р1 > 0,05 2,78±0,12 р1,2 > 0,05

Примечание. р\ - достоверность различий по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы; р2 - достоверность различий по сравнению с аналогичными показателями у пациенток с МК ПП без ЖДА.

Было установлено статистически значимое (р < 0,01) угнетение ФГА-стимулированной продукции дис-криминантного в реализации ТЬ1-пути иммунного ответа 1Ь-2 у всех обследованных пациенток. Уровень конституционального синтеза этого ин-терлейкина практически не отличался от нормы. Индекс стимуляции секреции цитокина также существенно (р < 0,01) снижался. Выявлено статистически значимое возрастание базальной и ФГА-стимулированной продукции мононуклеа-рами 1Ь-4, стимулирующее поляризацию Т-хел-перов в направлении ТЬ2, в анализируемых клинических группах по сравнению с контрольными значениями. Расчет индекса стимуляции продукции данного цитокина показал снижение значения этого показателя на 25 % у пациенток с анемией вследствие МК ПП. Конституциональная и индуцированная продукция иммуно-компетентными клетками 1Ь-10, а также индекс стимуляции секреции данного цитокина у пациенток с МК ПП независимо от наличия анемического синдрома значимых изменений по сравнению с таковыми в контрольной группе не претерпевали (см. табл.).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, проведенное нами исследование позволило выявить нарушение иммунного статуса при МК ПП, что характеризовалось дефицитом Т-клеточного звена иммунитета, следствием которого, вероятно, явился выявленный дисбаланс продукции цитокинов с про- (1Ь-2, 1ИР-у) и противовоспалительными (1Ь-4) свойствами. Настоящее исследование позволило зарегистрировать у пациенток с анемией при МК ПП значительное угнетение продукции мононуклеарами 1Ь-2, а также про-воспалительного цитокина - 1РИ-у. При этом продукция цитокина ТЬ-2 пути иммунного ответа - 1Ь-4, напротив, значительно увеличивалась.

ЛИТЕРАТУРА

1. Богданова Е. А. Гинекология детей и подростков. - М.: Медицинское информационное агенство, 2000. - 332 с.

2. Гарден А. С. Детская и подростковая гинекология / Под ред. А. С. Гарден, Т. М. Глыбинной; пер. с англ. - М.: Медицина, 2001. - С. 149-155.

3. Гуркин Ю. А. Гинекология подростков. - СПб.: Фолиант, 2002. - С. 193-226.

4. Диагностика и лечение ювенильных маточных кровотечений: методические рекомендации / Сост. В. Ф. Коколина. - М., 1999. - 32 с.

БЮЛЛЕТЕНЬ ВОЛГОГРАДСКОГО НАУЧНОГО ЦЕНТРА РАМН

I 1-2007

5. Железо дефицитные состояния в различные периоды жизни женщины / В. Н. Серов, В. Н. Прилеп-ская, Е. В. Жаров и др. - М., 2002. - 15 с.

6. Зудикова С. И. // Сб. науч. тр. IV Всерос. конф. по детской и подростковой гинекологии, г. Москва, 2000. - М., 2000. - С. 59-60.

7. Кучумова О. Ю. // Репродуктивное здоровье детей и подростков: сб. науч. тез. конфер. - Барнаул, 2004. - С.188-190.

8. Пеккер Я. С., Фокин В. А. Анализ и обработка медико-биологической информации. - Томск: Изд-во ТПУ, 2002. - 160 с.

9. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология: пер. с англ.- М.: Мир, 2000. - 582 с.

10. Симбирцев А. С. // Циток. и воспал. - 2004. -Т. 3, № 2. - С. 16-21.

11. Уварова Е. В., Веселова Н. М. // Репродуктивное здоровье детей и подростков. - 2005. - № 3. -С. 30-37.

12. Хаитов Р. М., Игнатьева Г. А., Сидорович И. Г. Иммунология. - М.: Медицина, 2000. - 432 с.

13. Chen B. H., Giudice L. C. // West. J. Med. -2004. - Vol. 169. - P. 280-284.