CC BY
78
Оригинальные статьи
Особенности становления микрофлоры у детей раннего возраста
Л. И. Кафарская, Б. А. Ефимов, Е. А. Постникова, Е. Е. Донских
гоу впо российский государственный медицинский университет росздрава
Кафедра фундаментальной и клинической микробиологии, Москва
Результаты данного исследования демонстрируют, что для детей первого года жизни характерны высокие популяцион-ные уровни и частота выявления не только таких групп бактерий, как бифидобактерии, энтерококки, непатогенные эше-рихии, но и бактерий, которые принято относить к условно-патогенным группам. Такими являются лецитиназопозитив-ные клостридии, коагулазопозитивные стафилококки, дрожжеподобные грибы рода Кандида, цитратассимилирующие энтеробактерии и эшерихии с низкой биохимической активностью, а также со способностью к продукции гемолизинов. К концу первого года жизни происходит частичная или полная элиминация условно-патогенных бактерий. Ключевые слова: микробиоценоз кишечника, дети раннего возраста, бифидобактерии, условно-патогенная флора
Изучению механизмов становления микробиоценоза кишечника посвящено значительное количество работ [1—5]. Это связано, в первую очередь, с той важностью и многообразием функций, которые присущи микрофлоре тела человека. Особо следует отметить возможность микрофлоры участвовать в создании колонизационной резистентности, физиологические функции, например, метаболические, антимутагенные и иммуномодуляторные [6—8].
Вместе с тем, несмотря на значительные успехи в области изучения нормальной микрофлоры кишечника у детей раннего возраста, в отечественной литературе до сих пор недостаточно комплексных данных о динамике состояния микрофлоры кишечника детей в данный период жизни. Процесс формирования нормальной микрофлоры начинается сразу же после рождения ребенка и продолжается в течение всего первого года жизни.
Для получения объективной информации о динамике микробной колонизации кишечника человека нами была предпринята попытка создания полноценной модели становления и поддержания микробной колонизации кишечника. Было проведено ретроспективное изучение состава микрофлоры кишечника 1113 человек, в возрасте от 1 месяца до 75 лет, прошедших плановое обследование на дисбактериоз кишечника на кафедре микробиологии РГМУ с 1997 по 2001 гг. Вместе с тем в данном исследовании мы позволили себе ограничиться анализом тех изменений в составе микрофлоры кишечника, которые сопровождают первые 2 года жизни ребенка.
Материалы и методы исследования
Под наблюдением находилось 45 клинически здоровых детей обоего пола, проживающих в экологически благополучном ЮЗАО г. Москвы. Состояние здоровья на момент обследования расценивалось как удовлетворительное. У большинства детей в анамнезе не было гастроинтестинальных и аллергических нарушений, все получали адекватное возрасту вскармливание.
Материалом для исследования служили фекалии. Посев исследуемого материла и последующий учет выросших колоний проводили в соответствии с ранее предложенной методикой [9].
Статистическую обработку полученных результатов проводили общепринятыми статистическими метода-
ми. Для каждого ряда значений определяли среднее арифметическое и стандартные отклонения среднего значения. Достоверность различий между средними значениями количества микроорганизмов определяли с использованием /-критерия Стьюдента или критерия Уилкоксона. Достоверность различий в частоте выявления микроорганизмов между группами обследуемых детей проверяли с использованием точного критерия Фишера, методами углового преобразования Фишера или критерия — с2. Различия стали достоверными при р < 0,05. Данные, полученные при проведении количественного микробиологического анализа, выражали в логарифме по основанию 10 (lg) микроорганизмов на 1 г исследуемого материала.
Результаты и их обсуждение
В результате проведенного исследования было установлено, что у 100% детей во всех возрастных группах доминирующими микроорганизмами в толстой кишке были бифидокбактерии. Средняя концентрация бактерий этого рода превысила значение 1010 КОЕ/г исследуемого материала (табл. 1). Другими группами бактерий, которые определялись со 100% частотой у детей в возрасте 6 месяцев, были эшерихии и стафилококки.
Отмечено, что только у 60% детей, находившихся на грудном вскармливании к 6-месячному возрасту выявились типичные кишечные палочки. В 53,3% случаев у них были обнаружены лактозонегативные (lac-) гемо-лизинпродуцирующие (hem+) штаммы эшерихий и в 46,6% случаев — гемолизинпродуцирующие штаммы, способные сбраживать лактозу. Среди других видов энтеробактерий наиболее часто (в 53,3% случаев) выявлялись клебсиеллы в средней концентрации 6,9 ± ± 1,4 lg КОЕ/г. Частота встречаемости C. freundii составила 20,0% (в количестве 6,2 ± 0,4 lg КОЕ/г), Е. cloacae — 13,3% (в количестве 5,9 ± 0,7 lg КОЕ/г).
Лактобактерии у детей этой возрастной группы были обнаружены у 66,6% детей, а их количество составляло 6,8 ± 1,0 lg КОЕ/г. У 67% детей был выделен S/aphylococcus aureus в средней концентрации 4,9 ± 0,8 lg КОЕ/г. Кроме того, у 66,6% детей встречались дрожжеподобные грибы рода Candida в концентрации 4,3 ± 1,3 lg КОЕ/г.
Таблица 1. Состав микрофлоры кишечника у клинически здоровых детей в различные периоды раннего возраста
Микроорганизмы 6 месяцев 8—9 месяцев 10—11 месяцев 1 год и старше
Частота встречаемости, % M ± SD Частота встречаемости, % M ± SD Частота встречаемости, % M ± SD Частота встречаемости, % M ± SD
Бифидобактерии 100 10,1 ± 0,7 100 10,4 ± 0,9 100 10,3 ± 0,9 100 10,1 ± 0,4
Лактобактерии 66,6 6,8 ± 1 100 7,5 ± 0,8 83,3 7,6 ± 1,0 76,9 6,9 ± 1,5
Эубактерии Н.О.* Н.О. 9,1 9,0 33,3 10,0 ± 0,4 46,2 9,8 ± 0,6
Пептострептококки Н.О. Н.О. 36,4 9,6 ± 0,4 33,3 9,4 ± 0,7 53,9 9,9 ± 0,5
Клостридии (общее количество) Н.О. Н.О. 100 8,5 ± 1,3 83,3 9,2 ± 0,4 100 8,5 ± 0,3
Клостридии (лецитиназопозитивные) 53,3 6,6 ± 2,3 54,5 5,3 ± 1,0 33,3 4,7 ± 0,3 69,2 5,2 ± 0,9
Клостридии (лецитиназонегативные) 86,6 6,0 ± 0,9 81,8 7,6 ± 1,0 83,3 8,1 ± 0,6 100 7,6 ± 1,4
Бактероиды Н.О. Н.О. 31,8 10,2 ± 0,5 10 10,3 ± 0,4 92,3 10,5 ± 0,6
Энтеробактерии (общее количество) 100 9,1 ± 0,6 100 8,4 ± 0,1 100 9,1 ± 0,5 100 8,5 ± 0,9
Escherichia coli (общее количество) 100 9,1 ± 0,7 100 8,1 ± 0,8 100 8,8 ± 0,9 100 8,5 ± 0,9
E.coli (лактозопозитивные/гемо-лизиннегативные) 60 8,8 ± 0,7 90,9 7,5 ± 1,2 83,3 8,1 ± 0,9 100 8,2 ± 1,0
E.coli (лактозонегативные/гемо-лизиннегативные) 18,2 7,7 ± 0,9 16,7 8 15 6,? ± 0,4
E.coli (лактозопозитивные/гемо-лизинпозитивные) 46,6 8,7 ± 0,? 36,4 8,1 ± 1,4 83,3 8,6 ± 0,7 23,1 7,7 ± 0,5
E.coli (лактозонегативные/гемо-лизинпозитивные) 5?,? 8,1 ± 1 16,7 7,18 ± 15,4 7,8 ± 1,8
Клебсиеллы (общее количество) 53,3 6,9 ± 1,4 90,9 7,7 ± 1,3 100 6,9 ± 1,0 61,5 6,3 ± 1,6
Klebsiella pneumoniae 33,3 7,3 ± 1,1 36,4 7,0 ± 1,7 66,7 7,0 ± 0,6 46,2 5,9 ± 2,0
Klebsiella oxytoca 26,6 6,3 ± 1,6 72,7 7,9 ± 1,3 50 6,5 ± 1,3 38,5 5,8 ± 1,1
Enterobacter cloacae 13,3 5,9 ± 0,7 27,3 6,3 ± 2,6 33,3 6,2 ± 0,3 23,1 7,5 ± 1,0
Citrobacter freundii 20 6,2 ± 0,4 9,1 8,3 33,3 7,5 ± 1,0 7,7 7,18
Proteus mirabilis ;,1 8,85
Proteus vulgaris 4,78
Morganella morganii 9,1 4,3 7,7 4,0
Acinetobacter spp. 7,7 8,6
Kluyvera spp. 9,1 6,0 16,7 8,95
Pseudomonas aeruginoza 9,1 2,78 16,7 4,0 15,4 3,6 ± 0,6
Стафилококки (общее количество) 100 5,0 ± 0,6 81,8 4,9 ± 1,1 83,3 6,2 ± 0,7 100 4,6 ± 1,1
Staphylococcus aureus 66,6 4,9 ± 0,8 81,8 4,7 ± 1,3 66,7 6,3 ± 0,9 76,9 4,6 ± 1,1
Staphylococcus spp. 86,6 4,6 ± 1,2 54,5 3,9 ± 1,0 66,7 5,4 ± 0,5 84,6 3,7 ± 1,3
Энтерококки 100 8,3 ± 0,9 100 8,0 ± 0,5 100 8,3 ± 0,4 92,3 7,5 ± 0,8
Бациллы 36,4 2,5 ± 0,6 33,3 3,7 ± 2,2 53,9 3,5 ± 1,2
Дрожжеподобные грибы рода Candida 66,6 4,3 ± 1,3 81,8 4,7 ± 1,1 50 4,5 ± 0,3 76,9 4,9 ± 0,8
Филаментозные грибы 9,1 2,0 7,7 3,76
*— Н.О. — не определялось
В микрофлоре кишечника у детей 8—9 месяцев, кроме бифидобактерий, со 100% частотой определялись эшерихии и лактобактерии. Частота выявления типичных кишечных палочек увеличилась до 90,9% случаев. Вместе с тем, частота встречаемости лактозо-негативных и гемолизинпродуцирующих штаммов снизилась до 18,2 и 36,4% соответственно. С другой стороны, у детей этой группы было обнаружено статистически достоверное увеличение частоты встречаемости клебсиелл (90,9%). Причем, наиболее значимо как по частоте обнаружения, так и в количествен-
ном отношении, увеличивалось содержание клебсиелл вида Klebsiella oxytoca (72,7% и 7,7 ± 1,0 lg КОЕ/г соответственно). Происходило расширение энтеробак-терий, к которым добавлялись протеи, морганеллы и кливеры.
Частота встречаемости золотистых стафилококков увеличилась до 81,8%. Дрожжеподобные грибы рода Candida были также обнаружены у 81,8% в концентрации 4,7 ± 0,7 lg КОЕ/г.
Увеличивался и анаэробный спектр микроорганизмов. Клостридии выделялись у 100% детей в количест-
ве 8,5 ± 0,8 lg КОЕ/г. У 81,8% детей этой группы были обнаружены бактериоды в средней концентрации
10.2 ± 0,3 lg КОЕ/г. Также выделялись пептострептокок-ки (в 36,4% случаев) в количестве 9,6 ± 0,4 lg КОЕ/г и эубактерии (в 9,1% случаев) в количестве 9,0 lg КОЕ/г.
Микрофлора кишечника у детей в возрасте 10—11 месяцев не имела принципиальных отличий от микрофлоры кишечника детей предыдущей возрастной группы, за исключением статистически значимого нарастания у них гемолизинпродуцирующих штаммов эшерихий и общего числа стафилококков за счет увеличения количества S/aphytococcus aureus. Продолжалось дальнейшее увеличение анаэробного спектра микроорганизмов и доминирующее положение наряду с бифидобак-териями занимали бактериоды, которые выделялись у всех детей этой возрастной группы в количестве
10.3 ± 0,4 lg КОЕ/г.
Полученные результаты показали, что группами бактерий, высеваемыми с наибольшей частотой, являлись бифидобактерии, энтеробактерии, стафилококки и энтерококки. Доминирующими микроорганизмами в толстой кишке у 100% детей во всех возрастных группах были бифидобактерии. Средняя концентрация бактерий этого рода превысила значение 1010 КОЕ/г исследуемого материала. Высокая частота встречаемости бифидобактерий по сравнению с другими микроорганизмами, отмечавшаяся у детей всех исследованных возрастных групп, соответствует ранее представленным данным об их доминировании у детей раннего возраста [1, 9].
Необходимо отметить, что бифидобактерии, в силу особенностей их биологических свойств, реализация которых выражается в благотворном влиянии на состояние здоровья человека, составляют важную часть микрофлоры кишечника. Это отражено также в высоком популяционном уровне, достигающем в норме 1010—1011 КОЕ/г испражнений и способности организма человека селективно стимулировать их размножение.
Частота обнаружения у обследованных детей лак-тобактерий уступала этому показателю для бифидо-бактерий и, кроме того, была подвержена значительным колебаниям. В нашей работе было установлено, что только 66,6% детей были колонизированы лакто-бактериями в первом полугодии жизни. В дальнейшем в нашей работе прослеживалась устойчивая тенденция к повышению частоты колонизации кишечника лакто-бактериями с увеличением возраста человека. Однако, частота встречаемости этих бактерий у детей разных возрастных групп, в отличие от этого показателя для бифидобактерий, была подвержена значительным колебаниям.
Непостоянное выявление лактобактерий в период от момента рождения ребенка до прекращения грудного вскармливания вызывает предположение, что данные микроорганизмы не способны сформировать стабильную популяцию в кишечнике новорожденных.
Необходимо отметить, что в научных работах последних лет обсуждается тесная связь между частотой обнаружения, количественным уровнем, а также видовым разнообразием лактобактерий и употребляемыми продуктами питания, в частности, содержащи-
ми лактобактерии и за счет этого обладающими про-биотической активностью. Кроме этого, количественный и качественный уровень лактобактерий, возможно, в значительной степени контролируется за счет иммунной системы. Было обнаружено, что у людей плазменные концентрации IgG, реактивных в отношении лактобактерий, были статистически выше, чем те же против бифидобактерий [10, 11].
В результате изучения качественного и количественного состава бактерий, относящихся к семейству En/erobac/eriaceae, всего было выявлено 20 различных видов энтеробактерий, относящихся к 10 родам. Исследования показали, что у детей от 6 месяцев до 1,5 лет, с наибольшей частотой высевались бактерии, относящиеся к виду Escherichiacoli. С другой стороны, для микрофлоры кишечника детей были характерны эшерихии, отличавшиеся сниженными ферментативными свойствами, а также штаммы, способные продуцировать гемолизины. Кроме того, с высокой частотой определялись и другие представители семейства (клебсиеллы, энтеробактеры и цитробактеры).
Эшерихии, отличавшиеся сниженными ферментативными свойствами, а также способностью к продукции гемолизинов, как и другие представители семейства (клебсиеллы, энтеробактеры и цитробактеры, протеи и другие), составляют значительную часть как качественного, так и количественного спектра энтеро-бактерий у детей первого года жизни, но в последующем к концу первого года жизни по мере созревания иммунной системы ребенка происходит частичная или полная элиминация условно-патогенных бактерий. У 100% детей в возрасте старше 1 года встречались типичные кишечные палочки, в то время как частота выявления и концентрация лактозонегативных и гемо-лизинпродуцирующих кишечных палочек снижалась. Также снижались частота выявления и уровень клебси-елл и других энтеробактерий.
Таким образом, полученные результаты доказывают, что только биохимически активные и не обладающие факторами патогенности штаммы кишечных палочек являются резидентами для человеческого организма. Другие штаммы эшерихий, а также другие виды энтеробактерий относятся к транзиторным группам бактерий.
Еще одной группой бактерий, колонизация которыми толстого кишечника детей была зарегистрирована в раннем возрасте, были стафилококки. Причем у всех детей микроорганизмы вида S/aphytococcus au-reus, в количественном отношении преобладали над коагулазонегативными стафилококками, а у детей в возрасте 8 месяцев и 1 года было отмечено преобладание золотистых стафилококков и по частоте встречаемости.
В этой связи необходимо подчеркнуть, что в течение последних десяти лет S. aureus обнаруживаются с все возрастающей частотой в образцах стула у детей западного сообщества. Так, в работе, проведенной в Англии в 1980 году, было показано, что только у 1 из 13 детей в испражнениях были обнаружены S. aureus. Однако, уже у 30% здоровых детей в Швеции в работе, опубликованной в 1985 году и у 53% детей в Швеции в конце 90-х годов. В работе, опубликованной в
2000 году, было показано, что частота обнаружения S. aureus в интестинальной микрофлоре здоровых детей в Швеции составляла 16% к 3 дню жизни. С этого времени частота колонизации продолжала увеличиваться, достигнув 73% к 6 месяцам. К 12-месячному возрасту 53% все еще имели S. aureus в их образцах исследуемого материала. В этой же работе показано, что источником колонизации детей бактериями вида S. aureus явилась флора кожи людей, окружавших ребенка [12, 13].
Среди других облигатно-анаэробных микроорганизмов практически у всех детей в возрасте 8 месяцев и старше определялись бактероиды и клостридии, причем количество бактероидов превышало 1010 КОЕ/г, а кло-стридий — 108—109 КОЕ/г. В кишечнике ребенка, начиная с 10-месячного возраста и старше, бактероиды, наряду с бифидобактериями, начинают занимать доминирующее положение. Полученные нами данные согласуются с исследованиями других авторов, указывающих на низкую частоту контаминации бактероидами детей первого полугодия жизни [5]. Частота выявления этих микроорганизмов возрастает у детей к концу первого года жизни.
Запаздывание контаминации толстой кишки гра-мотрицательными неспорообразующими облигат-но-анаэробными бактериями может быть связано с их высокой чувствительностью к токсическому действию кислорода воздуха, а также с необходимостью предварительного снижения окислительного потенциала в толстой кишке ребенка, которое достигается в результате первичной контаминации кишечника бактериями, относящимися к аэробной флоре. Так же, в работах с применением гнотобиологической модели животных было показано, что предварительная колонизация стерильного гастроинтестинального тракта бифидобактериями приводит к появлению на слизистой кишечника рецепторных паттернов, которые в последующем могут быть использованы некоторыми видами бактероидов для эффективной адгезии. Кроме того, поверхность интестинальных эпителиальных клеток покрыта большим количеством гликопротеинов и гликолипидов, которые в своих терминальных областях несут остатки фукозы. Индукция синтеза таких молекул происходит при участии кишечной микрофлоры и, в частности, бактероидов, которые способны отщеплять остатки фукозы от поверхности клеток хозяина, метаболизируя их, используя в качестве источника энергии или как строительный материал для синтеза различных молекул, включая богатые фукозой полиса-харидные капсулы. В свою очередь, фуколизированные капсульные полисахариды, антигенно неразличимы для организма хозяина и могут использоваться бактероидами для молекулярной мимикрии [14, 15]. Возможно, что необходимость появления такого рода рецепторов на кишечном эпителии для его оптимальной колонизации бактероидами, причем индукция синтеза которых происходит уже после рождения ребенка при участии самих бактероидов, приводит к некоторому замедлению процесса колонизации этими бактериями, особенно на фоне необходимости конкурировать за сайты адгезии с бифидобактериями, первично колонизирующими кишечник, в том случае если речь
идет о здоровых детях. Наконец, необходимо отметить, что бактероиды, колонизирующие кишечный тракт человека, обладают выраженными гликофильны-ми свойствами, которые проявляются в способности к ферментации неперевариваемых человеком полисахаридов, входящих, например, в состав пищевых волокон растительного происхождения. Бактероиды, которые испытывают недостаток в органеллах адгезии (В. 1Ье1а'ю1аот'сгоп), осуществляют доступ к нутриен-там, частично, за счет продуцируемого ими гли-кан-специфических поверхностных мембран-связан-ных протеинов. Прикрепление к пищевым платформам (частицы пищи, пищевые волокна, слизевой покров, слущенные эпителиальные клетки) помогают этим бактериям избегать смыва из кишечного биореактора [2, 16]. Таким образом, возможно, что задержка колонизации кишечника бактероидами у детей раннего возраста связана с особенностями их диеты, которая в ранние сроки физиологической адаптации отличается отсутствием или дефицитом пищевых волокон растительного происхождения. Так, в наших исследованиях было показано, что частота выделения бактероидов из кишечника у детей, в концентрации превышающей 109 КОЕ/г, достигла 50% рубежа только к 5 месяцу жизни, т. е. сроку введения прикорма, а у детей в возрасте 1 года частота выделения бактероидов в этой концентрации составила уже 87,9% случаев.
Отставание в частоте контаминации детей первого года жизни бактериями рода Ва^го/веэ, согласуется с ранее полученными данными для детей в других странах. Так, в работе М. М. Сгоп1ипС и соавт. (2000) по изучению становления микрофлоры кишечника у детей первого полугодия жизни, проведенной в Финляндии, показано, что бактероиды обнаруживались только у 35% детей на 30 день жизни, медиана концентрации составляла 9,4 КОЕ/г, в последующем количественный уровень этих бактерий не менялся, однако происходило увеличение частоты встречаемости этих бактерий [5]. Так, в возрасте 60 дней частота обнаружения бактероидов у обследуемых детей составила 48%, а в 180 дней уже 59%. В этой же работе обсуждается роль различных групп интенстиналь-ных бактерий в их модулирующем влиянии на созревание механизмов гуморального ответа у детей раннего возраста. Авторами была обнаружена тесная связь между интестинальной колонизацией бактероидами и созреванием 1дА-секретирующих и 1дМ-секретирую-щих клеток в сравнении с колонизацией кишечника группами бактерий или вводимыми диетами. Общепринятой концепции, отвечающей на вопрос, почему и каким образом в организме происходит селекция бактерий, при которой непатогенные штаммы сохраняются, а условно-патогенные штаммы элиминируются из кишечника, до настоящего времени не существует. Однако публикуемые в последнее время научные работы позволяют считать, что эти процессы регулируются тонкими механизмами иммунологической защиты человека, отвечающей по-разному на стимуляцию со стороны патогенных и непатогенных групп бактерий [8, 17—19].
Наиболее выраженные изменения в кишечной микрофлоре происходят у детей на первом году жизни.
Для них характерны высокие популяционные уровни и частота выделения не только таких аутохтонных групп бактерий, как бифидобактерии, энтерококки, непатогенные эшерихии, но и бактерий, которые принято относить к условно-патогенным аллохтонным группам. Такими группами бактерий являются лецитиназопози-тивные клостридии, цитратассимилирующие энтеро-бактерии и эшерихии с низкой биохимической активностью, а также со способностью к продукции гемолизинов, кроме того, к этой группе относятся коагулазопозитивные стафилококки. В последующем, как показали результаты нашего исследования, с ростом организма происходит прогрессивная элиминация бактерий этой последней группы. Основными механизмами, участвующими в контроле качественного и ко-личесвтеного уровня бактерий в микрофлоре кишечника, по нашему мнению, являются неспецифические и специфические факторы иммунологической защиты, созревание которых происходит по мере взросления человека и межмикробные взаимодействия, осуществляемые бактериями представителями нормальной микрофлоры.
В нашей работе мы обнаружили достоверное снижение частоты выделения золотистых стафилококков, начиная с группы детей 2 лет, в то время как популя-ционный уровень стафилококков этого вида статистически значимо снижался уже у группы детей 12-месячного возраста и продолжал снижаться в дальнейшем. Кроме того, в нашей работе мы выявили симилятивное снижение популяционного уровня коагулазонегативных сапрофитных стафилококков, в то время как, например, уровни энтерококков и энтеробактерий оставались высокими.
Таким образом, полученные результаты демонстрируют, что для детей первого года жизни характерны высокие популяционные уровни и частота выявления не только таких групп бактерий, как бифидобактерии, энтерококки, непатогенные эшерихии, но и бактерий, которые принято относить к условно-патогенным группам. Такими группами бактерий являются лецитиназо-позитивные клостридии, коагулазопозитивные стафилококки, дрожжеподобные грибы рода Кандида, цит-ратассимилирующие энтеробактерии и эшерихии с низкой биохимической активностью, а также со способностью к продукции гемолизинов. К концу первого года жизни происходит частичная или полная элиминация условно-патогенных бактерий.
В то же время существенные изменения качественного и количественного состава микрофлоры кишечника детей в последние годы по сравнению с предыдущими исследованиями могут быть связаны с воздействием неблагоприятных факторов окружающей среды, активной миграцией населения, низким социальным статусом основной части жителей России, использованием нерациональных диет, повсеместным применением антибиотиков широкого спектра действия и химио-препаратов.
Можно предположить, что в этих условиях нормальная микрофлора кишечника с высоким содержанием бифидобактерий играет существенную роль в поддержании колонизационной резистентности и на фоне избыточной колонизации кишечника условно-па-
тогенными микроорганизмами препятствует транслокации их в другие органы [8].
Отсутствие у обследованных нами детей клинических признаков дисбактериоза позволяет считать выявленное состояние микробиоценоза кишечника физиологическим в современных условиях жизни, и поэтому целесообразно пересмотреть существующие критерии нормы для микрофлоры кишечника у детей данной возрастной группы.
Обсуждая вероятные причины, приводящие к такой последовательности событий, сопровождающих формирование интестинальной микрофлоры, необходимо принимать во внимание, что со стороны человека антагонизм по отношению к патогенным микроорганизмам или симбиотические взаимодействия с непатогенными бактериями нормальной микрофлоры поддерживаются за счет разнообразных механизмов. К основным, известным на сегодняшний день, неиммунологическим механизмам относят кислотность желудка и его ферментные системы, ферменты поджелудочной железы, перистальтические движения стенки кишки, муциновое покрытие эпителиальных клеток кишечника, разнообразные молекулы, продуцируемые энтероцитами (цито-кины, факторы роста), протективное воздействие бактерий нормальной микрофлоры. К иммунологическим механизмам относят интраэпителиальные и lamina propria Т-лимфоциты (CD8 и CD4 соответственно), В-лимфо-циты, ассоциированную с кишечником лимфоидную ткань, систему секреторных иммуноглобулинов (IgA) и иммуноглобулины других классов, систему ^Е-мукоз-ных тучных клеток.
К сожалению, наши знания о физиологических особенностях защитных систем организма детей раннего возраста и в последующие периоды физиологической адаптации остаются скудными. В первую очередь это связано с необходимостью использования жестких ин-вазивных методов исследования для получения нужной информации, что часто невозможно у здоровых детей. Однако считается, что на протяжении относительно долгого времени после рождения эти системы остаются либо физически незрелыми, либо качественно наивными (необученными). Последний термин подразумевает необходимость контакта с пищевыми или бактериальными антигенами для запуска процессов созревания таких систем.
Так, например, было показано, что у детей число IgA-синтезирующих плазматических клеток слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки приближается к значениям взрослых людей только ко второму году жизни, при этом количество мукозных IgA достигает значений взрослых людей только к 6—8 году [18].
Таким образом, первый и последующие контакты новорожденного ребенка с бактериальными и пищевыми аллергенами должны в конечном итоге определить созревание иммунной системы, в том числе и при участии бактерий нормальной флоры кишечника, которые обладают иммуномодулирующими свойствами.
Необходимо подчеркнуть, что безусловное влияние на процесс формирования микрофлоры кишечника оказывает и степень микробной обсемененности окружающей среды. Нарушение этого критерия законо-
мерно ведет к ухудшению показателей состояния микрофлоры толстой кишки у детей.
Литература:
1. Гончарова Г. И. Бифидофлора человека, ее защитная роль в организме и обоснование сфер применения препарата «Би-фидумбактерин»: Автореф. дисс. ... д.б.н. — М., 1982.
2. The gut mikrobiota as an environmental factor that regulates fat stogare / F. Backhed et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2003. — Nov 2. — V. 101 (44). — P. 157128—157133.
3. Иммунобиологические препараты и перспективы их применения в инфектологии / Г. Г. Онищенко, В. А. Алешкин, С. С. Афанасьев, А. С. Поспелова. — М.
4. Пинегин Б. В. Дисбактериозы кишечника / Б. В. Пинегин, В. Н. Мальцев, В. М. Коршунов.— М.: Медицина, 1984. — 143 с.
5. Importance of intestinal colonisation in the maturation of humoral immunity in early infancy: a prospective follow up study of healthy infants aged 0—6 months / М. М. Gronlund et al. // Arch. Dis. Child. Fetal. Neonatal. — 2000. — V. 83. — P. 186—192.
6. Lactobacilli anticarcinogenic activities and human intestinal microflora /А. Lidbeck, С. E. Nord, J. А. Gustafsson, J. Rafter // Eur. J. Cancer. Prev. — 1992. — V. 1(5). — P. 341—353.
7. Binding of mutagenic heterocyclic amines by intestinal and las-tic acid bacteria / К. Orrhage et al. // Mutat. Res. — 1994. — V. 311. — P. 239—248.
8. Van der Waaij D. Colonozation resistance of the digestive tract-mechanism and clinical consequenxes // Die Nahrung. — 1987. — V. 31. — P. 507—517.
9. Ефимов В. А. Современные методы оценки качественных и количественных показателей микрофлоры кишечника и влагалища / В. А. Ефимов, Л. И. Кафарская, В. М. Коршунов // Журн. Микробиол. — 2002. — № 4. — С. 72—74.
10. Stimulation of cytokine production in clonal macrophage and T-cell models by Streptococcus thermophilus: comparison with Bifidobakterium sp. and Lactobacillus bulgaricus / M. L. Marin et al. // J. Foog. Prot. — 1998. — V. 61. — P. 859—864.
11. Perdigon G. Immunoadjuvant activity of oral Lactobacillus ca-sei: influence of dose on the secretory immune responce and protective capacity in intestinal infections / G. Perdigon, S. Alvarez, A. A. Pesce de Ruiz Holgado // J. Dairy. Res. — 1991. — V. 58. — P. 485—496.
12. Long-Time Persistence of Superantigen-Producing Staphylococ-cus aureus Strains in the Intestinal Microflora of Healthy Infants / E. Lindberg, F. Nowrouzian, I. Adlerberth, A. E. Wold // Pediatric. research. — 2000. — V. 48(6). — P. 741—747.
13. Intestinal microflora of Estonian and Swegish infants / E. Sepp et al. // Acta Paediatr. — 1997. — V. 86. — P. 956—961.
14. Human symbionts use a host-like pathway for surface fuco-sylation / M. J. Coyne, B. Reinap, M. M. Lee, L. E. Com-stock // Science. — 2005. — Mar 18. — V. 307 (5716). — P. 1778—1781.
15. Mpi recombinase globally modulates the surface architecture of a human commensal bacterium / M. J. Coyne, L. G. Weinacht, C. M. Krinos, L. E. Comstock // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2003. —Sep 2. — V. 100(18). — P. 10446—10451.
16. Host-bacterial mutualism in the human intestine / F. Backhed et al. // Science. — 2005. — Mar 25. — V. 307 (5717). — P. 1915—1920.
17. Host-bacterial Mutualism in the Human Intestine / Fredrik Backhed et al. // Science. — 2005. — V. 307. — P. 1919— 1925.
18. Matsuzaki T. J. Modulating immune presponses with probiotic bacteria // Immunol. Cell. Biol. — 2000.— V. 78(1). — P. 67—73.
19. Neutra M. R., Kraehenbuhl J. P. Regional Immune Responce to microbial pathogens / In: Edds. S. H. T. Kaufmann, A. Sher, R. Ahmed. Immunology of Infections Disease.— ASM Press USA Washongton, 2002. — 495 p.
Мониторинг энтеровирусов в Северо-Западном регионе России
Е. А. Мурина, О. А. Аксенов, Н. В. Скрипченко, Н. Ф. Пульман
Научно-исследовательский институт детских инфекций Росздрава, Санкт-Петербург
С помощью ускоренного теста выявления энтеровирусных антигенов у больных (м-РСК) проведено более чем 30-летнее слежение за циркулирующими патогенными штаммами энтеровирусов в Северо-Западном регионе. Экспресс-диагностика энтеровирусных инфекций дала возможность осуществлять непрерывный мониторинг за циркулирующими энтеро-вирусами и выявить сменность доминирующих и недоминирующих серотипов энтеровирусов, а также характеризовать свойства, определяющие степень их вирулентности в эпидемическом процессе. Доминирующие вирусы достигали максимальной репродукционной активности при температуре 40 "С > 1,0), тогда как сопутствующие — при уменьшении температуры до 37 "С < 1,0). Доминирующие энтеровирусы имели высокую устойчивость к интерферону, что вело к утяжелению клинической картины заболевания, а сопутствующие штаммы обусловливали более легкое течение болезни. Обнаружение доминирующих серотипов среди взрослого населения завершалось через 2 —4 года с возрастанием их этиологической значимости среди детей. Ключевые слова: энтеровирусы, штаммы, эпидемиология
Энтеровирусные заболевания до настоящего времени не утратили одной из лидирующих позиций в инфекционной патологии человека как по числу больных, так и по частоте неблагоприятных последствий [1—4]. Энтеровирусы, относящиеся к семейству Picor-naviridae, обладают большой серологической вариабельностью. Можно выделить три основные группы энтеровирусов, вызывающие инфекционные заболевания у человека: вирусы Коксаки В, вирусы ECHO (Эк-
хо) и вирусы Энтеро — 68, 69, 70 и 71 типов. Среди этих возбудителей энтеровирусных инфекций у населения прослеживаются различные клинические формы с избранным поражением практически всех жизненно важных органов и систем [5]. Среди серьезных поражений, вызываемых энтеровирусами, можно отметить развитие манифестных форм заболеваний нервной системы, к которым относятся серозный менингит, менингоэнцефалит, невриты и парезы различной
