CC BY
35
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
индивидуальных хромосом неравномерно. Это явление получило название теломерного профиля, который считается врожденной особенностью индивидуума и может оказывать влияние на ускоренное старение иммунной системы.
Цель и задачи. Исследовать характер распределения теломерных последовательностей на отдельных плечах индивидуальных хромосом у пациентов с РА в сравнении со здоровыми донорами.
Задачи:
— оптимизация метода количественной флуоресцентной гибридизации in situ (Q-FISH) для оценки длин тело-мерных последовательностей у пациентов с иммунопатологией;
— разработка программного обеспечения, позволяющего проводить количественный анализ теломерных повторов на Q-FISH изображениях метафазных пластинок;
— измерение сигналов флуоресценции теломерных последовательностей и проведение цитогенетического анализа на препаратах метафазных хромосом доноров и пациентов с РА.
Материалы и методы. В исследование были включены условно здоровые доноры (n = 6, медиана возраста 51,5 [49-53]) и пациенты с РА (n = 6, медиана возраста 51,5 [50-54]). Работа проводилась на препаратах метафазных хромосом, полученных из МНК периферической крови. У всех испытуемых было получено информированное медицинское согласие на исследование. На момент забора материала все пациенты находились на лечении в Клинике иммунопатологии НИИФКИ г. Новосибирска в стадии обострения основного заболевания. Диагностика заболевания проводилась специалистами клиники в соответствии с критериями ACR/EULAR 2010. Для определения длины теломер был использован метод Q-FISH с последующей идентификацией хромосом в соответствии с ISCN 2013. В ходе работы были модифицированы методические условия, что улучшило морфологию метафазных хромосом и позволило сделать цитогенетический анализ более достоверным. Также было создано программное обеспечение (МеТе^Ьеп) (http://www.bionet.nsc.ru/en/ development/application-development/development-of-a-computer/metelen.html), позволяющее проводить анализ количества теломерных повторов на отдельных плечах индивидуальных хромосом в Q-FISH-изображениях. Тестирование и валидационные эксперименты показали, что созданная программа и модифицированная методика могут служить для корректного вычисления длины тело-мер у пациентов с РА и здоровых доноров.
Результаты. Поскольку теломерный профиль является индивидуальной характеристикой, то было проанализировано наличие укороченных теломерных последовательностей на отдельных плечах индивидуальных хромосом относительно средней длины теломер для каждого испытуемого отдельно. У пациентов с РА было обнаружено большее количество достоверно укороченных тело-мер, чем у здоровых доноров. При сравнении теломерных профилей между группами, было обнаружено, что длина теломерной последовательности на p-плече 16 хромосомы у пациентов с РА достоверно меньше, чем у доноров (р < 0,05; U-критерий Манна—Уитни).
Заключение. Выявленные особенности длины теломер пациентов с РА, с одной стороны, могут быть результатом пролиферативного стресса, который возникает в результате массового деления клеток иммунной системы в процессе аутоиммунной реакции. С другой стороны, укороченная длина теломер на p-плече 16 хромосомы при РА может иметь значение для патогенеза этого заболевания.
Так, укорочение теломер может приводить к повышенной экспрессии генов, расположенных рядом с теломер-ными регионами. В 13 регионе р плеча 16 хромосомы локализуется ряд генов (CIITA, CLEC16A, DNAJA3, SOCS1, TRAP 1), которые ассоциированы с РА или могут принимать участие в его патогенезе. Кроме того, можно предположить, что наличие большого количества укороченных теломер может способствовать гибели клетки через апоп-тоз. Потому что именно эти теломерные последовательности могут первыми подвергаться критическому укорочению, приводить к слиянию хромосом конец-в-конец и повреждению генома.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ № 1415-00346.
ОСОБЕННОСТИ СОДЕРЖАНИЯ НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ/ХЕМОКИНОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ АУТОИММУННЫМИ ПОРАЖЕНИЯМИ ПЕЧЕНИ
Бацунов О.К.1, 3, Арсентьева Н.А.1, Любимова Н.Е.1, Смирнова М.Н.2, Семенов А.В.1, 3, Тотолян Арег А.1, 3
1ФБУН«Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера», Санкт-Петербург, Россия
2 СПБГУЗ «Городская клиническая больница № 31», Санкт-Петербург, Россия
3 ГБОУ ВПО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Аутоиммунный гепатит (АИГ) — это хроническое воспалительное иммунозависимое заболевание печени. Характеризуется неблагоприятным течением с высокой частотой и быстрыми темпами развития цирроза печени. К аутоиммунным заболеваниям печени относится и первичный билиарный цирроз (ПБЦ), проявляющийся в виде малосимптомного хронического деструктивного негнойного холангита, далее проходящего стадию холестаза, которая завершается формированием цирроза. В основе патогенеза обоих заболеваний лежит развитие иммунных процессов против собственных тканей организма. Значительную роль в развитии любых иммунных реакций играют цитокины — регуляторные пептиды иммунной системы. Отдельную группу составляют хемокины — семейство цитокинов, основная функция которых состоит в контроле клеточной миграции. При гепатите в печени усиленно продуцируются провос-палительные хемокины, вызывая миграцию лейкоцитов с периферии в печеночную паренхиму, что активирует иммунные процессы в очаге воспаления. Вследствие этого изучение цитокинового/хемокинового профиля в периферической крови пациентов позволят глубже понять механизмы иммунопатологии при различных формах гепатитов, а также выявить параметры с потенциалом биомаркеров для этих заболеваний.
Цель. Определение концентраций некоторых цитоки-нов/хемокинов в плазме крови больных аутоиммунными поражениями печени.
Материалы и методы. В работе была использована плазма крови 24 больных аутоиммунными поражениями печени, из них 10 — с диагнозом аутоиммунный гепатит, 14 — с диагнозом первичный билиарный цирроз и 37 — условно здоровых доноров. В ходе эксперимента использовали коммерческие тест-системы Milliplex MAP (Millipore,
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Аутоиммунные заболевания Autoimmune diseases
США), основанные на технологии Luminex xMAP (Luminex, США) с применением магнитных микросфер Milliplex Mag. Регистрацию и анализ данных проводили на приборе Luminex MAGPIX (Luminex,CfflA). Определяли концентрация следующих цитокинов/хемокинов: IFNy, TNFa, CCL2/MCP-1, CCL8/MCP-2, CCL20/MIP-3a, CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10 и CXCL11/I-TAC.
Результаты. В плазме крови больных АИГ и больных ПБЦ концентрация CCL8/MCP-2 была снижена (для АИГ Me = 14,7 [Q1 = 8,2 - Q3 = 18,7] пкг/мл, p < 0,001, ПБЦ - 15,7 [9,9-21,2] пкг/мл, p < 0,001), в группе здоровых доноров 37,8 [29,9-44,3] пкг/мл. В плазме крови больных в обеих группах увеличены концентрации хемокинов: CXCL9/MIG (для АИГ 2311 [1250-4901] пкг/мл, p = 0,0004, ПБЦ - 2873 [1940-6806] пкг/мл, p < 0,0001, в группе здоровых доноров 441,1 [341,9-806,9] пкг/мл), CXCL10/IP-10 (АИГ - 634,6 [461,0-911,7] пкг/мл, p < 0,0001, ПБЦ - 1053 [607-1518] пкг/мл, p < 0,0001, в группе здоровых доноров 183,5 [112,9-254,7] пкг/мл), CCL2/MCP-1 (АИГ - 233,7 [194,3-290,4] пкг/мл, p = 0,0028, ПБЦ - 266,9 [160,8432,0] пкг/мл, p = 0,001, в группе здоровых доноров 143,7 [102,7-200,4] пкг/мл). В плазме крови больных больных ПБЦ также увеличены концентрации следующих цито-кинов/хемокинов: CXCL11/I-TAC (у больных - 141,2 [94,1-293,1] пкг/мл, p = 0,0026, в группе здоровых доноров 77,9 [57,7-124,2] пкг/мл) и TNFa (у больных - 8,8 [6,1-13,6] пкг/мл, p = 0,0227, в группе здоровых доноров 6,8 мл [5,9-8,6] пкг/).
Заключение. В результате проведенного исследования показано, что в плазме периферической крови больных аутоиммунным гепатитом повышена концентрация хемокинов CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CCL2/MCP-1, а больных первичным билиарным циррозом - также повышена концентрация этих хемокинов и, кроме того, концентрации CXCL11/I-TAC и TNFa. Также показано, что в плазме периферической крови обеих групп пациентов снижена концентрация хемокина CCL8/MCP-2.
ВЛИЯНИЕ ИММУНОСУПРЕССИВНОЙ ТЕРАПИИ НА CУБПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ B-КЛЕТОК У БОЛЬНЫХ СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ
Будкова А.И.1, Мазинг А.В.1, Серебрякова М.К.3, Кудрявцев И.В.1, 3, Тришина И.Н.2, Маслянский А.Л.2, Тотолян Арег А.1, 4
1ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
2 ФГБУ«Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
3 ФГБНУ«Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
4 ФБУН«Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера», Санкт-Петербург, Россия
Введение. B-лимфоциты выполняют ряд функций. В развитии аутоиммунных заболеваний (АИЗ) они играют важную роль: синтез аутоантител, презентация ауто-антигенов, секреция провоспалительных цитокинов, образование эктопических герминативных центров и моделирование иммунного ответа.
Материалы и методы. Были обследованы 25 больных с СКВ (23 женщины, 2 мужчин) в возрасте от 18 до 65 лет. Группу контроля составили 49 здоровых доноров (28 женщин, 21 мужчина) в возрасте 35-62 лет. В качестве группы сравнения были обследованы 27 больных с ССД и 47 больных с СШ. Из базовой иммуносупрессивной терапии 32% (п = 8) больных СКВ получали последние 3 месяца циклофосфан, 100% (п = 25) — глюкокортикоиды. Для выявления популяции В-лимфоцитов периферической крови был использован метод проточной цитофлуоме-трии. Статистический анализ был проведен с помощью программы GraphPаd Р1^т 7.
Результаты. Мы обнаружили у больных СКВ снижение субпопуляций «наивных» В-клеток под влиянием ци-клофосфана по сравнению с больными без данной терапии (р = < 0,05). Также у больных СКВ, независимо от терапии, оказалось достоверно выше число плазмобластов по сравнению с донорами (р < 0,01). Полученные результаты свидетельствуют о том, что при АИЗ патогенетические механизмы заболеваний и терапия приводят к сдвигам в содержании субпопуляций В-клеток. Необходимо отметить отсутствие влияния циклофосфана у больных СКВ на повышенное число плазмобластов, вырабатывающих в большом количестве антитела.
Вывод. Использование в качестве мишени имму-носупрессивной терапии определенные субпопуляции В-клеток, возможно, является одним из перспективных способов достижения скорой и длительной ремиссии.
ЗНАЧИМОСТЬ ЦИТОКИНОВ АДАПТИВНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ^-ЛИМФОЦИТОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ЯЗВЕННОГО КОЛИТА
Валеева А.Р., Скороходкина О.В.
ФГБОУ ВО «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ, Казань, Россия
Введение. Аутоиммунные заболевания кишечника, к основным нозологическим формам которых относят язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона (БК), являются одной из наиболее актуальных проблем в современной гастроэнтерологии ввиду высокой их социальной значимости. Патогенез данной патологии довольно сложен и к настоящему моменту раскрыт не полностью. Так, в качестве значимых причин, влияющих на формирование воспалительной реакции при ЯК называются такие, как факторы окружающей среды, наличие генетической предрасположенности, также обсуждается роль кишечной микробиоты как аутоантигена, индуцирующего развитие аутоиммунных реакций. Традиционно считается, что в развитии ЯК преобладает ^2-опосредованный иммунный ответ. Однако в последнее время в литературе активно обсуждается роль и !Ы7-лимфоцитов в патогенезе ЯК, с учетом их значимости в формировании аутоиммунных процессов и при другой патологии.
Цель. Анализируя уровень Ш-4, Ш-17А и Ш-10, охарактеризовать функциональную активность ТЪ2- и ТЫ7-лимфоцитов в формировании аутоиммунного воспаления у пациентов с ЯК в стадии обострения и ремиссии заболевания.
Материалы и методы. Уровень указанных цитокинов исследовался в сыворотке крови 48 больных в стадии обострения ЯК, а также у 20 больных в период ремиссии заболевания с помощью метода мультиплексного анализа
