CC BY
776
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ГАСТРОЭНТЕРОЛОГИЯ
experimental gastroenterology
ОСОБЕННОСТИ ПРОВЕДЕНИЯ АНЕСТЕЗИИ У КРЫС ПРИ ПОЛОСТНЫХ ОПЕРАЦИЯХ
Смирнова А. В., Лагутина Л. Д., Трубицына И. Е., Васнев О. С., Янова О. Б.
ГУ Центральный научно-исследовательский институт гастроэнтерологии ДЗ г. Москвы
Трубицына Ирина Евгеньевна E-mail: gastroenter@rambler.ru
РЕЗЮМЕ
В РФ в качестве наркоза крысам наиболее распростраенен медицинский эфир. Мы опробовали наркозную смесь из 2 ветеринарных препаратов, которая рекомендована для работы в ветеринарии и с лабораторными животными — Zoletil100 + XylaVet в дозах 15 мг/кг живого веса и 15-10-5 мг/кг, соответственно. Были наркотизированы и прооперированы 6 самок крыс. Группой контроля служили крысы, прооперированные под эфиром. Группа эксперимента в сравнении с группой контроля показала непереносимость препаратов в данной комбинации, что противоречит многочисленным литературным данным. Мы предполагаем, что действие сочетанного наркоза на основе Zoletil100 + XylaVet вызывает нарушение гемодинамики в системе воротной вены печени конвенциональных крыс с последующим развитием острого тромбоза воротной вены печени, венозной гиперемии внутренних органов, формированием асцита.
SUMMARY
Nowadays, in Russia, diethyl ether is the most popular narcosis for rodent and particular rats. We had tested the new methods based on Zoletil100 + XylaVet (15 mg/kg and 15-10-5 mg/kg) respectively. 6 conventional female rats were treated with this narcosis. The rats, early have narcotized by diethyl ether were investigated as control group. All of 6 treated with new narcosis animals died in early post-operative time. Interestingly enough, that organ toxicity, except neurologic toxicity, was not described in literature and manuals. We assume that this new narcosis is the cause of portal thromboses.
OJ
В 2003 году Россией были приняты международные правила GLP (Правила надлежащей лабораторной практики. Приказ МЗ РФ от 19 июня 2003 г. № 267). Ранее была подписана Хельсинская декларация (редакция 1964 г. и последующие редакции). После принятия РФ принципов биоэтики, рекомендованных в GLP-руководстве, остро встал вопрос безопасного и качественного обезболивания биомоделей. Из-за изменения уголовного законодательства препараты для ветеринарного наркоза стали недоступными для широкого применения в ветеринарии. Медицинский эфир, используемый при проведении манипуляций с лабораторными животными, является альтернативой для обеспечения гуманного обращения, что определяет его активное использование в экспериментальных исследованиях.
Для исследователя частое использование эфира является токсичным. Найти в отечественной литературе по ланималогии современные препараты и их комбинации оказалось невозможным. Основная часть публикаций — это переводные цитаты из зарубежных руководств по анестезии и послеоперационной аналгезии для лабораторных животных. В мире для полостных операций у крыс ранее были изучен и отработан для наркозов ряд препаратов (см. табл. 1). Недоступные, кетамин в сочетании с ксилозином (доза 40 мг/кг; длительность наркоза 80 минут), фенобарбитал (30 мг / кг — 90 минут) и т. д., являются «золотым стандартом» ветеринарной анестезиологии (Ревякин А. О., 2009); 2009).
Исследователи-ланимологи из США, Канады, Великобритании рекомендуют применять
для анестезии и аналгезии крыс следующие препараты и их комбинации: ацетоминофен, ацетилсалициловая кислота, буторфанол, кодеин, фентанил + медетомидин, ибупрофен, кетамин + ксилазин, мепиридин, метадон, морфин, наль-буфен, налорфин, оксиморфин, пентазоцин, фенобарбитал, тилетамин / золазепам, пропофол, тиопентал, альфаксолон, трибромэтанол, тиа-минал и др. ^1ескпе11, 2009). Почти 10 лет назад в ветеринарии стали использовать сочетание из препаратов Zo1etil20 (50 или 100) и Ху1аУе1. С этой комбинацией работают для седации крупных животных и наркотизации мелких домашних (вплоть до рептилий). В официально представленных публикациях о противопоказаниях для применения препаратов у грызунов (белых крыс) не было найдено (Ревякин А. О., 2009); №1ескпе11, 2009).
Препарат 7о1еШ (Франция) или тилетамина гидрохлорид + золазепам зарегистрирован в РФ как комплексный инъекционный анестетик для ветеринарии, в том числе и для мелких домашних животных. Исследования данного препарата мало освещены в литературе (Альшинецкий, 2009). Химическая формула тилетамина С12Н17NOS, молекулярный вес 223,34 г/моль, метаболизиру-ется печенью, выводится почками. Тилетамина гидрохлорид относят к конкурентным антагонистам, блокирующим место связи ^метил^-аспартатного NMDA-рецептора (NMDAR) с глутаматом. NMDAR — ионотропный рецептор, пропускает электрические сигналы от нейрона к нейрону в головном и спинном мозге. Антагонисты связываются с аллостерическими сайтами на белках рецептора, закрывают ионный канал, ингибирют его активность. Его способность связываться с рецептором вызывает состояние, описанное в медицинской литературе как диссоциативная анестезия. Это состояние у животных характеризуется каталепсией, амнезией и анальгезией. Именно эти качества препарата используют для создания наркоза животным. Из литературных данных известно, что NMDA-антагонисты могут вызвать серьезное повреждение мозга в таких областях, как кора поясной извилины и ретроспленальная кора. Особенно это состояние выражено у грызунов, чей метаболизм сильно отличается от других животных. Кроме того, как и все производные фенциклидина, тиле-тамин может вызывать судороги и повышенную саливацию. Комбинация тилетамина с антихоли-нергическими препаратами, диазепамом, барбитуратами, этанолом, агонистами серотониновых 5-НТ2А рецепторов или мусцимолом предотвращает нейротоксическое действие ^1ескпе11, 2009) (Ревякин А. О., 2009) (Альшинецкий, 2009).
Золазепам — второе действующее вещество в 7о1еШ. Это бензодиазепин — класс психоактивных лекарственных веществ с гипнотическим, седативным, анксиолитическим, антиконвульсивным эффектами, способствует торможению
ЦНС. Эффекты препарата обусловлены блокированием периферических бензодиа-зепиновых рецепторов, которые являются сайтом ГАМК-отвечающих за реакцию организма на гамма-аминомасляную кислоту. Ингибирующий эффект ГАМК бензодиа-зепинами и определяет их антиоксилити-ческий и седативный эффект. Именно это свойство золазепама позволяет применять препараты на основе тилетамина у многих видов животных (Альшинецкий, 2009) (Flecknell, 2009).
Лекарственная форма Zoletil100 (20 или 50) — лиофилизированный порошок, что удобно для работы. Препарат смешивается и /или разводится с альфа-2-агонистами, долго хранится в растворенном виде при комнатной температуре, выдерживает кратковременное замерзание. В литературе не описаны серьезные побочные эффекты при применении рекомендованных доз. Введение препарата позволяет достигать хорошую аналгезию и релаксацию (особенно у всеядных и хищников). По рекомендациям ASA (American Society of Anesthesiologists), противопоказан ветеринарным пациентам 3-й и выше группы риска. В настоящее время в России это довольно распространенное средство для анестезии как мелких домашних, так и диких животных, а также их детенышей. Имеются единичные упоминания в литературе, о том, что крысам применение препарата противопоказано (Альшинецкий, 2009).
Препарат XylaVet (Голландия) является альфа-2-агонистом адренорецепторов, обладает выраженным миорелаксантным, гипотензивным действием. Хорошо зарекомендовал себя в ветеринарии как малый транквилизатор — при необходимости успокоить животных (при стрессах и т. п.), при оперативных вмешательствах для местной анестезии или в составе комплексной анестезии. По литературным данным, дозу препарата для грызунов необходимо подбирать опытным путем в диапазоне 5 - 15 мг / кг веса.
Целью наших исследований было определить возможность использования Zoletil 100+XylaVet при проведения полостных операций у крыс.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Использовали конвенциональных белых крыс (пит. «Алексеевка»), масса — 180-220 г. в количестве 12 животных. 2 опытные группы (6) животных для оптимизации анестезиологического пособия, при проведении гастрэктомии, были выбраны дозы препаратов: п/к в область холки вводили смесь XylaVet 15 или 5 мг/кг веса животного и Zoletil10015 мг/кг живого веса животного. Эфирный наркоз — контрольная группа (6). Эфир давали из расчета 3-5 мл на 1 кг веса тела через маску в смеси с атмосферным воздухом.
Б >
ст
So
1_ с
01
0£ Я^
Щ о
HJE
21 а.
I- £
и
га
L Б
га
X
j
га
I-
х ш
2 s а ш с и
v
m
m
о
Таблица 1
ПРЕПАРАТЫ И ИХ КОМБИНАЦИИ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ НАРКОЗА КРЫСАМ
Фармакологическая группа препаратов Препараты и / или их сочетания Дозы, мг/кг Метод введения Назанчение Примечания
Бензодиазепин Медетомин 0,135 в /м, п /к Для седации Запрещен для свободной продажи в РФ. Дополнительно требуется ингаляционная анестезия
Диазепам или ми-дазолам 2,5 в /м
Бензодиазепины + опиоидный агонист Медетомидин + мидазолам + фен-танил 0,15 + 2,0 + 0,005 Для проведения лапоротомии
а2-агонисты адренорецепторов + гипнотик Медетомидин + кетамин 0,25 - 0,5 + 60-75 в / м Лапоротомия до 40 минут длительностью Не достаточная анестезия при больших хирургических вмешательствах; требуется ингаляционная анестезия для продолжения операции
Килазин + кета-мин 15 + 80
Бензодиазепин + гипнотик Мидазолам + кетамин 2,5 + 75 в /м Премедикация перед длительной лапорото-мией Требуется дополнительная ингаляционная анестезия
Барбитурат Пентобарбитал 60 - 90 в / б Для операционного наркоза Непредсказуемость наркоза; наркоз должен быть свежим, не больше 24 часов от момента приготовления
Тиопентал натрия 40
Производное 2,6-диизопропил- фенол Пропофол 10 в / в оч. медленно Для операционного наркоза Сложность дозирования, экономчески нецелесообразно
Эфир 3 - 5 ингаля-ционно Для операционного наркоза Требуется постоянное дополнительное введение новой дозы
NMDA-антагонист + барбитурат + а2-агонисты адре-норецепторов Золетил20 (50 или 100) + 2% р-р ксилазина гидрохлорида = Ху1аУе1 13 - 20 + 5 -15 в / м; в / в; в / б; п / к В ветеринарной литературе для практикующих врачей указано, что подходит для премедика-ции и операций до 20 - 30 минут В единственном исследовании, проведенном в Московском Зоопарке, указано противопоказание — для крыс
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В опытных группах животных выраженная атаксия наступала на 4-10 минуте после введения препаратов соответственно 15 и 5 мг/кг. Далее проводили предоперационную подготовку — фиксировали, готовили операционное поле. Оперировали на 5-7 минуте от начала наркозного сна. Под таким со-четанным наркозом были прооперированы 6 животных (по 3 крысы на каждую дозировку Ху1аУе1). Контролем служили ранее оперированные крысы с наркотизацией медицинским эфиром через маску.
Доза препарата 15 мг/кг — во время операции, на 10-15 минуте от начала наркозного сна, на этапе отсечения желудка от пищевода и /или создания анастамоза у экспериментальных животных отмечали эпизоды угнетения дыхания. Повышенная
кровоточивость отмечалась весь период у 3 животных из 6. Это можно связать с окончанием вазокон-стрикторного действия Ху1аУе1. По этой причине в дальнейшем дозу препарата Ху1аУе1 уменьшили до 5 мг/кг массы животного (вторая опытная группа). Клиническая картина аналогична. В группе контроля (эфир) таких изменений гемостаза не было.
Выход из наркоза в группах опытных животных начинался самостоятельно на 32-45 минуте, в то время как группа контроля полностью активизировалась на 7-10 минуте после окончания ингаляции смеси воздух — эфир. Гипотермия в опытных группах была более значительной, что можно связать с действием обоих препаратов, для создания комфортных послеоперационных условий за спину помещали теплую грелку.
Самостоятельное питание, питье, мочеиспускание и акт дефекации животные демонстрировали через
2-3 часа, но оставались вялыми и более угнетенными, чем крысы, прооперированные под эфиром. Падеж животных, оперированных с применением сочетан-ного наркоза, отмечали через 5-36 ч от момента окончания операции, что можно расценивать как ранние послеоперационные осложнения, связанные с наркозом. В опытных группах погибло 6 животных из 6 оперированных. В группе крыс, прооперированных под эфирным наркозом, гибели животных не было. Эти данные позволяют сделать вывод о том, что комбинация препарата Zoletil и Ху1аУе1 для крыс является крайне токсичной. Аутопсия — трупы животных были осмотрены и вскрыты. При внешнем осмотре обращает на себя внимание некоторое снижение тургора кожи, крайне плохое удержание шерсти, выраженная сухость слизистых ротовой полости — заметны мелкие язвочки на слизистой губ и щек. Ревизия органов брюшной полости: ана-стамозы у всех животных были состоятельны. Легкое и сердце у всех животных без видимых особенностей. Отмечено расширение вен нижней трети пищевода, селезенки, кишечника, почек, повышенное содержание прозрачной жидкости в брюшной полости, у только павших животных — более выраженная
кровоточивость из внутренних органов при разрезах. Воротная вена расширена, деформирована. Анатомическое положение печени было правильным, цвет пурпурный, с гладкой поверхностью, венозный застой, на разрезе печень пестрая: от ало-пурпурной до пурпурно-фиолетовой. Селезенка правильного анатомического расположения, увеличена, края острые. Кровенаполнение органов брюшной полости с явлениями нарушения венозного оттока, при надавливании пинцетом сопротивление ткани, по брыжейке местами выявлялись участки мезентериаль-ных тромбозов. Рассечение крупных сосудов брюшной полости — красные тромбы. Можно предполагать, что действие сочетанного наркоза на основе Zo1eti1100 + Ху1аУе1 вызывает нарушение гемодинамики в системе воротной вены печени конвенциональных крыс с последующим развитием венозной гиперемии внутренних органов, формированием асцита, изменений характерных для острого тромбоза воротной вены печени, что требует дополнительного изучения.
Б >
ст
So L с
01
0£ Щ о
HJE
21 а.
I- £
и
га
L Б
га
X
га
I-
х ш
2 s а ш с и
v
m
ЛИТЕРАТУРА
1. АльшинецкийМ. В. Применение Золетила у диких и зоопарковых животных // Actual veterinary problems in zoos Materials of the Seminar of the EARAZA October 20-25. — 2009. — С. 77-83.
2. Ревякин А. О., Касинская Н. В., Зобова Л. Н. Влияние неингаляционных препаратов для общей анестезии и их сочетаний
и схем применения на макаках резусах // Биомедицина. — 2009. —
№ 2. — С. 81- 84.
3. FlecknellPaul. Laboratory animal anaesthesia, the 2-th edition. — 2009. — P. 350.
LЛ
•о
