CC BY
151
Раздел - обзоры
Особенности производства и регистрации БМКП в России
Большакова О.Б., Кулинич Т.М., Шишкин А.М., Боженко В.К. ФГБУ «Российский научный центр рентгенорадиологии» Минздрава России 117997 Москва, ул. Профсоюзная, 86 Информация об авторах
Большакова Оксана Борисовна - младший научный сотрудник лаборатории клеточной и генной терапии научно-исследовательского отдела молекулярной биологии и экспериментальной терапии опухолей
Кулинич Татьяна Михайловна - к.м.н., заведующая лабораторией иммунологии, онкоцитологии и клеточных технологий
Шишкин Александр Михайлович - к.м.н., старший научный сотрудник лаборатории иммунологии, онкоцитологии и клеточных технологий
Боженко Владимир Константинович - д.м.н., профессор, заведующий отделом молекулярной биологии и экспериментальной терапии опухолей
Контактное лицо
Большакова Оксана Борисовна, e-mail oksana.bolshakova.rncr@mail.ru Резюме
Биомедицинские клеточные продукты (БМКП) - новый класс перспективных медицинских изделий, требующих обязательной государственной регистрации и изучения эффективности и безопасности еще на этапе доклинических исследований (ДКИ).
В данной статье проводится обзор литературных данных о БМКП и клеточной терапии, рассмотрены аспекты их разработки и проведения ДКИ и клинических
исследований (КИ), а также описаны три основных типа БМКП, разрешенных в нашей стране.
Для реализации производства в Российской Федерации новейших препаратов, содержащих клетки человека, 1 января 2017 года был принят Федеральный закон № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах». Помимо этого, Министерством здравоохранения Российской Федерации был подписан приказ № 512н от 8 августа 2018 года «Об утверждении правил надлежащей практики по работе с биомедицинскими клеточными продуктами». До настоящего времени законодательство находится на этапе становления и ни один зарегистрированный БМКП не был применён.
Ключевые слова: биомедицинский клеточный продукт, клеточная линия, доклинические исследования (ДКИ), клинические исследования (КИ), специфический механизм действия, эффективность и безопасность
Features of production and registration of BCPs in Russia
Bolshakova O.B., Kulinich T.M., Shishkin A.M., Bozhenko V.K.
Federal State Budgetary Institution Russian Scientific Center of Roentgenoradiology (RSCRR) of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation Russian Scientific Center of Roentgenoradiology, 117997 Moscow, Profsoyuznaya str., 86 Authors
Bolshakova O.B. - junior researcher of the Laboratory of Cell and Gene Therapy of the Research Department of Molecular Biology and Experimental Tumor Therapy Kulinich T.M. - PhD, head of the Laboratory of Immunology, Oncocytology and Cell Therapy in Oncology
Shishkin A.M. - PhD, senior researcher of the Laboratory of Immunology, Oncocytology and Cell Therapy in Oncology
Bozhenko V.K. - MD, Professor, head of the Department of Molecular Biology and Experimental Tumor Therapy
Summary
Biomedical cell products (BCPs) are a new class of promising medical products that require mandatory state registration and study of efficacy and safety at the stage of preclinical research.
This article reviews the literature data on BCPs and cell therapy, discusses aspects of their development and conducting of preclinical and clinical studies, and describes the three main types of BCPs approved in the Russian Federation.
On January 1, 2017, Federal Law No. 180-FZ "On Biomedical Cell Products" was adopted to implement the production of the latest drugs containing human cells in the Russian Federation. In addition, the Ministry of Health of the Russian Federation signed Order No. 512n of August 8, 2018 "On approval of the rules of good practice for working with biomedical cell products". Until now, the legislation is at the stage of formation and not a single registered BCP has been applied.
Key words: biomedical cell product, cell line, preclinical studies, clinical studies, specific mechanism of action, efficiency and safety
Введение
В течение последних лет в России публикуется большое количество информации о проводимых исследованиях как клеточной терапии, так и
регенеративной медицины в общем. Данные научные открытия применяются для лечения заболеваний различного генеза.
Процесс разработки и создания клеточного продукта представляет собой совокупность сложных процессов, таких как производство, регулирование, тестирование и распространение, а также доставку. Каждая из составляющих производственного процесса направлена на повышение эффективности продукта и снижение затрат на его производство при одновременном сохранении качества.
Цель данного обзора - (1) на уровне российского законодательства сравнить термины, понятия, обязательные требования к проведению доклинических (ДКИ) и клинических испытаний (КИ) и к производству, а также порядок регистрации биомедицинских клеточных продуктов (БМКП) с нормативной базой ЕАЭС; (2) осветить проблемы разработки БМКП и его анализа, обобщить сведения о проведении основных этапов ДКИ и КИ, которые являются гарантией эффективности и безопасности БМКП. Изложение основного материала
Президент Межрегиональной общественной научной Ассоциации специалистов по клеточным культурам д.б.н. проф. Т.П. Пинаев отметил, что: «биомедицинские клеточные технологии представляют собой не только выделение, культивирование и трансплантацию клеток, но также и создание сложных композиций или клеточных продуктов, включающих помимо клеток, биологические полимеры, биосовместимые материалы, биологически активные молекулы и другие компоненты» [5].
На сегодняшний день появилась возможность лечения и улучшения состояния при ряде серьезных заболеваний, которые до настоящего времени считались безнадежными, с помощью различных методов клеточной терапии. К таким заболевания относятся: инфаркт и инсульт, рассеянный склероз и ДЦП, синдром
Дауна, почечная недостаточность, сахарный диабет и его осложнения, артрит и артроз, ишемическая болезнь сердца, хроническая болезнь Паркинсона и болезнь Альцгеймера, нарушения репродуктивной функции у мужчин и женщин, анемии различного генеза, атеросклероз, нейропатия, синдром хронической усталости, посттравматическая реабилитация, включая черепно-мозговые травмы, паралич, восстановление после ожогов, травм и рубцов и многие другие. В настоящее время медицинские исследования и различные разработки охватывают самый широкий спектр проблем [23].
По мере того, как все большее число методов клеточной терапии проходит через КИ к одобрению, потребность в надежных и хорошо описанных методах производства становится все более важной. Для того, чтобы клеточная терапия была успешной с клинической или коммерческой точки зрения, пациенты должны получать стабильный, безопасный и эффективный клеточный продукт, независимо от типа клеток или области его применения [18].
Регламент производства, а также проведения ДКИ и КИ многочисленных препаратов закладываются в методическую базу, которая находится в разработке уже более 20 лет. На данный момент наибольший опыт в сфере разработок и применения препаратов на основе клеток и тканей человека имеют страны Европейского союза, США и Южная Корея [6].
Принятие с 1 января 2017 г. Федерального закона Российской Федерации от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах» стало важной частью становления российского законодательства в области БМКП. Чтобы установить определённые требования, особенно относительно ДКИ И КИ биомедицинских клеточных продуктов, было необходимо провести анализ международных стандартов и директив зарубежной правоприменительной практики, что было выполнено при
подготовке данного Федерального закона [17]. Правила обращения БМКП в Российской Федерации были утверждены с помощью ряда стратегических программ развития медицинской науки до 2025 г. в области биотехнологий и фундаментальных научных исследований.
Биомедицинские клеточные продукты - новейшие перспективные средства, которые могут быть эффективны при профилактике, диагностике и лечении различных патологических состояний и реабилитации пациентов. Кроме того, с их помощью становится возможным проведение так называемой «регенеративной терапии», а именно активации восстановительных процессов организма человека. Структуру и функции тканей и органов человека с применением БМКП также возможно восстановить. Более того, с помощью БМКП методами тканевой инженерии имеются перспективы в создании органов и тканей биоинженерными методами [15].
В соответствии с Федеральным законом № 180-ФЗ «биомедицинский клеточный продукт — комплекс, состоящий из клеточной линии (клеточных линий) и вспомогательных веществ либо из клеточной линии (клеточных линий) и вспомогательных веществ в сочетании с прошедшими государственную регистрацию лекарственными препаратами для медицинского применения и (или) фармацевтическими субстанциями, включенными в реестр лекарственных средств, и (или) медицинскими изделиями» [8].
В нашей стране разрешено использование трёх типов БМКП.
1. Аутологичный - содержит клеточную линию (клеточные линии), полученную из биологического материала определенного человека, и предназначен для применения этому же человеку.
2. Аллогенный - содержит клеточную линию (клеточные линии), полученную из биологического материала определенного человека, и предназначен для применения другим людям.
3. Комбинированный - содержит клеточные линии, полученные из биологического материала нескольких людей, и предназначен для применения одному из них.
Тип клеток и сложность их состава определяют вид препарата. Это могут быть полностью дифференцированные клетки (особенностью которых являются их регенеративные, секреторные, иммуномодулирующие, специфические функции) или самообновляющиеся стволовые клетки [13, 19, 20].
В последние годы ведётся активная разработка законодательства в области биомедицинских клеточных продуктов. Для обеспечения работы Федерального закона № 180-ФЗ за 2016 - 2018 гг. было принято более 50 нормативно-правовых актов. Кроме того, для регламента регистрирования и оборота лекарственных препаратов на территории Евразийского экономического союза разрабатывается нормативно-правовая база в соответствии с законодательством Российской Федерации для традиционных лекарственных препаратов, а именно в соответствии с Федеральным законом № 61-ФЗ от 12 апреля 2010 г. «Об обращении лекарственных средств» [6].
8 августа 2018 года Министерством здравоохранения Российской Федерации был подписан Приказ № 512н «Об утверждении правил надлежащей практики по работе с биомедицинскими клеточными продуктами». В данном приказе содержится основная группа требований к проведению ДКИ и КИ, а также требования к производству и контролю качества БМКП. Они применимы к клеточной линии, как к исходному материалу для производства БМКП, и для промежуточных продуктов производства. Стоит отметить, что согласно указанному документу, «при регистрации
БМКП разработанных за пределами РФ в отношении которых ДКИ проведены в неполном объеме, требуемом данными Правилами, но имеются отчеты о КИ, проведенных в соответствии с нормативными требованиями стран проведения и Федерального закона «О биомедицинских клеточных продуктах», эти результаты проведенных клинических исследований могут быть приняты во внимание при проведении государственной регистрации для замены недостающих данных доклинических исследований» [11].
Правила надлежащей практики включают в себя два раздела: Правила надлежащей производственной практики для биомедицинских клеточных продуктов и Правила проведения ДИ биомедицинских клеточных продуктов.
Разработчик также вправе получить консультацию о проведении ДКИ и КИ от экспертного учреждения согласно Приказу Министерства здравоохранения № 542н от 23.08.2017 «Об утверждении Порядка консультирования по вопросам, связанным с проведением доклинических исследований, клинических исследований БМКП, биомедицинской экспертизы БМКП, государственной регистрации БМКП» [17].
Правила надлежащей практики содержат минимальный объём информации для того, чтобы провести исследования каждого типа БМКП. Иными словами, они не содержат в себе описание определённой методики для проведения ДИ. Разработчику необходимо определить и обосновать программу исследований для выпускаемого им биомедицинского клеточного продукта с учетом биологического разнообразия клеток, медицинских изделий и лекарственных препаратов. Также стоит принять во внимание механические, физические, химические и биологические свойства каждого компонента, входящего в его состав и позаботиться о безопасности каждого компонента. Каждый из структурных компонентов должен соответствовать своей предполагаемой функции.
При подготовке к КИ разработчиком или производителем биомедицинского клеточного продукта должен быть подготовлен пакет документов, в обязательном порядке включающий Отчет о результатах ДКИ, спецификацию на регистрируемый БМКП, проект протокола клинических исследований. Спецификация должна содержать сведения о типе БМКП и всех компонентах, присутствующих в готовом препарате, а именно о его качественном и количественном составе, физических, химических и биологических характеристиках клеточной линии.
Отчет о ДКИ описывает их результаты. Он также является заключением о возможном проведении КИ биомедицинского клеточного продукта. В нашей стране при подаче заявления о государственной регистрации биомедицинского клеточного продукта (п. 6, ч. 2, ст. 9 Федерального закона № 180-ФЗ) или при получении разрешения на проведение многоцентровых международных КИ (п. 3 ч. 2 ст. 30 Федерального закона № 180-ФЗ) необходимо обязательно предоставить данные (отчет) о ДКИ.
Эксперты дают заключение о возможности проведения КИ на основании отчета о ДКИ и проектов протоколов проведения КИ.
В законодательстве нашей страны отсутствует возможность замены этапов ДКИ результатами клинического применения, проводимого в рамках разработки или испытаний препарата, который был подан на государственную регистрацию.
В соответствии с правилами надлежащей практики, общие понятия относительно надежных и воспроизводимых процессов подразумевают использование определённого сырья и специфичных методов. Для того, чтобы регулирующие органы утвердили результаты КИ в полном соответствии с правилами надлежащей практики, необходимо применять воспроизводимые и надежные производственные процессы, а также использовать определённое сырьё и методы [18]. Именно выбор подходящих
методов ДКИ позволит обеспечить создание безопасного и эффективного биомедицинского клеточного продукта для дальнейшего введения его в клиническую практику [17].
Поскольку в состав БМКП входит клеточный компонент, то вопрос отбора животного для проверки безопасности и эффективности препарата является наиболее сложным. Для доказательства фармакологической эффективности биомедицинского клеточного продукта используют «гомологичный препарат». Это вид БМКП, который получают из такого же типа клеток или тканей животных по технологии, аналогичной производству разрабатываемого БМКП. Он помогает исключить иммунный ответ на клетки человека у животных. Ключевое свойство гомологичной модели -воспроизведение у животных таких же эффектов, которые предполагают получить во время использования БМКП, предназначенного для человека.
Помимо этого, исследование можно частично провести на модели in vitro, если есть обоснование о невозможном проведении всех ДКИ на модели in vivo или его гомолога животного происхождения.
Для проведения ДКИ используют подходящие модели животных. Их биологический ответ на введение исследуемого продукта или гомолога должен быть похож на тот, что ожидается получить у человека. Животное должно быть млекопитающим, в месте действия биомедицинского клеточного продукта быть схожим по физиологическим реакциям с человеком, иметь иммунную толерантность к испытываемому продукту, которая позволит ему проявлять своё биологическое действие [17].
Согласно правилам надлежащей практики, в отчете о ДКИ должна быть описана информация, содержащая в себе сведения о «наличии различий и сходств между патофизиологией заболевания или состояния, моделированного в ходе исследования
специфического действия БМКП на организм, и патофизиологией заболевания или состояния, наблюдаемого у человека; влияние заболевания (патологического состояния) модели на специфическое действие БМКП на организм; наличие ограничений на перенос данных, полученных в ходе эксперимента на модели на применение БМКП у человека» [11].
Чтобы в дальнейшем применять биомедицинский клеточный продукт у человека, механизм действия БМКП должен быть продемонстрирован в достаточных по объему ДКИ, которые проводятся как в условиях in vivo, так и в in vitro.
Стоит также учитывать, что согласно Федеральному закону Российской Федерации от 23 июня 2016 г. № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах» проведение КИ является важнейшей из частей процесса регистрации БМКП. Они могут проводиться только на основании разрешения, которое получено по результатам первого этапа экспертизы в экспертном центре Министерства Здравоохранения РФ. Проведение КИ необходимо для того, чтобы расширить показания БМКП, установить побочные действия БМКП, подобрать оптимальную дозировку, а также выявить как БМКП будет взаимодействовать с другими медицинскими изделиями, лекарственными средствам.
План КИ включает исследования фармакодинамики, фармакокинетики, дозировки и рандомизированные КИ. При завершении КИ, основываясь на заключении медицинских организаций, проводивших данное исследование, необходимо в письменной форме оформить отчет о результатах [10, 11].
Одним из наиболее важных документов регистрационного досье является лицензия на производство БМКП. В нашей стране лицензирование находится на этапе разработки, в то время как за границей широко известны сертификаты GMP (Good
Manufacturing Practice) и GTP (Good Tissue Practice). Они необходимы для регистрации БМКП иностранного производства [25].
Ответственный за проведение научной экспертизы лекарственных средств и БМКП ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», опубликовал статью, посвященную описанию типовых операций для получения БМКП для целей государственной регистрации. Данная статья содержит требования к содержанию документации, предоставляемой разработчиком БМКП в регистрационном досье. И хотя статья была опубликована задолго до вступления в силу №180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах» и других нормативных актов о БМКП, она содержит ключевые сведения, касающиеся производства и регистрации БМКП. Согласно данной статье, для получения безопасных, эффективных, обладающих специфичностью БМКП необходимо осуществить следующие типовые операции: а) получить клеточную линию определенного клеточного состава; б) наработать клетки определенной клеточной линии в количестве, необходимом для терапевтического применения в составе БМКП; в) провести мероприятия по контролю качества и стандартизации полученной клеточной линии [29].
Клеточные линии сформированы стволовыми клетками. На сегодняшний день определено несколько типов стволовых клеток, которые могут быть использованы для работы в сфере разработок БМКП (рисунок 1) [17 ,25, 28].
Рис. 1. Типы стволовых клеток, которые могут быть использованы для разработки БМКП: 1 - клетки кожи; 2 - нейроны; 3 - пигментные клетки; 4 - сердечная мышца; 5 -клетки костной ткани; 6 - гемопоэтические стволовые клетки; 7 - клетки ткани сустава; 8 - трубчатые клетки; 9 - клетки поджелудочной железы; 10 - клетки щитовидной железы; 11- клетки легкого; 12 - лимфоциты; 13, 14, 15 - различные миелоидные линии; 16 - эритроциты [2].
Считается, что региональные стволовые клетки, в частности одна из разновидностей МСК (мезенхимальные стволовые клетки), являются наиболее подходящими для клеточной терапии [24]. Данный тип клеток содержится во всех тканях и выполняет функции клеточных резервов. Стойкие биомаркеры в структуре региональных стволовых клеток позволяют отличать свое потомство от клеток других типов. Большая доступность управления дифференцировкой МСК по сравнению, например, с эмбриональными стволовыми клетками, является преимуществом МСК. Более того, при применении МСК не возникают иммунологические проблемы [24, 26].
Обладающие уникальными свойствами МСК можно использовать в качестве биомедицинского клеточного продукта. Во-первых, они обладают способностью замещать повреждённые клетки реципиента. Во-вторых, МСК способны обмениваться биологическим материалом с клетками реципиента, и, в т-третьих, от использования МСК может возникать терапевтический эффект за счет секрета биологически активных веществ [8].
Для получения клеточной линии с определенным клеточным составом необходимо обеспечить наличие помещения с асептическими условиями класса А, где будут выполнены пять последовательных этапов [15].
1. На первом этапе происходит отбор донора. Производится его обследование на предмет отсутствия противопоказаний для получения биологического материала, из которого будет произведён БМКП.
2. На втором этапе выполняется забор биоматериала. Он предполагает получение донорской ткани, её измельчение и получение суспензии клеток. Данные операции должны проводиться в асептических условиях.
3. На третьем этапе из биоматериала донора происходит выделение стволовых клеток.
4. На четвертом этапе в достаточном количестве для дальнейшего культивирования нарабатывается стандартизуемая популяция однородных клеток.
5. Пятым этапом является паспортизация, необходимая процедура для клеточной линии. В паспорте указывается состав, качество и результаты контроля безопасности. Получение паспорта основывается на описании результатов свойств клеточной линии и проводится до проведения ДКИ.
Согласно общей структуре паспорт должен состоять из четырёх блоков. Первый блок должен содержать общую информацию как о самих клетках, так и о доноре. Второй блок полностью посвящён жизнеспособности клеток. Он содержит данные о внешнем виде образцов, их жизнеспособности, величине водородного показателя, их консистенции, концентрации и объёме, а также о времени получения, условиях хранения и сроке годности. Третий блок содержит результат проверки образцов на
отсутствие содержания в них инфекционных агентов, общих для всех клеток, а четвертый - о специфических [3, 29].
Клетки, которые прошли «паспортный контроль» помещаются в биореактор, содержащий нужную питательную среду. Там они растут и размножаются. Затем их собирают и готовят к концентрированию. Далее концентрируют и фасуют.
Для трансплантации клеточной линии необходимым условием является оценка стабильности кариотипа клеток. С помощью цифровой обработки фотоизображения проводят анализ хромосомного состава клеток. Культуры МСК обычно характеризуются малым количеством митозов [17].
Хранение биомедицинского клеточного продукта на период его регистрации, с последующим сохранением его свойств в течение всего предполагаемого периода хранения также является важной проблемой. Согласно части 2 статьи 37 №180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах» биологический материал, клетки для приготовления клеточных линий, клеточные линии, предназначенные для производства биомедицинских клеточных продуктов, биомедицинские клеточные продукты должны храниться в условиях биобанков, обеспечивающих сохранение их биологических свойств и предотвращающих их инфицирование и загрязнение [8].
Биобанк - помещение, оборудованное низкотемпературными морозильными камерами, обеспечивающими долговременное хранение биологических (материалов) образцов. Общие требования к деятельности биобанков регламентированы Приказом 842н. Согласно данному приказу сохранность БМКП должна обеспечиваться путем обеспечения надлежащих режимов, а именно температурно-влажностного режима, санитарно-гигиенического режима, светового режима [4, 12].
Поскольку каждый биомедицинский клеточный продукт требует соблюдения индивидуальных условий хранения, то вышеуказанный приказ содержит лишь общие указания об организационной деятельности хранения БМКП [7].
Стоит отметить, что криосохранение может повреждать клетки из-за образования льда внутри них, что может привести к увеличению внутренних объёмов мембран. Иными словами, клетки могут «лопнуть». Также такой способ хранения может привести к обезвоживанию клеток, поскольку происходит вымораживание воды и повышение концентраций растворённых веществ во внешней среде. По этой причине нельзя обойтись без добавления к БМКП специального вещества - криопротектора, образующего водородные связи с молекулами воды и защищающего продукт от образования в нём кристаллов льда. Состав криопротектора подбирается индивидуально в зависимости от характеристик биоматериала.
В настоящее время в нашей стране разрабатываются БМКП для лечения и профилактики различных видов заболеваний. Как известно, биомедицинский клеточный продукт должен быть качественным и эффективным. Поэтому, согласно определению Федерального закона № 180-ФЗ «О биомедицинских клеточных продуктах», «качество биомедицинского клеточного продукта - это соответствие биомедицинского клеточного продукта требованиям нормативной документации на биомедицинский клеточный продукт». Поскольку состав БМКП зависит от его назначения, способа получения и других параметров, то определён ряд показателей качества, которые характерны для всех видов БМКП [8].
1. Подлинность. Подлинность продукта - это набор характерных показателей, таких как морфологические, биохимические и генетические, которые отличают данный продукт от других.
2. Специфическая активность. Подтверждение данной группы показателей качеств зависит от ряда факторов, включающих: способ получения, состав, назначение БМКП.
3. Микробиологическая безопасность. Микробиологическая безопасность подтверждается инкубированием продукта в течение 24 - 72 часов на селективных средах в аэробных и анаэробных условиях роста при температуре 30 °С и 37 °С.
4. Стабильность. Может существовать множество критериев для оценки стабильности продукта в зависимости от его назначения. Её может определять размер клеток, их жизнеспособность, сохранение свойств и т.п.
5. Жизнеспособность клеток. Данный показатель подтверждается окраской клеток при помощи индикатора трипанового синего. После окрашивания подсчитывают количество неокрашенных и окрашенных клеток. Если в продукте содержится от 70 до 90% живых (неокрашенных) клеток, то он считается имеющим надлежащее качество.
Таким образом, несмотря на всё разнообразие биомедицинских клеточных продуктов, есть возможность выделить общие показатели качества. И хотя внутри каждой группы показателей и методов их определения будут существовать индивидуальные особенности, производителям и разработчикам задан вектор для подготовки необходимой документации для целей регистрации [14].
БМКП - новейший и перспективный метод лечения онкологических заболеваний при помощи генетически модифицированных Т-лимфоцитов пациента.
Новейший метод адоптивной клеточной терапии, в котором используются генетически модифицированные Т-лимфоциты больного, которые экспрессируют химерные антигенные рецепторы (CAR) к специфическим опухолевым антигенам
называется CAR- T терапия (Chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy) [9, 1]. С помощью модифицированного рецептора можно обеспечить специфичность взаимодействия Т-лимфоцитов с клетками опухоли, что приведёт к их разрушению, а также к активации собственных Т-лимфоцитов. Технология производства модифицированных Т-клеток состоит из нескольких этапов. Нужные Т-клетки сначала «изымают» у пациента, затем производят их активацию для того, чтобы впоследствии можно было провести модификацию [16]. На третьем этапе проводится генетическая модификация Т-лимфоцитов, в результате чего на их поверхности появляются химерные рецепторы, обеспечивающие эффективность терапии [21]. Последний этап представляет собой размножение в биореакторе модифицированных Т-лимфоцитов и проверка их на безопасность, функциональность и эффективность. Метод, при котором клетки сначала извлекаются из крови пациента, модифицируются, а затем возвращаются обратно, называется ex vivo.
В настоящее время проводят множество КИ, посвященных изучению данного вида терапии. Клеточная терапия оказалась наиболее эффективной при применении в сочетании с химиотерапией и другими методами лечения. Однако у CAR-T терапии существуют побочные эффекты, такие как: аллергические реакции на животные или рекомбинантные компоненты, гиперцитокинемия, выражающаяся в повышении температуры, утомляемости, тахикардии, тошноте и т.д. Кроме того, рецепторы на поверхности модифицированных Т-лимфоцитов могут взаимодействовать со здоровыми клетками, например, с нормальными B-лимфоцитами.
Несмотря на то, что CAR-T терапия требует доработки для устранения побочных эффектов, она демонстрирует свою эффективность в ходе ДКИ и КИ при лечении онкологических заболеваний [2, 22].
Федеральным законом № 180-ФЗ относит БМКП не к биологическим лекарственным средствам, а к отдельной группе препаратов для медицинского применения. Также стоит иметь ввиду, что регуляторные органы зарубежных руководств имеют определенные различия как в понятиях, так и в механизмах признания результатов разработки препаратов. Так, например, термин БМКП, как таковой, в нормативно-правовой базе ЕАЭС отсутствует, но Решением Совета ЕАЭС № 78 было введено понятие «высокотехнологических лекарственных препаратов». Нормативные акты для лекарственных средств, в случае ЕАЭС, также регламентируют высокотехнологические лекарственные препараты (ВТЛП). ВТЛП подразделяются на генотерапевтические препараты и лекарственные препараты на основе соматических клеток [27].
В апреле 2019 года состоялась тематическая сессия, посвящённая различным аспектам жизненного цикла БМКП и перспективе выхода на рынок этих продуктов. Сессия под названием «Развитие биотехнологического направления в фармпромышленности» проводилась в рамках выставки IPhEB Russia и проходила в Санкт-Петербурге.
Хотя за последние годы законодательством нашей страны было введено несколько нормативно правовых актов, устанавливающих процесс регистрации БМКП, в настоящий момент в Российской Федерации нет ни одного биомедицинского клеточного продукта, получившего лицензию на производство.
Стоит отметить, что выход отечественного БМКП на рынок займёт достаточно длительный срок. По реалистичным прогнозам и оценке экспертов понадобится 9 -11 лет с момента получения лицензии на ДКИ и КИ до успешной постановки производства на поток. Только на производство и поставку оборудования потребуется около 2 лет.
Также остаётся нерешенным и вопрос кадров. В настоящее время многие компании и научно-исследовательские центры организуют обучающие программы, поскольку квалифицированный персонал является основным условием для любого производства.
Ускорить выход БМКП на рынок могут следующие шаги: усовершенствование нормативно-правовой базы, качественная подготовка специалистов, создание ассоциаций производителей, подготовка необходимой инфраструктуры. Кроме того, полезным будет и обращение к зарубежному опыту разработки и внедрения БМКП, ведь на мировом рынке существует уже около 30 таких препаратов. Список литературы
1. Боженко В.К., Киселева Я.Ю., Шишкин А.М. и др. Разработка метода иммунотерапии (CAR-T терапии) СА125-позитивнных опухолей. Исследования и практика в медицине. 2019. Т. 6. № 5. С. 73.
2. Боженко В.К., Князева А.Д., Киселева Я.Ю. и др. Исследование эффективности различных вариантов химерных Т-клеточных рецепторов относительно РЭА-позитивных опухолевых клеток. Вестник Российского научного центра рентгенорадиологии. 2018. Т. 18. № 2. С. 7.
3. Бурунова В.И. Проблемы стандартизации при получении клеточных культур мезенхимального происхождения: экспериментальный и теоретический анализ: автореф. дис. ... канд. биол. наук. М.: 2011.
4. Глотов А.С. Биобанк СПбГУ как ресурс для проведения исследований в области трансляционной биомедицины. Сборник трудов IX Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика 2017» Москва, 18-20 апреля 2017 года. С 511-512.
5. Лызиков А.Н., Скуратов А.Г., Воропаев Е.В., Призенцов А.А. Роль стволовых клеток в регенерации печени и перспективы их использования в лечении печеночной недостаточности. Проблемы здоровья и экологии. 2012. № 2. С. 713.
6. Меркулов В.А., Мельникова Е.В. Биомедицинские клеточные продукты или высокотехнологические лекарственные препараты? БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2019. Т. 19. № 2. С. 94-98. doi: 10.30895/2221 -996X-2019-19-2-94-98.
7. Назаренко Л.Н. Некоторые особенности криосохранения биологических объектов. Вестник московского городского педагогического университета. Серия: естественные науки. 2008. № 2. С. 53-59.
8. Научно-практический комментарий к Федеральному закону «О биомедицинских клеточных продуктах» (постатейный) отв.ред. Е.Н.Холопова. Москва: Проспект, 2021. 336 с.
9. Павлова А.А., Масчан М.А., Пономарев В.Б. Адоптивная иммунотерапия генетически модифицированными Т-лимфоцитами, экспрессирующими химерные антигенные рецепторы. Онкогематология. 2017. Т. 12. № 1. С. 17-32. doi: 10.17650/1818-8346-2017-12-1-17-32.
10. Постановление Правительства РФ от 25.08.2017 № 1015 «Об утверждении Правил аккредитации медицинских организаций на право проведения клинических исследований биомедицинских клеточных продуктов».
11. Приказ Министерства Здравоохранения Российской Федерации от 8.08.2018 № 512н «Об утверждении Правил надлежащей клинической практики биомедицинскими клеточными продуктами».
12. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации от 20.10.2017 г. № 842н "Об утверждении требований к организации и деятельности биобанков и правил хранения биологического материала, клеток для приготовления клеточных линий, клеточных линий, предназначенных для производства биомедицинских клеточных продуктов, биомедицинских клеточных продуктов".
13. Пятигорская Н.В., Тулина М.А., Аладышева Ж.И., Береговых В.В. Международные подходы к регулированию препаратов клеточной терапии. Вестник Российской академии медицинских наук. 2013. Т. 68. № 8. С. 4-8.
14. Супотницкий М.В., Елапов А.А., Борисевич И.В. и др. Перспективные методические подходы к доклиническому исследованию биомедицинских клеточных продуктов и возможные показатели их качества. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2015. Т. 1. С. 36-44.
15. Супотницкий М.В., Елапов А.А., Меркулов В.А. и др. Основные технологические процессы, используемые при производстве биомедицинских клеточных продуктов. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2015. Т. 2. С. 36-45.
16. Тарасов Ю. Генная терапия: познакомьтесь с лекарствами будущего. URL:https://Ыomolecula.m/artides/gennaia-terapпa-poznakomtes-s-lekarstvami-budushchego.
17. Тихомирова А.В., Горячев Д.В., Меркулов В.А. и др. Доклинические и клинические аспекты разработки биомедицинских клеточных продуктов. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. 2018. Т. 8. № 1. С. 23-35. doi: 10.30895/1991-2919-2018-8-1-23-35.
18. Campbell A., Brieva T., Raviv L., et al. Concise Review: Process Development Considerations for Cell Therapy. Stem Cells Transl Med. 2015. V. 4. No. 10. P. 11551163. doi: 10.5966/sctm.2014-0294.
19. Committee for Advanced Therapies (CAT). European Medicines Agency. URL:http://www.ema.europa.eu/ema/index.jsp?curl=pages/about_us/general/general_ content_000266.jsp.
20. Guideline on human cell-based medicinal products. London, 21 May 2008 (EMEA/CHMP/410869/2006). European Medicines Agency. URL: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/ 09/WC500003894.pdf.
21. Kiseleva Ya.Yu., Shishkin A.M., Ivanov A.V., et al. CAR T-cell therapy of solid tumors: promising approaches to modulating antitumor activity of CAR T-cells. Bulletin of Russian State Medical University. 2019. T. 9. No. 5. C. 5-12.
22. Kochenderfer J.N., Dudley M.E., Feldman S.A., et al. B-cell depletion and remissions of malignancy along with cytokineassociated toxicity in a clinical trial of anti- CD19 chimeric-antigen-receptortransduced T cells. Blood. 2012. V. 119. No. 12. P. 27092720. doi: 10.1182/blood-2011-10-384388.
23. Le Blanc K., Davies L.C. Mesenchymal stromal cells and the innate immune response. Immunol. 2015. V. 168. No 2. P. 140-146. doi: 10.1016/j.imlet.2015.05.004.
24. Liras A. Future research and therapeutic applications of human stem cells: general, regulatory, and bioethical aspects. J Transl Med. 2010. V. 8. Article ID 131. doi: 10.1186/1479-5876-8-131.
25. Placzek M.R., Chung I.M., Macedo H.M., et al. Stem cell bioprocessing: fundamentals and principles. J R Soc Interface. 2009. V. 6. No. 32. P. 209-232. doi: 10.1098/rsif.2008.0442.
26. Rigotti G., Marchi A., Sbarbati A. Adipose-derived mesenchymal stem cells: past, present, and future. Aesthet Plast Surg. 2009. V. 33. P. 271-273. doi: 10.1007/s00266-009-9339-7.
27. Reflection paper on classification of advanced therapy medicinal products. 21 May 2015 (EMA/CAT/600280/2010). European Medicines Agency. URL: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2015/ 06/WC500187744.pdf.
28. Sensebe L., Gadelorge M., Fleury-Cappellesso S. Production of mesenchymal stromal/stem cells according to good manufacturing practices: a review. Stem Cell Res Ther. 2013. V. 4. No. 3. P. 66-71. doi: 10.1186/scrt217.
