CC BY
68
23. Bergmak K., Avail - Lundqvist E., Dickman P.W., Henningsohn L., Steineck G. Vaginal changes and sexuality in women with a history of cervical cancer. // N Engl J Med. 1999. - Vol. 340. - P. 1383 - 1389.
24. Bergmak K., Lundqvist E.A., Steineck G. A Swedish study of women treated for cervix cancer. Gynaecologic cancer often affects sexuality // Lakartidningen. 2000. - Vol. 97. - P. 5347 - 5355.
25. Bergmak K., Lundqvist E.A., Dickman P.W., et al. Patient - rating of distressful symptoms after treatment for early cervical cancer // Acta Obstet Gynecol Scand.-2001 .-Vol. 81. - P. - 443 - 450.
УДК 616.15;615.38
ОСОБЕННОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДА ЦОЛИКЛОНОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ ЭРИТРОЦИТОВ
А С. Уваисова
Национальный научный кардиологический центр, г. Астана
Огромное значение крови в жизни каждого организма известно с незапамятных времён. В наивных представлениях древних, в народных преданиях, в научных взглядах врачей различных эпох единодушно высказывалась мысль о том, что «качествами» крови определяется здоровье, молодость и даже характер людей, поэтому многие лечебные воздействия были с давних пор направлены на улучшение качеств и обновление состава крови [1].
Интерес к групповым факторам крови со дня их открытия не ослабевает. Не последнюю роль здесь играет широко распространенное переливание крови -не всегда одногруппная кровь полностью принимается организмом реципиента. Даже благополучное зачатие нового организма и нормальное вынашивание плода также может зависеть от группы крови. Группы крови - это генетические маркеры, несущие в себе огромное количество информации о популяции в целом и индивиде в частности.
Очень важную роль сыграло открытие групп крови, в результате чего были выявлены причины некоторых посттрансфузионных осложнений, что дало возможность предупредить их. Величайшее открытие в этой области сделал австрийский учёный Карл Ландштейнер.
К. Ландштейнер предположил, а затем доказал наличие двух реагирующих веществ в эритроцитах и двух, способных вступать с ними в контакт,- в плазме. Вещества, содержащиеся в эритроцитах, были антигенами (изоагглютиногенами). Их Ландштейнер обозначил латинскими буквами А и В. Вещества плазмы и сыворотки, вступающие с ними в контакт и вызывающие агглютинацию были антителами (изоагглютининами). Они обозначаются греческими буквами а и (3. При встрече «одноимённых» антигенов и антител (например, А и а, В и 3) происходит склеивание эритроцитов. Следовательно, в крови каждого человека должны содержаться такие агглютиногены, которые не склеивались бы агглютининами собственной плазмы. Так учёный пришёл к выводу, что кровь людей не одинакова, и её следует разделять на группы. В результате многочисленных опытов с кровью Ланвштейнер установил, что всех людей в зависимости от свойств крови можно разделить на три группы. Каждую из них он назвал латинскими буквами по алфавиту: А, В и С [2].
В 1906 году чешский учёный Ян Янский установил, что у человека имеются не три, а четыре группы крови. Четвёртая встречается реже, чем первые три. Именно Янский дал группам крови порядковые обозначения римскими цифрами: ^ И, iii, м. Классификация групп крови, предложенная Яном Янским, оказалась очень удобной и была официально утверждена в 1921 году на съезде патологов и бактериологов.
Антигены АВ0 присутствуют на эритроцитах, лейкоцитах, тромбоцитах, тканевых клетках, жидкостях организма, секретах. Антигены системы АВ0 развиваются на эритроцитах ещё до рождения ребёнка [3].
Аналогично тому, как в эритроцитах имеются групповые антигены А и В, плазма крови может содержать антитела - агглютинины. Агглютинины-это тоже белки, которые находятся в плазме и тканевых жидкостях.
Группа крови является постоянной у каждого человека. Она является генетически обусловленным биологическим признаком и определяется тем набором антигенов, которые имеются в форменных элементах крови (эритроцитах, лейкоцитах и тромбоцитах) и белках плазмы данного индивидуума. Групповые признаки крови появляются уже в эмбриональном периоде и не меняются в течение всей жизни.
В 1940 г. К. Ландштейнер и А. Винер обнаружили в эритроцитах человека новый, ранее неизвестный агглютиноген, названный ими резус-фактором (Кп) (такое название антиген получил потому, что подобный же антиген был впервые выявлен в эритроцитах обезьян породы макак-резус Масасш гЬевш). Резус положительный фенотип определяется наличием антигена Б. В отличие от системы АВ0 естественные антитела в системе Резус крови не встречаются. Они относятся к иммунным антителам.
Вырабатываются тогда, когда в резус - отрицательный организм попадают резус - положительные эритроциты, содержащие резус - фактор [4].
В настоящее время известно более 400 антигенов эритроцитов, которые объединяются в 27 систем. Для каждого человека характерен свой набор этих антигенов, представленный на мембране эритроцитов, который называется фенотипом. Достаточно большое разнообразие антигенов эритроцитов свидетельствует о том, что абсолютно идентичных гемокомпонентов практически не бывает, поэтому любая аллогенная трансфузия эритроцитсодержащих сред может сопровождаться сенсибилизацией реципиента теми или иными антигенами донора. Взаимодействие образовавшихся в результате этого процесса антител к антигенам эритроцитов ведет к сокращению времени жизни перелитых эритроцитов, а в некоторых случаях к гемолитическим посттрансфузионным реакциям и осложнениям. Поэтому назначение любого вида гемокомпонентной терапии должно сопровождаться соответствующими иммуногематологическими исследованиями, как крови доноров, так и реципиентов гемокомпонентов, в ходе которых выявляются эти антитела и не допускается переливание соответствующего им антигена. Прежде всего, это антигены эритроцитов, несовместимость по которым может стать причиной серьёзных гемолитических посттрансфузионных реакций и осложнений. В настоящее время шкала приоритета трансфузионно опасных эритроцитарных антигенов выглядит следующим образом: А, В^>К>с>С>Е>е [5].
Широкое типирование антигенов эритроцитов для реципиентов гемокомпонентов не требуется. В норме к антигенам всех эритроцитарных систем, за исключением системы АВО, антител быть не должно. Поэтому принцип безопасности трансфузий эритроцитсодержащих гемокомпонентов возможно осуществлять за счет выявления предшествующей сенсибилизации. Это достигается обязательным для всех реципиентов скринингом нерегулярных антиэритроцитарных антител, которые способны вызывать in vivo разрушение эритроцитов, имеющих на мембране соответствующий антиген, и с существованием которых связаны возникновение гемолитической болезни новорождённых, посттрансфузионные гемолитические реакции и осложнения или укорочение времени выживания перелитых эритроцитов [6].
Для исследования вышеуказанных антигенов эритроцитов и антител к ним используются различные методы, чувствительным и специфичным из которых является применение цоликлонов.
Анти-А и Анти-В антитела продуцируются мышиными гибридомами. Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь анти-А и анти-В антител. Технология изготовления реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами. В составе цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов.
Цоликлоны достигли широкого применения в изосерологии, т.к. являются абсолютно безопасными для человека, за счёт отсутствия в их составе материала крови человека. Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объёмом 10 мл. Цоликлон Анти - А - красного цвета, Анти - В -синего, Анти-АВ - бесцветный.
Метод с применением цоликлонов предназначен для типирования групп крови по системе АВО. Антитела надежно выявляют слабые формы А и В антигенов. Цоликлон - это солевой раствор моно-клональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека. Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов. Благодаря моноклональным антителам стало возможным фенотипирование крови доноров по основным трансфузионно-значимым антигенам.
Для определения резус принадлежности пользовался цоликлонов Анти-D. Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлон Анти-D представляет собой неполные моноклональные антитела изотипа IgG к D-антигенам эритроцитов человека системы Резус, Анти-С СУПЕР и снти-Е СУПЕР содержат полные (IgM) анти-С и анти-Е антитела. Цоликлоны обладают ввысоким титром, титр реагента в микроплате составляет 1:256, авидностью - 60 секунд и не дают перекрестных реакций. Реагенты не содержит антител других специфичностей и не требуют проведения контроля растворителя [7].
Литература:
1. Кеннет Р.Г, Мак-Керн Т.Дж., Бехтол К.Б. Моноклональные антитела: Гибридомы: новый уровень биологического анализа. М.: Медицина, 2003-250 с.
2. Абелев ГИ. Моноклональные антитела. М.: Медицина,2003-90с.
3. Порываева В.А. Моноклональные антитела - компонент современных диагностических тест-систем. М.: Академия, 2003. - 120 с.
4. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека. - Т.2. - М.: Мир, 2000.
5. Репин В.С., Ржанинова А.А., Шеменков Д.А. Эмбриональные стволовые клетки: Фундаментальная биология и медицина. изд. РеМеТекс, М., 2002- 220 с
6. Репин В.С. Сухих Г.Т. «Медицинская клеточная биология.» изд. БЭБиМ. 2001- 200с.
7. Тотолян А.А. Иммуноглобулины в клинической и лабораторной диагностике // СПб.: АО «Стибиум плюс», 2008 -30 с.
