CC BY
58
Раздел 9. Пульмонология
ОСОБЕННОСТИ ПОЛИМОРФИЗМА ALA16VAL ГЕНА СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ 2 (SOD2) У ДЕТЕЙ С БРОНХОЛЕГОЧНОЙ ДИСПЛАЗИЕЙ
Гусева О.Е., Лебедько О.А., Кузнецова М.С., Наговицына Е.Б.
Хабаровский филиал ДНЦ ФПД — НИИ ОМиД, г. Хабаровск
Введение. Определение основных механизмов повреждения легочной ткани у недоношенных детей с бронхолегочной дисплазией (БЛД) с позиций генетической детерминации является актуальнейшей задачей современных исследователей. Установлено, что наличие однонуклеотидных замен в генах, кодирующих супероксиддисмутазу, может влиять на оксидативный статус недоношенного ребенка и способствовать усилению патологического воздействия супероксид-анион радикала на ткань легкого.
Цель: изучить особенности полиморфизма Ala16Val гена супероксиддисмутазы 2 (SOD2) у детей с различной степенью тяжести бронхолегочной дисплазии, классической формы.
Материалы и методы. Обследовано 15 пациентов с диагнозом: Бронхолегочная дисплазия недоношенных, классическая форма. Молекулярно-гене-тическое исследование осуществляли с помощью тест-систем ООО НТП «Литех» методом ПЦР. Для оценки соответствия распределений генотипов ожидаемым значениям при равновесии Харди-Вайнберга использовали критерий х2 Пирсона.
Результаты. Анализ полиморфизма гена SOD2 в положении Ala16Val у пациентов с БЛД выявил следующее распределение. Частота гетерозиготного варианта А/V у пациентов составила 40%, монозиготного варианта V/V — 20% и варианта А/А — 40%, соответственно.
При изучении зависимости степени тяжести БЛД с выявленным распределением полиморфизмом гена SOD2 в положении Ala16Val установили следующее. При легкой степени БЛД тяжести (n=6) гетерозиготный вариант определялся у 66,6% пациентов, вариант А/А — у 33,3%. При средней степени тяжести БЛД (n=8) распределение полиморфизмов гена SOD2 в положении Ala16Val отмечалось в равной пропорции — по 37,5% между вариантами А/А и V/V, соответственно, и в 25% — при варианте А/V. При тяжелой степени тяжести БЛД (n=1) у пациента был выявлен полиморфизм А/А.
Заключение. Полученные данные не выявили ассоциации полиморфизма Ala16Val гена SOD2 с тяжестью течения классической формы бронхоле-гочной дисплазии у детей.
ДЕТЕКЦИЯ МУТАЦИЙ ПРИ МУКОВИСЦИ-ДОЗЕ В ГЕНЕ CFTR У НОВОРОЖДЁННЫХ ДЕТЕЙ В ХАНТЫ-МАНСИЙСКОМ АВТОНОМНОМ ОКРУГЕ - ЮГРЕ
Донников М.Ю.1,2, Мещеряков В.В.2, Колбасин Л.Н.1 'БУ ХМАО-Югры «Окружной кардиологический диспансер «Центр диагностики и сердечнососудистой хирургии», г. Сургут 2БУ ВО «Сургутский государственный университет», г. Сургут
Цель: ранняя молекулярно-генетическая диагностика мутаций в гене CFTR у новорождённых детей с повышенным уровнем иммунореактивного трип-синогена по результатам неонатального скрининга на муковисцидоз.
Задачи: разработка и тестирование комбинации молекулярно-генетических методов выделения ДНК из сухих пятен крови, ПЦР-амплификации 27 экзо-нов и экзон-интронных границ гена CFTR, проведение анализа кривых плавления высокого разрешения, селективное секвенирование экзонов с отличными от референсного паттернами плавления, детекция гомозиготных мутаций.
Материалы и методы: ДНК из сухих пятен крови выделяли набором "QIAamp DNA Micro kit" (Qiagen); анализ кривых плавления проводили с использованием ПО "Precision Melt Software" на приборе CFX96 (Bio-Rad), секвенирование проводилось на генетическом анализаторе "GenomeLab GeXP" (Beckman-Coulter).
Результаты: проведен ретроспективный анализ 40 образцов ДНК у детей с подтвержденным диагнозом муковисцидоз и установленными мутациями в гене CFTR. В работе использовали ДНК, выделенную из сухих пятен крови, полученных при проведении неонатального скрининга в ХМАО в период 2009—2016 гг. Спектр выявленных мутаций по частоте аллелей распределялся следующим образом: 1) delF508 — 52,5%; 2) Е92К — 10,0%; 3) dele2,3 - 3,75%; 4) 1677delTA, L138ins, S466X — по 2,5%; 3) 21 редкая мутация (R31C, 175delC, L218X, L233R, W277R, R347H, G509N, G542X, L568F, E527R, R668C, Y849X, R1066C, R1070W, W1282X, N1303K, W1310X, 394delTT, 621+1G>T, G1222VfsX44, 1342-13G/T) -по 1,25%. Проблема детекции гомозиготных мутаций (в частности, для самой частой мутации delF508) была решена путем гетерозиготной конверсии (смешивания ДНК исследуемого образца с ДНК дикого типа). Таким образом, чувствительность и специфичность комбинации используемых методов составила 100%; эффективность методики — 98% (не выявляются протяженные делеции/дупликации гена).
Заключение: разработанная методика потенциально позволяет в течение 2—3 рабочих дней на уровне региональной медико-генетической консультации, оснащенной оборудованием для проведения
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИК ПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 2017; 62:(4) ROSSIYSKIY VESTNIK PERINATOLOGY IPEDIATRII, 2017; 62:(4)
