CC BY
12DOI: 10.24412/2226-079X-2022-12446
Особенности показателей врожденного и адаптивного иммунитета у пациентов с болезнью Паркинсона. Фокус на "минорной" субпопуляции Т-лимфоцитов
И.В. Красаков1, 2, И.В. Литвиненко2, Н.И. Давыдова1, А.А. Калашникова1, С.С. Алексанин1
1 ФГБУ "Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины им. А.М. Никифорова" МЧС России (Санкт-Петербург) 2 ФГБВОУВО "Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова" Минобороны России (Санкт-Петербург)
Болезнь Паркинсона (БП) является одной из значимых медицинских проблем XXI века. С целью разработки новых методов лечения БП предлагаются патогенетические теории заболевания, основанные на изучении показателей как локального, так и системного воспаления, в том числе иммунологических данных. Изучение патогенеза БП выявило дисфункцию иммунной системы, в частности врожденного нейровоспа-лительного ответа как потенциального фактора предрасположенности к заболеванию [1—3].
Т-клеточное звено иммунной системы играет существенную роль в нейровоспалительной активности при БП [4]. В настоящее время активно изучается гетерогенная субпопуляция убТ-лим-фоцитов, доминирующая в слизистых оболочках и коже, сочетающая свойства и функции клеток как врожденного, так и адаптивного иммунитета.
Закладка эпителия тимуса происходит на 6-й неделе развития плода. Клетки-предшественники, мигрирующие в тимус из фетальной печени на 8-й неделе эмбрионального развития, созревают в убТ-клетки с ограниченной вариабельностью Т-клеточного рецептора (T-cell receptor, TCR); далее они перемещаются из тимуса в кожу, слизистые оболочки языка и репродуктивную систему, в последующем эти клетки самостоятельно поддерживаются локально. Позже в тимусе формируются убТ-лимфоциты с более широким спектром специфичностей TCR, покидающие тимус после рождения (до 13-х суток) и заселяющие слизистые оболочки различных органов.
В постнатальном периоде прекоммитирован-ные к развитию в Т-клетки лимфоциты проходят в вилочковой железе следующие основные этапы
своего развития [5]: 1) стадия дубль-негативных (DN) клеток CD4-CD8 (CD - кластер диффе-ренцировки); 2) формирование более зрелой популяции с фенотипом CD4+CD8+ - дубль-позитивные клетки, слабо экспрессирующие на мембране CD3. На стадии DN происходит дивергенция тимоцитов к дифференцировке в различные линии ab или у6, запускается основное событие дифференцировки Т-лимфоцитов - перестройка V-генов TCR в последовательности 6, у, b [6]. Уже на стадии DN3 тимоцит экспрессирует y6TCR и быстро эмигрирует из тимуса. У человека вариабельные домены y6TCR кодируются 3 основными V6-генами и не менее чем 6 Vy-генами, что обусловливает высокий полиморфизм y6TCR, большой потенциал к формированию разнообразных лигандсвязывающих участков [7]. Не более 5% от общего числа покинувших тимус Т-лимфоцитов составляют у6Т-клетки. Большинство Т-клеток имеют TCR, которые содержат a- и b-цепи, они взаимодействуют с пептидными антигенами, представляемыми в комплексе с молекулами системы HLA (главный комплекс гистосовместимо-сти) антигенпрезентирующими клетками (классические Т-лимфоциты). Популяция у6Т-лимфо-цитов экспрессирует уникальный Т-клеточный рецептор, способный распознавать собственные и чужеродные антигены непептидной природы в отсутствие необходимых для презентации молекул I или II класса системы HLA [8].
у6Т-лимфоциты впервые были описаны в середине 1980-х годов H. Saito et al. и Y.H. Chien et al. [9, 10]. В периферической крови взрослого человека у6Т-клетки составляют около 5% от общего числа CD3+ Т-лимфоцитов. Во всех лим-
yj) № 2 • 2022
111
фоидных органах (тимус, селезенка, лимфатические узлы, миндалины), в эпителии репродуктивных органов, респираторного тракта, языка общее содержание убТ-клеток также составляет менее 5% от зрелых Т-лимфоцитов [11, 12]. Существуют корреляции экспрессии ySTCR с определенными анатомическими зонами. Так, резидентные убТ-клетки с вариантами CD3+V51+ TCR или CD3+V53+ TCR доминируют в слизистых оболочках желудочно-кишечного, респираторного и урогенитального трактов, а в крови основная субпопуляция Т-лимфоцитов имеет Vy9V52 TCR [13].
Функциональная активность убТ-клеток определяется экспрессией на их мембране различных рецепторов, в том числе рецепторов клеток врожденного иммунитета. Так, убТ-клетки экспрессируют активационные рецепторы натуральных киллерных клеток NKG2D, которые при взаимодействии с лигандами реализуют ци-тотоксическую функцию, т.е. противовирусную, противоопухолевую защиту. Уничтожение этих клеток-мишеней убТ-лимфоцитами через индукцию апоптоза - важная особенность данной субпопуляции лимфоцитов. Активация су-прессирующих рецепторов CD94/NKG2A и CD94/NKG2C на мембране убТ-клеток подавляет уничтожение клеток-мишеней [14].
На мембране убТ-клеток определены рецепторы, распознающие патогенассоциированные молекулярные паттерны: Toll-подобные рецепторы (TLR), рецепторы к полисахаридам бактерий, грибам, CD36, рецепторы молекул-"мусорщиков" (scavengers) и др.; такая рецепторная специфичность обусловливает участие этих клеток в антибактериальной защите. При контактах с бактериями эта клеточная субпопуляция может менять ре-гуляторную функцию (продукция цитокинов) на антигенпрезентирующую, начиная экспрессиро-вать антигены класса HLAII, необходимые для эффективной презентации антигенов классическим CD4+ Т-хелперам; всё это свидетельствует о функциональной пластичности убТ-клеток. Популяция Vy9V62 Т-лимфоцитов распознает фосфатные антигены pAgs, которые имеют микробное происхождение или являются эндогенными промежуточными продуктами мевалонатного пути (изопренилпирофосфат) и накапливаются в клетках, "инфицированных" вирусами, а также в опухолевых клетках. Vy9V62 Т-лимфоциты осуществляют иммунный надзор [15].
убТ-клетки экспрессируют на мембране рецепторы цитокинов ИЛ-2R (ИЛ - интерлейкин), ИЛ-15R, ИЛ-23R и др., которые активируют или подавляют эффекторные функции этих клеток, в том числе пролиферативную и регуляторную [8]. Активация убТ-клеток через TCR стимулирует продукцию интерферона-у (ИФН-у), ИЛ-17, фактора некроза опухоли (ФНО), С^3/4, С^5, которые являются промоторами активации и миграции других клеток иммунной системы в зону воспаления; активация через костимулятор-ные молекулы CD27, CD30 способствует продукции ИФН-у и ИЛ-4. Различные функциональные фенотипы уб (убТ1 и убТ17) генерируются в течение пренатального развития тимуса. Комми-тированная к продукции ИЛ-17 субпопуляция убТ-лимфоцитов характеризуется экспрессией ИЛ-23R, CCR6 и отсутствием CD27 на клеточной мембране. Подавление нейроиммунного воспаления при БП реализует противовоспалительный цитокин ИЛ-10: он на периферии продуцируется клетками врожденного иммунитета (дендритными, макрофагами, эозинофилами, нейтрофилами, тучными клетками, NK-клет-ками) и клетками адаптивного иммунитета -Т-хелперами (ТЫ, Т2, ТЫ7), Т- и В-регулятор-ными клетками [16, 17]. В центральной нервной системе ИЛ-10 экспрессируется клетками мик-роглии, астроцитами и нейронами [18, 19]. Ин-терлейкин-10 ингибирует продукцию ФНО, ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12 и ИЛ-23, а также пролиферацию и синтез цитокинов ТЫ (ИЛ-2 и ИФН-у) и ТЪ2 (ИЛ-4, ИЛ-5), но не ингибирует синтез ИЛ-17 ТЫ7 [20, 21].
Роль убТ-клеток в иммунном ответе на чужеродные антигены, в противоопухолевой защите, в патогенезе аутоиммунных заболеваний характеризуется рядом особенностей. убТ-клетки способны распознавать различные типы антигенов, спонтанно продуцировать цитокины, обладают различными и уникальными функциями, в том числе антигенпрезентирующей, имеют определенную анатомическую локализацию. Этим клеткам принадлежит решающая роль в защите от специфических патогенов, они способны к активации дендритных клеток.
Несмотря на то что убТ-клетки являются "минорной" субпопуляцией, между их количеством и вариантами течения/исходами заболеваний были выявлены значимые корреляции [22-24]. Так, содержание убТ-клеток резко возрастает (до
60% от общего количества Т-клеток) в крови больных с различными инфекционными заболеваниями [25-27]. убТ-лимфоциты первыми запускают иммунный ответ при острых инфекциях (сальмонеллез, туляремия, листериоз, токсо-плазмоз). Внедрение в организм возбудителей активирует убТ-клетки, что сопровождается продукцией цитокинов: ИФН-у при Listeria monocytogenes и ИЛ-4 при Nippostrongylus brasiliensis. На экспериментальных моделях инфекционных и аутоиммунных заболеваний было показано, что убТ-клетки являются основными продуцентами ИЛ-17 [28], который инициирует воспалительные реакции, стимулируя созревание и рекрутирование нейтрофилов из костного мозга [29]. Кроме того, на ранних стадиях рассеянного склероза также описано повышенное содержание убТ-клеток (до 20-30% от общего количества Т-клеток) [30].
В 1994 г. в работе U. Fiszer et al. впервые показано, что у пациентов с БП содержание убТ-лим-фоцитов как в периферической крови, так и в ликворе было выше, чем у пациентов с другими неврологическими заболеваниями [31]. Стимулом к изучению субпопуляций Т-лимфоцитов при БП послужили исследования, определившие важный вклад системного воспаления в патогенез БП.
Среди возможных "регуляторов" системного воспаления при БП кишечная микробиота в последние годы стала одним из самых популярных объектов исследования. Подробное изучение ее состава стало возможным благодаря внедрению в практику современных методов лабораторной диагностики. Кишечная микробиота находится в тесном контакте с эпителиальным барьером кишечника, подавляющее число иммунных процессов происходит в барьерных тканях, которые подвергаются постоянной антигенной нагрузке. Эпителиальные клетки экспрессируют рецепторы, взаимодействие которых с микроорганизмами приводит к активации и продукции противо-микробных пептидов, синтезу цитокинов, усилению экспрессии на эпителиоцитах корецепторов для клеток иммунной системы. М-клетки эпителиального слоя контролируют перенос через барьер чужеродного материала. Такой контролируемый "трафик" необходим для сигнализации иммунной системе о дисбалансе микробиоты. В подэпителиальной рыхлой соединительной ткани lamina propria (собственная пластинка)
диффузно расположены клетки врожденного иммунитета, под эпителием в lamina propria -"изолированные лимфоидные фолликулы" с Т-, В-клеточными зонами и герминативным центром, где присутствуют apTCR CD4+ Т-хелперы (Th1, Th2, Th17) и продуцирующие ИЛ-10 Т-регуляторные клетки, а также В-лимфоциты. Доставляемый М-клетками в фолликулы антигенный материал запускает адаптивный (специфический) иммунный ответ с участием региональных лимфатических образований (аппендикс, миндалины, пейеровы бляшки и др.), а далее локальный иммунный ответ переходит на системный уровень [32].
Эволюция организма-хозяина проходила совместно с бактериями-комменсалами кишечника с целью реализации симбиотических отношений посредством медиаторного синтеза и реагирования на некоторые общие медиаторы. Результатом совместной эволюции явилось расширение функций микробиоты: добавилось или расширилось ее участие в метаболизме нерасщепляемых углеводов, обеспечении хозяина энергоносителями (аденозинтрифосфат), жирными и желчными кислотами, синтезе витаминов, конкуренции с патогенными микроорганизмами, предотвращении колонизации ими кишечного тракта хозяина и стимуляции его мукозального иммунитета. Кишечник стал местом синтеза веществ, способных влиять на секрецию гормонов, работу нервной и иммунной систем посредством синтеза нейромедиаторов, метаболитов и жирных кислот.
Для объяснения влияния микробиоты кишечника на физиологию хозяина были предложены три механизма [33]:
• секреция нейромедиаторов, нейропептидов и метаболитов, которые могут непосредственно стимулировать рецепторы в нейронах кишечной нервной системы (тем самым модулируя физиологию кишечника) или мигрировать через блуждающий нерв в центральную нервную систему;
• возможность метаболитов и гормонов, производимых микробиотой в кишечном тракте, диффундировать через стенку кишечника в портальную систему и оказывать влияние дистанционно;
• стимуляция медиаторами кишечной микро-биоты рецепторов, экспрессированных на мембране клеток иммунной системы, - таким образом, микробиота участвует в регуляции
№ 2 » 2022
113
иммунного ответа как на локальном, так и на системном уровнях.
Ранее с использованием метода газовой хроматографии, совмещенного с масс-спектромет-рией, нами было показано, что у пациентов с развернутой стадией БП в пристеночном слое кишечника отмечается увеличение общего количества микробных маркеров на 43% по сравнению с группой контроля [34]. Увеличение происходило за счет двукратного повышения количества маркеров условно-патогенной микрофлоры, что сопровождалось снижением вдвое количества микробных маркеров полезной микрофлоры.
В случае развития клинически значимых запоров у пациентов с БП количество бактерий в кишечнике увеличивается, приводя к развитию синдрома избыточного бактериального роста (СИБР). Показано, что СИБР коррелирует с тяжестью двигательных расстройств, нарушениями ходьбы, застываниями и выраженностью моторных флуктуаций [35]. Полученные корреляции в первую очередь объясняются снижением биодоступности (поступления из кишечника в кровь) противопаркинсонических препаратов на фоне СИБР [36]. Данная теория подтверждается результатами исследований, проведенных V. Maini Rekdal еt al. [37]. Авторами было продемонстрировано, что микроорганизм Enterococcus faecalis способен декарбоксилировать леводопу до дофамина и далее дегидроксилировать дофамин до тирамина бактерией Eggerthella lenta.
Целью настоящего исследования являлось изучение отдельных субпопуляций лимфоцитов, неклассических убТ-лимфоцитов и продукции цитокинов у пациентов с III стадией БП, испытывающих моторные флуктуации.
В исследование было включено 20 пациентов (11 мужчин, 9 женщин; средний возраст 69 ± ± 4,5 года) с БП, получающих комбинированную (препараты леводопы + агонисты дофаминовых рецепторов) дофаминергическую терапию; средняя эквивалентная доза леводопы составила 730,4 ± 150,6 мг/сут. С учетом предполагаемой роли хронического запора в поддержании дис-биотических состояний и хронического воспаления при БП, наличие запоров являлось критерием включения пациента в исследование.
Критерии включения:
• III стадия БП по шкале Хен-Яра;
• наличие моторных флуктуаций;
• наличие симптомов хронического запора.
Наличие моторных флуктуаций определяли с помощью краткого опросника для выявления феномена истощения действия дозы леводопы (9-item Wearing-Off Questionnaire) [38]. Верификация хронического запора у пациентов с БП проводилась согласно клиническим рекомендациям Российской гастроэнтерологической ассоциации по диагностике и лечению взрослых пациентов с хроническим запором [39].
Группу контроля составили 20 пациентов (8 мужчин, 12 женщин; средний возраст 67 ± ± 2,5 года) с хроническими цереброваскулярны-ми заболеваниями (дисциркуляторная энцефалопатия I и II стадий).
Критерии невключения:
• верифицированные заболевания крови, желудочно-кишечного тракта, эндокринных органов;
• показатель по Монреальской шкале оценки когнитивных функций (Montreal Cognitive Assessment) менее 26 баллов.
Всем пациентам проведена оценка субпопуля-ционного состава лимфоцитов периферической крови, а также определение уровня цитокинов. Для визуализации субпопуляций лимфоцитов использовали моноклональные антитела: HLADR-FITC, CD4-PE, CD3-ECD, CD56-PC5.5, CD25-PC7, CD8-APC, CD19-APC-AF700, CD45-APC-AF750. Пробы анализировали на проточном цитофлюориметре Navios в многоцветном протоколе (Beckman Coulter), популяцию лимфоцитов оценивали как CD45+brightSSdim-клетки. Определение субпопуляций B-лимфо-цитов проводили с использованием монокло-нальных антител CD19-FITC, CD27-PE, CD5-PC5. Пробы анализировали на проточном цитофлюориметре Cytomics FC 500 в многоцветном протоколе (Beckman Coulter), популяцию лимфоцитов оценивали как FSdimSSdim-клетки. При определении субпопуляций убТ-лимфо-цитов использовали моноклональные антитела CD4-FITC, CD8-PE, CD3-ECD, TCRy5-PC5, CD8-APC, CD45-APC-AF750. Пробы анализировали на проточном цитофлюориметре Navios в многоцветном протоколе, популяцию лимфоцитов оценивали как CD45+brightSSdim-клетки. Уровни цитокинов ИЛ-ф, ИЛ-6, ФНО, ИЛ-10 в культуральных средах (спонтанная, индуцированная продукция) и в сыворотке определяли с использованием наборов реагентов для иммуно-ферментного анализа (ВЕКТОР-БЕСТ, Россия).
Статистическую обработку проводили в программе Statistica 8.0. Для выявления различий применяли непараметрический критерий Ман-на—Уитни, для выявления зависимости — коэффициент корреляции Спирмена. Результаты анализа считали значимыми при р < 0,05. Данные представлены в виде Ме ^1; Q3] (медиана [1-й квартиль; 3-й квартиль]).
При исследовании лимфоцитов периферической крови было установлено, что количественные характеристики популяций лимфоцитов у пациентов с БП и у лиц группы сравнения не выходили за границы референсного интервала. Однако общее количество зрелых Т-лимфоцитов CD3+ (табл. 1) в группе пациентов с БП было значимо ниже (медиана 74% (57,3-83,5)), чем в группе сравнения (медиана 80% (73,0-86,0); р = 0,014). По количеству Т-хелперов CD3+CD4+, Т-цитотоксических лимфоцитов CD3+CD8+ группы были сопоставимы. Количество ТNK-клеток CD3+CD56+ в группе пациентов с БП было достоверно ниже (медиана 4,7% (1,3-7,7)), чем в группе сравнения (медиана 7,8% (0,8-24); р = 0,036). При этом в группе пациентов с БП количество NK-клеток CD3-CD56+ было значимо выше (медиана 16,4% (9-34)), чем в группе сравнения (медиана 8,7% (5-15); р = 0,001). Кроме того, в основной группе было выявлено значимое повышение количества активированных NK-клеток CD3-CD8+ (медиана 7% (4,5-13,5)), в группе сравнения этот показатель составил 3,5% (0,86-4,9; р < 0,001). Общее количество В-лимфоцитов, количество В1-лимфоци-тов было сопоставимо в обеих группах, однако у пациентов с БП значимо снижено количество В-клеток памяти CD19+CD27+.
При оценке субпопуляций убТ-лимфоцитов получены следующие результаты (табл. 2): количество Т-хелперов CD4+CD8- ТСКуб было достоверно меньше в группе пациентов с БП (медиана 13,6% (6,2-7,0)), чем в группе сравнения (медиана 29,8% (4-52,1); р = 0,016). По остальным субпопуляциям Т-лимфоцитов значимых различий между группами не выявлено.
При исследовании уровней цитокинов в группе пациентов с БП (табл. 3) было выявлено значимое повышение индуцированной продукции ИЛ-ф, а также высокая спонтанная продукция ИЛ-10, которая в исследованной группе составила 227,5 пг/мл при норме 0-23 пг/мл. Уровень медианы индуцированной продукции ИЛ-10 в
Таблица 1. Результаты иммунофенотипирования лимфоцитов периферической крови (в % (Ме Q3]))
Показатель Норма БП Группа сравнения Критерий Манна-Уитни
СБ3+ 52-76 74,0 [60,0; 77,0] 80,0 [75,0; 82,0] 0,014
СБ3+СБ56+ 0,1-8 4,7 [2,7; 5,2] 7,8 [3,4; 14,2] 0,038
СБ3+СБ4+ 31-46 45,0 [39,0; 53,6] 49,2 [43,0; 60,0] 0,274
СБ3+СБ8+ 23-40 24,3 [20,0; 32,0] 26,4 [20,0; 32,0] 0,722
СБ4+СБ8+ 0,1-1,1 1,5 [0,7; 3,7] 1,0 [0,6; 1,5] 0,285
СБ3СБ8+ 1,5-6 7,0 [5,4; 9,1] 3,5 [2,3; 4,1] 0,001
СБ3-СБ56+ 9-19 16,4 [13,2; 21,6] 8,7 [7,0; 13,0] 0,001
СБ3+ ТСЯуб 2-7 1,8 [1,2; 3,5] 1,4 [1,1; 3,1] 0,602
СБ19+ 6-18 7,5 [5,0; 11,0] 13,0 [10,0; 16,0] 0,194
СБ19+СБ5+ 0-3,5 1,4 [0,5; 1,9] 2,5 [1,7; 3,3] 0,451
СБ19+СБ27+ 2-7 2,0 [1,7; 2,6] 4,7 [3,1; 6,3] 0,031
исследуемой группе не выходил за границы ре-ференсных значений, однако следует отметить сильный разброс полученных результатов -94 пг/мл, Q3 - 447 пг/мл), что требует отдельного анализа и, возможно, определяет гетерогенность течения БП.
Проведенный корреляционный анализ субпопуляции Т-хелперов CD4+CD8- ТСКуб и цито-кинов в группе пациентов с БП (табл. 4) продемонстрировал наличие достоверной (р = 0,048) обратной связи этой субпопуляции Т-хелперов с индуцированной продукцией ИЛ-10 (г = -0,745) и достоверной (р = 0,042) прямой связи с содержанием провоспалительного цитокина ИЛ-ф (г = 0,648). Кроме того, была выявлена тенденция к повышению спонтанной продукции ИЛ-10 (г = -0,602; р = 0,0506) при снижении числа Т-хелперов CD4+CD8- ТСКуб.
Среди работ отечественных авторов, посвященных изучению субпопуляционного состава лимфоцитов и клеток врожденного иммунитета у пациентов с БП, представляют интерес данные, изложенные в статье Е.В. Бочарова и соавт. [40].
^ № 2 * 2022
115
Таблица 2. Результаты иммунофенотипирования убТ-лимфоцитов (в % (Ме [Q1; Q3]))
Показатель БП Группа сравнения Критерий Манна-Уитни
CD4-CD8+ 25,1 [22,2; 35,5] 19,1 [18,0; 27,3] 0,250
CD4CD8+CD56+ 17,6 [10,3; 32,1] 43,4 [21,9; 50,8] 0,052
CD4+CD8- 13,6 [8,4; 19,5] 29,8 [17,0; 37,7] 0,016
CD4+CD8CD56+ 2,9 [1,5; 7,5] 4,2 [1,5; 10,9] 0,660
CD4CD8- 57,4 [52,8; 67,6] 47,9 [37,2; 58,7] 0,163
CD4CD8CD56+ 23,6 [13,5; 40,0] 22,5 [9,8; 39,5] 0,827
CD3+CD56+ 15,6 [9,0; 20,9] 20,2 [13,6; 33,8] 0,155
CD3+CD56- 78,7 [64,6; 84,3] 78,0 [64,7; 83,0] 0,743
Таблица 3. Результаты оценки уровней цитокинов у пациентов с болезнью Паркинсона (в пг/мл (Ме ^1; Q3]))
ИЛ-1Р ind 50-1200 1796,0 [491; 3181]
ИЛ-1Р s 0-11 1,5 [1; 4]
ИЛ-6 sp 30-280 1,0 [1; 1]
ИЛ-6 ind 11 450-42 200 11 249,5 [8951; 14 041]
ИЛ-6 s 0-10 1,0 [1; 1]
ФНО sp 7-30 1,0 [1; 4]
ФНО ind 2810-5700 2532,5 [931; 10 199]
ФНО s 0-6 8,5 [1; 56]
ИЛ-10 sp 0-23 227,5 [13; 482]
ИЛ-10 ind 66-335 241,0 [94; 447]
ИЛ-10 s 0-31 2 [1; 5]
Обозначения: s — содержание в сыворотке. Здесь и в табл. 4: М — индуцированная продукция, sp — спонтанная продукция.
Таблица 4. Результаты корреляционного анализа субпопуляции Т-хелперов CD4+CD8- TCRyS и ИЛ-ф, ИЛ-10 ind, ИЛ-10 sp
Пока- Субпопуляция Т-хелперов CD4+CD8- TCR76
затель r Р
ИЛ-1Р 0,648 0,042
ИЛ-10 ind -0,745 0,048
ИЛ-10 sp -0,602 0,0506
Ими были выявлены следующие изменения: снижение общего числа Т-лимфоцитов (CD3+), преимущественно за счет Т-хелперов (CD4+), иммунорегуляторного индекса CD4+/CD8+, а также снижение количества В-лимфоцитов (CD20+) и лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR (антигены HLA II), что сочеталось с увеличением количества лимфоцитов с экспрессией рецептора к ИЛ-2 (CD25+) и количества клеток, несущих на мембране CD95+ - маркер готовности к апоптозу. Врожденный иммунитет характеризовался увеличением количества макрофагов (CD11b+ и CD18+) и натуральных киллеров (NK16+). Общими изменениями в субпопу-ляционном составе лимфоцитов крови, выявленными в исследовании цитируемых авторов и в нашей работе, являются: снижение количества Т-лимфоцитов у пациентов с БП; увеличение в крови количества NK-клеток CD3CD56+; признаки активности иммунного ответа (увеличение количества лимфоцитов, экспрессирующих маркер ранней активации в CD25+, а в нашей работе - увеличение количества активированных NK-клеток, значимое повышение индуцированной продукции провоспалительного цитокина ИЛ-ф).
Компоненты мембраны и внутреннего содержания клеток комменсалов и патогенов распознаются TLR эпителия кишечника и клетками врожденного иммунитета [41], а микробиота непрерывно подает сигналы мукозоассоцииро-ванной лимфоидной ткани и поддерживает барьерный иммунитет в состоянии "хронической" активации. Однако микробиота обладает и иммуносупрессивными/толерогенными свойствами. Bacteroides fragilis при взаимодействии с TLR2 на клетках врожденного иммунитета может блокировать их провоспалительную активность [32]. Микробиота может активировать комменсалспецифические Т-регуляторные клетки, что приводит к продукции ими противовоспалительного цитокина ИЛ-10 [42]. Таким образом, эти процессы обусловлены взаимодействием микробиоты, барьерного эпителия и клеток врожденного и адаптивного иммунитета в сайте воспаления.
В работе C. Zhou et al. продемонстрировано снижение в крови пациентов с тяжелым течением БП количества TNK и убТ-лимфоцитов в сравнении с этими показателями у здоровых лиц [43]. В нашем исследовании количество
Показатель
ИЛ-1Р sp
Норма
0-107
Результаты
2,3 [1; 8]
CD4+CD8- TCRy6 в периферической крови было достоверно меньше в группе пациентов с БП и сочеталось с аберрантной спонтанной продукцией ИЛ-10. Спонтанная продукция цитокинов убТ-лимфоцитами участвует в поддержании баланса между воспалением и толерантностью [14]. Известно, что основными продуцентами ИЛ-10 являются Т-регуляторные клетки, TCR которых представлены ab- или уб-цепями, а также В-регуляторные клетки. Вероятно, выраженная спонтанная продукция ИЛ-10 у пациентов с БП связана в том числе с повышенной активностью CD4+CD8- ТСКуб-клеток, а именно с регулятор-ной субпопуляцией.
В некоторых работах показано, что количество Т-лимфоцитов меняется в процессе про-грессирования нейродегенерации при БП. Продемонстрирована взаимосвязь уровня так называемых a-синуклеинреактивных Т-лимфоцитов со стадией заболевания, возрастом пациента и дозой леводопы [44]. a-синуклеинреактивные Т-лимфоциты появляются на премоторной стадии БП, достигают максимума на этапе развития моторных симптомов и значительно снижаются на развернутых стадиях. Нельзя исключать, что уровень убТ-клеток также меняется в процессе прогрессирования БП; принимая во внимание роль данных клеток в антибактериальной защите, можно предположить, что эти изменения могут быть связаны и с составом микробиоты.
Таким образом, полученные нами данные позволяют по-новому оценить вклад убТ-клеток в патогенез БП, указывают на их роль в прогресси-ровании заболевания, а также на взаимосвязь с изменениями (качественными и количественными) кишечной микробиоты при этой патологии.
Список литературы
1. Литвиненко И.В. и др. Современная концепция патогенеза нейродегенеративных заболеваний и стратегия терапии. Журн. неврол. и психиатр. им. C.C. Корсакова. 2017;117(6-2):3-10.
2. Cztonkowska A et al. Immune processes in the pathogenesis of Parkinson's disease — a potential role for microglia and nitric oxide. Med. Sci. Monit. 2002;8(8):RA165-77.
3. Whitton PS. Inflammation as a causative factor in the aetiology of Parkinson's disease. Br. J. Pharmacol. 2007;150(8):963-76.
4. Chen Z et al. The role of T cells in the pathogenesis of Parkinson's disease. Prog. Neurobiol. 2018;169:1-23.
5. Ярилин А.А. Иммунология. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2010. 752 c.
6. Janeway CA et al. Immunobiology. The immune system in health and disease. 5th ed. New York, NY: Garland Science; 2001. 884 p.
7. Нижегородова Д.Б., Зафранская М.М. у5Т-лимфоци-ты: общая характеристика, субпопуляционный состав, биологическая роль и функциональные особенности. Мед. иммунол. 2009;11(2-3):115-30.
8. Hedges JF, Jutila MA. Harnessing y5 T cells as natural immune modulators. Mucosal Vaccines. 2020;20:773-87.
9. Saito H et al. Complete primary structure of a heterodi-meric T-cell receptor deduced from cDNA sequences. Nature. 1984;309(5971):757762.
10. Chien YH et al. A new T-cell receptor gene located within the alpha locus and expressed early in T-cell differentiation. Nature. 1987;327(6124):677-82.
11. Groh V et al. Human lymphocytes bearing T cell receptor gamma/delta are phenotypically diverse and evenly distributed throughout the lymphoid system. J. Exp. Med. 1989;169(4):1277-94.
12. Parker CM et al. Evidence for extrathymic changes in the T cell receptor gamma/delta repertoire. J. Exp. Med. 1990;171(5):1597-612.
13. McCarthy NE et al. Azathioprine therapy selectively ablates human VS2+ T cells in Crohn's disease. J. Clin. Invest. 2015;125(8):3215-25.
14. Paul S et al. Phenotypic and functional plasticity of gamma-delta (y5) T cells in inflammation and tolerance. Int. Rev. Immunol. 2014;33(6):537-58.
15. Harly C et al. Key implication of CD277/butyrophilin-3 (BTN3A) in cellular stress sensing by a major human y5 T-cell subset. Blood. 2012;120(11):2269-79.
16. Moore KW et al. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor. Annu. Rev. Immunol. 2001;19:683-765.
17. Saraiva M, O'Garra A. The regulation of IL-10 production by immune cells. Nat. Rev. Immunol. 2010;10(3):170-81.
18. Gutierrez J et al. Introduction to neuropathic pain syndromes. Neurosurg. Clin. N. Am. 2014;25(4):639-62.
19. Tarazi FI et al. Emerging therapies for Parkinson's disease: from bench to bedside. Pharmacol. Ther. 2014;144(2):123-33.
20. Naundorf S et al. IL-10 interferes directly with TCR-in-duced IFN-gamma but not IL-17 production in memory T cells. Eur. J. Immunol. 2009;39(4):1066-77.
21. Sabat R et al. Biology of interleukin-10. Cytokine Growth Factor Rev. 2010;21(5):331-44.
22. Moore TA et al. Gamma delta-T cells are critical for survival and early proinflammatory cytokine gene expression during murine Klebsiella pneumonia. J. Immunol. 2000;165(5):2643-50.
23. Toth B et al. The role of gammadelta T cells in the regulation of neutrophil-mediated tissue damage after thermal injury. J. Leukoc. Biol. 2004;76(3):545-52.
24. Koohsari H et al. The role of gamma delta T cells in airway epithelial injury and bronchial responsiveness after chlorine gas exposure in mice. Respir. Res. 2007;8(1):21.
25. Balbi B et al. T-lymphocytes with gamma delta+ V delta 2+ antigen receptors are present in increased proportions in a fraction of patients with tuberculosis or with sarcoid-osis. Am. Rev. Respir. Dis. 1993;148(6 Pt 1):1685-90.
26. Bertotto A et al. Lymphocytes bearing the gamma delta T cell receptor in acute Brucella melitensis infection. Eur. J. Immunol. 1993;23(5):1177-80.
27. Caldwell CW et al. Apoptosis of gamma/delta T cells in human ehrlichiosis. Am. J. Clin. Pathol. 1996;105(5):640-6.
28. Chien YH et al. y5 T cells: first line of defense and beyond. Annu. Rev. Immunol. 2014;32:121-55.
29. Stark MA et al. Phagocytosis of apoptotic neutrophils regulates granulopoiesis via IL-23 and IL-17. Immunity. 2005;22(3):285-94.
vj) № 2 • 2022
117
30. Wucherpfennig KW et al. Gamma delta T-cell receptor repertoire in acute multiple sclerosis lesions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992;89(10):4588-92.
31. Fiszer U et al. Gamma delta+ T cells are increased in patients with Parkinson's disease. J. Neurol. Sci. 1994;121(1):39-45.
32. Козлов И.Г. Микробиота, мукозальный иммунитет и антибиотики: тонкости взаимодействия. Рус. мед. журн. 2018;8(1):19-27.
33. Campos-Acuña J et al. T-cell-driven inflammation as a mediator of the gut-brain axis involved in Parkinson's disease. Front. Immunol. 2019;10:239.
34. Красаков И.В. и др. Оценка микробиоты кишечника у пациентов с болезнью Паркинсона с помощью метода газовой хромато-масс-спектрометрии. Анн. клин. эксперимент. неврол. 2018;12(4):23-9.
35. Fasano A et al. The role of small intestinal bacterial overgrowth in Parkinson's disease. Mov. Disord. 2013;28(9):1241-9.
36. Fasano A et al. Gastrointestinal dysfunction in Parkinson's disease. Lancet. Neurol. 2015;14(6):625-39.
37. Maini Rekdal V et al. Discovery and inhibition of an inter-species gut bacterial pathway for levodopa metabolism. Science. 2019;364(6445):eaau6323.
38. Stacy M et al. Identification of motor and nonmotor wear-ing-off in Parkinson's disease: comparison of a patient questionnaire versus a clinician assessment. Mov. Disord. 2005;20(6):726-33.
39. Ивашкин В.Т. и др. Клинические рекомендации Российской гастроэнтерологической ассоциации по диагностике и лечению взрослых пациентов с хроническим запором. Рос. журн. гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2017;27(3):75-83.
40. Бочаров Е.В. и др. Нарушение иммунной и антиокси-дантной защиты при болезни Паркинсона. Патогенез. 2012;10(1):34-8.
41. Bouskra D et al. Lymphoid tissue genesis induced by commensals through NOD1 regulates intestinal homeostasis. Nature. 2008;456(7221):507-10.
42. Ubeda C, Pamer EG. Antibiotics, microbiota, and immune defense. Trends Immunol. 2012;33(9):459-66.
43. Zhou C et al. Reduction of peripheral bood iNKT and y5T cells in patients with Parkinson's disease: an observational study. Front. Immunol. 2020;11:1329.
44. Lindestam Arlehamn CS et al. a-synuclein-specific T cell reactivity is associated with preclinical and early Parkinson's disease. Nat. Commun. 2020;11(1):1875.
