CC BY
62
Таблица 5
Средние значения показателей лейкограммы cамок крыс CD (данные микроскопического метода)
Показатель группа 1 (n=5) группа 2 (n=5)
Нейтрофилы палочкоядерные, % 1,0±0,00 1,0±0,00
Нейтрофилы палочкоядерные, х109/л 0,1±0,02 0,1±0,01
Нейтрофилы сегментоядерные, % 10,6±1,94 15,2±3,93
Нейтрофилы сегментоядерные, х109/л 1,1±0,21 1,5±0,49
Эозинофилы, % 1,0±0,00 1,0±0,00
Эозинофилы, х109/л 0,1±0,02 0,1±0,01
Базофилы, % 0,2±0,20 0,2±0,19
Базофилы, х109/л 0,0±0,02 0,0±0,01
Лимфоциты, % 83,8±2,22 79,2±4,09
Лимфоциты, х109/л 8,5±1,51 7,7±0,77
Моноциты, % 3,4±0,40 3,4±0,24
Моноциты, х109/л 0,3±0,03 0,3±0,04
Примечание: значения представлены как Mean±SEM, где Mean - среднее значение, SEM - стандартная ошибка среднего; n - количество животных
Рис. 1. Типичные гистограммы распределения клеток крови крысы по объему: ШВС - лейкоцитарная, ЯБС - эритроцитарная,
РЬТ - тромбоцитарная. По оси абсцисс - объем клеток в фемтолитрах, по оси ординат - количество клеток в относительных единицах. 8,4 б - время лизиса эритроцитов.
Поскольку кровь крысы имеет лимфоцитарный профиль [4], то этот факт .отражается на форме лейкоцитарной гистограммы (рис.1, №ВС). Она характеризуется высоким лимфоцитарным пиком в области 25-85 фл и сравнительно малым пиком гранулоцитов (110-400 фл), между ними (85-110 фл) «средние лейкоциты», к которым относят моноциты, эозинофилы и базо-филы. Перераспределения в составе субпопуляций лейкоцитов приводят к изменениям в соответствующих областях гистограммы, что указывает на присутствие того или иного патологического состояния. Нормальная эритроцитарная гистограмма крысы имеет симметричную куполообразную форму с нижней границей около 25 фл и максимумом 50-60 фл (рис 1, ИВС). По ширине ее основания и положении максимума сразу можно судить о степени анизо-цитоза эритроцитов и наличии микро- или макроцитоза. Тромбоци-тарная кривая унимодальна и немного асимметрична, расположена между 1 и 20 фл с максимумом 5-7 фл (рис.1, РЬТ). По форме ее правого крыла и пограничной зоны с эритроцитами можно выявить присутствие в крови макротромбоцитов или микроэритроцитов.
Таким образом, качественные и количественные изменения в клеточном составе крови немедленно отражаются на формах гистограмм, что является сигналом исследователю для проведения детального морфологического анализа мазка крови.
Выводы:
1. Приведены исторические данные анализа крови контрольных крыс СЭ категории СПФ, полученные при проведении доклинических токсикологических исследований, проводимых в Лаборатории биологических испытаний ФИБХ на протяжении 2008-2011 годов.
2. Показано, что трехкомпонентная дифференцировка лейкоцитов гематологическим анализатором не несет достаточной информации для формирования окончательных выводов в токсикологических исследованиях на лабораторных животных и может использоваться только в качестве ориентировочных значений. Во
избежание ошибочных выводов оптимальным является сочетание исследования трехкомпонентной лейкограммы гематологического анализатора и микроскопического исследования крови с определением всех субпопуляций лейкоцитов.
3. Определены границы распределения клеток крови крысы по объему, которые составляют для эритроцитов 25-260 фл, для лейкоцитов 25-450 фл, для тромбоцитов 1-20 фл.
Литература
1. Антонов, В.С. Автоматизация гематологического анализа. Интерпретация показателей гемограммы / В.С. Антонов, Н.В. Богомолова, А.С. Волков.- Издательство Саратовского Медицинского Университета.- 2008.- С.10-14; 38-41.
2. Биомедицина / И.Н. Кравченко [и др.].- 2008.- № 2.-С.20-30.
3. Луговская, С.А. Гематологические анализаторы. Интерпретация анализа крови. Методические рекомендации / С.А. Луговская, М.Е. Почтарь, В.В. Долгов.- М., 2008.- С.18-20.
4. Никитин, В.Н. Атлас клеток крови сельскохозяйственных и лабораторных животных / В.Н. Никитин.- М., 1949.- С.17-22.
5. Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации N° 708н от 23.08.2010 «Об утверждении правил лабораторной практики».
6. «Animal Models in Toxicology» edited by Shayne C. Gad.-2008- Р. 813.
7. Charles River Laboratories. Clinical Laboratory Parameters
for Crl:CD(SD) Rats.- March, 2006- Internet resource (February, 2008): http://www.criver.com/SiteCollectionDocuments/rm rm r
clinical parameters cd rat 06.pdf
8. The Guide for Care and Use of Laboratory Animals.-Washington, D.C.: National Academy Press-1996.
THE USE OF THE RESULTS OF AUTOMATED BLOOD CELL COUNTING IN TOXICOLOGICAL STUDIES ON RODENTS
I.N. KRAVCHENKO, D.I. RZHEVSKY, I.A. PAKHOMOVA,
N.N. KRAVCHENKO , A.N. MURASHEV
Branch of Russian Academy of Sciences, Institute of Bio-Organic Chemistry after Academicians M.M. Shemyakin and Yu.A. Ovchinnikov, Pushchino, Moscow Region
The historical blood test data of control CD (Sprague-Dawley) rats having SPF category (pathogenic flora free) are presented. The data have been received by using hematological analyzers. The comparison of the results of rat' 3-part white blood cells differential leukogram with the data of microscopic studying revealed the difference in the quantitative formula of leukocyte subpopulations.
Key words: blood, rats, automated blood test.
УДК 616-021.3
ОСОБЕННОСТИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУННОГО СТАТУСА У ЧАСТО БОЛЕЮЩИХ ДЕТЕЙ, ПРОЖИВАЮЩИХ В ТВЕРСКОЙ ОБЛАСТИ.
Р.В. МАЙОРОВ*
Проведено обследование 2040 детей школьного возраста проживающих на территории Тверской области. Выявлена большая распространенность детей, часто болеющих респираторными инфекциями. Отмечены характерные изменения в иммунном статусе у данной категории детей: снижением уровня Т-хелперов, NK-клеток, иммунорегуляторного индекса, повышением уровня TNF-альфа и IgG. Ключевые слова: частые респираторные заболевания, дети,
иммунограмма.
Острые инфекционно-воспалительные заболевания различных отделов респираторного тракта являются одними из самых частых болезней в детском возрасте [1,2,3,4].
При этом отдельно выделяют часто болеющих детей (ЧБД), которые по сути своей представляют особую группу диспансерного наблюдения, включающую детей, с более частыми, чем у сверстников, простудными заболеваниями. Распространенность ЧБД в различные возрастные периоды может колебаться от 10 до 80% [3,5,6,7].
Доказано, что частые респираторные инфекции являются фактором риска развития различных соматических [1,2,8] и нервно-психических заболеваний [2,9].
* ГБОУ ВПО Тверская ГМА, 170100, г. Тверь, ул. Советская, д. 4
Оценка состояния иммунной системы у детей с рецидивирующими инфекционными заболеваниями дыхательных путей является одной из основополагающих составляющих диспансерного наблюдения за этим контингентом детей [3,5].
В настоящее время признано, что повышенная заболеваемость острыми респираторными инфекциями у часто болеющих детей не связана со стойкими врожденными изменениями иммунной системы, а возникает из-за транзиторных, корригируемых отклонений в защитных системах организма [9,10].
Нам представляется важным проведение подобных исследований отдельно для каждого региона, где планируются программы по уменьшению частоты ОРЗ, что позволит учесть территориальные особенности и повысить эффективность проводимых профилактических мероприятий.
Цель исследования - выявить и оценить характерные изменения иммунного статуса часто болеющих детей Тверской области.
Материалы и методы исследования. Для решения поставленной задачи 2040 детей школьного возраста, проживающих на территории Тверской области, были осмотрены врачом аллергологом-иммунологом с выделением диспансерной группы, часто болеющие респираторными инфекциями. Исследование носило одномоментный характер. Для этого были использованы критерии, предложенные В.Ю. Альбицким и А.А. Барановым [3].
Оценка иммунного статуса произведена у 280 детей из числа осмотренных ранее. Из них 208 школьников относились к группе ЧБД. Из них мальчиков - 102 (49%) , девочек - 106 (51%), средний возраст детей в группе - 10±3,3 лет.
72 ребенка переносили простудные заболевания эпизодически и были отнесены к группе контроля (группа ЭБД). Из них мальчиков - 34 (47,5 %) , девочек - 38 (52,5%), средний возраст - 10±2,7 лет. Таким образом, статистически значимых различий по возрасту и полу между выделенными группами не было.
В работе использовали комплекс иммунологических тестов: фенотипирование иммунокомпетентных клеток по кластерам дифференцировки CD3+, CD19+, CD3+CD8+, CD3+CD4+,
CD3+CD16+CD56+, с определением иммунорегуляторного индекса (соотношение CD4/CD8), оценка концентрации сывороточных иммуноглобулинов M, G, А изучение цитокинового профиля (INF-альфа, фактор некроза опухолей альфа (TNF-альфа)), постановка НСТ-тестов спонтанного и индуцированного. В работе использованы методы иммуноферментного анализа и проточной цитофлюорометрии.
Для статистической обработки результатов использовалась пакеты программ Office XP (Excel), STATGRAPHICS Plus Version 5.1. При оценке достоверности признаков определялись критерий Стьюдента (t) и коэффициент корреляции Пирсона (r).
Результаты и их обсуждение. При анализе заболеваемости было выявлено, что наибольшая распространенность часто болеющих детей отмечается в младших школьных классах (33,3%) и в дальнейшем снижается по мере взросления ребенка. В средней школе распространенность ЧБД составила - 24,7%, а в старших классах 18,8% обследованных (р <0.0001, r > 0.6). Таким образом, каждый третий обследованный школьник младших классов и каждый пятый старшеклассник болеют простудными заболеваниями значительно чаще, чем его сверстники.
Выявленные данные подчеркивают большую распространенность данной проблемы и актуальность её детального изучения.
Результаты иммунологического обследования выделенной группы детей, обследованных ранее, представлены в табл.
Лабораторное обследование часто болеющих детей выявило комплексные изменения иммунного статуса. Было отмечено, что в группе часто болеющих респираторными заболеваниями детей, отмечался достоверно более низкий относительный и абсолютный уровень Т-хелперов и натуральных киллеров (NK клеток), при сравнении с группой эпизодически болеющих детей. При этом содержание CD3+CD4+ клеток у детей с более частыми чем у сверстников респираторными заболеваниями выходит за границы возрастной нормы. Подобная динамика, отмечаемая на фоне сопоставимых при сравнении между группами показателей Т-лимфоцитов цитотоксических, приводит к снижению иммуно-регуляторного индекса, являющегося, хотя и косвенным, маркером активности адаптативного иммунитета.
Таблица
Показатели иммунного статуса у часто и эпизодически болеющих детей
Показатель ЧБД, n=208 ЭБД, n=72 Норма
Т-лимфоциты (003+), % 68.7±5.5 71.8±4.8 66-76
Т-лимфоциты (0Э3+), абс 1.8±0.5 1.6±0.4 1,4-2*109/л
В-лимфоциты (0Э19+), % 11.7±2.6 13.2±5,5 12-22
В-лимфоциты (0Э19+), абс 0.3±0.1 0.32±0.1 0,3-0,5*109/л
Т-лимфоциты хелперы (0Э3+ 0Э4+), % 30.7±3.3 40±2.1* 33-41
Т-лимфоциты хелперы (0Э3+ 0Э4+), абс 0.67±0.1 0.99±0.1** 0.7-1.1*109/л
Т-лимфоциты цитотоксические (0Э3+ 0Э8+), % 27.5±2.2 27.9±2.8 27-35
Т-лимфоциты цитотоксические (003+008+), абс 0.58±0.2 0.63 0,6-0,9*109/л
Натуральные киллеры ЫК (0В3+,0Э16+, 0Э56+ ), % 9.1±2.6 17.6±5.4* 4-27
Натуральные киллеры ЫК (0В3+,0Э16+, 0Э56+ ), абс 0.16±0.04 0.34±0.1** 0,1-0,5 *109/л
004/008 1.15±0.2 1.5±0.3*** 1-1.5
1еА, мг/мл 1.41 ±0.8 1.3±0.3 1.03-4.61
IgG, мг/мл 15.5±3.2 8.2±2.2* 6.2-14.7
1еМ, мг/мл 1.32±3.2 1.3±0.3 0.61-1.64
Интерферон-альфа 15.7±7.3 19.2±1.8 0-50 пг/мл
ЮТ-альфа 8.7±1.4 3.8±0.9* 0-8.21 пг/мл
НСТ -тест спонтанный, % 3.5±1.8 4±1.2 0-5
НСТ -тест индуцированный, % 35.8±10.8 55.4±6.7* 40-80
Примечание: * р<0.0001; г>0.6; ** р<0.001; г>0.5; *** р<0.005; г>0.55
Выявленные нарушения в группе ЧБД сопровождаются снижением способности к фагоцитозу. Так, результаты НСТ-теста индуцированного были достоверно ниже в группе часто болеющих детей при сравнении с эпизодически болеющими, при этом значения выходили за границы физиологической нормы.
Большую настороженность вызывает увеличение в группе детей с рецидивирующими инфекциями дыхательных путей уровня TNF-альфа и IgG. На момент лабораторного обследования все дети находились в состоянии относительного клинического здоровья, не имели признаков инфекционных заболеваний, и выявленные изменения, типичные для острых или хронических воспалительных реакций, указывают на значимость влияния частых респираторных инфекций на здоровье школьников.
Таким образом, мы видим сочетанные нарушения показателей иммунного статуса у детей, проживающих на территории Тверской области и часто болеющих инфекционными заболеваниями дыхательных путей: снижение показателей клеточного иммунитета и фагоцитоза, повышение уровня TNF-альфа и IgG.
Полученные данные позволят совершенствовать мероприятия первичной и вторичной профилактики в выделенной диспансерной группе и выбрать наиболее оптимальное направление профилактической иммунокорригирующей терапии.
Выводы:
1) В Тверской области отмечена высокая распространенность детей, часто болеющих респираторными инфекциями дыхательных путей.
2) В иммунном статусе часто болеющих детей выявлены комплексные нарушения: снижение уровня CD3+ CD4+ и CD3+CD16+CD56+ клеток, снижение иммунорегуляторного индекса и НСТ-теста индуцированного, повышение уровня TNF-альфа и IgG.
Литература
1. Иванова, Н.А. Часто болеющие дети: нужны ли иммуномодуляторы/ Н.А. Иванова// Пульмонология и аллергология.-2006.- №4.- C. 18-20
2. Самсыгина, Г.А. Часто болеющие дети: проблемы патогенеза, диагностики и терапии/ Г.А. Самсыгина // Педиатрия.-
2005.- № 1.- C. 66-74.
3. Альбицкий, В.Ю. Часто болеющие дети. Клиникосоциальные аспекты. Пути оздоровления / В.Ю. Альбицкий, А.А. Баранов.- Саратов, 1986.- 89 с.
4. Майоров, Р.В. Факторы риска частых респираторных инфекций у детей Тверской области/ Р.В. Майоров // Врач-аспирант.- 2011.- № 4 (47).- C.9-12
5. Романцев, М.Г. Часто болеющие дети: современная фармакотерапия / М.Г. Романцев, Ф.И. Ершов.- М.: Гэотар-медиа,
2006.- 192 с.
6. Корнева, Е.А. Введение в иммунофизиологию / Е.А. Корнева.- СПб.: Элби.- 2003.- 48 с.
7. Магаева, С.В. Психонейроиммунология как область психосоматики/ С.В. Магаева, С.Г. Морозов, И.Е. Грибова // Нейроиммунология.- 2006.- Том IV.- №3-4.- С. 4-15
8. Дерманова, И.Б. Диагностика эмоционально-нравственного развития / И.Б. Дерманова.- СПб.: Речь,2002.- 86 с.
9. Коровина, Н.А. Часто и длительно болеющие дети: современные возможности иммунореабилитации. руководство для врачей / Н.А. Коровина, А.Л. Заплатников, А.В. Чебуркин, И.Н. Захарова.- М.: Контимед, 2001.- 68 с.
10. Современные возможности эффективной иммунопрофилактики острых респираторных инфекций в программах оздоровления часто болеющих детей/ А.Л. Заплатников [и др.]// Детские инфекции.- 2011.- №°1- С. 56-59
FEATURES OF IMMUNE STATUS AT OFTEN FALLING ILL CHILDREN LIVING IN THE TVER REGION
R.V. MAIOROV Tver State Medical Academy
Examination of school age 2040 children living on the territory of Tver region was performed. It was founded out, that prevalence of children with often respiratory diseases is extremely high. Characteristic changes of immune status in this category of children were noted: decreasing of T-helpers, NK-cells, immune regulatory index, increasing of TNF-alpha and IgG levels.
Key words: often respiratory diseases, children, immunogram.
УДК 616.742. 616.71-089.844
КЛИНИКО-РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ РЕКОНСТРУКЦИИ ВИСОЧНО-НИЖНЕЧЕЛЮСТНОГО СУСТАВА КОМПОЗИТНЫМИ ЭНДОПРОТЕЗАМИ ИЗ МАТЕРИАЛОВ НИКЕЛИДА ТИТАНА
Н.М.ДЮРЯГИН*, В.Э.ГЮНТЕР**, П.Г.СЫСОЛЯТИН***, В.В.СЕМЧЕНКО****, Е.Н.ДЮРЯГИНА*, С.С.СТЕПАНОВ*
В работе на 16 пациентах с посттравматическими и пострезекцион-ными дефектами нижней челюсти по поводу доброкачественных и злокачественных новообразований проведен анализ результатов восстановления височно-нижнечелюстного сустава композитными эндопротезами из никелида титана. Убедительно показано, что применение мультиспиральной компьютерной томографии и 30 визуализации, лазерных технологий стереолитографического прототипирования, а также новых технологий реконструкции синовиальной суставной полости и связок височно-нижнечелюстного сустава методами эндопротезирования позволяет существенно повысить качество лечения пациентов.
Ключевые слова: реконструкция височно-нижнечелюстного сустава, композитные эндопротезы, никелид титана, мультиспиральная компьютерная томография, 3Б визуализации, лазерная стереолитография.
Дефекты нижней челюсти и височно-нижнечелюстного сустава являются распространенной патологией челюстнолицевой области, что связано с высоким уровнем их травматических и опухолевых поражений [12,13,14]. При этом проблема реконструкции нижней челюсти методами эндопротезирования при наличии дефектов височно-нижнечелюстного сустава чрезвычайно актуальна и сложна [8].
Имеется множество способов реконструкции височнонижнечелюстного сустава, обладающих различными показателями эффективности. Однако, в основном они не вполне соответствуют современным критериям функциональной и эстетической реабилитации пациентов [5].
С 2003 года нами разрабатываются новая методология эндопротезирования и технологии создания эндопротезов пожизненного действия из никелида титана [2,9]. В экспериментах на кроликах показано, что результаты длительного эффективного функционирования таких эндопротезов зависят не только от уникальных свойств имплантационных материалов, их рационального композиционирования в структурах эндопротезов, качества
* ГБОУ ВПО Омская государственная медицинская академия, ул. Петра Некрасова, 5, г.Омск, 644099
НИИ имплантатов и материалов с памятью формы, ул. 19 Гвардейской Дивизии, 17, г. Томск
ГБОУ ВПО Новосибирский государственный медицинский университет, Красный проспект, 52, г. Новосибирск, 630091
Институт ветеринарной медицины и биотехнологий ФГОУ ВПО Омского государственного аграрного университета, Институтская площадь, д.2, Омск, 644008
изготовления, но и от адекватного восстановления конфигурации костного фрагмента - скелетного кинематического звена [4].
Установлено, что у экспериментальных животных - кроликов при целенаправленном создании биометрических дефектов нижней челюсти эндопротезами из никелида титана происходит их оптимальная тканевая адаптация, но в функциональном отношении реконструированная челюсть не состоятельна. Только индивидуальное исполнение технологий эндопротезирования с оптимальным устранением биометрических дефектов нижней челюсти позволяет эффективно реабилитировать животных до полного биологического цикла жизни [4].
Цель исследования - клинико-рентгенологический анализ результатов реконструкции височно-нижнечелюстного сустава композитными эндопротезами из никелида титана у пациентов без применения новых технологий и у пациентов с применением новых технологий медицинской визуализации и прототипирования.
Материалы и методы исследования. Замещение односторонних дефектов височно-нижнечелюстного сустава у 16 пациентов осуществляли с помощью эндопротезов мыщелка нижней челюсти из материалов никелида титана. В соответствии с известными положениями биомеханики [1], эндопротезы содержали пассивные элементы - аналоги костных структур и активные элементы - аналоги соответствующие соединительной ткани надкостницы шейки мыщелка [3]. В основе доказательной базы и дизайна данной работы лежало исследование серии случаев, распределенных по двум группам [10].
В группу I вошли 8 пациентов: 4 пациента (женщины, возраст от 28 до 56 лет) прооперированы по поводу амелобластом нижней челюсти с поражением мыщелкового отростка, 4 пациента (женщина и 3 мужчин, возраст от 30 до 71 года) - по поводу злокачественных новообразований с вторичным поражением нижней челюсти и мыщелкового отростка. Пациенты первой группы оперированы до 2005 года, когда в регионе не было аппаратуры для мультиспиральной компьютерной томографии. Поэтому изучение рентгенологических данных и необходимые измерения при подготовке к реконструктивным операциям производили по компьютерным томограммам, ортопантомограммам и рентгенограммам челюстей в различных проекциях [6].
Эндопротезы для данных пациентов формировались на основании гипсовых моделей прикуса, антропометрических измерений и математических моделей дефектов, исходные данные для которых не вполне соответствовали истинным, а реальные конструкции получались не вполне корректных размеров. Применялась традиционная оперативная техника - имплантация эндопротезов методом припасовки и укрепления «по месту». В связи с этим первоначально реконструированные фрагменты имели различные, иногда значительные отклонения от истинных размеров мыщелков и суставных головок челюстей.
В группу II вошли так же 8 пациентов с односторонними дефектами нижней челюсти и височно-нижнечелюстного сустава. 6 женщин (возраст от 30 до 42 лет) - посттравматические дефекты 2, амелобластомы 3, злокачественные новообразования с поражением нижней челюсти после несостоятельной реконструкции 1 и 2 мужчин (возраст 26 и 36 лет) - соответственно с по-сттравматическим дефектом и амелобластомой.
В период предоперационной подготовки и при проведении реконструктивно-восстановительных операций для пациентов этой группы использованы новые технологии.
1. Рентгенологическая диагностика c помощью мультиспи-ральной (многослойной) компьютерной томографии и 3-D визуализации по стоматологической программе [11] выполнялась на установке Philips Brilliance CT 6-Slice с построением 3-D изображений. Это позволяло получать полноценную объективную информацию о характере патологических изменений в области поражения височно-нижнечелюстного сустава и нижней челюсти.
2. Для данных пациентов заказывались пластиковые сте-реолитографические прототипы костей лицевого скелета выполненные с помощью 3-D технологий [7]. Они содержали точную предметную информацию о реальных размерах патологии костных структур, на них формировались пластиковые модели костных дефектов, к которым припасовывались модели композитных эндопротезов. Благодаря этому и технологиям никелида титана первоначально реконструированные фрагменты нижней челюсти были, как правило, идентичны истинным или имели отклонения не более 1 -2 мм.
3. Новые хирургические способы реконструкции синови-
