Научная статья на тему 'Особенности морфогистологической картины гомографтов в различные сроки консервации'

Особенности морфогистологической картины гомографтов в различные сроки консервации Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

CC BY
8
2
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
гомографт / аллографт / морфогистологическая картина / раствор RPMI 1640 / homograft / allograft / morphohistological picture / RPMI 1640 solution

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Калинин Р.Е., Сучков И.А., Карпов В.В., Климентова Э.А., Швальб А.П.

Цель – оценить динамику гистологических показателей трупных гомографтов при консервации в растворе RPMI 1640 в различные сроки. Материал и методы. Выполнено морфологическое исследование трупных гомографтов общей бедренной вены и поверхностной бедренной артерии. Изучено 72 образца от одного посмертного донора. Гистологическое исследование проводилось на 7, 14, 21, 28, 35, 42-е сутки после забора гомографтов по 2 артериальных и венозных препарата соответственно. Получено 6 групп сравнения артериальных и венозных гомографтов. Изучено 36 артериальных и 36 венозных образцов. Оценена динамика толщины интимо-мускулярного комплекса, толщины мышечной оболочки и толщина внутренней эластической мембраны в артери альном гомографте и толщина стенки без адвентиции в венозном гомографте. Результаты. Имеет место уменьшение толщины интимо-мускулярного комплекса (р=0,043) на 21% в конце 21-х суток относительно значений 7-х суток, но отмечено увеличение толщины этого показателя на 51% (р=0,001) на 28-е сутки относительно значений 21-х суток. Толщина мышечного слоя на 21-е сутки уменьшилась на 19,5% (статистически недостоверно) относительно показателей 7-х суток, но выявлено увеличение толщины мышечного слоя к 28-м суткам (р=0,01) на 49,8% относительно значений этого показателя на 21-е сутки за счет разрежения мышечной порции стенки, набухания миоцитов, изменения ядер в виде фрагментации и лизиса. Толщина внутренней эластической мембраны уменьшилась к 21-м суткам (р=0,035) на 12,3% относительно значений 7-х суток. К 42-м суткам отмечается тенденция к увеличению ее толщины. Выявлено уменьшение толщины стенки венозного гомографта без адвентиции (р=0,014) в конце 42-х суток на 23,4% к значению этого показателя на 7-е сутки, также отмечено снижение толщины венозного графта в конце 42-х суток (р=0,05) на 28,6% относительно значений 35-х суток. На протяжении всех контрольных точек полностью сохранена структура нативной стенки трупных гомографтов. Отсутствуют очаги некроза стенки во всех микропрепаратах. Заключение. Наиболее «чувствительным» маркером некроза ткани при морфогистологическом методе исследования стенки графта является изучение динамики ее толщины в различные сроки консервации, так как отек клеток и волокон приведет к увеличению толщины стенки, а затем к последующему тотальному некрозу. К концу 28-х суток консервации выявлены статистически достоверное увеличение стенки артерии относительно показателей 21-х суток, участки разряжения мышечной ткани. Отмечена тенденция увеличения толщины стенки артерии к 42-м суткам. В венозном гомографте выявлено статистически достоверное снижение толщины стенки к концу исследования. Исходя из этих данных можно говорить о более длительной возможности хранения с целью использования венозного трупного кондуита. Оптимальным сроком применения артериальных гомографтов можно считать срок консервации в растворе RPMI 1640 до 21-х суток. Венозные гомографты возможно использовать в срок до 42-х суток.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Калинин Р.Е., Сучков И.А., Карпов В.В., Климентова Э.А., Швальб А.П.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Features of the morphohistological picture of homografts in different periods of conservation

Aim. Evaluate the histological dynamics of cadaveric homografts during preservation in RPMI 1640 solution over time. Material and methods. Morphological examination of cadaveric homografts of the common femoral vein and superficial femoral artery was performed. 72 samples from a postmortem donor were studied. Histological examination was carried out on days 7, 14, 21, 28, 35, 42 days after taking two arterial and venous preparations of homografts, respectively. 6 comparison groups of arterial and venous homografts were obtained. 36 arterial and 36 venous samples were studied. The dynamics of the thickness of the intimo-muscular complex, the thickness of the muscular membrane and the thickness of the internal elastic membrane in the arterial homograft and the wall thickness without adventitia in the venous homograft were evaluated. Results. There is a decrease in the thickness of the intimo-muscular complex (р=0.043) by 21% at the end of day 21 in comparison with the values of day 7, but there was an increase in the thickness of this indicator by 51% (р=0.001) on day 28 in comparison with the values of day 21. The thickness of the muscle layer on day 2 decreased by 19.5% (statistically non-significant) in comparison with the indicators of day 7, but the thickness of the muscle layer by day 28 increased (р=0.01) by 49.8% in comparison with the values of this indicator on day 21 due to the rarefaction of the muscle portion of the wall, swelling of myocytes, changes in the nuclei in the form of fragmentation and lysis. The thickness of the internal elastic membrane decreased by day 21 (р=0.035) by 12.3% in comparison with the values of day 7. By day 42, there was a tendency to increase its thickness. A decrease in the wall thickness of the venous homograft without adventitia (р=0.014) was revealed at the end of day 42 by 23.4% in comparison with the value of this indicator on day 7, and a decrease in the thickness of the venous graft was also noted at the end of day 42. Conclusion. In our opinion, the most "sensitive" marker of tissue necrosis in the morphohistological method of examining the graft wall is the study of the dynamics of its thickness at various conservation periods. Since the swelling of cells and fibers will lead to an increase in wall thickness, and then, to subsequent total necrosis. By the end of day 28 of preservation, a statistically significant increase in the artery wall in comparison with the indicators of day 21, areas of muscle tissue discharge were revealed. There was a tendency to increase the thickness of the artery wall by day 42. A statistically significant decrease in wall thickness was revealed in the venous homograft by the end of the study. Based on these data, it is rational to talk about a longer storage possibility for the purpose of using a venous cadaveric conduit. The preservation period in RPMI 1640 solution up to 21 days is the optimal period for the use of arterial homografts. Venous homografts can be used for up to 42 days.

Текст научной работы на тему «Особенности морфогистологической картины гомографтов в различные сроки консервации»

ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И МЕЖДИСЦИПЛИНАРНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ■

Особенности морфогистологической картины гомографтов в различные сроки консервации

о

Калинин Р.Е.1, Сучков И.А.1, Карпов В.В.2, Климентова Э.А.1, 2, Швальб А.П.3, Гузаиров Д.В.1, Егоров А.А.1, 2

1 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 390026, г. Рязань, Российская Федерация

2 Государственное бюджетное учреждение Рязанской области «Областная клиническая больница», 390039, г. Рязань, Российская Федерация

3 Государственное бюджетное учреждение Рязанской области «Бюро судебно-медицинской экспертизы имени Д.И. Мастбаума», 390047, г. Рязань, Российская Федерация

ДЛЯ КОРРЕСПОНДЕНЦИИ

Сучков Игорь Александрович -доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры сердечно-сосудистой, рентгенэндоваскулярной хирургии и лучевой диагностики ФГБОУ ВО «РязГМУ им. акад. И.П. Павлова» (Рязань, Российская Федерация) E-mail: Suchkov_med@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-1292-5452

Цель - оценить динамику гистологических показателей трупных гомографтов при консервации в растворе 1^РМ1 1640 в различные сроки.

Материал и методы. Выполнено морфологическое исследование трупных гомографтов общей бедренной вены и поверхностной бедренной артерии. Изучено 72 образца от одного посмертного донора. Гистологическое исследование проводилось на 7, 14, 21, 28, 35, 42-е сутки после забора гомографтов по 2 артериальных и венозных препарата соответственно. Получено 6 групп сравнения артериальных и венозных гомографтов. Изучено 36 артериальных и 36 венозных образцов. Оценена динамика толщины интимо-мускулярного комплекса, толщины мышечной оболочки и толщина внутренней эластической мембраны в артериальном гомографте и толщина стенки без адвентиции в венозном гомографте.

Результаты. Имеет место уменьшение толщины интимо-мускулярного комплекса (р=0,043) на 21% в конце 21-х суток относительно значений 7-х суток, но отмечено увеличение толщины этого показателя на 51% (р=0,001) на 28-е сутки относительно значений 21-х суток. Толщина мышечного слоя на 21-е сутки уменьшилась на 19,5% (статистически недостоверно) относительно показателей 7-х суток, но выявлено увеличение толщины мышечного слоя к 28-м суткам (р=0,01) на 49,8% относительно значений этого показателя на 21-е сутки за счет разрежения мышечной порции стенки, набухания миоцитов, изменения ядер в виде фрагментации и лизиса. Толщина внутренней эластической мембраны уменьшилась к 21-м суткам (р=0,035) на 12,3% относительно значений 7-х суток. К 42-м суткам отмечается тенденция к увеличению ее толщины. Выявлено уменьшение толщины стенки венозного гомографта без адвентиции (р=0,014) в конце 42-х суток на 23,4% к значению этого показателя на 7-е сутки, также отмечено снижение толщины венозного графта в конце 42-х суток (р=0,05) на 28,6% относительно значений 35-х суток. На протяжении всех контрольных точек полностью сохранена структура нативной стенки трупных гомографтов. Отсутствуют очаги некроза стенки во всех микропрепаратах.

Заключение. Наиболее «чувствительным» маркером некроза ткани при морфогистологи-ческом методе исследования стенки графта является изучение динамики ее толщины в различные сроки консервации, так как отек клеток и волокон приведет к увеличению толщины стенки, а затем к последующему тотальному некрозу. К концу 28-х суток консервации выявлены статистически достоверное увеличение стенки артерии относительно показателей 21-х суток, участки разряжения мышечной ткани. Отмечена тенденция увеличения толщины стенки артерии к 42-м суткам. В венозном гомографте выявлено статистически достоверное снижение толщины стенки к концу исследования. Исходя из этих данных можно говорить о более длительной возможности хранения с целью использования венозного трупного кондуита. Оптимальным сроком применения артериальных гомографтов можно считать срок консервации в растворе 1^РМ1 1640 до 21-х суток. Венозные гомографты возможно использовать в срок до 42-х суток.

Ключевые слова:

гомографт; аллографт; морфогистологическая картина; раствор RPMI1640

OORRESPONDENCE

Igor A.Suchkov -MD, Professor, Professor of Department of Cardiovascular, X-ray Endovascular Surgery and Radiation Diagnostics, Ryazan State Medical University named after Academician I.P. Pavlov, Ministry of Health of the Russian Federation (Ryazan, Russian Federation) E-mail: Suchkov_med@mail.ru https://orcid.org/0000-0002-1292-5452

Keywords:

homograft; allograft; morphohistological picture; RPMI 1640 solution

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Для цитирования: Калинин Р.Е., Сучков И.А., Карпов В.В., Климентова Э.А., Швальб А.П., Гузаиров Д.В., Егоров А.А. Особенности морфогистологической картины гомографтов в различные сроки консервации // Клиническая и экспериментальная хирургия. Журнал имени академика Б.В. Петровского. 2023. Т. 11, № 4. С. 75-82. 001: ИИрБ://^. огд/10.33029/2308-1198-2023-11-4-75-82

Статья поступила в редакцию 31.08.2023. Принята в печать 13.11.2023.

Features of the morphohistological picture of homografts in different periods of conservation

Kalinin R.E.1, Suchkov I.A.1, Karpov V.V.2, Klimentova E.A.1, 2, Shvalb A.P.3, Guzairov D.V.1, Egorov A.A.1, 2

1 Ryazan State Medical University named after Academician I.P. Pavlov, Ministry of Health of the Russian Federation, 390026, Ryazan, Russian Federation

2 Regional Clinical Hospital, 390039, Ryazan, Russian Federation

3 Bureau of Forensic Medical Examination named after D.I. Mastbaum, 390047, Ryazan, Russian Federation

Aim. Evaluate the histological dynamics of cadaveric homografts during preservation in RPMI 1640 solution over time.

Material and methods. Morphological examination of cadaveric homografts of the common femoral vein and superficial femoral artery was performed. 72 samples from a postmortem donor were studied. Histological examination was carried out on days 7, 14, 21, 28, 35, 42 days after taking two arterial and venous preparations of homografts, respectively. 6 comparison groups of arterial and venous homografts were obtained. 36 arterial and 36 venous samples were studied. The dynamics of the thickness of the intimo-muscular complex, the thickness of the muscular membrane and the thickness of the internal elastic membrane in the arterial homograft and the wall thickness without adventitia in the venous homograft were evaluated.

Results. There is a decrease in the thickness of the intimo-muscular complex (p=0.043) by 21% at the end of day 21 in comparison with the values of day 7, but there was an increase in the thickness of this indicator by 51% (p=0.001) on day 28 in comparison with the values of day 21. The thickness of the muscle layer on day 2 decreased by 19.5% (statistically non-significant) in comparison with the indicators of day 7, but the thickness of the muscle layer by day 28 increased (p=0.01) by 49.8% in comparison with the values of this indicator on day 21 due to the rarefaction of the muscle portion of the wall, swelling of myocytes, changes in the nuclei in the form of fragmentation and lysis. The thickness of the internal elastic membrane decreased by day 21 (p=0.035) by 12.3% in comparison with the values of day 7. By day 42, there was a tendency to increase its thickness. A decrease in the wall thickness of the venous homograft without adventitia (p=0.014) was revealed at the end of day 42 by 23.4% in comparison with the value of this indicator on day 7, and a decrease in the thickness of the venous graft was also noted at the end of day 42.

Conclusion. In our opinion, the most "sensitive" marker of tissue necrosis in the morphohistological method of examining the graft wall is the study of the dynamics of its thickness at various conservation periods. Since the swelling of cells and fibers will lead to an increase in wall thickness, and then, to subsequent total necrosis. By the end of day 28 of preservation, a statistically significant increase in the artery wall in comparison with the indicators of day 21, areas of muscle tissue discharge were revealed. There was a tendency to increase the thickness of the artery wall by day 42. A statistically significant decrease in wall thickness was revealed in the venous homograft by the end of the study. Based on these data, it is rational to talk about a longer storage possibility for the purpose of using a venous cadaveric conduit. The preservation period in RPMI 1640 solution up to 21 days is the optimal period for the use of arterial homografts. Venous homografts can be used for up to 42 days.

Funding. The study had no sponsor support.

Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

For citation: Kalinin R.E., Suchkov I.A., Karpov V.V., Klimentova E.A., Shvalb A.P., Guzairov D.V., Egorov A.A. Features of the morphohistological picture of homografts in different periods of conservation. Clinical and Experimental Surgery. Petrovsky Journal. 2023; 11 (4): 75-82. DOI: https://doi.org/10.33029/2308-1198-2023-11-4-75-82 (in Russian) Received 31.08.2023. Accepted 13.11.2023.

I

Одним из аспектов достижений в области биологических и медицинских исследований является то, что ткани и клетки человека используются все чаще и по-новому. Особое место занимает сосудистая ткань (артериальные и венозные аллографты) в хирургии магистральных артерий и вен [1, 2].

Аутовена является эталоном, применяемым в хирургии артерий нижних конечностей, не нужен подбор, консервация для ее применения. Но она не может быть использована до 40% случаев, по данным С. Могеиа и соавт. [3]. По данным А.В. Покровского и соавт., в 30% случаев аутовена не может быть применена [4], а при повторных интервенциях не может использоваться в половине случаев [5]. 5-летняя проходимость составляет 40% в результате применения синтетических кондуитов на бедренно-дистально-подколенном сегменте в исследовании М. МЬегБ [б]. Работа Б. МаБте]ап и соавт. демонстрирует неплохие показатели в реконструкциях артерий при критической ишемии криоконсервированными гомографтами и отсутствием аутовены у 38 больных [7]. Данных в мировых источниках об использовании гомограф-тов в ангиохирургии артерий немало [6-8].

Ведение пациентов с нагноением зоны реконструкции остается нерешенной проблемой в сосудистой хирургии [9]. Реконструктивно-восстано-вительные оперативные вмешательства на сосудах зачастую выполняются повторно. Очень часто операции проводятся при наличии обширных некрозов и трофических язв. Не всегда аутовена доступна для реконструкции. Поэтому до сих пор особенно актуальным остается вопрос выбора материала для реконструкции. В медицинской литературе показана склонность ксенопротезов к аневризматиче-ской трансформации в послеоперационном периоде [10-12].

Ведение пациентов с осложнениями постоянного сосудистого доступа для гемодиализа остается также нерешенной проблемой в ангиохирургии. Не всегда в качестве альтернативы возможно использовать синтетический протез. При наличии гнойно-воспалительного процесса в зоне сосудистого протеза решений немного. Использование аллографтов в таких случаях может быть методом выбора [13].

Сегодня также возможно эффективно использовать аллографт от посмертного донора у пациентов с истинными аневризмами подколенных артерий [14].

Эффективное использования аллографтов от посмертного донора у пациентов с кровотечением после эндоваскулярного лечения критической ишемии конечности с трофическими изменениями в этапном хирургическом лечении, а также у больных с тромбированными ложными аневризмами анастомозов после ранее выполненных реконструктивных вмешательств показано в наших работах [15].

Сегодня необходимо четкое понимание возможностей применения влажносохраненных трупных гомографтов: показаний их использования, сроков хранения и «жизнеспособности». На некоторые из этих вопросов можно ответить, оценив гистологические изменения при консервации в различные сроки наблюдения.

Цель - оценить динамику гистологических показателей трупных гомографтов при консервации в растворе 1^РМ1 1640 в разные сроки наблюдения.

Материал и методы

Исследование было выполнено в соответствии со стандартами надлежащей клинической практики GCP (Good Clinical Practice) и принципами Хель-синской декларации на базе кафедры сердечнососудистой, рентгенэндоваскулярной хирургии и лучевой диагностики ФГБОУ ВО РязГМУ Минздрава России (отделение сосудистой хирургии ГБУ РО ОКБ). Протокол исследования одобрен локальным этическим комитетом № 4 от 9 ноября 2021 г. Исследование зарегистрировано на платформе ClinicalTrials.gov (идентификатор NCT05455138).

Выполнено морфологическое исследование трупных общей бедренной вены и поверхностной бедренной артерии (гомографты), изъятых при мультивисцеральном заборе от посмертного донора при соблюдении всех правил и норм трансплантологии [2]. Изучено 72 образца гомографтов от одного посмертного донора.

Кондиционированы в растворах для культивации клеточных структур RPMI (Roswell Park

Рис. 1. Стенка сосуда с исследуемыми показателями. Интимо-мускулярный комплекс -синий отрезок. Мышечная оболочка - зеленый отрезок. Внутренняя эластическая мембрана -желтый отрезок

Fig. 1. The vessel wall with the studied parameters. The intimo-muscular complex is a blue segment. The muscle membrane is a green segment. The inner elastic membrane is a yellow segment

4,09 мкм

С \У

250 мкм

Memorial Institute) 1640 с глутамином при температуре +4 °С. Получены 3 раствора с кондиционируемыми гомографтами. 1-й раствор - артерия и вена без добавления гентамицина и флуконозола в 500 мл раствора RPMI; 2-й раствор - артерия и вена с добавлением гентамицина (400 мкг/мл) и флуконазола (20 мкг/мл) в 500 мл раствора RPMI; 3-й раствор - артерия и вена с добавлением гентамицина (200 мкг/мл) и флуконазола (10 мкг/мл) в 500 мл раствора RPMI.

Проводилась вырезка артерий перпендикулярно их просвету (кольцо) шириной около 0,4 см, вен - продольно, длиной фрагментов до 1 см, которые затем укладывались в пластиковые кассеты и помещались в автоматический гистологический процессор Tissue-Tek VIP 6 для фиксации и проводки, происходящих в течение 12 ч. Затем выполнялась заливка в заливочные формы с пластиковыми кольцами чистым парафином в диспенсере Tissue-Tek ТЕК 5, после охлаждения изготавливались срезы толщиной до 5 мкм на микротоме ротационном полуавтоматическом Accu-Cut SRM. Срезы помещались на предметное стекло толщиной 3 мм, затем окрашивали готовыми красителями в мультистейнере автоматическом для микропрепаратов Tissue-Tek Prisma двумя методиками: гематоксилин-эозином и по Вейгерту-Ван-Гизону.

Участками разрежения мышечной оболочки мы называли зоны с плотностью расположения мио-цитов меньше 80 на 0,1 мм2.

Проводилось заключение окрашенных сте-клопрепаратов на аппарате для гистологических срезов под пленку Tissue-Tek Film. Препараты изучались при помощи сканирующего микроскопа NanoZoomer S60 фирмы Hamamatsu.

Гистологическое исследование гомографтов из каждого раствора проводилось на 7, 14, 21, 28, 35, 42-е сутки после забора гомографтов по 2 артериальных и венозных препарата соответственно. Получено 6 групп сравнения артериальных и венозных гомографтов. Изучено 36 артериальных и 36 венозных образцов трупных гомографтов от одного посмертного донора. Оценены динамика толщины интимо-мускулярного комплекса, толщины мышечной оболочки и толщина внутренней эластической мембраны в артериальном гомо-графте и толщина стенки без адвентиции в венозном графте. Использовано программное обеспечение NDP.view2 (U12388-01) компании Hamamatsu Photonics KK для измерения этих показателей.

Статистический анализ

Статистический анализ данных проводился с использованием пакета статистических программ STATISTICA 10.0. В связи с нормальным распределением данных (использовался критерий Шапиро-Уилка, р>0,05) для дальнейшего анализа применялись параметрические тесты. Для оценки статистической значимости различий внутри групп использовался дисперсионный анализ повторных измерений (ANOVA), попарные сравнения выполнялись с помощью критерия Нью-мена-Кейсла. Принятый уровень статистической значимости - р<0,05. Числовые данные представлены как среднее арифметическое и стандартное отклонение.

Результаты

Методика измерения толщины интимо-муску-лярного комплекса, толщины мышечной оболочки

Таблица 1. Средние значения и стандартные отклонения исследуемых показателей аллоартерии

Срок наблюдения, сут Толщина интимо-мускулярного комплекса, мкм Толщина мышечной оболочки, мкм Толщина внутренней эластической мембраны, мкм

7-е 562,2+121,9 485,2+126,1 4,2+0,6

14-е 477,9+25,9 409,2+25,9 4,3+0,5

21-е 444,9+82,3* (р=0,043) 390,8+65,6 3,74+0,35* (р=0,035)

28-е 672,9+38,0* (р=0,001) 585,3+64,1* (р=0,01) 4,25+0,7

35-е 556,3+165,7 474,2+154,1 4,0+0,8

42-е 604+113,6 512,7+77,8 4,8+0,8

Примечание. * - статистически значимое отличие показателей (толщина интимо-мускулярнорго комплекса, толщина внутренней эластической мембраны) на 21-е сутки относительно их значений на 7-е сутки (уменьшение); по показателям толщина мышечной ее части толщина интимо-мускулярного комплекса между 21 и 28-ми сутками (увеличение).

и толщина внутренней эластической мембраны в артериальном гомографте заключалась в следующем: измеряли минимальные и максимальные размеры показателей каждого микропрепарата артериального гомографта отдельно в исследуемые сроки. В результате получено 6 минимальных и 6 максимальных значений для каждого показателя на 7, 14, 21, 28, 35, 42-е сутки после забора материала. Затем получены средние их значения. Выполнена статистическая обработка.

Стенка сосуда с исследуемыми показателями представлена на рис. 1.

Проведена гистологическая оценка исследуемых образцов артериальных гомографтов и полученные результаты представлены в табл. 1.

Согласно полученным результатам, имеет место уменьшение толщины интимо-мускулярного комплекса (р=0,043) на 21% в конце 21-х суток относительно значений 7-х суток, но отмечено увеличение толщины этого показателя на 51% (р=0,001) в 28-е сутки относительно значений 21-х суток.

Толщина мышечного слоя на 21-е сутки уменьшилась на 19,5% (статистически недостоверно)

относительно показателей 7-х суток, но выявлено увеличение толщины мышечного слоя к 28-м суткам (р=0,01) на 49,8% относительно значений этого показателя на 21-е сутки.

Толщина внутренней эластической мембраны уменьшилась к 21-м суткам (р=0,035) на 12,3% относительно значений 7-х суток. К 42-м суткам отмечается тенденция к увеличению ее толщины.

К концу 7-х суток участки разрежения мышечной оболочки не наблюдаются, ядра миоцитов сохранены (рис. 2).

Участки разряжения мышечной ткани выявлены к концу 28-х суток (рис. 3).

Методика измерения толщины стенки вены без адвентиции в венозном гомографте заключалась в следующем: измерялись минимальные и максимальные размеры показателя каждого микропрепарата венозного гомографта отдельно в исследуемые сроки. В результате получено 6 минимальных и 6 максимальных значений показателя на 7, 14, 21, 28, 35, 42-е сутки после забора материала. Затем получены средние его значения. Выполнена статистическая обработка.

:.* - -- ^ -г- oV

^ Рис. 2. Стенка артерии,

окраска по Вейгерту-Ван-Гизону, цифровое увеличение. Мышечная порция без разрежения, ядра миоцитов сохранены

Fig. 2. Artery wall, Weigert-Van Gieson staining, digital magnification. A muscle portion without permission, the nuclei of myocytes are preserved

Рис. 3. Стенка артерии, окраска гематоксилином и эозином, цифровое увеличение. Мышечная порция с участками разрежения, набухание миоцитов, изменения ядер в виде фрагментации и лизиса

Fig. 3. Artery wall, hematoxylin-eosin staining, digital magnification. Muscle portion with areas of rarefaction, swelling of myocytes, changes in nuclei in the form of fragmentation and lysis

Стенка вены с исследуемым показателями представлена на рис. 4.

Проведена гистологическая оценка исследуемых образцов венозных гомографтов. Средние значения и стандартные отклонения исследуемого показателя алловены представлены в табл. 2.

Выявлено уменьшение толщины стенки венозного гомографта без адвентиции (р=0,014) в конце 42-х суток на 23,4% к значению этого показателя на 7-е сутки, также отмечено снижение толщины венозного графта в конце 42-х суток (р=0,05) на 28,6% относительно значений 35-х суток.

На протяжении всех контрольных точек полностью сохранена структура нативной стенки трупных гомографтов. Отсутствуют очаги некроза стенки во всех микропрепаратах.

Обсуждение

Некроз - омертвение, гибель клеток и тканей в живом организме; при этом жизнедеятельность их полностью прекращается. Консервированные гомографты в растворе RPMI 1640 должны сохранять «жизнеспособность» в течение определенного срока. Клетки стенки сосуда продолжают свой метаболизм, а это означает, что они выделяют продукты метаболизма, которые в норме «уносятся» кровотоком. In vitro кровоток отсутствует, следовательно продукты распада остаются в местах выделения, что приводит к «отравлению» клетки. В результате запускается механизм апоптоза. Своеобразной формой некроза является апоптоз. В основе апоптоза лежит разделение клетки на части с образованием апо-птозных тел (фрагменты клетки, окруженные мембраной и способные к жизнедеятельности) [16].

Рис. 4. Фото стенки вены. Минимальный диаметр -зеленый отрезок. Максимальный диаметр -синий отрезок

Fig. 4. Photo of the vein wall. The minimum diameter is a green segment. The maximum diameter is a blue segment

Таблица 2. Средние значения и стандартные отклонения исследуемого показателя алловены

Срок наблюдения, сут Среднее значение и стандартные отклонения толщины стенки венозного гомографта

7-е 542,7+109,9*

14-е 499,7+143,7

21-е 502,9+145,9

28-е 504,6+115

35-е 581,8+64,6*

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

42-е 415,5+53,7*

Примечание. * - статистически значимое отличие показателей.

К микроскопическим признакам апоптоза относятся характерные изменения клетки и межклеточного вещества - кариопикноз (конденсация хроматина), кариорексис (распад ядра), кариоли-зис (растворение ядра), набухание коллагеновых и эластических волокон, их распад и лизис [16]. Большинство из этих процессов возможно верифицировать простыми морфогистологическими методами исследования.

В нашем исследовании на протяжении всех контрольных точек полностью сохранена структура нативной стенки трупных гомографтов. Отсутствуют очаги некроза стенки во всех микропрепаратах.

По нашему мнению, «чувствительным» маркером некроза ткани при морфогистологическом методе исследования стенки графта является изучение динамики ее толщины в различные сроки консервации, так как отек клеток и волокон приведет сначала к увеличению толщины стенки, а затем к тотальному некрозу. В нашем исследовании показано уменьшение толщины стенки без адвентиции, толщины мышечной ее части и внутренней эластической мембраны в артериальном гомографте к концу 21-х суток в сравнении с этими показателями к исходу 7-х суток, что говорит об отсутствии процесса набухания и отека структур стенки. Но к концу 28-х суток выявлено статистически достоверное увеличение стенки артерии относительно показателей 21-х суток. Также выявлены участки разрежения мышечной

Литература

1. Guide to the quality and safety of tissues and cells for human application. URL: https://freepub.edqm.eu/publications/ AUTOPUB_17/detail

2. О трансплантации органов и (или) тканей человека (с изменениями и дополнениями): Закон РФ от 22 декабря 1992 г. № 4180-I [Электронный ресурс]. URL: http://base.ga-rant.ru/136366/

3. Moreira C., Leung A., Farber A. et al. Alternative conduit for infrageniculate bypass in patients with critical limb ischemia // J. Vasc. Surg. 2016. Vol. 64. P. 131-139.e1.

4. Покровский А.В., Яхонтов Д.И. Значение венозных манжет при бедренно-тибиальном шунтировании // Вестник национального медико-хирургического Центра имени Н.И. Пи-рогова. 2013. Т. 8, № 4. С. 18-24.

5. Neville R.F., Tempesta B., Sidway A.N. Tibial bypass for limb salvage using polytetrafluoroethylene and a distal vein

стенки, набухание миоцитов, изменения ядер в виде фрагментации и лизиса к концу 28-х суток консервации артериального гомографта. Именно поэтому срок хранения до 21-х суток целесообразно считать оптимальным для использования артериального графта в ангиохирургии.

Заключение

Значимым маркером некроза ткани при мор-фогистологическом методе исследования стенки графта является изучение динамики ее толщины в разные сроки консервации, так как отек клеток и волокон приведет к увеличению толщины стенки, а затем к последующему тотальному некрозу. К концу 28-х суток консервации выявлены статистически достоверное увеличение стенки артерии относительно показателей 21-х суток, участки разряжения мышечной ткани. Отмечена тенденция увеличения толщины стенки артерии к 42-м суткам. В венозном гомографте выявлено статистически достоверное снижение толщины стенки к концу исследования, что также можно трактовать как отсутствие процесса набухания и отека структур его стенки. Исходя из этих данных можно говорить о более длительной возможности хранения с целью использования венозного трупного кондуита. Оптимальным сроком применения артериальных гомо-графтов можно считать срок консервации в растворе RPMI 1640 до 21-х суток. Венозные гомографты возможно использовать в срок до 42-х суток.

patch // J. Vasc. Surg. 2001. Vol. 33, N 2. P. 266-271. DOI: https://doi.org/10.1067/mva.2001.113131

6. Albers M., Battistella V.M., Romiti M., Rodrigues A.A.E., Pereira C.A.B. Meta-analysis of polytetrafluoroethylene bypass grafts to infrapopliteal arteries // J. Vasc. Surg. 2003. Vol. 37. P. 1263-1269.

7. Masmejan S., Deslarzes-Dubuis C., Petitprez S., Long-champ A., Haller C., Saucy F. et al. Ten-year experience of using cryo-preserved arterial allografts for distal bypass in critical limb ischaemia // Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 2019. Vol. 57, N 6. P. 823-831. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ejvs. 2018.11.020

8. Antonopoulos C.N., Papakonstantinou N.A., Hardy D., Lyden S.P. Editor's choice - cryopreserved allografts for arterial reconstruction after aorto-iliac infection: a systematic review and meta-analysis // Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 2019.

Vol. 58, N 1. P. 120-128. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ejvs. 2019.03.003

9. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Карпов В.В., Пшенников А.С., Егоров А.А. Первый опыт применения аллографтов в хирургии магистральных артерий нижних конечностей // Журнал имени Н.В. Склифосовского «Неотложная медицинская помощь». 2020. Т. 9, № 3. С. 442-448. DOI: https://doi.org/102 3934/2223-9022-2020-9-3-442-448

10. Покровский А.В., Дан В.Н., Чупин А.В. и др. Применение биологических трансплантатов в бедренно-подколенно-берцовой позиции // Ангиология и сосудистая хирургия. 1996. Т. 2, № 3. С. 91-100.

11. Барбараш Л.С., Иванов С.В., Журавлева И.Ю., и др. 12-летний опыт использования биопротезов для замещения инфраингвинальных артерий // Ангиология и сосудистая хирургия. 2006. Т. 12, № 3. С. 91-97.

12. Тищенко И.С., Золкин В.Н., Максимов Н.В. и др. Двухлетние результаты инфраингвинальных реконструкций с использованием аутовенозных шунтов и ксенопротезов //

Ангиология и сосудистая хирургия. 2016. Т. 22, № 4. С. 130135.

13. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Егорова А.В., Карпов В.В., Климентова Е.А., Карпов Д.В. Формирование постоянного сосудистого доступа для программного гемодиализа донорской алловеной // Кардиология и сердечно-сосудистая хирургия. 2021. Т. 14, № 1. С. 98-103.

14. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Карпов В.В., Егоров А.А. Возможности применения аллографтов в хирургическом лечении аневризм подколенных артерий // Российский медико-биологический вестник имени академика И.П. Павлова. 2022. Т. 30, № 1. С. 115-122. DOI: https://doi.org/10.17816/PAVL0VJ76343

15. Калинин Р.Е., Сучков И.А., Карпов В.В., Егоров А.А., Пшенников А.С., Карпов Д.В. и др. Возможности трансплантации сосудов в неотложной хирургии магистральных артерий // Новости хирургии. 2021. Т. 29, № 6. С. 747-753. DOI: https:// doi.org/10.18484/2305-0047.2021.6.747

16. Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия : учебник. 5-е изд., стер. Москва : Литтерра, 2010. 848 с.

References

1. Guide to the quality and safety of tissues and cells for human application. URL: https://freepub.edqm.eu/publications/ AUTOPUB_17/detail

2. About transplantation of organs and (or) human tissues (with amendments and additions): The Law of the Russian Federation of December 22, 1992 N 4180-I [Electronic resource]. URL: http://base.garant.ru/136366/ (in Russian)

3. Moreira C., Leung A., Farber A., et al. Alternative conduit for infrageniculate bypass in patients with critical limb ischemia. J Vasc Surg. 2016; 64: 131-39.e1.

4. Pokrovsky A.V., Yakhontov D.I. The significance of venous cuffs in femoral-tibial bypass surgery. Vestnik Natsional'nogo me-diko-khirurgicheskogo Tsentra imeni N.I. Pirogova [Bulletin of the National Medical-Surgical Center named after N.I. Pirogov]. 2013; 8 (4): 18-24. (in Russian)

5. Neville R.F., Tempesta B., Sidway A.N. Tibial bypass for limb salvage using polytetrafluoroethylene and a distal vein patch. J Vasc Surg. 2001; 33 (2): 266-71. DOI: https://doi. org/10.1067/mva.2001.113131

6. Albers M., Battistella V.M., Romiti M., Rodrigues A.A.E., Pereira C.A.B. Meta-analysis of polytetrafluoroethylene bypass grafts to infrapopliteal arteries. J Vasc Surg. 2003; 37: 1263-9.

7. Masmejan S., Deslarzes-Dubuis C., Petitprez S., Long-champ A., Haller C., Saucy F., et al. Ten-year experience of using cryo-preserved arterial allografts for distal bypass in critical limb ischaemia. Eur J Vasc Endovasc Surg. 2019; 57 (6): 823-31. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ejvs.2018.11.020

8. Antonopoulos C.N., Papakonstantinou N.A., Hardy D., Lyden S.P. Editor's choice - cryopreserved allografts for arterial reconstruction after aorto-iliac infection: a systematic review and meta-analysis. Eur J Vasc Endovasc Surg. 2019; 58 (1): 120-8. DOI: https://doi.org/10.1016/j.ejvs.2019.03.003

9. Kalinin R.E., Suchkov I.A., Karpov V.V., Pshennikov A.S., Egorov A.A. The First Experience of Using allografts in surgery of main arteries of lower limbs. Zhurnal imeni N.V. Sklifosovskogo

«Neotlozhnaya meditsinskaya pomoshch'» [Journal named after N.V. Sklifosovsky «Emergency Medical Care»]. 2020; 9 (3): 442-8. DOI: https://doi.org/10.23934/2223-9022-2020-9-3-442-448 (in Russian)

10. Pokrovsky A.V., Dan V.N., Chupin A.V., et al. The use of biological grafts in the femoral-popliteal-tibial position. Angiologiya

1 sosudistaya khirurgiya [Angiology and Vascular Surgery]. 1996;

2 (3): 91-100. (in Russian)

11. Barbarash L.S., Ivanov S.V., Zhuravleva I.Yu., et al. 12-year experience in the use of bioprostheses for the replacement of infrainguinal arteries. Angiologiya i sosudistaya khirurgiya [Angiology and Vascular Surgery]. 2006; 12 (3): 91-7. (in Russian)

12. Tishchenko I.S., Zolkin V.N., Maksimov N.V., et al. Two-year results of infrainguinal reconstructions using autovenous shunts and xenoprostheses. Angiologiya i sosudistaya khirurgiya [Angiology and Vascular Surgery]. 2016; 22 (4): 130-5. (in Russian)

13. Kalinin R.E., Suchkov I.A., Egorov A.A., Karpov V.V., Kli-mentova E.A., Karpov D.V. Permanent vascular access for hemodialysis using allogeneic vein. Kardiologiya i serdechno-sosudistaya khirurgiya [Cardiology and Cardiovascular Surgery]. 2021; 14 (1): 98-103. DOI: https://doi.org/10.17116/kardio20211401198 (in Russian)

14. Kalinin R.E., Suchkov I.A., Karpov V.V., Egorov A.A. Potentials of using allografts in surgical treatment of popliteal artery aneurysms. Rossiyskiy mediko-biologicheskiy vestnik imeni akademika I.P. Pavlova [Russian Medical and Biological Bulletin named after academician I.P. Pavlov]. 2022; 30 (1): 115-22. DOI: https://doi.org/10.17816/PAVL0VJ76343 (in Russian)

15. Kalinin R.E., Suchkov I.A., Karpov V.V., Egorov A.A., Pshennikov A.S., Karpov D.V., et al. Possibilities of vascular transplantation in urgent surgery of main arteries. Novosti kh-irurgii [News of Surgery]. 2021; 29 (6): 747-53. DOI: https://doi. org/10.18484/2305-0047.2021.6.747 (in Russian)

16. Strukov A.I., Serov V.V. Pathological anatomy: Textbook. 5th ed., ster. Moscow: Litterra, 2010: 848 p. (in Russian)

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.