CC BY
19
УДК 618.2:618.414.8
М.А. КАГАНОВА, Н.В. СПИРИДОНОВА, В.О. КАТЮШИНА
Самарский государственный медицинский университет, г. Самара
Особенности микробиоты плаценты при преждевременном излитии околоплодных вод и доношенной беременности
Контактная информация:
Каганова Мария Александровна — кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии ИПО Адрес: 443100, г. Самара, ул. Полевая, д. 80, тел.: +7-846-207-19-68, e-mail: mkaganova@yandex.ru
Цель исследования — изучить микробный пейзаж плаценты при доношенной беременности и преждевременном разрыве плодных оболочек (ПРПО) в сравнении с целым плодным пузырем.
Материал и методы. На базе ГБУЗ ГКБ № 1 им. Н.И. Пирогова у 43 беременных на сроке 37-41 неделя, из которых 24 с ПРПО — основная группа и 19 пациенток группы контроля с неповрежденными плодными оболочками, во время элективного кесарева сечения проводился забор ткани плаценты на ПЦР-РВ следующих микроорганизмов: Lactobacillus spp., Enterobacteriaceae, Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Gardnerella vaginalis / Prevotella bivia / Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Sneathia spp. / Leptotrihia spp. /Fusobacterium spp., Megasphaera spp. / Veillonella spp. / Dialister spp., Lachnobacterium spp. /Clostridium spp., Mobiluncus spp. /Corynebacterium spp., Peptostreptococcus spp., Atopobium vaginae, Mycoplasmahominis, Ureaplasma (urealyticum + parvum), Candida spp., Mycoplasma genitalium.
Результаты. При физиологически протекающей доношенной беременности на плаценте выявлено присутствие общей бактериальной массы 103,1-104,5 Гэ/образце. Стерильные плаценты встречались как в контрольной (21,1%), так и в основной группах (41,6%). В образцах плаценты нами выявлено преобладание лабораторной общей бактериальной массы (ОБМ) над рассчитанной, то есть в анализах присутствовала ДНК микроорганизмов, неидентифицируемая стандартной панелью — «неидентифицируемые» микроорганизмы (в основной группе — 25,0% и в контрольной — 52,6%). При целом плодном пузыре на тканях плаценты определяются представители Enterobacteriaceae spp. (102,6 Гэ/образце). При ПРПО микрофлора плаценты постепенно замещается влагалищной, появляются облигатная и факультативная микрофлора вагинального биотопа. Присутствие Lactobacillus spp. в тканях плаценты характерно только для пациенток с ПРПО.
Выводы. При физиологически протекающей доношенной беременности возможно выявление методом ПЦР-РВ небольшого количества бактериальной массы, представленной из входящих в панель представителями Enterobacteriaceae spp., при ПРПО на образцах плаценты выявляется также Lactobacillus spp и анаэробная вагинальная флора.
Ключевые слова: преждевременное излитие околоплодных вод, фемофлор, плацента, полимеразная цепная реакция, микробиота.
(Для цитирования: Каганова М.А., Спиридонова Н.В, Катюшина В.О. Особенности микробиоты плаценты при преждевременном излитии околоплодных вод и доношенной беременности. Практическая медицина. 2020. Т. 18, № 6, С. 13-19)
DOI: 10.32000/2072-1757-2020-6-13-19
M.A. KAGANOVA, N.V. SPIRIDONOVA, V.O. KATYUSHINA
Samara State Medical University, Samara
Features of the placental microbiota in premature rupture of membrane at full-term pregnancy
Contact details:
Kaganova M.A. — PhD (medicine), Associate Professor of the Department of Obstetrics and Gynecology Address: 80 Polevaya St., Russian Federation, Samara, 443100, tel.: +7-846-207-19-68, e-mail: mkaganova@yandex.ru
The purpose — to study the microbial placental landscape at premature rupture of membrane (PROMt) in comparison with intact membranes at full-term pregnancy.
Material and methods. At the City Clinical Hospital No. 1 named after N.I. Pirogov, 43 pregnant women at 37-41 weeks of gestation (24 persons with PROMt in the main group and 19 patients in the control group with intact membranes) placental tissue were taken during elective cesarean section for RT-PCR of the following microorganisms: Lactobacillus spp, Enterobacteriaceae, Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Gardnerellavaginalis / Prevotella bivia / Porphyromonas spp., Eubacterium spp.,
Sneathia spp. / Leptotrihia spp. / Fusobacteriumspp, Megasphaera spp. / Veillonella spp. / Dialister spp., Lachnobacterium spp. / Clostridium spp., Mobiluncus spp. / Corynebacterium spp., Peptostreptococcus spp., Atopobiumvaginae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma (urealyticum + parvum), Candida spp., Mycoplasma genitalium.
Results. The presence of a total bacterial mass of 103.1-104.5 Ge/sample was revealed at the placenta of full-term pregnancy. Sterile placentas were found both in the control (21,1%) and in the main groups (41,6%). In the placenta samples, we observed the predominance of the laboratory total bacterial mass (TBM) over the calculated one, i.e. they contained DNA of microorganisms that was not identified by the standard panel — the «unidentifiable» microorganisms (in the main group — 25,0% and in the control group — 52,6%). Enterobacteriaceae spp. (102,6 Ge/sample) were detected on the placental tissues of the patients with intact membrane. The placental microflora is gradually replaced by the vaginal one, obligate and facultative microflora of the vaginal biotope appeared. The presence of Lactobacillus spp. in placental tissues is characteristic only for patients with PROMt.
Conclusion. A small amount of bacterial mass can be detected by RT-PCR at the physiologically full-term pregnancy, represented by Enterobacteriaceae spp. Lactobacillus spp. and anaerobic vaginal flora are also detected on placental samples at full-term pregnancy with PROMt.
Key words: premature rupture of membrane, femoflor, placenta, polymerase chain reaction, microbiota.
(For citation: Kaganova M.A., Spiridonova N.V., Katyushina V.O. Features of the placental microbiota in premature rupture of membrane at full-term pregnancy. Practical medicine. 2020. Vol. 18, № 6, P. 13-19)
В современном акушерстве вопрос существования плацентарной микробиоты и ее регулирующего влияния на беременность по-прежнему является спорным. Если в прошлом столетии считалось, что плацента, плодные оболочки и околоплодные воды в норме должны быть стерильными [1, 2], то уже в начале 2000-х гг. стали появляться работы, свидетельствующие в пользу существования уникального плацентарного микробиома [3, 4]. Было обнаружено, что плацентарные микробы могут быть имплантированы в плаценту через урогенитально-плацентарный, желудочно-кишечно-плацентарный и орально-плацентарный пути [5-8]. Анализ полости матки при гистерэктомиях также продемонстрировал ее нестерильность [9]. Микробиота плаценты и околоплодных вод может играть как положительную роль, подготавливая иммунную систему плода к внеутробному существованию, так и отрицательную, так как многие микроорганизмы ассоциированы с абортами, хориоамнионитом, преждевременным разрывом плодных оболочек, преждевременными родами и мертворождением [10-13]. Основными факторами, влияющими на микробиологию плаценты, являются: ожирение, гестационный сахарный диабет, пробиотики и антибиотики во время беременности [12, 14, 15]. Научному миру еще предстоит разобраться в особенностях микробиоты фето-плацентарного комплекса и ее влиянии на развитие осложнений гестации, материнскую и перинатальную заболеваемость.
Цель исследования — изучить микробный пейзаж плаценты при доношенной беременности и преждевременном разрыве плодных оболочек (ПРПО) в сравнении с целым плодным пузырем.
Материал и методы
Исследование выполнено на базе родильных отделений ГБУЗ ГКБ № 1 им. Н.И. Пирогова г. Самара, в которое были включены 43 беременных на сроке беременности 37-41 неделя. В основную группу вошли 24 пациентки с ПРПО и 19 пациенток составили группу контроля с интактными плодными оболочками. Все пациентки были родоразрешены путем операции кесарева сечения. В группе контроля операция выполнена в плановом порядке (показаниями являлись: неправильное положение и пред-лежание плода, наличие рубца на матке после предыдущей операции кесарева сечения, бесплодие в
сочетании с отягощенным акушерским анамнезом, возраст), в группе с ПРПО показания были те же, но операции выполнены в срочном порядке не позднее 6 ч с момента излития околоплодных вод, при условии отсутствия родовой деятельности и неподготовленных родовых путей.
Критерии исключения
1. Критериями исключениями из исследования являлись: беременные, относящиеся к группе высокого риска, согласно порядку оказания помощи по профилю: «Акушерство и гинекология» № 572 от 01.11.2012, по соматической патологии (сахарный диабет, гестационный диабет), особенностям плацентации.
2. Наличие острых и обострения хронических воспалительных заболеваний, в том числе наличие кольпита.
3. Антибактериальная терапия в течение беременности.
Всем пациенткам было выполнено исследование образца плаценты методом ПЦР с детекцией результатов в режиме реального времени (набор Фемофлор-16) и применения детектирующего ам-плификатора ДТ-96 производства ООО «НПО ДНК-Технология» (РУ ФСР 2009/04663, патент № 2362808 от 13.02.08). Забор образца плаценты проводился в стерильных условиях во время операции кесарева сечения, плацента извлекалась, и в пределах операционного поля проводился забор образца. По середине расстояния от места прикрепления пуповины до наиболее отдаленной точки края плаценты с помощью конхотома с диаметром рабочей поверхности 9,4 мм отсекался стандартный образец ткани плаценты с захватом участка из глубины плаценты (с предварительным отсечением амниона, хорионической пластинки и децидуальной ткани с материнской стороны), который затем помещался в пробирку 1,5 мл «эппендорф» с транспортной средой (физиологический раствор или «Проба-Рапид» производства ООО «НПО ДНК-Технология»). Методика Фемофлор-16, которая первоначально разработана для оценки микробиоты влагалища, нами была использована с целью оценки микробного состава плаценты, так как с помощью данной технологии возможен анализ биоты различных биотопов [16-19]. Методика Фемофлор-16 включает в себя определение следующих микро-
организмов: Lactobacillus spp., Enterobacteriaceae, Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Gardnerella vaginalis / Prevotella bivia / Porphyromonas spp., Eubacterium spp., Sneathia spp. / Leptotrihia spp. / Fusobacterium spp., Megasphaera spp. / Veillonella spp. / Dialister spp., Lachnobacterium spp. / Clostridium spp., Mobiluncus spp. / Corynebacterium spp., Peptostreptococcus spp., Atopobiumvaginae, Mycoplasma hominis, Ureaplasma (urealyticum + parvum), Candida spp., Mycoplasma genitalium.
При анализе оценивалось качество взятия материала (КВМ), которое во всех случаях было адекватным (более 104 ГЭ/образец). Выполнялось определение общей бактериальной массы (ОБМ), так называемой лабораторной ОБМ (ОБМл), содержания Lactobacillus spp. и остальных вышеперечисленных видов, входящих в данную панель. Количественная оценка выявленных микроорганизмов приводилась как в абсолютных числах — количество ДНК искомого микроорганизма в образце, выраженное в ГЭ/мл и представленное в виде десятичного логарифма — lg, так и в относительных показателях — в процентах, полученных в результате отношения абсолютного количества выявленного микроорганизма к ОБМ лабораторной. Расчетная ОБМ (ОБМр) получалась из суммы абсолютного количества выявленных микроорганизмов в образце.
Со всех плацент интраоперационно также производился забор мазка на бактериологическое исследование в пробирки, для культивирования на стандартных средах для аэробов и анаэробов.
Статистический анализ
Обработку результатов исследования проводили с помощью программы Statistica 10.0, SPSS 13. Абсолютное количество микроорганизмов представлено в виде среднего десятичных логарифмов, сравнение абсолютного количества в группах выполнялось с помощью критерия Манна — Уитни. Частота выявления микроорганизмов дана в процентах, распределение микроорганизмов относительно лабораторной ОБМ в относительных процентах. Количественные показатели с нормальным распределением представлены средним арифметическим (М) со стандартным отклонением (SD), при отклонении распределения от нормального данные представлены в виде медианы с указанием 25-го и 75-го перцентилей (Me (Q1; Q3)). Сравнение количественных признаков при нормальном распределении проводилось с помощью критерия Стью-дента. Анализ качественных признаков проводился с помощью таблиц сопряженности, с применением критерия хи-квадрат либо двустороннего критерия Фишера. Статистически значимыми считали различия при p < 0,05.
Результаты
Исследуемые группы были сопоставимы между собой по возрасту (32,2 (5,4) лет и 31,0 (5,3) лет, Т = 0,73; р = 0,465), паритету родов (число первородящих в основной группе — 12 беременных (50,0%), в контрольной — 7 беременных (36,8%), р = 0,291) и беременностей (2,29 (1,21) и 2,47 (1,71); Т = -0,443; р = 0,792). Средний срок гестации в основной группе был ниже 38,2 (0,92) недель, чем в контрольной группе — 39,3 (0,65) недель (Т = -4,74; р = 0,000). Результаты анализа ПЦр-РВ образцов плаценты представлены в табл. 1.
Все образцы имели хорошее качество взятия материала (КВМ): основная группа 10558 Гэ/образце
(10485; 105'45) и контрольная — 10558 Гэ/образце (104'85; 105'45).
ОБМ лабораторная (ОБМл) в обеих группах была выше, чем ОБМ расчетная. Частота выявления ОБМл в основной группе составила 14 беременных (58%), а в контрольной группе — 15 случаев (79%) (р = 0,152), частота положительной ОБМр была ниже в обеих группах: 8 случаев (33%) и 5 случаев (26%) соответственно (р = 0,437). Частота стерильных плацент (ОБМл и ОБМр не определяется) в основной группе выявлена у 10 пациенток (41,67%), в контрольной группе — у 4 (21,1%; р = 0,134). Наибольшую частоту составляли так называемые «неидентифицируемые» виды: 6 случаев (25,0%) в основной группе и 10 (52,6%) в контрольной группе (р = 0,061). Под «неидентифицируемыми» видами мы понимали ситуации, когда лабораторно оБм определялась (ОБМл) — то есть наличие дНк некой микробной массы присутствовало, а все перечисленные в панели микроорганизмы не идентифицировались (рис. 1).
В основной группе ОБМл и ОБМр были сопоставимы с таковыми показателями в контрольной группе. При целом плодном пузыре из идентифицируемых микроорганизмов были выявлены представители Enterobacteriaceae spp. в 5 случаях (26%) в низком титре — 10258 Гэ/образец (минимум — 1021; максимум — 1032), другие виды микроорганизмов не определялись. В основной группе разнообразие видов микроорганизмов было значимо больше: на первом месте по частоте выявления также наблюдались Enterobacteriaceae spp. — 4 случая (17%), однако их относительное и абсолютное содержание было ниже (2,29 (0,15)% и 10235 ГЭ/образце), чем количество Lactobacillus spp. (22,38 (0,42)% и 10334 ГЭ/образце). В единичных случаях в основной группе были выявлены Eubacterium spp. (4%), Atopobium vaginae (4%), Mobiluncus spp. + Corynebacterium spp (4%).
Со всех 43 плацент брался мазок на бактериологическое исследование, однако роста микроорганизмов в посевах не было (независимо от полученной ОБМ при ПЦР-РВ анализе).
Обсуждение
Появление современных методов исследования, таких как амплификация генов и секвенирование ДНК, позволило совершить прорыв в исследовании метагеномики, которая может идентифицировать геном хозяина с обитающими микроорганизмами в определенной эко-нише. С внедрением новых методов вопрос о существовании микробиоты плаценты и понятие о том, что есть его норма и патология при беременности, заиграли новыми гранями.
За последние 5 лет интерес к этой теме возрос в несколько раз. Более современные исследования с применением культуральных и метагеномных методик демонстрируют наличие микроорганизмов в полости матки и плаценте при физиологически протекающей беременности [5, 8, 13, 20].
В ряде других исследований указывается, что существование плацентарной микробиоты весьма сомнительно, так как бактериальная колонизация имеет низкую биомассу и, следовательно, может являться просто результатом загрязнения [21-23].
Большинство микроорганизмов, населяющих человеческий организм, не растут in vitro, и поэтому исследование микробиома стало доступным только при использовании высокотехнологичных методов: секвенировании генома, ПЦР-диагностика. Проект
Таблица 1. Относительное и абсолютное количество микроорганизмов плаценты при доношенной беременности, определенное методом ПЦР-РВ
Table 1. Relative and absolute amount of microorganisms under full-term pregnancy detected with the RT-PCR method
Параметры и микроорганизмы Основная группа (n = 24) Группа контроля (n = 19) р1 р2
M (SD), % Абс. (lg), Me (Q1-Q3) M(SD), % Абс. (lg, Me (Q1-Q3)
КВМ - 5,58 (4,85; 5,45) - 6,00 (4,9; 6,1) 0,202
ОБМ лабораторная 100 3,99 (0; 3,40) 100 4,01 (3,1; 4,5) 0,309
ОБМ расчетная 25,70 (0,11) 3,40 (0; 3) 3,71 (0,19) 2,58 (0; 3,1) 0,361 0,841
Lactobacillus spp. 22,38 (0,42) 3,34 (0; 4,7) 0 - 0,215 0,215
Enterobacteriaceae spp. 2,29 (0,15) 2,35 (0; 3,2) 3,71 (0,19) 2,58 (0; 3,1) 0,524 0,418
Streptococcus spp. 0 - 0 -
Staphylococcus spp. 0 - 0 -
Gardnerella vaginalis + Prevotella bivia + Porphyromonas spp. 0 - 0 -
Eubacterium spp. 0,36 (0,06) 1,55 0 - 0,399 0,399
Sneathia spp. + Leptotrichia spp. + Fusobacterium spp. 0 - 0 -
Megasphaera spp. + Veillonella spp. + Dialister spp. 0 - 0 -
Lachnobacterium spp. + Clostridium spp. 0 - 0 -
Mobiluncus spp. + Corynebacterium spp. 0,83 (0,09) 1,91 0 - 0,215 0,215
Peptostreptococcusspp. 0 - 0 -
Atopobium vaginae 0,05 (0,02) 0,72 0 - 1,000 0,399
Candida spp. 0 - 0 -
Mycoplasma hominis 0 - 0 -
Ureaplasma (urealyticum + parvum) 0 - 0 -
Mycoplasma genitalium 0 - 0 -
Неизвестные виды 74,07 (0,44) 3,87 (0; 3,3) 96,33 (0,19) 3,99 (0; 4,1) 0,361 0,091
Стерильные 10 (41,67%) - 4 (21%) - 0,134* -
Примечание: р1 — критерий Манна — Уитни для относительного количества; р2 — критерий Манна — Уитни для абсолютного количества, * — р рассчитано с помощью точного критерия Фишера.
Note: р1 — Mann — Whitney criterion for the relative amount; р2 — Mann — Whitney criterion for the absolute amount, * — р calculated with the Fischer's exact test.
«Микробиом человека» [14] был начат в 2008 г. Национальным институтом здоровья (NICE) с целью характеристики колонизации всего бактериального сообщества «Тело человека». Это позволило бы определить, существует ли связь между микробио-мными изменениями и появлением специфических заболеваний.
Если в более ранних публикациях речь шла о Lactobacillus и Bifidobacterium (обитателях нормальной кишечной микрофлоры) в биоптатах
плаценты [24], то сейчас при физиологически протекающей беременности во многих исследованиях доказано пребывание в тканях плаценты ДНК Enterobacteriaceae spp. [11], что совпадает с полученными нами данными. В другом исследовании кроме Enterobacteriaceae spp. обнаружена и Thermus как доминирующие виды в децидуальной ткани [25]. По результатам A.L. Prince [1l], в плаценте выявляются Proteobacteria, Enterobacteriaceae (Enterobacter, Escherichia, Shigella), Lactobacillus и
Рисунок 1. Частота выявления микроорганизмов в плаценте в зависимости от целостности плодного пузыря при доношенной беременности
Figure 1. Frequency of detecting microorganisms in placenta depending on the membranes integrity in full-term pregnancy
Propionbacteriaceae. В другом исследовании в норме в плаценте были выявлены Staphylococcus spp. и Streptococcus spp.[26].
Наличие Lactobacillus и Propionibacterium в плаценте, а также в кишечнике плода позволяет новорожденному проявлять толерантность к бактериям через феномен прайминга, способствует врожденной экспрессии генов иммунитета у плода и созданию здорового микробиома у новорожденного [11, 27]. Присутствие микробной колонизации плаценты у большинства женщин без явных неблагоприятных перинатальных исходов подтверждает, что плацентарный микробиом может быть полезным [28, 29]. В рамках нашего исследования в контрольной группе у 79% была выявлена общая бактериальная масса, а идентифицированы микробы с помощью панели Фемофлор были только у 26%, ими являлись Enterobacteriaceae spр. Столь высокая частота выявления микробной ДНк не повлияла на материнские и перинатальные исходы: септических либо других осложнений у обследованных пациенток в послеродовом периоде не наблюдалось, соответственно выявление бактериальной массы, в составе которой определяются представители Enterobacteriaceae spр., не является предиктором септических осложнений.
Секвенирование всего генома продемонстрировало, что плацента содержит уникальный микроби-ом, несколько похожий на оральный, а не вагинальный [2, 8]. Однако не совсем понятно: это сходство характерно для физиологически протекающей беременности, или связь реализуется при инфекциях пародонта и впоследствии приводит к повышению частоты осложнений [4, 11, 27]. Так, предполагаемая связь между дисбиозом полости рта и осложнениями беременности ставит в центр дискуссии вопрос о микробиоте плаценты: клинические исследования связи между гингивитом и преждевременными родами выявили наличие бактерий в очень старых структурах плаценты: виллезном дереве и базальной пластинке [30]. Предполагается, что бактерии могут передаваться из полости рта в пла-
центу гематогенным путем, а не восходящим путем из нижних половых путей как предполагалось ранее. По данным литературы, наиболее распространенными изолятами из плаценты являются представители Protobacteria, Bacteroides, Fusobacteria и Tenericutes [32], а также Firmicutes [25]. В нашем исследовании Protobacteria, Bacteroides были выявлены в группе пациенток с ПИОВ в единичных случаях. Представители Tenericutes (Mycoplasma hominis, Ureaplasma (urealyticum + parvum), Mycoplasma genitalium) и Fusobacteria (Sneathia spp. + Leptotrichia spp. + Fusobacterium spp.) не наблюдались.
Культурно-зависимые исследования идентифицировали представителей родов Prevotella, Bacteroides, Peptostreptococcus, Gardnerella, Mobiluncus и Mycoplasma genitalium в плацентах женщин, родивших недоношенных с преэкламп-сией или без нее, что предполагает участие нескольких штаммов бактерий в патогенезе акушерских осложнений [33], как видно, все они являются участниками формирования бактериального ва-гиноза. Исследования плацентарной микробиоты при преждевременных родах на основе ДНК показали повышенное содержание видов Burkholderia, Protobacteria, и Actinomyces spp., а также других смешанных некультивируемых анаэробов [33]. Однако в случае хориоамнионита было зарегистрировано более высокое содержание Streptococcus agalactiae, Fusobacterium nucleatum и Ureaplasma parvum [33]. В нашем исследовании вышеперечисленные бактерии выявлены не были. В заключение мы можем сказать, что идентификация Enterobacteriaceae spp., Lactobacillus spp. и остальных представителей анаэробной микробиоты не являлись предикторами неблагоприятных материнских и перинатальных исходов в обследуемых группах.
В нашем исследовании были предприняты все меры по исключению загрязнения образцов (стерильное операционное поле, отсутствие контакта с кожными покровами), контрольные технические
образцы в отличие от образцов плацентарной ткани не содержали ОБМ. Таким образом, плацента содержит некую ДНК микроорганизмов. Нельзя утверждать, что это микробиота в общепринятом понимании, которая может быть культивирована при микробиологическом исследовании, что подтвердили результаты микробиологического исследования в нашей работе. Но тем не менее плацента исходно развивается не в стерильной среде (эндометрий в норме содержит собственную микробиоту), и, соответственно, ее обсеменение возможно как контактно, так и гематогенно. Ряд исследований демонстрирует наличие микробного генетического материала как на плаценте, так и в эндометрии здоровых женщин вне беременности [1, 5, 13, 26, 31], что подтверждает наше исследование.
Несовпадение лабораторной ОБМ и суммарного количества идентифицированных микроорганизмов — расчетной оБм говорит о том, что в исследуемом биоматериале присутствуют микроорганизмы, выявление которых не предусмотрено используемым набором реагентов. Максимальная частота «неидентифицируемых» видов выявлена у пациенток с интактными оболочками. С нарушением целостности плодных оболочек постепенно происходит замещение микробиоты плаценты представителями вагинальной флоры, с выявлением которых отлично справляется методика Фемофлор, направленная на выявление микроорганизмов, наиболее часто обитающих в вагинальном биотопе. Этим объясняется более высокий процент «неиденти-фицируемых» микроорганизмов и представителей семейства Enterobacteriaceae spр. у беременных с целым плодным пузырем. После нарушения его целостности на плаценте были выявлены Lactobacillus spp. и представители анаэробной микрофлоры влагалища. Наше исследование подтвердило данные других авторов [11, 25]: при физиологически протекающей беременности наиболее часто идентифицируются Proteobacteria, Firmicutes.
Выводы
При физиологически протекающей доношенной беременности допустимо присутствие общей бактериальной массы 103 1-1045 Гэ/образце на плаценте. Стерильные плаценты встречались как в контрольной группе (21,1%), так и в основной группах (41,7%). В образцах плаценты нами выявлено преобладание лабораторной ОБМ над рассчитанной ОБМ, то есть в анализах присутствовала ДНК микроорганизмов, неидентифицируемая стандартной панелью — «неидентифицируемые» микроорганизмы (в основной группе — 25,0% и в контрольной группе — 52,6%, р = 0,061). В норме при целом плодном пузыре на тканях плаценты могут определяться представители Enterobacteriaceae spp. (1026 Гэ/образце). При ПРПО микрофлора плаценты постепенно замещается влагалищной, появляются обли-гатная и факультативная анаэробная микрофлора вагинального биотопа. Присутствие Lactobacillus spp. в тканях плаценты характерно только для пациенток с ПРПО.
Каганова М.А.
https://orcid.org/0000-0001-5879-418x Спиридонова Н.В. https://orcid.org/0000-0003-3928-3784 Катюшина В.О.
https://orcid.org/0000-0001-9601-5394
ЛИТЕРАТУРА
1. Han Y.W., Shen T., Chung P., Buhimschi I.A., Buhimschi C.C. Uncultivated bacteria as etiologic agents of intra-amniotic inflammation leading to preterm birth // J Clin Microbiol. — 2009. — Vol. 47. — P. 38-47. DOI: 10.1128/JCM.01206-08
2. Goldenberg R.L., Hauth J.C., Andrews W.W. Intrauterine infection and preterm delivery // N Engl J Med. — 2000. - Vol. 342. — P. 1500-1507. DOI: 10.1056/NEJM200005183422007
3. Stout M.J., Conlon B., Landeau M., Lee I., Bower C., Zhao Q., Roehl K.A., Nelson D.M., Macones G.A., Mysorekar I.U. Identification of intracellular bacteria in the basal plate of the human placenta in term and preterm gestations // Am J Obstet Gynecol. — 2013. — Vol. 208: 226 e221-7.
4. Satokari R., Gronroos T., Laitinen K., Salminen, S.. Isolauri E. Bifidobacterium and Lactobacillus DNA in the human placenta // Lett Appl Microbiol. — 2009. — Vol. 48. — P. 8-12.
5. Parnell L.A., Briggs C.M., Cao B., Delannoy-Bruno O., Schrieffer A.E., Mysorekar I.U. Microbial communities in placentas from term normal pregnancy exhibit spatially variable profiles // Sci Rep. — 2017. — Vol. 7. — P. 11200. DOI: 10.1038/s41598-017-11514-4
6. Lim et al. Microbiome. — 2018. — Vol. 6. — P. 87. https://doi. org/10.1186/s40168-018-0475-7
7. Collado M.C., Rautava S., Aakko J., Isolauri E., Salminen S. Human gut colonisation may be initiated in utero by distinct microbial communities in the placenta and amniotic fluid // Sci Rep. — 2016. — Vol. 6. — P. 23129.
8. Aagaard K., Ma J., Antony K.M., Ganu R., Petrosino J., Versalovic J. The placenta harbors a unique microbiome // SciT ransl Med. — 2014. — Vol. 6. — P. 237ra265.
9. Caroline M. Mitchell, Anoria Haick, Evangelyn Nkwopara, Rochelle Garcia, Mara Rendi, Kathy Agnew, David N. Fredricks, David Eschenbach. Colonization of the upper genital tract by vaginal bacterial species in non-pregnant women // Am J Obstet Gynecol. — 2015, May. — Vol. 212 (5). — P. 611.e1-611.e9. Published online, 2014, Dec 16. DOI: 10.1016/j.ajog.2014.11.043PMCID: PMC4754962 NIHMSID: NIHMS650669 PMID: 25524398.
10. Chen H.J., Gur T.L. Intrauterine Microbiota: Missing, or the Missing Link? // Trends Neurosci. 2019. — Vol. 42. — P. 402-413.
11. Prince A.L., Ma J., Kannan P.S., Alvarez M., Gisslen T., Harris R.A., Sweeney E.L., Knox C.L., Lambers D.S., Jobe A.H. et al. The placental membrane microbiome is altered among subjects with spontaneous preterm birth with and without chorioamnionitis // Am J Obstet Gynecol. — 2016. — Vol. 214.
12. Popova E.N., Gordeev I.G. Modern ideas about human microbiota. MICROBIOT / Monograph edited by E.L. Nikonov and E.N. Popova. — Moscow, 2019. — P. 5-19.
13. Fox C., Eichelberger K. Maternal microbiome and pregnancy outcomes // Fertil Steril. — 2015. — Vol. 104 (6). — P. 1358-1363.
14. Peterson J., Garges S.. Giovanni M., McInnes P., Wang L., Schloss J.A., Bonazzi V., McEwen J.E., Wetterstrand K.A. et al. The NIH Human Microbiome Project // Genome Res. — 2009. — Vol. 19. — P. 2317-2323.
15. Липатов И.С., Тезиков Ю.В., Мартынова Н.В., Мингалие-ва Л.К., Гогель Л.Ю., Белоконева Т.С., Калинкина О.Б., Жерна-кова Е.В., Юсупова Р.Р. Универсальный подход к профилактике синдрома патологической беременности // Наука и инновации в медицине. — 2017. — Vol. 1 (5). — P. 13-23.
16. Болдырева М.Н., Липова Е.В., Алексеев Л.П., Витвиц-кая Ю.Г., Гуськова И.А. Характеристика биоты урогенитального тракта у женщин репродуктивного возраста методом ПЦР в реальном времени // Журнал акушерства и женских болезней. — 2009. — Т. LVIII, № 6. — С. 36-42.
17. Сухих Г.Т., Прилепская В.Н., Трофимов Д.Ю., Донников А.Е., Айламазян Э.К. и соавт. Применение метода полимеразной цепной реакции в реальном времени для оценки микробиоценоза урогенитального тракта у женщин (тест фемофлор): медицинская технология. — М., 2011. — С. 36.
18. Ворошилина Е.С., Тумбинская Л.В., Донников А.Е., Плот-ко Е.Э., Хаютин Л.В. Биоценоз влагалища с точки зрения количественной полимеразной цепной реакции: что есть норма? // Акушерство и гинекология. — 2011. — С. 57-65.
19. Каганова М.А., Спиридонова Н.В., Казакова А.В., Девято-ва О.О., Галкина Д.А., Головина О.Н. Особенности микробиоты цервикального канала при дородовом излитии околоплодных вод и доношенной беременности // Акушерство и гинекология. — 2019. — № 5. — С. 77-84. https://dx.doi.org/10.18565/aig.2019.5.77-84
20. Lauder A.P., Roche A.M., Sherrill-Mix S., Bailey A., Laughlin A.L., Bittinger K. et al. Comparison of placenta samples with contamination controls does not provide evidence for a distinct placenta microbiota // Microbiome. — 2014. — Vol. 4. — P. 29. DOI: 10.1186/s40168-016-0172-3
21. Kevin R. Theis, Roberto Romero, Andrew D. Winters, Jonathan M. Greenberg, Nardhy Gomez-Lopez, Ali Alhousseini, Janine Bieda, Eli Maymon, Percy Pacora, Jennifer M. Fettweis, Gregory A. Buck, Kimberly K. Jeferson, Jerome F. Strauss, Offer Erez, Sonia S. Hassan. Does the human placenta delivered at term have a microbiota? Results of cultivation, quantitative real-time PCR, 16S
rRNA gene sequencing, and metagenomics // J Matern Fetal Neonatal Med. - 2019, Dec. - Vol. 29. - P. 1-16.
22. de Goffau M.C., Lager S., Sovio U., Gaccioli F., Cook E., Peacock S.J. et al. Human placenta has no microbiome but can contain potential pathogens // Nature. - 2019. - Vol. 572. - P. 1-21. DOI: 10.1038/s41586-019-1451-5
23. Kevin R. Theis, Roberto Romero, Jonathan M. Greenberg, Andrew D. Winters, Valeria Garcia-Flores, KenichiroMotomura, Madison M. Ahmad, Jose Galaz, Marcia Arenas-Hernandez, Nardhy Gomez-Lopeza. No Consistent Evidence for Microbiota in Murine Placental and Fetal Tissues // mSphere. - Feb, 2020. - Vol. 5 (1). -P. e00933-19. DOI: 10.1128/mSphere.00933-19
24. Satokari R., Gronroos T., Laitinen K., Salminen S., Isolauri E. Bifidobacteriu m and Lactobacillus DNA in the human placenta // Lett Appl Microbiol. - 2009. - Vol. 48. - P. 8-12.
25. Lihong Zhu, Fei Luo, Wenjing Hu, Yang Han, Yuezhu Wang, Huajun Zheng, Xiaokui Guo, Jinhong Qin. Bacterial Communities in the Womb During Healthy Pregnancy // Front. Microbiol. - Sept. 2018. D0I.org/10.3389/fmicb.2018.02163
26. Bagga R., Arora P. Genital Micro-Organisms in Pregnancy // Front. Public Health. - Vol. 8. - P. 225. DOI: 10.3389/fpubh. 2020.00225
27. Martinez K.A., Romano-Keeler J., Zackular J.P., Moore D.J., Brucker R.M., Hooper C., Meng S., Brown N., Mallal S., Reese J. et al. Bacterial DNA is present in the fetal intestine and overlaps with that in the placenta in mice // PLoS ONE. - 2018. - Vol. 13. - P. e0197439.
28. Parnell L.A., Briggs C.M., Cao B., Delannoy-Bruno O., Schrieffer A.E., Mysorekar I.U. Microbial communities in placentas from term normal pregnancy exhibit spatially variable profiles // Sci Rep. - 2017. - Vol. 7. - P. 11200. DOI: 10.1038/s41598-017-11514-4
29. Leiby J.S., McCormick K., Sherrill-Mix S., Clarke E.L., Kessler L.R., Taylor L.J. et al. Lack of detection of a human placenta microbiome in samples from preterm and term deliveries // Microbiome. - 2018. -Vol. 6. - P. 196. DOI: 10.1186/s40168-018-0575-4
30. Vanterpool S.F., Been J.V., Houben M.L., Nikkels P.G., De Krijger R.R., Zimmermann L.J., Kramer B.W., Progulske-Fox A., Reyes L. Porphyromonas gingivalis within Placental Villous Mesenchyme and Umbilical Cord Stroma Is Associated with Adverse Pregnancy Outcome // PLoS One. - 2016. - Vol. 11 (1). - P. e0146157.
31. Younes J.A., Lievens E., Hummelen R., van der Westen R., Reid G., Petrova M.I. Women and their microbes: the unexpected friendship // Trends Microbiol. - 2017. - Vol. 26. - P. 16-32. DOI: 10.1016/j.tim.2017.07.008
32. Charles M. Cobb, Patricia J. Kelly, Karen B. Williams, Shilpa Babbar, Mubashir Angolkar, Richard J. Derman. The oral microbiome and adverse pregnancy outcomes // International Journal of Women's Health. - 2017. - Vol. 9. - P. 551-559. DOI: 10.2147/IJWH. S142730
33. Pelzer E., Gomez-Arango L.F., Barrett H.L., Nitert M.D. Maternal health and the placental microbiome // Placenta. - 2017, Jun. -Vol. 54. - P. 30-37. DOI.org/10.1016/j.placenta.2016.12.003
НОВОЕ В МЕДИЦИНЕ. ИНТЕРЕСНЫЕ ФАКТЫ
СПОРТСМЕНКИ ЧАЩЕ СТРАДАЮТ НАРУШЕНИЯМИ МЕНСТРУАЛЬНОГО ЦИКЛА
Нарушения менструального цикла более распространены среди молодых финских спортсменок, чем среди их ровесниц, не занимающихся спортом активно. Однако одновременно с этим спортсменки испытывают меньше неудовлетворенности массой тела, чем ровесницы.
Эти результаты были представлены в недавнем исследовании, проведенном на факультете наук о спорте и здоровье Университета Ювяскюля, Финляндия. Исследование проводилось среди членов спортивных клубов, которые тренировались не менее четырех раз в неделю (спортсменки), и среди тех, кто членом клубов не являлся (не спортсменки). Результаты исследования показали, что в подростковом возрасте 18% спортсменок и не спортсменок сообщали о нарушении менструального цикла. Однако 8% спортсменок сообщили о первичной аменорее (отсутствии менструаций к 15 годам), в отличие от группы, не занимающейся спортом, где распространенность первичной аменореи составляла 0%. В молодом возрасте распространенность нарушений цикла у спортсменок достигла 39%, в то время как 6% не спортсменок сообщили о нарушениях.
Источник: https://www.medikforum.ru
