CC BY
23Таблица 1
Уровень антилизоцимной активности штаммов, выделенных у детей с ХТ
Штамм Число штаммов с АЛА Число штаммов с различным уровнем АЛА (мкг\мл)
1-2 3-4 5-6 7 и >7
Staphylococcus aureus 83% (39 штамма) - 15 (20%) 20(26%) 13 (18%)
Streptococcus pyogenes 64% (41 штамм) 15 (17%) 29(32%) 30 (34%) -
Антикомплементарная активность (АКА) выявлена у 34% изученных штаммов S.aureus (табл.2). Как видно из приведенных в таблице данных, штаммы пиогенного стрептококка обладают АКА в 30% случаев. Как и при исследовании АЛА, при изучении АКА, большинство штаммов обладали средними показателями активности (25 ед\мл).
Известно, что первичными бактерицидными факторами, выделяемыми фагоцитами, являются перекись водорода и продукты ее свободнорадикального разложения, такие как гипох-лорит и гидроксильный радикалы. Патогенные и условно-патогенные бактерии приспосабливаются выживать в среде с повышенной концентрацией перекиси водорода путем индукции генов раннего ответа на окислительное повреждение [7]. Белковыми продуктами этих генов являются, среди прочих, фермент каталаза, разлагающий перекись водорода до нейтральных продуктов: воды и молекулярного кислорода и фермент супероксиддисмутаза, разлагающая супероксид анион радикал до молекулярного кислорода.
Каталазная активность была выявлена у всех штаммов, выделенных при посевах с миндалин детей с хроническим тонзиллитом. При количественной оценке каталазной активности бактерий обнаружено, что наиболее высокая активность фермента наблюдалась у штаммов стафилококков (4,0-5,1 ед\20млн), штаммы стрептококков обладали достоверно более низкой каталазной активностью (2,2-2,5 ед\20млн и 2,3-2,7 ед\20млн, соответственно) (р < 0,05).
В дальнейшем оценивали эффективность внутриклеточного киллинга бактерий с различной каталазной активностью. Обнаружили, что существует корреляция между выживаемостью бактерий после фагоцитоза и их способностью разлагать перекись водорода. Спектрофотометрическая оценка каталазной активности лейкоцитов и стафилококков по отдельности и при смешивании (в соотношении 1:100) показала, что она практически не снижалась у стафилококков в процессе фагоцитоза. При оценке эффективности внутриклеточного киллинга бактерий фагоцитами обнаружено, что штаммы, активно продуцирующие каталазу, в среднем в 40% случаев, не уничтожаются в фагосомах, что приводит к персистенции инфекционного агента в организме. Коэффициент корреляции между каталазной активностью штаммов и способностью их к колониеобразованию после фагоцитоза равен 0,9.
При оценке супероксид дисмутазной активности бактерий обнаружено, что изученные штаммы таковой не обладали.
Таблица 2
Частота выделения и уровень антикомплементарной активности штаммов, выделенных из миндалин детей
с хроническим тонзиллитом
Штамм % бактерий,выживающих после фагоцитоза Число штаммов с АКА Число штаммов с различным уровнем АКА, (ед\мл)
12,5 25 50
Staphylococcus aureus 15,5-17,5% 34,2% (25 штаммов) 20,0%* (5штаммов) 64,0% (16 штаммов) 16% (4 штамма)
Streptococcus pyo-genes 13,0-22,0% 30,5% (4 штамма) 46,8% (15 штаммов) 53,2% (17 штамов) -
^ 5 Зг
Российская оториноларингология №3 (52) 2011
Заключение. Таким образом, среди возбудителей ХТ у детей наиболее часто встречается грамположительная кокковая флора с выраженным персистентным потенциалом в сочетании с антибиотикорезистентностью. Комплекс выявленных свойств возбудителей хронических тонзиллитов определяет необходимость поиска новых методов терапии с применением препаратов неантибактериального происхождения, воздействующих на факторы противостояния бактерий врожденному и приобретенному иммунитету.
ЛИТЕРАТУРА
1. Азаматова Э. К., Хараева З. Ф., Мальцева Г. С. Цитокиновый статус крови и небных миндалин у детей с хроническим тонзиллитом// Рос. оторинолар. — 2009. — №4(41). — С. 3-7.
2. Бухарин О. В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий//ЖМЭИ. — 1994. — Приложение. — С. 4-13.
3. Бухарин О. В., Усвяцов Б. Я., Хуснутдинова Л. М. Некоторые особенности микрофлоры миндалин и межмикробного взаимодействия (в норме и при патологии) // ЖМЭИ. — 2000. — №4. — С. 82-84.
4. Навашин С. М. Микро- и макроорганизм — взаимодействие в инфекционном процессе при антибактериальной терапии // Антибиотики и химиотерапия. - 1998. - Т. 43. № 11. — С. 3-5.
5. Хараева З. Ф., Азаматова Э. К. Факторы персистенции возбудителей хронических тонзиллитов// Проблемы и перспективы современной науки. — 2009. — Т. 2, выпуск 1. — С. 234-235.
6. Evaluation of a method for measurement of intracellular killing of Staphylococcus aureus in human neutrophil granulocytes / S. L. Nielsen [ et al.] // J. Biochem. — 1995. — Vol. 118(2). — P. 271-277.
7. Kanatani H., Martin S. E. Catalase and superoxide dismutase activities in virulent and nonvirulent Staphylococcus aureus isolates // J. Clin. Microbiol. — 1985. — Vol. 21. — P. 607-610.
8. Misra H. P., Fridovich I. The role of superoxide anion in the autoxidation of epinephrine and a simple assay for superoxide dismutase // J. Biol. Chem. — 1972. — V. 247. — P. 3170.
Азаматова Э. К. — врач детской поликлиники №2 г. Нальчика. Тел. 8-905-437-64-77, э/п: elazamatova@gmail. com; Хараева Заира Феликсовна — док. мед. наук, проф. зав. каф. микробиологии КБГУ. 360000, Нальчик, ул. Чернышевского, 173. тел. 8-928-708-91-66, э/п: irafe@yandex.ru; Мальцева Галина Семёновна — докт. мед. наук, учёный секретарь Санкт-Петербурского НИИ ЛОР. 190013, СПб.: ул Бронницкая, 9. тел. 8-911-236-92-11, э/п: g.s.maltseva@gmail.ru
УДК: 616.22-002-097
ОСОБЕННОСТИ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ГОРТАНИ В НОРМЕ И ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ
Л. Ф. Азнабаева, Н. А. Арефьева, А. Н. Даянов
THE PECULIARITIES OF LOCAL IMMUNITY OF MUCOUS MEMBRANE OF THE LARYNX IN NORM AND PATHOLOGY, INFLAMMATORY
L. F. Aznabaeva, N. A. Arefyeva, A. N. Dayanov
ГОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет, г. Уфа (Зав. каф. оториноларингологии — проф. Н. А. Арефьева)
Представлены результаты изучения особенностей местного иммунитета слизистой оболочки гортани у практически здоровых людей. Выявлены особенности иммунной защиты слизистой оболочки гортани по сравнению с другими участками верхних дыхательных путей. У больных хроническим ларингитом иммунное реагирование слизистой оболочки гортани также характеризуется активацией на местном уровне гуморальных факторов. Ключевые слова: местный иммунитет, ларингит. Библиография: 7 источников.
Presents the results of the study of local immunity of mucous membrane of the larynx in healthy people. Identified particular immune protection mucous larynx compared to other parts of the upper respiratory tract. In patients with chronic laryngitis immune response of larynx mucosa is also characterized by activation humoral factors at the local lev
Keywords: local immunity of mucous membrane of the larynx, chronic nonspecific laryngitis.
Bibliography: 7 sources.
Слизистая оболочка гортани обеспечивает защиту от проникновения в организм болезнетворных микроорганизмов путем взаимодействия факторов иммунной защиты и непосредственно клетками эпителиального слоя.
Местный иммунитет слизистой оболочки гортани характеризуется несколькими уровнями. Первый уровень — надэпителиальный слой — иммунная защита формируется прежде всего антителами [6] и фагоцитами, обеспечивает противобактериальный эффект. Второй уровень — клетки многослойного плоского эпителия и многорядного цилиндрического реснитчатого эпителия [1, 2, 3], выполняют механическую защиту, обеспечивая мукоцилиарный клиренс.
Клетки плоского эпителия являются участниками иммунного ответа. Здесь происходит продукция секреторного компонента и присоединение его к иммуноглобулинам типа А и М [3, 5]. В подэпителиальном слое синтезируются антитела. Изучение факторов иммунной защиты слизистой гортани представлено в ограниченных публикациях [4]. В этой связи представляется важным проведение исследования.
Цель исследования — определение особенностей формирования иммунного ответа на слизистой оболочке гортани в норме и при воспалении.
Задачи исследования
1. Оценить показатели местного иммунитета на различных участках слизистой оболочки верхних дыхательных путей (нос, глотка и гортань) у практически здоровых лиц на основе изучения иммуноцитограмм (клеточное представительство, состояние деструкции) и уровня антител (IgG, IgA, IgE, IgM, sIgA).
2. Провести сравнительное изучение показателей местного иммунитета слизистой оболочки гортани при хроническом воспалении (хронический ларингит) в зависимости от формы заболевания (катаральная, гиперпластическая, атрофическая).
Пациенты и методы исследования
Под наблюдением находились 30 практически здоровых лиц (возраст 47,2 (±0,81) лет, распределение по полу (мужчин — 32, женщин — 22), которые не имели хронических воспалительных заболеваний, и в течение 3 месяцев не болели острыми воспалительными заболеваниями, и 110 больных различными формами хронического ларингита. Из них катаральная форма хронического ларингита была у 27 человек (24,54%), гиперпластическая форма — у 58 человек (52,72%) и атрофическая — у 25 человек (22,72%). Средний возраст больных составил при хроническом катаральном ларингите — 32,03 (±1,14) года, хроническом гиперпластическом ларингите — 45,98(±0,44) лет и при хроническом атрофическом ларингите — 57,8 (±0,91) лет. Распределение по полу: мужчин — 68 (61,8%), женщин — 42 (38,2%). Всем больным (110 человек) проводилось эндоскопическое обследование носа, глотки, гортани и уха. Больные с гнойно-воспалительными заболеваниями носа и уха, а также с выявленной патологией других органов и систем в группу исследуемых не включались.
Материалом для исследования служили кровь, секрет с поверхности голосовых складок, мазки — перепечатки с поверхности слизистой гортани в области голосовых складок; у практически здоровых лиц дополнительно — слюна и носовые смывы.
Оценку клеточных факторов местного иммунитета слизистых оболочек проводили по данным иммуноцитограмм. Гуморальные факторы исследовали путём количественного определения в биологических жидкостях иммуноглобулинов (sIgA, IgG, IgA, IgM и IgE) и альбумина. Для оценки происхождения антител в смывах производили расчёт относительных коэффициентов секреции (ОКС) иммуноглобулинов (Тотолян А. А., 1999) [7].
Иммуноцитологические исследования включали в себя изучение количественного и функционального состояния присутствующих в мазках клеток. Изучение деструктивных процессов в клетках осуществляли по методу Л.А. Матвеевой (1986) [5]. Функциональная активность нейтрофилов изучалась путём исследования фагоцитарной способности нейтрофилов. Вычислялся процент нейтрофилов, фагоцитирующих аутофлору — показатель фагоцитоза.
Российская оториноларингология №3 (52) 2011
Среди фагоцитирующих нейтрофилов учитывали процент разрушенных (деструктирован-ных) фагоцитов, в протоплазме которых сохранились целые микроорганизмы — показатель незавершённого фагоцитоза [1].
Проводили количественное определение иммуноглобулинов ^А, 8^А, IgG, ^М, ^Е в сыворотке крови, в смывах со слизистой оболочки гортани, носа и смешанной слюне методом иммуноферментного анализа.
Результаты исследования
Анализ клинических особенностей у больных хроническим ларингитом показал, что в большинстве случаев (52,7%) выявлялся гиперпластический вариант заболевания. Катаральная и атрофическая формы заболевания отмечались в числе случаев — по 25% в каждой группе.
Результаты исследования иммуноцитограмм с поверхности слизистых оболочек носа, глотки и гортани у практически здоровых лиц показали, что у практически здоровых лиц имеется повышенный цитоз за счет слущивания клеток плоского эпителия (доля клеток составляла около 75%). Иммунокомпетентные клетки — нейтрофилы были представлены в незначительном количестве (14%). Способность к фагоцитозу нейтрофилов гортани по сравнению с клетками, находящимися на слизистой носа и глотки, была сниженной.
При изучении состояния клеточного звена иммунной защиты слизистой оболочки гортани при хроническом воспалении было установлено незначительное снижение количества нейтро-филов 0 степени деструкции. При катаральной форме доля неповреждённых нейтрофилов составила 14,54 (±2,40)% (^ < 0,05), при гиперпластической форме — 9,25 (±3,31)% (^ < 0,01) по сравнению с группой практически здоровых лиц 22,16 (±4,12)%, что может быть расценено как нарушение выхода нейтрофилов на слизистую оболочку гортани из кровеносного русла. В то же время, отмечалось увеличение показателя способности нейтрофилов к фагоцитозу до 34,8(±6,85)% ^ < 0,05), при катаральной форме и до 38,0 (±8,29)% ^ < 0,05), при гиперпластической форме хронического ларингита по сравнению с 20,87 (±5,51)% в группе контроля. Обращает на себя внимание, что при атрофической форме заболевания показатели функциональной активности нейтрофилов практически не менялись.
Следовательно, у больных хроническим ларингитом отмечались выраженные деструктивные изменения клеток плоского эпителия слизистой оболочки гортани и снижение выхода нейтрофилов на поверхность слизистой оболочки , более выраженное при гиперпластическом и атрофическом вариантах течения заболевания. Высокие показатели фагоцитарной активности нейтрофилов свидетельствуют о напряжённости иммунной системы слизистой оболочки гортани за счет факторов врожденного иммунитета.
Показатели гуморального иммунитета слизистой оболочки гортани при сопоставлении с данными на других участках слизистой оболочки верхних дыхательных путей — глотки и носа выявили ряд особенностей.
Иммуноглобулиновый профиль на слизистых оболочках носа и глотки был практически идентичен. Иммуноглобулины были представлены преимущественно антителами с секреторным компонентом — — на слизистой оболочке носа — в 77% и глотке — в 81% случаев. В то же время в этих областях иммуноглобулины без секреторного компонента — ^А не превышали 12%. Иммуноглобулины класса G имелись в незначительном количестве и составляли соответственно 13% и 6%. Тогда как в гортани — доля секреторного иммуноглобулина А (з^А) была значительно ниже, чем на слизистой оболочке носа и глотки в 42% случаев. Иммуноглобулины без секреторных компонентов (^А и IgG) были представлены в равных количествах по 27% каждый.
При сравнительной оценке показателей относительных коэффициентов секреции (ОКС) иммуноглобулинов в смывах с различных участков слизистой оболочки верхних дыхательных путей было установлено, что на слизистой оболочке гортани отмечалось значительное увеличение продукции ^Е антител и снижение секреции Показатель ОКС ^Е на слизистой оболочке гортани составил 16,64 (±7,63), а на слизистой оболочки глотки и носа только 0,19 (±0,08) (р < 0,05 при t = 2,16) и 0,14 (±0,07) (р < 0,05 при t = 2,16) соответственно. ОКС з^А на слизистой гортани составил 10,65 (±3,36) по сравнению с показателями на слизистой оболочке глотки 51,44 (±5,67) (р < 0,001 при t = 6,2) и полости носа 35,71 (±10,01) (р < 0,05 при t = 2,37).
Научные статьи
При исследовании гуморальных факторов местного иммунитета слизистой оболочке полости гортани у больных хроническим ларингитом была выявлена выраженная активация антительной защиты. Иммунное реагирование на слизистой оболочке гортани при хроническом воспалении сопровождалось значимым повышением уровня реагиновых антител (^Е) в десятки раз и в 3-5 раз — иммуноглобулинов без секреторного компонента (рекрутируемых из кровеносного русла) — классов G, А и М и незначительным увеличением секреторных антител (з^А). При атрофической форме заболевания, несмотря на отсутствие признаков выраженной антительной активации, спектр иммуноглобунов характеризовался увеличенным содержанием ^Е (в 5 раз) и IgG (в 2 раза).
Таким образом, местный иммунитет слизистой оболочки гортани у практически здоровых людей формируется прежде всего антителами (гуморальный иммунитет) с вовлечением в элиминационный механизм клеток фагоцитарного звена — нейтрофилов (клеточное звено иммунной системы) и клеток плоского эпителия. Выявлены особенности иммунной защиты слизистой оболочки гортани по сравнению с другими участками верхних дыхательных путей. В частности в гортани значимость в иммунном ответе клеток фагоцитарного звена (нейтрофилов) невысокая. Иммунная защита определяется высоким уровнем продукции ^Е и привлечением антител из кровеносного русла (IgG).
У больных хроническим ларингитом иммунное реагирование слизистой оболочки гортани также характеризуется активацией на местном уровне гуморальных факторов по реагиновому типу (^Е), вовлечением в воспалительный процесс сывороточных антител (из кровеносного русла), нарушением процессов рекрутации нейтрофилов из кровеносного русла и усилением деструктивных процессов, затрагивающих эпителиальные клетки, особенно при гиперпластическом и атрофическом варианте хронического ларингита. Вывод
Иммунное реагирование на слизистой оболочке гортани, в отличие от других участков верхних дыхательных путей (ротовая полость и нос), формируется путем преимущественной продукцией на местном уровне реагиновых антител (IgE) и вовлечением в воспалительный процесс иммуноглобулинов из кровеносного русла, что необходимо учитывать при проведении лечебных мероприятий.
ЛИТЕРАТУРА
1. Арефьева Н. А., Медведев Ю. А. Иммунология в оториноларингологии: Метод. рекомендации. — Уфа, 1997. — 27 с.
2. Иммунологические исследования в ринологии: Учебное пособие / Н. А. Арефьева [ и др.]. Уфа, Издательство «Здравоохранение Башкортостана», 2002. — 88 с.
3. Клиническая патология гортани / Н. А. Дайхес [ и др.] Руководство-атлас. М., ООО «Медицинское информационное агентство», 2009. — 160 с.
4. Костюкова С. Б., Рязанцев С. В. Иммуноглобулины ларингеальных секретов // Новости оторинолар. и логопа-тол. — 1995 . — №3(4). — С. 155.
5. Матвеева Л. А. Местный иммунитет при болезнях лёгких у детей. — Томск, 1986. — 189 с.
6. Рязанцев С. В. , Хмельницкая Н. М., Тырнова Е. В. Роль слизистой оболочки в защите ЛОРорганов от потенциально патогенных для организма антигенных факторов // Вестн. оторинолар. — 2000. — №3. — С. 60-64.
7. Тотолян А. А. Современные подходы к диагностике иммунопатологических состояний // Медицинская иммунология. — 1999. — Т.1, №1-2. — С. 75-108.
Азнабаева Лилия Фаритовна — докт. мед. наук, проф. каф. оториноларингологии БГМУ, врач-иммунолог Республиканской клинической больницы. Уфа, ул. Достоевского, 132.тел. моб. 8-917-469-48-20; Арефьева Нина Алексеевна—докт. мед. наук, профессор, зав. каф. оториноларингологии БГМУ.тел. 8-347-251-03-39, 8-917-348-67-51, э/п:Агейеуа_1ог@таЦ.га;ДаяновАйрат Назирович—аспирант каф. оториноларингологии БГМУ. Тел8-347-272-82-63, 8-917-418-14-12, э/п: airday@mai1.ru
^ 9 Зг
