CC BY
37
УДК 619:612.419:612.017:636.5 :616-008
А. С. СТАРУН Л. А. БЕРЕНДЯЕВА
Омский государственный аграрный университет
ОСОБЕННОСТИ КОСТНО МОЗГОВОГО КРОВЕТВОРЕНИЯ И ИММУННОЙ СИСТЕМЫ 30-ДНЕВНЫХ ИНТАКТНЫХ цыплят ПРИ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО ЛАРИНГОТРАХЕИТА
Установлены особенности костно-мозгового кроветворения, некоторых показателей периферической крови и иммунной реакции организма 30-дневных цыплят, которые следует учитывать для оптимизации сроков проведения профилактических мероприятий в птицеводстве. Предложены диагностические критерии активности кроветворения и степени иммунной защиты цыплят при физиологических и различных патологических состояниях, что позволяет оценить тяжесть состояния организма, эффективность лечебно-профилактических мероприятий.
Гематологические данные являются существенными элементами характеристики клинико-физио-логического статуса организма. Проблема изучения реакций крови в плане системного и синхронного исследования различных клеточных форм одновременно в разных разделах (периферическая кровь, костный мозг, лимфоидные органы) позволяет судить о реакции крови как целостной и единой системы. Вопросы физиологии и функционального реагирования системы крови на различные воздействия факторов внешней среды, в том числе стрессоров, на изменения внутренних свойств в организме птицы очень актуальны. Особый интерес представляют исследования кроветворения в период развития иммунных реакций [5].
Новые технологии в промышленном птицеводстве сильно изменили эпизоотологию многих инфекционных болезней птиц. Слабая изученность иммуно-реактивности кур является причиной, тормозящей выработку эффективных методов их профилактики и лечения. В 2001 году, по данным Л.А. Венгеренко [2,3], в птицеводческих хозяйствах России регистрировался в ряде территорий среди других болезней инфекционный ларинготрахеит (ИЛТ). Он наносит значительный ущерб промышленному птицеводству. Профилактика болезни складывается из ряда ветеринарно-санитарных мероприятий, в том числе проведения вакцинации птицепоголовья. Но сама процедура иммунизации нередко приводит к развитию стрессовых состояний у птиц, вызывает снижение их резистентности к другим стресс-факторам, что, в свою очередь, отрицательно влияет на формирование поствакцинального иммунитета и способствует развитию осложнений и гибели птиц [ 1 ]. Для развития полноценного иммунного ответа большое значение имеет возраст вакцинируемой птицы. И.М. Карпуть и М П. Бабина [6] утверждают, что этот возраст является критическим иммунологическим периодом, в котором чаще регистрируются желудочно-кишечные болезни и гиповитаминозы.
В качестве средств, снижающих патогенное действие вакцинации, используются различные анти-
стрессовые препараты, в том числе антибиотики, растительные биологически активные вещества, поливитаминные премиксы,группа витаминов А, Е и С, аминовитал и др. В доступной литературе нет сведений о применении одной аскорбиновой кислоты для коррекции стресса при иммунизации против ИЛТ цыплят 30-дневного возраста.
Целью исследований является изучение особенностей костно-мозгового кроветворения и иммунной реактивности цыплят 30-дневного возраста и использование этих данных для обоснования профилактики и коррекции с помощью аскорбиновой кислоты стресса, вызванного вакцинацией птицы против инфекционного ларинготрахеита.
Объектов исследования служили цыплята породы белый леггорн 30-дневного возраста, находящиеся в цехе выращивания ремонтного молодняка на промышленном предприятии «Оша», находящемся на территории Омской области.
Для проведения экспериментальных исследований по принципу аналогов были сформированы две группы по 100 цыплят. Вся птица находилась в одном корпусе при одинаковых условиях кормления и содержания. Кормовой рацион был составлен по нормам ВИП.
Цыплята первой группы были вакцинированы против ИЛТ живой вирус-вакциной из штамма ВНИИБП согласно прилагаемому наставлению путем инсталляции на конъюнктиву. Цыплятам второй группы за 3 дня до вакцинации и 3 дня после в корм дополнительно давали аскорбиновую кислоту из расчета 100 мг на 1 кг корма.
Для гематологических, биохимических и иммунологических исследований цыплят кровь брали из крыловой вены по следующей схеме: до вакцинации, через сутки, на 5, 7,14 и 21 день после иммунизации их против инфекционного ларинготрахеита.
На основании анализа миелограмм (табл. 1) и рассчитанных костно-мозговых индексов (табл. 2) было установлено, что гемопоэтическая активность миелоидного ростка костного мозга цыплят 30-дневного возраста снижена по сравнению с данными
Миелограмма цыплят 30-дневного возраста 1Х+^)п-5
Показатели Значение показателя, % Пределы колебаний
Клетки псевдоэозинофильного ряда 11,92±0,31 11,28- 12,56
Клетки эозинофильного ряда 2,82±0,26 2,27 - 3,36
Клетки базофильного ряда 1.9±0,04 1,82 - 1,98
Всего гранулоцитов 19,05=^=0,43 18,17 - 19,92
Клетки лимфоидного ряда 39,4±0.57 38,22 - 40,58
Клетки моноцитарного ряда 5,56±0,08 5,39 - 5.73
Клетки белого ростка кроветворения 66,47±0,86 64,7 - 68,24
Клетки эритроидного ряда 31,43±0,9 29,57 - 33,29
Клетки тромбоцитарного ряда 0,33 ±0,02 0,29 - 0,37
Плазматические клетки 2,47±0,04 2,38 - 2,56
Клетки в митозе 2,17 ±0,04 2,09 - 2,25
Таблица 2
Костно-мозговые индексы цыплят 30-дневного возраста (М ± Б, )п=5
Индексы Значение Колебания
Лейкоэритробластическое соотношение 2,12 ±0,07 1.98 - 2,26
Индекс созревания псевдоэозинофилов 1,12 ±0,05 1,01 - 1,024
Индекс созревання эозинофилов 2,85±0,24 2,37 - 3,34
Индекс созревания нормобластов 0,41 ±0,01 0,38 - 0,43
Индекс созревания базофильных нормобластов 3,63 ±0,13 3,36 -3,91
Индекс созревания полихроматофильных нормобластов 0,54 ±0,03 0,48 - 0,59
В.А. Верхолетова (4] для цыплят 60-суточного возраста (1,83), что подтверждает индекс созревания псевдоэозинофилов (1,12 ±0,1), который ниже в 1,63 раза, Значение индекса указывает на преобладание незрелых форм клеток миелоидного ряда (10,56±0,12%) и наличие малого резерва зрелых гетерофилов (5,61 ±0,15%) в костном мозге. У исследуемых цыплят зрелых форм псевдоэозинофилов в периферической крови в 2,28 раза больше, чем в костно-мозговом пунк-тате, и имеют ся в наличии незрелые формы псевдоэозинофилов. Это снижает резистентность птиц не только в экстремальных условиях, но и при физиологических процессах. При наличии в костно-мозговом пунктате (КМП) 1,9 ±0,04% клеток базофильного ряда в кровяном русле их всего 0,9%, что не обеспечивает полноту межклеточных взаимодействий за счет биологически активных веществ этой группы клеток. Индекс созревания эозинофилов (2,85±0,24) выше по сравнению с данными (1,57) В.А. Верхолетова в 1,82 раза для цыплят 60-дневного возраста.
В лимфоидном ряду усилены процессы размножения властных клеточных элементов (лимфо-бластов 11,71 ±0,41%), но несколько заторможен их переход в коммитированные клетки (пролимфоцитов всего 2,36 ±0,09%). В результате усиленной индукции созревания клеток лимфоидного ряда число зрелых форм в составе костно-мозгового пунктата цыплят было 25,3±0,83%. Значительное количество лимфоцитов в периферической крови (80,2±1,04%) дает
возможность говорить об усилении лимфопоэза не только в костном мозге, но и в других лимфоидных тканях и органах (тимус, бурса) в организме цыплят этого возраста.
Отношение лимфоидных клеток костного мозга к клеткам псевдоэозинофильного ряда (лимфо-цитарный индекс) у 30-дневных цыплят равно 3,33 ±0,32%. Оно доказывает преобладание лимфопоэза над миелопоэзом. Клетки моноцитарной группы в КМП составили 5,56±0,15%, а в периферической крови — 0,9±0,42%, что недостаточно для полноценной макрофагальной реакции организма цыплят. Митотически активных клеток (2,17±0,07%) было в 1,36 раза больше по сравнению с данными В. А. Верхолетова (1965).
При анализе парциальных эритробластограмм у цыплят 30-дневного возраста выявлено снижение процессов дифференцировки эритроцитов, так как количество эритробластов составило 4,03 ±0,12%. Значение индекса созревания нормобластов низкое — 0,41 ±0,01. Высокое значение индекса созревания базофильных (3,63±0,13), но низкое значение индекса созревания полихроматофильных нормобластов (0,54±0,03%) показало ингибирова-ние пролиферативной активности и гемоглобин-образовательной функции эритрона у цыплят.
Аейкоэритробластический индекс показывает преобладание клеток белого ростка кроветворения, а именно - клеток лимфоидного ряда.
Лейкоцитарные индексы периферической крови интактных 30-дневных цыплят (M±Sd) n=S
Показатели Значение показателя Пределы колебаний
Лимфоциты / псевдоэозинофилы 6,09+0,03 5,93-6,41
Псевдоэозинофилы / лимфоциты 0.17±0,02 0,19-0,24
Индекс сдвига ядра 0,12±0,03 0,06-0,22
Индекс сдвига лейкоцитов крови 0,19+0,07 0,21-0,27
Лейкоцитарный индекс интоксикации 0.24±0,07 j 0.17-0,49
Таблица 4
Иммунограмма 30-дневных цыплят (M+Sd) п=5
Показатели Значение показателя (%) Колебания Абсолютные значения хЮ'Ул Колебания
Т-лимфоциты 22,3±0,91 20,43-24.17 5,9±0,23 5,42-6,38
Т-хелперы 13,6±1,14 11.25-15,95' 0,8±0.08 0.63-0.98
Т-супрессоры 12,7±0,76 11,34-14,06 0,75±0,05 0,63-0,86
ИРИ 1,07±0,05 0,97-1,17
В-лимфоциты 16±0,79 14,37-17,63 4,2410,24 3,75-4,73
Вирусспецифические лимфоциты . 5,8±1,15 3,43-8,17 1,53±0,29 0,93-2,14
Все вышеперечисленные факты объясняют сохраняющуюся незрелость системы костно-мозго-вого кроветворения, её слабую активность у цыплят 30-дневного возраста по сравнению с цыплятами старшего возраста.
При анализе некоторых гематологических характеристик интактных цыплят 30-дневного возраста выявлено, что количество лейкоцитов, несмотря на низкое содержание предшественников в костном мозге, в периферической крови находится в пределах физиологической нормы для птиц (32,99±0,73 х10а/ л), но выше, чем определено у И.М. Карпуть и МП. Бабиной (2000 г.) для цыплят 28-дневного возраста, — в 1,4 раза. Количество красных клеток в периферической кровинизкое (1,97 ±0г1Ч10|2/л),что положительно коррелирует с количеством клеток эритроидного ряда в костном мозге. Уровень гемоглобина в единице объема крови достаточно высок (9,63±0,1 ммоль/л). Был рассчитан средний объем эритроцитов (МСУ) для цыплят этого возраста, он составляет 122,7±0,67фл, а среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) - 79,2±9,86пг. Средняя концентрация гемоглобина в массе эритроцитов (МСНС) - величина, отражающая насыщение эритроцита гемоглобином и не зависящая от объема клетки, у 30-дневных цыплят равна 64,51 ±2,17 г/л, является чувствительным тестом при нарушениях гемоглобинобразования. Сиаловых кислот в сыворотке крови у цыплят 30-дневного возраста было 50,2 ± 1,49 усл. ед..
Показатели среднего объема эритроцитов, среднего содержания гемоглобина в эритроците, средней концентрации гемоглобина в эритроцитах, количество сиаловых кислот в сыворотке крови при-
няты нами за показатели нормы, гак как в доступной литературе таких данных для птиц не обнаружено.
При дифференциальной характеристике лейкоцитов выявили значительное преобладание относительного и абсолютного количества лимфоцитов (80,2±0,93% и 26,46±0,48х10"/л соответственно). Определили наличие незрелых форм псевдоэозино-филов у цыплят 30-дневного возраста, что характерно для раннего онтогенеза при общем низком относительном и абсолютном количестве гетерофилов (13,2±0,37% и 4,35±0,15х107л соответственно). Сниженное относительное и абсолютное количество моноцитов (0,7±0,27% и 0,23±0,09х107л соответственно) подтверждает дефицит клеточно-опосре-дованных факторов защиты. Были в наличии и плазматические клетки (1,8±0,76%). При расчете ИСЯ, ИСАК, ЛИИ (табл. 3) получили достоверные величины, характеризующие незрелость системы крови, сниженную реактивность организма цыплят 30-дневного возраста. Лимфопсевдоэозинофильный коэффициент составил 6,09±0,03. Показатель стрессового состояния организма — отношение псевдоэозинофилов к лимфоцитам - низкий (0,17 ±0,02), ниже в 4,24 раза по сравнению с данными (W.B. Gross., 1983) для взрослых птиц 0,72.
При изучении иммунного статуса 30-дневных цыплят (табл. 4) во взаимосвязи с костно-мозговым кроветворением определили, что при наличии резерва зрелых лимфоцитов в костном мозге и значительного количества их в кровяном русле иммунокомпе-тентных клеток в периферической крови было недостаточно: Т-лимфоцитов меньше в 2,12 раза, а В-лимфоцитов - в 1,84 раза по сравнению с данными для взрослых кур И.А. Болотникова с соавт. (1983).
1Ш
Данные таблицы 4 показывают, что среди изученных клеточных факторов иммунитета у 30-дневных цыплят преобладали Т-лимфоциты. Их абсолютное значение было ниже в 1,4 раза, чем представлено у И. М. КарпутьиМ.П. Бабиной (2000 г.) для цыплят 28-дневного возраста.
В наших исследованиях среди субпопуляций Т-лимфоцитов количество хелперов незначительно выше количества супрессоров — всего на 0,9% (или 0,05x10''/л), что предполагает сниженную иммуно-реактивность.
Иммунорегуляторный индекс (ИРИ) показывает, что супрессорная функция лимфоцитов 30-дневных цыплят еще высока, поэтому иммунные свойства ослаблены, что подтверждаетмнение И.М. Карпуть, М.П. Бабиной (2000 г.) о наличии критического иммунологического периода в онтогенезе цыплят этого возраста.
По результатам исследований относительное количество В-лимфоцитов у интактных цыплят 30-дневного возраста было 16,6±0,79%, абсолютное число их 4,24±0,24х109/л, что согласуется с данными И.М. КарпутьиМ.П. Бабиной (2000г.).
Обнаружение вирусспецифических клеток в сыворотке крови объясняется возможностью сохраниться в организме у цыплят при контакте их с вирусом ИДТ в окружающей среде.
Таким образом, результаты исследований показали, что у 30-дневных цыплят в возрастной период, рекомендованный для вакцинации против ИЛТ, еще недостаточно сформировались кроветворение и иммунная система, что может вызвать неадекватный ответ организма при иммунизации.
Процесс вакцинации оказывает на организм 30-дневных цыплят двустороннее воздействие. Процедура отлова, фиксации птицы, инсталляции вакцинного штамма вируса ИЛТ на конъюнктиву, с одной стороны, вызывает состояние напряжения всех систем организма, которое должно было, согласно закономерностям течения стрессовой реакции, закончиться через 24-48 часов после начала действия стрессирующего агента. С другой стороны, вирус, являясь антигеном и стрессором, после поступления в организм пролонгирует течение адаптации. Поэтому после начала действия раздражителя (вакцинации цыплят против ИЛТ) в костном мозге отмечаются фазные изменения гемопоэза. Так, в стадию тревоги, через сутки, в КМП достоверно уменьшается число псевдоэозинофилов — на 1,37%. Индекс созревания псевдоэозинофилов (меньше на 0,25) показывает снижение активности дифференцировки. Увеличивается число всех клеток белого ростка кроветворения на 6,92% (с минимумом на 14 дбнь 60,8 ± ±1,52%), но при этом число митотически активных клеток уменьшено в 2,38 раза. Кроме того, уменьшается эффективность процессов созревания эритро-идных клеток, особенно на стадии полихроматофиль-ных нормобластов. Созревание псевдоэозинофилов интенсифицируется (р < 0,001) на 5 день, что может характеризовать наступление стадии резистентности стресса. Красный росток кроветворения при этом увеличивает пролиферативную активность, индекс созревания нормобластов достоверно (р < 0,001) выше исходного значения. Дифференцировка эритро-идных клеток усилена на стадии базофильных и по-лихроматофильных нормобластов, причем на стадии базофильных нормобластов снижается к 14 дню и не восстанавливается к концу испытаний до первоначального значения, вероятно, в связи с ускоренным выходом полихроматофилов в кровеносное русло. Исходный уровень пролиферации костно-мозговых
клеток до конца изучаемого периода не восстанавливается. Таким образом, стадия резистентности реакции адаптации началась к пятому дню изучаемого периода и полного своего развития достигла только к 7 дню вакцинации.
При действии вакцинного стресса отмечали следующие изменения картины крови у цыплят. Уровень гемоглобина достоверно (р < 0,001) снижается до концаэксперимента, минимальное значение (5,71 ±0,12 ммоль/л) отмечали через сутки после введения вакцины против ИЛТ. Количество эритроцитов достоверно увеличивается, хотя средний объем эритроцитов (МСУ) в ходе исследований меняется: через сутки и на 14 день после начала вакцинации снижается (на 14,2 и 20,7фл соответственно), а затем достоверно увеличивается, оставаясь высоким к концу эксперимента. Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) достоверно снижается (в 1,5 раза) и не восстанавливается до конца эксперимента. Неэффективный эритропоэз в костно-моз-говой кроветворной ткани и как следствие — эритро-цитоз могут служить показателем развивающейся стадии мобилизации стрессовой реакции.
Количество лейкоцитов периферической крови в ходе вакцинации достоверно возрастает до 5 дня исследований в 1,27 раза и составляет 41,75± ± 1,01х109/л, затем снижается (минимальное значение было на 14 день — 23,4±0,82х10°/л), что при рассмотрении во взаимосвязи с состоянием костно-моз-гового кроветворения можно считать признаком развивающейся депрессии кроветворения в результате действия вакцинного стресса.
Уровень сиаловых кислот как показатель стресса достоверно увеличивается в ходе иммунного ответа у цыплят до 5 дня исследований (41,26 ±2,18 усл. ед.) в 1,95 раза, к концу эксперимента становится ниже исходного значения, т.е. к 5 дню накапливаются продукты деструкции гликокалекса клеточных мембран эритроцитов и псевдоэозинофилов.
Максимально высокий лейкоцитоз определяли на 5 день эксперимента. Высокие показатели были получены за счет эозинофилов, моноцитов, а на 7 день — за счет увеличения числа зрелых псевдоэозинофилов. Псевдоэозинофилия в периферической крови на 5 день объясняется освобождением резерва этих клеток в костном мозге и дальнейшей компенсаторной активацией миелопоэза, но только к 14 дню произошло увеличение властных форм псевдоэозинофилов (активизировался пролиферативный пул псевдоэозинофилов).
Относительное и абсолютное количество лимфоцитов периферической крови в ходе эксперимента незначительно меняется, но начиная с 5 дня и по 14 активно происходит дифференцировка лимфоцитов и размножение клонов Т- и В-лимфоцитов, их становится 36,8±4,3% и 26,6± 1,17% соответственно, что в 1,65 раза больше исходного количества. Увеличивается и количество субпопуляций Т-лимфо-цитов, причем в большей степени Т-хелперов, - их стало в 3,44 раза больше по сравнению с исходным значением и составило 46,8±1,7%, а супрессоров 28,8±3,2% - в 2,27 раза (р<0,001). Количество вирусспецифических лимфоцитов (35,6±0,75%) возрастает к этому дню в 6,14 раза. Эти данные свидетельствуют о наступлении и развитии продуктивной фазы иммунной реакции. Коэффициент дифференцировки Т-лимфоцитов (ИРИ) в этот период достаточно высокий и достигает максимума (2,84±0,5) на 14 день после введения вакцины, что в 2,78 раза выше исходного значения (р < 0,001).
К концу эксперимента отмечали увеличение количества всех клеток эритроидного ряда (39,41 ±0,44%), что в 1,25 раза больше относительно исходных данных. Созревание эритроцитов замедляется на этапе базофильных нормобластов и усиливается на уровне полихроматофильных, но незначительно (вероятно, в организме недостаточно потенциальных резервов). Эти изменения отражают ослабление гемоглобинобразования, т.е. уровень гемоглобина в единице объема крови ниже исходного в 1,3 раза, МСН стало меньше в 1,68 раза при увеличении среднего объема эритроцита в 1,22 раза.
В этот период показатели, характеризующие функцию белого ростка костного мозга, отражают угнетение лейкопоэза й усиленное выведение клеток белого ряда в кровоток. Индекс созревания псевдоэозин офилов (0,41 ±0,03) ниже исходного в 2,73 раза. В периферической крови число лейкоцитов достоверно увеличено. Лимфопсевдоэозинофильный коэффициент (3,56±0,19) достоверно возрос в 1,34 раза, ИСЯ снижен в 2,71 раза. Лимфоцитарный индекс (0,12±0,01) достоверно ниже исходных данных.
Количественные показатели иммунокомпетент-ных клеток отражали снижение активности Т-звена лимфоцитов в основном за счет супрессоров, так как значение ИРИ высокое (2,82±1,6). Количество В-лимфоцитов (15,4±0,75%) и вирусспецифических лимфоцитов (16,7±0,49%) остается также на высоком уровне.
Таким образом, по показателям кроветворения, периферической крови и иммунного статуса при вакцинации против ИДТ 30-дневных цыплят проявляется стадийность развития стресса: до 5 дня испытаний - мобилизации, с 5 по 14 день - резистентности, на 14 день — истощения, и до 21 дня наблюдается постепенное восстановление гомео-стаза.
Динамика показателей кроветворения й иммунитета цыплят на фоне коррекции вакцинального стресса аскорбиновой кислотой
При изучении влияния аскорбиновой кислоты на костно-мозговое кроветворение получили следующие результаты. По сравнению с миелограммой цыплят, находящихся без дополнительной витаминной подкормки, у витаминизированных цыплят количество псевдоэозинофилов (6,69±0,46%) на фоне аскорбиновой кислоты стало меньше в 1,78 раза (р < 0,001). Но индекс созревания псевдоэозинофилов составил 1,28 ±0,04, что на 0,16 выше по сравнению с этим показателем у цыплят без аскорбиновой кислоты. В ряду клеток базофильного и эозинофильного ряда отмечалась тенденция к снижению в основном за счет незрелых форм эозинофилов. В целом грану-лоцитов (12,29±0,78%) вкостном мозге у 30-дневных цыплят на фоне применения аскорбиновой кислоты было достоверно (р < 0,001) меньше, чем у цыплят без неё, в 1,56 раза. Клеток моноцитарного ряда (1,12± ±0,14%) насчитывалось меньше в 4,96 раза ((р < 0,01). Таким образом, у 30-дневных цыплят на фоне аскорбиновой кислоты снижается костно-мозговой резерв клеточных факторов естественной защиты (микро-и макрофагов), по нашему мнению, за счет быстрого их перемещения в кровяное русло и в очаг воспаления. Несколько выше (на 1,62%) количество клеток лимфоидного ряда, в основном за счет зрелых лимфоцитов (35,82± 1,4%), которых насчитывали в этой группе цыплят в 1,42 раза больше. Властных клеток
(3,94 ±0,14) в 2,97 раза меньше, чем в костном мозге у цыплят без при-менения витамина С. Количество плазматических клеток (5,43±0,19%) оказалось достоверно (р^0,01) больше в 2,2 раза. Лимфопсевдоэозинофильный коэффициент (8,21 ±0,7.5) в 2,7 раза выше, чем у цыплят без аскорбата. Митотическая активность клеток (1,09±0,13%) ниже в 1,99 раза. Возможно, аскорбиновая кислота за счет интен - ифика-ции метаболических процессов стимулирует диф-ференцировку и выход гранулоцитов в периферическое русло для выполнения свойственных им функций.
Судя по результатам исследований пунктата костного мозга цыплят на фоне применения аскорбата, в белом ростке кроветворения активированы процессы дифференцировки клеток лимфоидного ряда, пролиферации плазматических клеток, что положительно сказывается на деятельности иммунной системы, как клеточного, так и гуморального ее звена.
Среди клеток эритроидного ряда у цыплят на фоне применения аскорбиновой кислоты отме-чается тенденция к снижению количества эритро-бластов, базофильных нормобластов, но достоверно (р < 0,01) больше насчитывалось полихромато-фильных (в 2,13 раза) и оксифильных нормобластов (в 1,68 раза). Индекс созревания нормобластов (0,62 ±0,01) выше, чем у цыплят первой группы, в 1,5 раза. Причем индекс созревания базофильных нормобластов (3,97±0,07) на 0,34, а полихромато-фильных нормобластов (1,37 ±0,03) в 2,53 раза выше, чем у цыплят первой группы. Аскорбиновая кислота улучшает усвоение железа и усиливает дифференциров-ку клеток эритрона и гемоглобинобразо-вателыгую его функцию. Лейкоэритробластический индекс {1,49±0,03) ниже в 1,4 раза, чем у цыплят без витамина С.
Таким образом, гемодепрессия у цыплят 30-дневного возраста на фоне применения аскорбиновой кислоты менее выражена.
Иммунный статус цыплят при даче витамина С отличался меньшим количеством Т- и В-лимфоцитов (на 4% и на2,3% соответственно), Т-хелперов — выше на 5,6%, Т-супрессоров -выше на 6,1% (р^0,01). Аскорбиновая кислота влияет на активизацию хел-перного звена лимфоцитов.
В периферической крови изменения коснулись в основном уровня гемоглобина (меньше на 3,04 ммоль/л), уменьшено количество эритроцитов (на 0,14x1012/л). На фоне аскорбиновой кислоты увеличивается средний объем эритроцитов, но снижены МСНи МСНС (на20,96пги21,2г/лсоответственно). Достоверность различий р < 0,05.
В динамике вакцинального процесса хорошо заметно, что все изучаемые показатели под влиянием витамина С изменялись следующим образом: высокие значения незначительно снижались, а низкие — увеличивались. Особое влияние аскорбиновая кислота оказывает на красный росток кроветворения, увеличивая исходное число эритроидных клеток. В динамике иммунного ответа отмечается увеличение количества клеток эритрона на 14 день эксперимента до 54,36± 1,65%, что на 23% больше, чем у цыплят первой группы. В периферической крови максимальное количество эритроцитов ((2,84±0,08)х х 1012/л) отмечали на 7 день вакцинации. Аналогично изменялся и уровень гемоглобина. МСН в ходе вакцинации снижался до 46,02± 1,36пг на 7 день исследований (р < 0.01). Индекс МСНС минимальным (27,84± 1,17г/л) был через сутки после введения вак-
цилы, б ходе вакцинации имел тенденцию к возрастанию, но оставался низким до конца эксперимента. У цыплят на фоне аскорбиновой кислоты динамика изменений в лейкограмме почти по всем параметрам повторяла лейкограмму цыплят первой группы. Отличия отмечены только по относительному количеству эозинофилов и базофилов, уровень которых стал максимальным (2,1 ±1,48% и 3,2 ±0,81 % соответственно на 14 и 7 день изучаемого периода, р < 0,01, по сравнению с 1,7±0,51% и 1,8±0,51% соответственно на 5 и 2 день у цыплят первой группы). Вакцинация против ИЛТ на фоне аскорбиновой кислоты проявляется как стресс для организма 30-дневных цыплят, но сила его значительно снижена и не может считаться чрезмерной, вызывающей истощение.
Аскорбиновая кислота оказывает иммуно-коррегирующее действие, незначительно снижая количество Т- и В-лимфоцитов, но увеличивает количество Т-супрессоров. Иммунорегуляторный индекс меняется незначительно. Оказывая существенное влияние на метаболические процессы, аскорбат несколько снижает высокие показатели состояния организма и увеличивает низкие, нормализуя гомеостаз, поэтому может служить антистрессовым препаратом при иммунизации цыплят,
На основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы:
1. При изучении миелограммы 30-дневных цыплят выявлено преобладание в костномозговом пунктате клеток белого ростка кроветворения, в основном лимфоидного ряда. Лейкоэритробластический индекс (2,12±0,07). Среди гранулоцитов преобладающими были клетки псевдоэозинофильного ряда, индекс созревания псевдоэозинофилов (1,12±0,1) и эозинофилов (2,85±0,24) показывает задержку дифференцировки клеток, малый резерв зрелых форм. Клетки эритроидного ряда представлены в основном базофильными нормобластами. Индекс созревания нормобластов отражает задержку дифференцировки клеток эритрона.
2. Стадия мобилизации стресса в ходе вакцинации 30-дневных цыплят против инфекционного ларииготрахеита характеризуется гемодепрес-сией миелоидного и эритроидного ростка кроветворения костного мозга. В стадию резистентности происходит дальнейшее угнетение миелопоэза, лимфопоэза, но достоверно активизируется диф-ференцировка и транслокация клеток белого ростка в кровяное русло. Реципрокно усиливается эри-тропозз. Стресс усиливает исходную гипоплазию миелоидного ростка.
3. Изучение гемограммы 30-дневных цыплят показало соответствие количества лейкоцитов физиологической норме, количество эритроцитов достоверно меньше. Средний объем эритроцита (122,7±0,67фл), среднее содержание гемоглобина в эритроците (79,2±9,86пг), средняя концентрация гемоглобина в эритроцитарной массе (64,51 ±2,17г/л) приняты за физиологическую норму для этого возраста цыплят. Дифференциальная характеристика лейкоцитов и рассчитанные лейкоцитарные индексы показали недостаточность клеточных факторов доиммунной и преобладание лимфо-цитопосредованной защиты, наличие гиперхромных макроэритроцитов.
4. Под влиянием стресса - вакцинации у 30-дневных цыплят против инфекционного ларииготрахеита прослеживается стадийность изменений в периферической крови. До 5 дня изучаемого периода
достоверно снижаются кислородсвязывающие свойства крови, но увеличивается количество форменных элементов, что свидетельствует об окончании мобилизации и о начале стадии резистентности стрессовой реакции с отставанием полноценного эритропоэза. Лейкограмма показала сдвиг ядра влево, снижение ИСАК, ЛИИ, что свидетельствует о снижении реактивности организма при постепенном усилении факторов клеточной защиты. Во вторую стадию отмечали одинаковую динамику изменений кислородпоставляющих факторов: увеличение к 7 дню и в дальнейшем - снижение. Лейкограмма отражает сдвиг ядра вправо, ИСАК увеличивается, повышается ЛИИ в 2,25 раза, что свидетельствует об усилении реактивности организма, активизации микро- и макрофагоцитоза. К концу эксперимента постепенно ликвидируется антигенное начало в организме цыплят после введения вакцины и начинается восстановление нарушенного метаболизма и гомеостаза.
5. Изучение иммунограммы 30-дневных цыплят показало, что большую часть лимфоцитов в периферической крови составляли Т-лимфоциты, среди них преобладали хелперы. При этом ИРИ составил 1,07±0,05. В-лимфоцитов насчитывали 16±0,79% (4,24±0,24Г/л), что свидетельствует о недостаточности иммунной защиты.
6. При изучении иммунореактивности в ходе вакцинации цыплят выявлено, что индуктивная фаза иммунного ответа по времени совпадала со стадией мобилизации стрессовой реакции, характеризовалась достоверным снижением количества всех иммунокомпетентных клеток, но активизацией пролиферации вирусспецифических клеток, ИРИ стал выше нормы, что свидетельствует о нарастании хелперной функции лимфоцитов. Продуктивная фаза иммунного ответа по времени проявления совпадала со стадией резистентности стрессовой реакции, сопровождалась снижением супрессорного звена лимфоцитов и высокой иммунной лимфо-цитопосредованной активностью орг анизма. К концу исследований количество клеточных компонентов иммунной системы достоверно уменьшается, что свидетельствует о продолжении иммунного ответа в виде антителообразования и лизиса клеток-мишеней.
7. Включение в корм аскорбиновой кислоты 30-дневным цыплятам вызывает снижение выраженности реакций доиммунного и иммунного воспаления. В периферической крови уменьшает явную лейкоцитарную реакцию количество сиаловых кислот. В костном мозге способствует выходу эозинофильных, лимфоидных клеток из синусов, в стадию резистентности активизируется эритропоэз, усиливается созревание псевдоэозинофилов, эозинофилов, нормобластов, в основном на стадии базофильных нормобластов, выравнивает ответную реакцию организма цыплят на стресс.
Библиографический список
1. Болотников И. А. Стресс и иммунитет у птиц / И.А. Болотников, B.C. Михкиева, Е.К. Олейник. - Л. : Наука, 1983. -118 с.
2. Венгеренко Л. А. Актуальные ветеринарные проблемы птицеводства и их решение / Л.А. Венгеренко // БИО. -2003. - № 4. - С. 14-16.
3. Венгеренко Л, А. Эпизоотическая обстановка в птицеводстве / Л.А. Венгеренко // Птицеводство. - 2004. - № 6. -С. 21-23.
4. Верхолетов В. А. Морфология клеток костного мозга и возрастные изменения миелограммы у нормально развивающихся цыплят / В. А. Верхолетов // Уч. зап. Казан, вет. инта. 1965. - Т. 97. - 345 с.
5. Горизонтов П.Д. Стресс и система крови / П.Д. Горизонтов, О.И. Белоусова, М.И. Федотова. - М.: Медицина, 1990. - 282 с.
6. Карпуть И.М. Профилактика иммунных дефицитов и желудочно-кишечных болезней у цыплят-бройлеров /
И.М. Карпуть, М.П. Бабина // Ветеринария. - 2000. - N 11. - С. 41-44.
СТАРУН Алла Станиславовна, кандидат биологических наук, старший преподаватель. БЕРЕНДЯЕВА Людмила Александровна, кандидат биологических наук, доцент.
Статья пиступила в редакцию 17.05.06. © Старун А. С., Берендяева Л. А.
УДК 6П.73-018 636 5 р> ю> ПАНФИЛОВ
Омский государственный аграрный университет
ИНТЕНСИВНОСТЬ РОСТА И МОРФОЛОГИЯ ГРУДНЫХ мышц БРОЙЛЕРОВ_
Статья посвящена изучению микроструктуры мышечной ткани, автор анализировал микрометрические параметры мышечной ткани - площадь поперечного сечения мышечных волокон и количество ядер. Показано, что микрометрические показатели имеют тесную связь с интенсивностью прироста мышц, полученные данные можно использовать для прогнозирования мясной продуктивности бройлеров, коррекции особенностей откорма.
В последние два десятилетия произошли значительные изменения в развитии бройлерного птицеводства. Это связано с получением гибридов с высокой мясной продуктивностью, прогрессом з технологии убоя и переработки птицы, почти повсеместным внедрением в крупных птицеводческих хозяйствах современных убойных линий для глубокой переработки мяса цыплят, улучшением состава рациона и введением в комбикорма различных добавок, повышенным спросом населения на высококачественное мясо бройлеров [1 ].
Прирост мышечной ткани бройлеров в возрастной динамике непостоянен, это зависит от ряда факторов — заложенной в генотипе мясистости породы, условий кормления и содержания, физиологического состояния птицы [3]. Очевидно, что структура мышечной ткани в эти периоды также претерпевает изменения.
Целью нашего исследования являлось определение гистострухтуры грудных мышц бройлеров при высокой и низкой интенсивности прироста.
Объектом для изучения были поверхностная большая грудная мышца - ш. pectoralis superficialis major и глубокая грудная (надкоракоидная, подключичная) мышца - m. pectoralis profundus, взятые от тушек бройлеров в разные возрастные периоды. Эти мышцы являются самыми крупными, определяющими по массе грудное филе - самую ценную часть куриной тушки [2,4]. Массу мышц определяли в суточном, 1-,2-,3-,5-6-,8-, 10-недельном возрасте. Для гистологического исследования были взяты кусочки поверхностной и глубокой грудных мышц из средней части мускулов. Материал фиксировали 5% водным раствором формальдегида, уплотнение проводили в парафине. Окрашивали гистологические срезы гематоксилин-эозином и по Эйнарсону. С помощью
сетки Ав гандилова и окуляр-микрометра определяли среднюю площадь поперечного сечения мышечных волокон (мкм2) и количество ядер на поперечном сечении мышечного волокна. Для оценки механизма роста мышечной ткани вычисляли коэффициент саркоплазмы (Кс) — это отношение площади поперечного сечения мышечного волокна к коли-чествув нем ядер (мкм2). Полученные статистические данные сравнивали с помощью критерия достоверности Стьюдента.
Согласно полученным весовым показателям (табл. 1), с возрастом бройлеров происходит увеличение относительной массы грудных мышц. За исследуемый период относительная масса поверхностной большой грудной мышцы увеличивается на 12,93%, глубокой грудной мышцы - на 3,49%. В течение первой недели жизни цыпленка (табл. 2) масса поверхностной грудной мышцы увеличивае тся в 3,43 раза, во вторую неделю в 2,75 раза. За третью неделю отмечено максимальное увеличение массы поверхностной грудной мышцы более чем в 4,70 раза. За этот же период глубокая грудная мышца увеличивается в 4,35 раза. Необходимо отметить, что в первые три недели масса поверхностной грудной мышцы увеличивается в 44 раза, а масса глубокой грудной мышцы в 22 раза.
Анализ динамики весовых показателей грудных мышц показывает, что максимальная интенсивность прироста грудных мышц наблюдается в течение третьей недели жизни цыпленка (табл. 2). Однако за 4-ю неделю кратность увеличения массы мышц уменьшается незначительно. В более старшем возрасте (с 42-х до 70-и суток) интенсивность прироста мышечной массы значительно уменьшается и за две недели увеличивается менее чем в два раза. Кратность увеличения абсолютной массы
