CC BY
12
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
87
ООО «МБЦ «Генериум», Москва
Введение. Хемокиновый рецептор CXCR4 и его лиганд SDF-1 экспрессируются во многих типах рака. CXCR4 на опухолевых клетках направляет метастазирование к местам высокой экспрессии SDF-1. CXCR4/SDF-1 также действуют локально, паракринно и аутокринно, усиливая рост опухоли и воспалительную нагрузку. SDF-1, секрети-руемый опухолью и ее микроокружением, увеличивает выживаемость опухоли и модулирует трафик иммунных клеток в ее окружение. Поэтому CXCR4 является привлекательной мишенью для иммунотерапии рака с помощью антител. Основываясь на результатах партнерской компании Affitech AS, МБЦ «Генериум» ведет дальнейшую разработку и доклинические исследования антитела 9N10, антагониста CXCR4.
Цель исследования — доклиническая разработка полностью человеческого рекомбинантного антитела, инги-бирующего CXCR4, и оценка его терапевтического потенциала по онкологическим показаниям.
Материалы и методы. Для создания изотипов IgG1 и IgG4 антитела 9N10 использовали стандартные методы молекулярного клонирования. Рекомбинантные антитела экспрессировались в клетках линии CHO. Антитела были выделены и очищены с помощью 2-стадийной хроматографии и диализа. Связывание антител с нативным CXCR4 определяли проточной цитометрией. Ингиби-рование внутриклеточного сигнального каскада CXCR4 оценивали измерением выброса внутриклеточного кальция в ответ на лиганд. Хемотаксис CXCR4+ раковых клеток in vitro определялся в камерах Бойдена. Для определения терапевтического потенциала 9N10 in vivo использовались 2 модели: 1) экспериментальная сингенная модель метастазирования мышиной меланомы В16 при инъекции раковых клеток в хвостовую вену; б) мышиная сингенная ортотопическая опухоль молочной железы 4Т1. Количество и тип клеток иммунной системы, инфильтрировавших в опухоль, оценивали методом многоканальной проточной цитометрии гомогенизированной опухоли при некропсии.
Результаты. Показано, что антитело 9N10 является высокоселективным ингибитором CXCR4, вытесняет его лиганд и блокирует его внутриклеточный сигнальный каскад. In vitro 9N10 блокирует миграцию (хемотаксис) нескольких видов раковых клеток (например, лимфомы CCRF-CEM и карциномы 4Т1), не вызывая при этом апоптоз CXCR4+-клеток. В мышиных сингенных раковых моделях монотерапия 9N10 уменьшает количество легочных метастазов CXCR4+-меланомы B16 и увеличивает количество цито-токсических лимфоцитов, инфильтрирующих в опухоль молочной железы 4T1.
Заключение. Антитело 9N10 является перспективным кандидатом для дальнейших доклинических и возможных клинических испытаний в области иммунотерапии солидных опухолей. Ингибирование сигнального каскада CXCR4 с помощью 9N10 может иметь наибольший терапевтический эффект в комбинации с ингибиторами иммунного чекпойнта, поскольку блокирование CXCR4 усиливает проникновение цитотоксических Т-лимфоцитов в опухоль.
Л.В. Плотникова1, А.М. Поляничко2, М.В. Успенская1,
А.Д. Гарифуллин3, С. В. Волошин3
ОСОБЕННОСТИ ИНФРАКРАСНЫХ СПЕКТРОВ
СЫВОРОТКИ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ
С МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
ФГАОУВО «Санкт-Петербургский НИУ ИТМО»;
Международный научно-исследовательский институт
«Биоинженерия», Санкт -Петербург;
2ФГБОУ ВО СПбГУ, Санкт-Петербург;
3ФГБУ«Российский НИИ гематологии и трансфузиологии
ФМБА», Санкт-Петербург
Введение. Множественная миелома (ММ) составляет около 1 % всех злокачественных новообразований и чуть более 10 % гемобластозов. Наиболее частым симптомом ММ являются боли в костях, которые отмечаются более чем у 60 % пациентов на момент диагностики. Одним из критериев диагностики и оценки эффективности лечения больных ММ является определение уровня патологического белка в сыворотке крови и/или моче. Примерно у 80 % больных ММ методом электрофоретического анализа белков сыворотки крови можно выявить одиночный узкий пик или локализованную полосу (М-компонент) патологического белка, который вырабатывается кло-нальными плазматическими клетками. При этом в сыворотке крови развивается выраженная диспротеинемия. Гипогаммаглобулинемия присутствует только в 10 % случаев ММ, в то время как у оставшихся 90 % пациентов имеются более сложные нарушения соотношения белков сыворотки крови.
Материалы и методы. В нашем исследовании мы применили комбинацию электрофоретического разделения, спектральных подходов и термального анализа для выявления ключевых различий в белковом составе сыворотки крови, ее термального поведения и вторичной структуры белков для образцов, полученных из сыворотки крови больных ММ и здоровых доноров.
Результаты. На сегодняшний день, молекулярные механизмы возникновения болезни остаются слабо изученными. Среди новых и потенциально перспективных подходов к лечению ММ особый интерес представляют направления, основанные на изменениях структуры белков и нарушении процессов фолдинга белков в клональных плазматических клетках. В данной работе методами электрофореза высокого разрешения, рефрактометрии и инфракрасной спектроскопии мы провели сравнительный анализ вторичной структуры белков в составе плазмы крови у пациентов с ММ и здоровых доноров. Анализ полученных данных показывает, что по сравнению с образцами сыворотки крови здоровых доноров в пробах ММ-IgG в структуре белков сыворотки крови наблюдается уменьшение доли а-спиральных участков в среднем на 15—20 %. Уменьшение степени а-спиральности сопровождается также повышением количества межмолекулярных Р-слоев в среднем на 10—15 %. Иная картина наблюдается для образца MM—IgA. В этом случае среднее содержание основных элементов вторичной структуры в белках сыворотки крови близко к таковому в образцах, полученных от здоровых доноров. Увеличение доли межмолекулярных Р-слоев в структуре белков сыворотки крови больных ММ-IgG свидетельст-
88
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
вует об увеличении роли межмолекулярных белок-белковых взаимодействий, стабилизирующихся за счет формирования межмолекулярных ß-структур.
Заключение. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что избыток тяжелых или легких цепей в сыворотке крови приводит к их взаимодействию между собой, что проявляется в спектрах как увеличение доли межмолекулярных ß-структур. Однако данные инфракрасной спектроскопии не дают прямого ответа на вопрос о том, взаимодействуют ли «избыточные» моноклональные белки только между собой или же они могут также связываться с полноразмерными иммуноглобулинами. Мы предполагаем, что имеют место оба типа взаимодействия.
С.А. Полозкова, В.А. Горбунова, Н.Ф. Орел, А.Е. Кузьминов, А.С. Одинцова, Г.С. Емельянова, А.А. Маркович ЭФФЕКТИВНОСТЬ И ТОКСИЧНОСТЬ КОМБИНАЦИИ АРАНОЗЫ С ДОКСОРУБИЦИНОМ ПРИ МЕТАСТАТИЧЕСКИХ НЕЙРОЭНДОКРИННЫХ НЕОПЛАЗИЯХ
ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. Нейроэндокринные неоплазии (НЭН) — новообразования, которые происходят из клеток диффузной эндокринной системы и способны продуцировать различные биологически активные вещества. Ограниченный спектр эффективных и доступных препаратов для лечения метастатических форм, их невысокая эффективность и проблема переносимости диктуют необходимость поиска и изучения новых эффективных режимов химиотерапии.
Цель исследования — оценить эффективность и безопасность режима химиотерапии араноза + доксорубицин в 1-4-й линиях лечения метастатических НЭН различной локализации.
Материалы и методы. В исследование были включены 26 больных с метастатическими НЭН различной локализации (панкреатические НЭН — у 13 пациентов, непанкреатические - у 12 и НЭН без выявленного первичного очага — у 1) в возрасте от 23 до 76 лет (медиана 48 лет), получивших режим араноза 500 мг/м2 внутривенно в 1-й и 2-й дни + доксорубицин 40 мг/м2 внутривенно на 3-й день, каждые 3—4 нед. Высокодифференцированные ней-роэндокринные опухоли (ВД НЭО) диагностированы у 21 пациента, низкодифференцированные нейроэндо-кринные карциномы (НД НЭК) — у 4 больных. В процессе исследования оценивали частоту объективного ответа (по шкале RECIST версия 1.0), биохимический ответ (нормализация/снижение на 50 % и более уровня хромогра-нина А), медиану выживаемости без прогрессирования (по методу Каплана — Майера) и токсичность (шкала NCI— CTCAE, версия 3.0).
Результаты. Суммарно 26 больным было проведено 163 курса химиотерапии. Объективный ответ зарегистрирован у 19 % (5/26) пациентов, из них у 4 больных диагностированы ВД НЭО поджелудочной железы и у 1 — НД НЭК тимуса; стабилизация опухолевого процесса — у 69 % (18/26); прогрессирование — у 12 % (3/26). У 63 % (12/19) пациентов зафиксирован биохимический ответ. Отдаленные результаты лечения оценены у 23 больных, у 3 проследить течение заболевания не удалось. Медиана выживае-
мости без прогрессирования составила 15 мес (95 % доверительный интервал 4,3—24). Из побочных явлений чаще всего отмечалась гематологическая токсичность — преимущественно I и II степени. Токсичность III—IV степени наблюдалась у 8 пациентов: тромбоцитопения — у 1, нейтропения — у 4, лейкопения — у 2 и гипербилирубине-мия — у 1.
Заключение. Применение режима араноза + доксорубицин при метастатических НЭН обеспечивает хороший контроль над ростом опухоли (88 %) и не сопровождается выраженной клинически значимой токсичностью.
Н.В. Полуконова1, Н.А. Наволокин1, Д.А. Мудрак1, А.И. Прилепский2, А.А. Широков2, А. Б. Бучарская1, Г.Н. Маслякова1
ИССЛЕДОВАНИЕ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭКСТРАКТА АВРАНА ЛЕКАРСТВЕННОГО И КВЕРЦЕТИНА НА КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЕ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ
1ГБОУ ВПО «СГМУ им. В. И. Разумовского» Минздрава России, Саратов; ФГБУН ИБФРМРАН, Саратов
Цель исследования — сравнить цитотоксическую активность экстракта аврана лекарственного и отдельно входящего в его состав кверцетина в экспериментах in vitro.
Материалы и методы. Для исследования использован флавоноидсодержащий экстракт из сырья аврана лекарственного, полученный разработанным нами способом, химический состав которого описан ранее (количество кверцетина в сухом остатке экстрактивных веществ (получаемого из 10 г сухой травы аврана), установленное методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, составило не менее 350 мкг). Исследование проводили на клеточной культуре рака шейки матки HeLa из крио-банка коллекции клеточных культур Института цитологии РАН. Культивирование выполняли в пластиковых флаконах в среде RPMI-4 (10 % эмбриональной сыворотки, ген-тамицин, ампициллин, амфотерицин). Эксперименты проводили в культуральных планшетах. Контролем служили клетки в питательной среде без добавления экстракта, выросшие в течение суток. Анализировали следующие концентрации экстракта аврана: 24; 12; 6; 3; 1,5; 0,75; 0,375 мг/мл и кверцетина: 0,1584; 0,0792; 0,0396; 0,0198; 0,0099; 0,00495; 0,002475 мг/мл, соответствующие его содержанию в экстракте. В качестве красителя использовали йодистый пропидий, проникающий в клетки через поврежденные мембраны.
Результаты. При концентрации экстракта аврана 0,375 и 0,75 мг/мл процент погибших клеток достоверно увеличивается (p < 0,005) в 5—6 раз, а при дальнейшем увеличении концентрации в 2 раза (1,5 мг/мл) — в 11 раз. При минимальной из исследованных концентраций кверцетина (0,002475 мг/мл) процент погибших клеток достоверно меньше, чем в контрольной группе. С повышением концентрации кверцетина процент погибших клеток достоверно увеличивается в 2—4 раза.
Заключение. Таким образом, при низких концентрациях кверцетин проявляет протекторные свойства и уменьшает процент погибших клеток HeLa, при увеличении
