CC BY
23
http://bloodjournal.ru/ V Евразийский гематологический форум 523
за (ХЛЛ) являются B-клетки, к анергии T-клеток может приводить изменение экспрессии на опухолевых клетках костимулирующих молекул, например CD80/CD86, PD-L1 и FAS-L, отвечающих за негативную регуляцию активации T-клеток и индукцию апоптоза. При этом экспрессия PD-1 и FAS на Т-клетках может также отличаться от нормальной и отражать их состояние анергии при ХЛЛ.
Материалы и методы. В исследование включено 7 пациентов с ХЛЛ (3 — на этапе прогрессирования, 4 — в дебюте заболевания). Мужчин было 4, женщин — 3, медиана возраста — 64 года (диапазон 55-72 года). Контрольная группа — 29 здоровых доноров. Исследовали экспрессию CD80, CD86, PD-1, PD-L1, FAS на опухолевых В-клетках, а также PD-1, PD-L1, FAS на поверхности CD4+ и CD8+ Т-клеток периферической крови пациентов с ХЛЛ и здоровых доноров. Периферическая кровь больных ХЛЛ и здоровых доноров изучалась на проточном цитометре BD FACSCanto II с использованием панели антител, включающей CD80 FITC, CD86 APC, CD274 (PD-L1) PE-Cy7, CD279 (PD-1) FITC, CD95 (FAS) PE-Cy7, CD19 PE, CD5 PerCP, CD4 APC-Cy7, CD8 PerCP. Данные представлены в виде среднего ± стандартная ошибка среднего. Статистическая значимость различий средних определялась с помощью критерия Манна—Уитни.
Результаты. Доля В-лимфоцитов CD80+ доноров была статистически значимо выше, чем у больных ХЛЛ: 20,5 ± 1,7 vs 7,4 ± 4,7 % (p = 0,01). Доля FAS+ среди опухолевых В-клеток статистически значимо ниже, чем на В-клетках здоровых доноров: 6,9 ± 2,4 vs 14,1 ± 2,4 % (p = 0,014). Статистически значимых различий среди В-клеток CD86+, PD-1+, PD-L1+ у доноров и у больных ХЛЛ не выявлено. У пациентов с ХЛЛ доля Т-клеток PD-1+ статистически значимо выше, чем у здоровых доноров, как среди клеток CD8+ (30,4 ± 5,7 vs 16,9 ± 1,3 %; р < 0,001), так и клеток CD4+ (34,8 ± 4,8 vs 10,8 ± 0,9 %; р < 0,001). Доля Т-клеток PD-L1+ у больных ХЛЛ и доноров статистически значимо не различалась.
Выводы. Меньшая доля опухолевых В-клеток FAS+ у больных ХЛЛ свидетельствует об их уклонении от FAS-индуцированного апоптоза. Снижение доли опухолевых клеток CD80+ может способствовать нарушению формирования второго костимулирующе-го сигнала для Т-клеток. На Т-лимфоцитах пациентов обнаружена более высокая экспрессия PD-1 по сравнению с Т-лимфоцитами доноров, но не PD-L1, что указывает на преобладание негативной регуляции Т-клеточного звена. Степень анергии и иммунного дисбаланса может служить фактором прогноза и обоснованием применения таргетной иммунотерапии.
Конфликты интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Источники финансирования. Работа не имела спонсорской поддержки.
regulation of T-cell activation and induction of apoptosis. The expression of PD-1 and FAS on T-cells may also differ from normal and reflect their non-responsiveness in CLL.
Materials & Methods. The study included 7 patients with CLL (3 patients had disease progression, 4 patients had newly diagnosed disease). The demographic characteristics were the following: 4 males and 3 females; the median age was 64 years (range 55-72 years). The control group consisted of 29 healthy participants. The expression of CD80, CD86, PD-1, PD-L1, FAS on tumor B-cells, as well as the expression of PD-1, PD-L1, FAS on the surface of CD4+ and CD8+ T-cells of peripheral blood of patients with CLL and healthy donors were studied. Peripheral blood of CLL patients and healthy controls was studied with a BD FACSCanto II flow cytometry using an antibody panel comprising CD80 FITC, CD86 APC, CD274 (PD-L1) PE-Cy7, CD279 (PD-1) FITC, CD95 (FAS) PE-Cy7, CD19 PE, CD5 PerCP, CD4 APC-Cy7, CD8 PerCP. The data were presented as the mean ± standard error of the mean. The statistical significance of the mean differences was determined using the Mann-Whitney test.
Results. The proportion of CD80+ B-lymphocytes in controls was significantly higher compared to CLL patients: 20.5 ± 1.7 vs 7.4 ± 4.7 % (p = 0.01). The proportion of FAS+ among tumor B-cells was statistically significantly lower compared to B-cells of the healthy controls: 6.9 ± 2.4 vs 14.1 ± 2.4 % (p = 0.014). There were no statistically significant differences among CD86+ B-cells, PD-1+, PD-L1+ in the control group and in CLL patients. In patients with CLL, the proportion of PD-1+ T-cells was significantly higher compared to the controls that in the healthy controls: both among CD8+ cells (30.4 ± 5.7 vs 16.9 ± 1.3 %, p < 0.001) and CD4+ cells (34.8 ± 4.8 vs 10.8 ± 0.9 %, p < 0.001). The proportion of PD-L1+ T-cells in patients with CLL and controls was similar.
Conclusions. A smaller proportion of tumor B-cells FAS+ in CLL patients indicates their evasion from FAS-induced apoptosis. Reducing the proportion of CD80+ cancer cells may interfere with the formation of a second costimulatory signal for T-cells. Higher PD-1 expression was found on T-lymphocytes of patients compared to T-lymphocytes in controls, but not PD-L1, indicating a predominance of negative regulation of the T-cell link. The degree of anergy and immune imbalance can serve as a prognostic factor and the rationale for the use of targeted immunotherapy.
Conflicts of interest. The authors declare no conflicts of interest.
Funding. The study received no external funding.
ОСОБЕННОСТИ ИММУНОФЕНОТИПА ОПУХОЛЕВЫХ ПЛАЗМОЦИТОВ КОСТНОГО МОЗГА И ЦИРКУЛИРУЮЩИХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЕ
К.А. Белоусов, Ю.Ю. Чуксина, Т.А. Митина, А.К. Голенков, А.Н. Митин, С.В. Шевелев
ГБУЗ МО «Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. Н.Ф. Владимирского», Москва, Российская Федерация
Цель. Изучить и сопоставить клинические особенности множественной миеломы (ММ), а также иммунофенотипические особенности опухолевыхплазматических клеток в костном мозге (ПК
IMMUNOPHENOTYPES OF TUMOR BONE MARROW PLASMA CELLS AND CIRCULATING PERIPHERAL BLOOD PLASMA CELLS IN MULTIPLE MYELOMA
KA Belousov, YuYu Chuksina, TA Mitina, AK Golenkov, AN Mitin, SV Shevelev
NF Vladimirsky Moscow Regional Scientific Research Institute, Moscow, Russian Federation
Aim. To correlate the clinical forms of multiple myeloma (MM) with the immunophenotype of tumor bone marrow plasma cells (BMPC) and circulating peripheral blood plasma cells (PBPC).
Materials & Methods. The study included 19 patients with MM (14 with primary MM, 5 with relapsing/refractory MM; aged 51-85 years;
V Евразийский гематологический форум
КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОГЕМАТОЛОГИЯ
КМ) и циркулирующих опухолевых клеток периферической крови (ЦОК ПК).
Материалы и методы. Обследовано 19 пациентов с ММ (с первичной — 14, с резистентностью/рецидивами — 5) в возрасте 5185 лет (медиана 65 лет), ISS 3. У 2 пациентов имел место плазмо-клеточный лейкоз. Пациенты с первичной ММ получали терапию по протоколу VMP, с резистентностью/рецидивами — RVP. Всем пациентам проводилось иммунофенотипическое исследование ПК КМ и ЦОК ПК методом 4-цветной проточной цитометрии с использованием панели моноклональных антител, включающей CD38, CD138, CD45, CD56, CD19, CD20, CD117, CD27, CDTk, CD33 (Becton Dickinson, США).
Результаты. У пациентов с впервые диагностированной ММ выявлена яркая экспрессия CD56, CD81, CD27, CD79 как на ПК КМ, так и на ЦОК ПК. Однако статистически значимыми оказались различия по CD11c (интегриновая молекула адгезии) на ЦОК ПК по сравнению с опухолевыми клетками КМ (p < 0,05). В отличие от поверхностных маркеров ПК КМ на ЦОК ПК у всех пациентов наблюдались снижение уровня CD38+bright (р < 0,05), клеток с коэкспрессией CD38++/CD138+ (р > 0,01) и выраженная коэкспрес-сия CD38++/CD138-. Отмечается статистически значимо меньшее количество клеток с экспрессией CD33 (p < 0,05). Число CD45-позитивных ЦОК ПК значительно выше, чем на ПК КМ. Выявлена выраженная экспрессия рецептора фактора стволовых клеток CD117 на ЦОК ПК у пациентов с плазмоцитомами и в стадии рецидива (p < 0,05).
Заключение. Таким образом, первые результаты этого продолжающегося исследования свидетельствуют о том, что ЦОК ПК являются субклоном опухолевых плазматических клеток. Они имеют менее зрелый фенотип в сравнении с ПК КМ, характеризуются менее выраженной экспрессией молекул адгезии, что, вероятно, объясняет их меньшую зависимость от стромальных элементов костного мозга, способность к циркуляции в периферической крови и образованию экстрамедуллярных поражений с генерализацией опухоли. В критериях ответа на лечение ММ этот показатель не учитывается. Тем не менее опухолевые клетки, несущие маркер CD38+++, представляют опасность с точки зрения развития рецидивов и метастазирования при ММ. Они могут быть мишенью для таргетной противоопухолевой терапии.
Конфликты интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
Источники финансирования. Работа не имела спонсорской поддержки.
median age 65 years) with ISS 3. Two patients had plasma cell leukemia. Patients with primary multiple myeloma received therapy according to the VMP protocol, patients with relapsing/refractory MM received therapy according to the RVP protocol. In all patients immuno-phenotypic evaluation of BMPC and PBPC was performed using 4-color flow cytometry with a panel of monoclonal antibodies including CD38, CD138, CD45, CD56, CD19, CD20, CD117, CD27, CD11c, CD33 (Becton Dickinson, USA).
Results. In patients with newly diagnosed MM, bright expression of CD56, CD81, CD27, CD79 was detected both in BMPC and in PBPC. However, differences in CD11c (integrin adhesion molecule) were found to be statistically significant in PBPC compared to BMPC (p < 0.05). In contrast to the surface markers of BMPC, all patients had a decrease in the level of CD38+bright (p < 0.05), cells with coexpression of CD38++/ CD138+ (p > 0.01) and expressed coexpression of CD38++/CD138- in PBPC. A statistically significantly smaller number of cells with CD33 expression (p < 0.05) was noted. The number of CD45-positive BMPC was significantly higher compared to the PBPC. Significant expression of the receptor of the CD117 stem cell factor on PBPC in patients with plasmacytomas and in patients with relapses (p < 0.05) was revealed.
Conclusion. Thus, the first results of this ongoing study indicate that PBPC are a subclone of tumor plasma cells. They have a less mature phenotype compared to BMPC; they are characterized by less pronounced expression of adhesion molecules, which probably explains their lesser dependence on the stromal elements of the bone marrow, the ability to circulate in the peripheral blood and the formation of extramedullar lesions with tumor generalization. This indicator is not taken into account in the analysis of response to MM treatment. Nevertheless, cancer cells carrying the CD38+++ marker are dangerous in terms of MM relapse and metastasis. They can be treated with targeted antitumor therapy.
Conflicts of interest. The authors declare no conflicts of interest.
Funding. The study received no external funding.
РЕЗУЛЬТАТЫ ЛЕЧЕНИЯ РАСПРОСТРАНЕННЫХ СТАДИЙ ЛИМФОМЫ ХОДЖКИНА ПО ПРОТОКОЛУ ЛХ-2007 НИИ ДЕТСКОЙ ОНКОЛОГИИ И ГЕМАТОЛОГИИ ФГБУ«НМИЦ ОНКОЛОГИИ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА»
Е.С. Беляева
НИИ детской онкологии и гематологии ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Российская Федерация
Актуальность и цели. Лимфома Ходжкина (ЛХ) у детей является одним из наиболее успешно поддающихся лечению онкологических заболеваний. Однако у 20 % пациентов с распространенными стадиями развиваются рецидивы. В связи с этим интенсификация терапии распространенных стадий заболевания представляется актуальной в настоящее время. Кроме того, важное значение имеет возможность снижения дозы лучевой терапии
TREATMENT RESULTS OF THE ADVANCED STAGES OF HODGKIN'S LYMPHOMA BY THE flX-2007 PROTOCOL OF THE RESEARCH INSTITUTE OF PEDIATRIC ONCOLOGY AND HEMATOLOGY OF NN BLOKHIN NATIONAL MEDICAL CANCER RESEARCH CENTER
ES Belyaeva
Research Institute of Pediatric Oncology and Hematology, NN Blokhin National Medical Cancer Research Center, Moscow, Russian Federation
Background & Aims. Hodgkin's lymphoma (HL) in children is one of the most successfully curable oncological diseases. However, 20 % of patients with advanced stages have relapses. Therefore, the intensification of therapy of advanced stages of the disease is crucial. In addition, it is important to be able to reduce the dose of radiation therapy (RT) or to cancel it in girls in order to reduce the likelihood of developing second tumors.
