Особенности иммунофенотипа лимфоидного клона при В-хроническом лимфолейкозе и В-клеточной пролимфоцитарной лимфоме в стадии лейкемизации Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

водили на проточном цитофлюориметре FACScan но программе Simulset с автоматическим поиском лимфоцитарного гейта и, при необходимости, — с последующей ручной коррекцией.

Использовали моноклональные антитела фирмы BECTON DICKINSON с двойной флюоресцентной меткой — РЕ и FITC (наборы Simultest IMK Plus, Acute Leukemia) для определения экспрессии и коэкспрессии CD-антигенов: CD14/CD45, CD3/CD19, CD4/CD8, CD3' HLA-DR, CD 16/CD56/CD3, CD 1 О/CD 19, CD20/CD5, CD3/ CD22, CD7/CD33, HLA-DR/CD13, CD3/CD4, CD3/CD8, CD8/HLA-DR, CD57/CD8, антн-лямбда/антн-каппа, CD8/ CD38; антитела к антигенам стволовоклеточному — CD34, пролиферирующих клеток — CD71, ранних этапов активации — CD69.

Показано, что в пуктатс костного мозга у больных обследованных групп уровни экспрессии основных лимфоидных и миелоидных маркеров варьировали незначительно: В-лимфоцитов CD 19, CD20, CD22 — от 15 до 27%, Т-лимфоцитов CD3, CD5, CD7, от 46 до 67%, CD4, CD8— от 31 до 50%, НК-лимфоцитов CD 16*56'— 28-48%, CD 13, CD33 — 19-29%.

По сравнению с соответствующим и показа телями периферической крови в суспензии костного мозга, уровень В- и НК- лимфоцитов соответственно в 2 и 2,5 раза выше, а уровень различных Т-лимфоцитов — в 1,5 раза ниже.

Наиболее информативной оказалась оценка уровня экспрессии активационных маркеров Т-лимфоцитов (CD3, HLA-DR), включая экспрессию маркера ранних этапов активации (CD69).

При реактивном лимфадените для лимфоцитов костного мозга характерен нормальный уровень этих показателей (соответственно 10% и 18%). При соматических заболеваниях и специфических лимфаденитах обнаружен повышенный уровень экспрессии раннего активационного маркера CD69 (27%-33%), но уровень CD3+HLA-DR* - клеток не изменен. Наиболее высокие уровни активации Т-лимфоцитов костного мозга по двум маркерам выявлены у больных с метастазами рака в лимфоузлы (23-31%).

Таким образом, показано, что лимфоидные элементы костного мозга приданных заболеваниях характеризуются различной степенью экспрессии активационных маркеров. Проведено сопоставление уровней экспрессии лимфоидных маркеров костного мозга и периферической крови. Обсуждаются факторы, влияющие на им-мунофенотипическую картину лимфоцитов (способность некоторых моноклональных антител к лимфоидным маркерам реагировать с маркерами гранулоцитов и предшественников эритроидного ростка, а также сход-

ство характеристик светорассеяния у лимфоидных и других ростков кроветворения в костном мозге).

Учитывая трудности получения образцов костного мозга от здоровых доноров, результаты иммуно<|>ено7и-иирования костного мозга при реактивных лимфаденитах можно рассматривать как группу сравнения при иммунодиагностике лимфопролиферативных процессов.

Особенности иммунофенотипа лимфоидного клона при В-хроническом лимфолейкозе и В-клеточной пролимфоцитарной лимфоме в стадии лейкемизации

Пантелеева Е.С., Нсприна Г.С., Кузьмина Е.Г.,

Павлов В.В., Шахтарина С.В.

Медицинский радиологический научный центр РАМН Обнинск, Россия

В дифференциальной диагностике В-лимфоидных опухолей с “периферическим” фенотипом - В-хрони-ческиП лимфоцитарный лейкоз (В-ХЛЛ) и В-лимфома в стадии лейкемизации, существуют трудности при использовании традиционных методов исследования.

В данной работе предпринята попытка решения данной проблемы сопоставлением иммунофенотипа лимфоцитов костного мозга (КМ) и периферической крови (ПК) при В-опухолях.

Из 38 больных с иммуиофенотипнчески выявленным В-лимфоидным клоном у 23 установлен диагноз В-ХЛЛ и 15 - В- лимфома в стадии лейкемизации (вовлечение в опухолевый процесс КМ с выходом процесса в ПК.

Иммунофеиотипирование лимфоидных элементов КМ и ПК проводили на проточном цитофлюориметре FACScan по программе Simulset с автоматическим поиском лимфоцитарного гейта и, при необходимости, с последующей ручной коррекцией.

Использовали моноклональные антитела фирмы BECTON DICKINSON с двойной флюоресцентной меткой - РЕ и FITC (наборы Simultest IMK Plus, Acute Leukemia) для определения экспрессии и коэкспрессии CD-ачтигенов: CD14/CD45, CD3/CD19, CD4/CD8, CD3/ HLA-DR, CD16+CD56/CD3,CD10/CD19,CD20/CD5,CD3/ CD22, CD7/CD33, HLA-DR/CD13, анти-лямбда/анти-кап-па, CD38, CD71, CD69.

Признаками В-лимфоидного клона в КМ считали увеличение доли лимфоидных клеток в пунктате КМ (>30%) и усиление экспрессии маркеров В-лимфоцитов (выше 40%), в ПК - абсолютный лимфоцитоз (15* 10Ч кле-

Таблица

В-опухоли О о со + CD20+ CD5+CD20* CD22+ О о со со + HLA-DR

В-ХЛЛ 1,20+0,10 0,94±0,25 1,21 ±0,12 1,25±0,25 1,00+0,18 1,23±0,12

В-лимфома с лейкемизацией 1,19*0,13 1,76±0,22* 1,91±0,32* 1,98±0,25* 1,60±0,20* 1,16±0,11

ток/л крови) и усиление экспрессии маркеров В-лим-фоцитов (выше 30%).

В пораженном опухолевым процессом КМ и в ПК при B-XJ1J1 и В-лимфоме в стадии лейкемизации клон аберрантных В-лимфоцитов имеет аналогичную иммупофе-нотипическую характеристику: HLA-DR CD 19* CD20’ CD5 CD20* CD22 . При этом, и в КМ, и в ПК, независимо от патологии, степень выраженности признаков клона была, по средним данным, практически одинаковой.

Для повышения диагностической информативности иммунофенотипических данных нами введем индекс экспрессии — соотношение уровней экспрессии маркеров в КМ к соответствующим показателям ПК. Показано, что при XJIJI этот индекс варьирует в пределах единицы, при В- лимфоме — существенно выше для некоторых маркерных признаков клона (см. табл. на стр. 106).

При изучении экспрессии маркеров Т-лимфоцитов при В-злокачественных лимфомах обнаружено, что в КМ, независимо от патологии, численность Т-лимфоцитов (CD3 , CD7 , CD 8 ) была в одинаковой степени резко снижена (от 11 % до 24%). В то же время, в ПК при В - лимфоме с лейкемизацией степень Т-лимфоцитопении была менее выражена (от 17% до 37%). Аналогичная закономерность выявлена для рецептора к трансферрину (CD71 ), который экспрессируется на делящихся клетках: в КМ, независимо от патологии, численность CD71 -лимфоцитов была в одинаковой степени снижена (до 20%), а в ПК наименьший уровень этого показателя выявлен при B-XJIJI.

Таким образом, одновременное проведение иммуно-фенотипирования лимфоидных клеток ПК и КМ с использованием широкой панели моноклональных антител к поверхностным антигенам лимфоцитов позволило выявить дополнительные признаки дня дифференциальной диагностики В-лимфоидных опухолей с “периферическим” фенотипом -В-ХЛЛ и В-лимфома в стадии лейкемизации.

Исследование конформации Fc-фрагмента IgG больных раком мочевого пузыря методом конкурентного ИФА на белке А

Плюгачева Е. И., Веялкин И. В., Красный С. А., Маврнчев А. С.

Международный институт по радиоэкологии им. А. Д. Сахарова

Физиологическое состояние системы иммунитета играет важную роль в определении предрасположенности организма к опухолевому росту, динамике развития и течения онкологических заболеваний. В литературе имеется относительно небольшое количество сообщений о состоянии системы иммунитета у больных раком мочевого пузыря в зависимости от стадии процесса, характера и этапа комплексного лечения.

Целью данной работы было методом конкурентного ИФА на белке А из клеточной стенки St. aureus — белком, нековалентно связывающимся с Fc-фрагментом

1цО в области контакта СН2-СНЗ доменов — исследовать конформацию этого фрагмента 1^С у больных раком мочевого пузыря на различных стадиях онкологического процесса; до и после проведения нм определенного вида терапии, и посмотреть, как стадия заболевания или применяемая терапия влияют на конформацию Гс-фрагмента 1цО. В качестве контроля использовался донорский ДО, меченный пероксидазой хрена (IIX).

Иммуноглобулины выделяли из сыворотки осаждением 4 М (МН4)2504 (трижды), и после диализа и течение мочи при 4'С, пропускали суммарную фракцию через Д[{А Р.-целлюлозу, конъюгированную с белком А. Элюировали фракции 1цв 0,1 М глициновым буфером pH 3,0. Концентрация белка колебалась от4 до 8 мкг/мл. Чистота препарата определялась электрофоретпчсски в Г1ААГ. Концентрацию белка измеряли на спектрофотометре.

Нами был синтезирован конъюгат донорского с пероксидазой хрена. Углеводный фрагмент перок-сидазы окисляли перйодатом натрия. Окисленная пе-роксидаза связывалась с образуя Шиффовы основания, которые восстанавливали борпщридом натрия.

Проводили конкурентное связывание ^С-Г!Х н 1цС сывороток больных раком мочевого пузыря с белком А. Активность пероксидазы определяли по ферментативному окислению орто-фенилендиамина. Константы ассоциации (Ка) [цв с белком А определялись по графикам Лануивера-Берка.

В результате проведенных исследований было обнаружено значительное увеличение Ка к белку А у больных раком мочевого пузыря (18-20* 10* М'1) по сравнению с контрольной группой (4-8»10! М'1), причем чем выше стадия заболевания, тем больше различие между константами ассоциации. Также было отмечено значительное уменьшение Ка к белку А у больных после полного удаления опухоли в мочевом пузыре операционным путем (ТУР) (12-13* 108 М1). Повышение Ка к белку, по-видимому, говорит об увеличении междоменно-го СН2-СНЗ расстояния в молекуле уменьшение же Ка - о более компактной структуре 1цО.

Получение и характеристика моноклональных антител к меланомо-ассоциированному антигену

Полосухина Е.Р., Михайлов АД, Иванов П.К.,

Новиков К.Н., Абрамов М.Е., Степанова Е.В.,

Лукашина М.И., Заботима Т.Н., Морозова Л.Ф., Барышников А.Ю.

Российский онкологический научный центр им.Н.Н.Блохина РАМН, Москва

Использование моноклональных антител (МКА) делает возможным четко идентифицировать опухоле-ас-социироваиные антигены. В настоящее время охарактеризовано большое количество меланомо-ассоциировап-ных антигенов (М А А) - таких, как Б-100, НМВ-45, вы со-