CC BY
50
УДК 591.8+619
Ключевые слова: щитовидная железа, С-клетки, собака
Key words: thyroid gland, C-cells, dog
Мужикян А. А., Иванов В. С. ОСОБЕННОСТИ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО СТРОЕНИЯ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗы
собаки и морфология с-клеток на разных стадиях онтогенеза
FEATURES OF THE HISTOLOGICAL STRUCTURE OF THYROID GLAND IN A DOG AND C-CELL MORPHOLOGY IN DIFFERENT STAGES OF ONTOGENY
'ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» Адрес: 196084, Россия, Санкт-Петербург, Черниговская ул., 5. Тел. +7 (812) 388-13-78
'Saint-Petersburg State Academy of Veterinary Medicine Address: '96084, Russia, Saint-Petersburg, Chernigovskaya str., 5. Tel. +7 (8'2) 388-13-78
2ЗАО «Институт экспериментальной фармакологии» Адрес: 188663, Россия, Ленинградская обл., Всеволожский р-н, п. Кузьмоловский, 245 2Institute of Experimental Pharmacology, JSC Address: '88663, Russia, Leningrad region, Vsevolozhsky district, Kuzmolovsky, 245 Мужикян Арман Артушович, аспирант каф. биологии, экологии, гистологии1, мл. научн. сотрудник2 Muzhikyan Arman A., Postgraduate of the Dept. of Biology, Ecology, Histology', Junior Researcher2 Иванов Валентин Станиславович, к. в. н., доцент, зав. каф. биологии, экологии, гистологии1 Ivanov Valentin S., Ph.D. in Veterinary Science, Associate Professor, Head of the Dept. of Biology, Ecology, Histology'
Аннотация. Проведено гистологическое исследование и морфометрический анализ щитовидной железы собак разных возрастных групп, в том числе плодов собаки, полученных на разных сроках гестации. Изучены основные морфометрические показатели состояния щитовидной железы собаки, включающие измерение среднего диаметра фолликула, высоты фолликулярного эпителия, диаметра ядра тироцитов. Определены просвет-эпителиальный индекс (ПЭИ), показатель накопления коллоида (ПНК), ядерный индекс (ЯИ), фолликулярный индекс (ФИ), площадь стромы железы, IPAS и IPSNA. Выявлены характерные изменения микроструктуры органа в возрастном аспекте. Отмечено увеличение с возрастом высоты тиреоидного эпителия, ПЭИ, ПНК, ФИ, диаметра ядра тироцитов, увеличение доли фолликулов с ШИК-положительным коллоидом в просвете и снижение их количества у старых животных. Установлено значительное снижение пролиферативной активности железы после рождения. Изучено строение и возрастные изменения С-клеток с применением иммуногистохимических реакций на кальцитонин, нейрон-специфическую енолазу, синаптофизин. Проведено морфометрическое исследование и статистический анализ показателей С-клеток у собак разных возрастных групп. Установлено увеличение диаметра ядра и площади клеток, возрастание экспрессии кальцитонина и NSE, увеличение индекса функциональной активности, достигающего наибольших значений у плодов собаки, новорожденных щенков и старых собак. Выявлена тенденция к увеличению с возрастом ядерно-цитоплазматического соотношения С-клеток, снижению количества клеток с концентрацией секреторных гранул на сосудистом полюсе, уменьшению размеров С-клеток и увеличению их количества у старых животных. Выявлена наибольшая плотность расположения С-клеток в участках железы с высокой экспрессией PCNA. Обнаружены и описаны С-клеточные комплексы у плодов собаки и взрослых животных. Summary. A histological examination and a morphometric analysis of the thyroid gland of dogs of different age groups, including fetuses obtained at different stages of gestation, were performed. The basic morphometric indicators of thyroid gland of dogs, including measurement of the mean diameter of the follicle, follicular epithelium height, the diameter of the thyrocyte nucleus were studied. The index for luminal epithelia, the index of colloid accumulation, the nucleonic index, the follicular index, the glandular stromal area, IpAS and IPSNA were defined. The age-specific characteristic changes in the microstructure of the organ were revealed. The age-related increase of the thyroid epithelium height, the index for luminal epithelia, the index of colloid accumulation, the follicular index, the diameter of the thyrocyte nucleus, the increase of the proportion offollicles with PAS-positive colloid in the lumen and the decrease in their number in old animals were shown. A considerable reduction in the proliferative activity of the gland after birth was established. The authors studied the structure and age-specific changes of the C-cells using immunohistochemical responses to calcitonin, neural-specific enolase, synaptophysin. A morphometric research and statistical analysis of the indicators of the C-cells in dogs of different age groups were performed. The increase of the nucleus diameter and the cell area, the increase of the expression of calcitonin and NSE, the increase of the index of functional activity, reaching its highest value in older dogs, were defined. The tendency for the age-related increase of the nuclear-cytoplasmic ratio of the C-cells, decrease of the number of cells with concentration of secretory granules at the vascular pole, reduction of the C-cells in size and increase of their number in old animals was established. Maximum density of the C-cells in glandular areas with high expression of PCNA was found. C-cell complexes in fetal and adult dogs were discovered and described.
Введение
Морфология щитовидной железы (ЩЖ) хорошо изучена у разных видов животных. В ряде работ были выявлены межвидовые и внутривидовые различия [3]. Встречается большое количество исследований, посвященных морфологии ЩЖ у плодов и взрослых животных, в том числе собак, кошек, крупного и мелкого рогатого скота, диких животных [6, 7]. При этом лишь в части работ уделяется внимание морфо-функциональному состоянию парафоллику-лярных (интерфолликулярных) С-клеток, вырабатывающих тиреокальцитонин, серотонин и другие биогенные амины [5].
Сведения о происхождении и развитии С-клеток остаются противоречивыми. Первые признаки ультимобранхиального происхождения C-клеток обнаружил и описал Godwin в 1937 году, показав, что у собак С-клетки происходит в основном в областях, образованных из ультимобранхиальных зачатков. Возможность миграции C-клеток из ультимобранхиальных телец в ткань развивающейся ЩЖ была показана позднее и в других исследованиях (Pearse, Carvalheira 1967, 1968; Fontaine 1974; Kirkeby et al., 1973). Существует также версия, что С-клетки происходят из нейробластов нервных гребней, мигрирующих в слизистую оболочку головной кишки, откуда вместе с ультимобранхи-альным тельцем и попадают в зачаток щитовидной железы [8]. В то же время последние исследования показывают, что C-клетки щитовидной железы мыши образуются из энтодермальных эпителиальных клеток четвертого глоточного кармана, которые экс-прессируют E-кадгерин и не происходят из клеток нервного гребня [9].
Известна особая роль интерфолликулярных клеток в эндокринной системе организма. С-клетки имеют ключевое значение в поддержании кальциевого гомеостаза. Описано паракринное влияние гормонов интерфолликулярных клеток в отношении фолликулярных эпителиоцитов, а также развитие из С-клеток медуллярной карциномы ЩЖ. В связи с этим возрастает актуальность изучения вопросов возрастного гистогенеза как основной тиреоидной ткани, так и тесно свя-
занной с ней системы специализированных С-клеток ЩЖ животных, требующих рассмотрения и решения с применением современных методов гистологической обработки материала и анализа данных.
Цель исследования. Целью исследования явилось изучение особенностей гистологического строения ЩЖ собак и определение возрастных изменений морфологии С-клеток в разные периоды онтогенеза.
Материалы и методы
Гистологическому и морфометрическому исследованию были подвергнуты ЩЖ собак в разные периоды онтогенеза: плодов в возрасте 30-35 дней (n = 9), 40-45 дней (n = 6), новорожденных щенков (n = 5), собак в возрасте 4-6 месяцев (n = 5), 1 года (n = 5), 10-12 лет (n = 7), 15 лет и старше (n = 5). Для изучения общего строения железы, а также проведения морфометрии, материал фиксировали в 10 % растворе нейтрального забуференного формалина, по общепринятой методике заливали в парафин и изготавливали срезы толщиной 5-7 мкм. Полученные срезы окрашивали гематоксилин-эозином. С целью выявления коллагеновых волокон и оценки соединительнотканной стромы органа парафиновые срезы окрашивали по Ван Гизону, для оценки площади стромального компонента проводили импрегнацию ткани ЩЖ солями серебра, с выявлением колла-геновых и ретикулярных волокон. С целью обнаружения мукополисахаридов в коллоиде железы проводили ШИК-реакцию с применением Шифф-йодной кислоты по Мак-Манусу.
Для проведения иммуногистохимиче-ских (ИГХ) реакций материал фиксировали в спирт-формалине с цинком [4]. Парафол-ликулярные клетки выявляли иммуноперок-сидазным методом с помощью ИГХ-реакции на кальцитонин (CAL), нейрон-специфическую енолазу (NSE), синаптофизин (SYN). Пролиферативную активность железы изучали с помощью экспрессии PCNA, для выявления которой использовали монокло-нальные мышиные антитела (клон PC10; Dako, Дания). В качестве вторичных реагентов применялись EnVision+System Labbeled
Polymer-HRP Anti-Mouse (K4001) (Dako, Дания). Для постановки ИГХ-реакции на каль-цитонин, NSE, синаптофизин использовали поликлональные кроличьи антитела (Dako, Дания). В качестве вторичных реагентов для реакции на синаптофизин применяли реактивы из набора Polymer HRP Detection Kit Spring Bio (Genex, США). Для кальцитонина и NSE применяли EnVision+System Labbeled Polymer-HRP Anti-Rabbit (Dako, Дания).
Морфологическое исследование гистологических препаратов проводилось при помощи светооптического микроскопа Carl Zeiss (Германия) при увеличении 50, 100, 200, 400 и 1000. Микрофотографирование проводили при помощи цифровой фотокамеры Axio Scope A1 (Германия). Морфометри-ческие измерения проводили полуавтоматически и вручную с помощью программного обеспечения AxioVision Rel. 4.8. и редактора изображений PhotoM 1.21. Площади структур определяли при помощи бинаризации изображений [1] с дальнейшей обработкой в редакторе PhotoM 1.21.
Морфометрическое исследование состояния щитовидной железы включало определение следующих показателей: средний диаметр фолликула, высота фолликулярного
эпителия, диаметр ядра тироцитов. На основании полученных данных были определены: просвет-эпителиальный индекс (ПЭИ), показатель накопления коллоида (ПНК), ядерный индекс (ЯИ), фолликулярный индекс (ФИ) [2]. Измерена площадь стро-мального компонента железы, определены индекс накопления ШИК-положительного коллоида (1рА8) и пролиферативная активность железы (1ртА). Для изучения С-клеточного аппарата считали абсолютное и среднее количество С-клеток на условную единицу площади при увеличении 200 -78485,34 мкм2 (324,0x242,0 мкм), среднюю площадь иммунореактивных клеток (мкм2) с экспрессией кальцитонина (определяли площадь одной С-клетки), среднюю площадь иммунореактивной ткани (мкм2) с экспрессией кальцитонина ($САЬ+) и ней-ронспецифической енолазы (3 ) в поле зрения, средний диаметр кариона (СДК) и индекс функциональной активности С-клеток (ИФА).
Полученные данные были подвергнуты статистическому анализу с помощью критерия Шапиро-Уилка. Межгрупповые различия анализировали однофакторным дисперсионным анализом (АКОУА) с апостериорным
Таблица 1.
Результаты статистической обработки данных о влиянии возраста на оцениваемые параметры (дисперсионный анализ)
Показатель Значение F-критерия Значение р
Диаметр фолликула F 6,119 = 125,05 <0,01
Высота фолликулярного эпителия F6,119 = 94,67 <0,01
Диаметр ядра тироцитов F6,119 = 26,39 <0,01
ПЭИ F 6,119 = 108,49 <0,01
ПНК F 6,119 = 108,49 <0,01
ЯИ F6,119 = 27,22 <0,01
ФИ F 6,119 = 125,05 <0,01
Площадь стромы (S стромы) F6,35 = 85,15 <0,01
индекс PCNA (^ F635 = 320,18 6,35 7 <0,01
индекс PAS (IPAS) F6,35 = 213,49 <0,01
Количество C-клеток в поле зрения F 6,119 = 105,14 <0,01
SCAL+ материала в поле зрения F6,119 = 26,44 <0,01
SNSE+ материала в поле зрения F6,35 =6,43 <0,01
S одной C-клетки F = 79 10 6,119 <0,01
СДК F6,119 = 39,11 <0,01
ИФА С-клеток F6,119 = 50,58 <0,01
Таблица 2.
Морфометрические показатели состояния щитовидной железы собак разных возрастных групп
№ г Средний диаметр фолликула, мкм Высота фоллик. эпителия, мкм Диаметр ядра тироцитов, мкм ПЭИ пнк ЯП ФИ S стромы, мкм2 индекс PCNA, % индекс PAS, %
1 Плоды 30-35 дн. (п=9) 11Д1±0,51 5,88±0,12* 4,00±0,05* 1,92±0,11 0,96±0,05 0,0330±0,0008* 11,11±0,51 6614,09±222,09 33,42±1,16* 23,14±0,83*
2 Плоды 40-45 дн. (п=6) 16,62±0,84 6,40±0,11 4,33±0,08 2,61±0,15 1,31±0,07 0,0284±0,0011 16,62±0,84 6610,81±453,33 21,25±0,44 41,06±0,75*
3 Новорожд. щенки (п=5) 19,07±0,85# 6,71±0,15# 4,51±0,10 2,85±0,13 1,43±0,06 0,0263±0,0013 19,07±0,85# 7727,53±438,57# 18,95±0,27* 69,49±4,25*
4 Собаки 4-6 мес. (п=5) 41,52±2,55* 9,12±0,29* 4,89±0,09* 4,56±0,26 2,28±0,13 0,0222±0,0008* 41,52±2,55* 13191,43±535,47* 8,71±0,39* 92,88±0,74*
5 Собаки 1 год (п=5) 64,37±3,68 10,03±0,16 4,83±0,07 6,47±0,42* 3,23±0,21* 0,0226±0,0007 64,37±3,68 16554,05±261,98 4,72±0,28 96,34±1,52
6 Собаки 10-12 лет (п=7) 78,70±4,27* 7,52±0,09# 4,88±0,05* 10,44±0,52# 5,22±0,26# 0,0221±0,0005* 78,70±4,27# 19555,65±564,83* 2,48±0,25* 86,66±2,32*
7 Собаки 15 лет (п=5) 104,73±6,75# 7,07±0,13# 4,74±0,08 15,04±1,14# 7,52±0,57* 0,0236±0,0008 104,73±6,75# 22436,19±1509,91* 1,46±0,14* 74,10±2,81*
Примечание: данные представлены как M±m; * - р < 0,05, статистически значимое отличие от новорожденных щенков (3 группа), тест Тьюки; # - р < 0,05, статистически значимое отличие от собак в возрасте 1 года (5 группа), тест Тьюки.
Морфометрические показатели С-клеток щитовидной железы собак разных возрастных групп
Таблица 3.
Кол-во С-кл. в поле зрения, ув.200 S материала в поле зрения, мкм2 ув.200 SNSE+ материала в поле зрения, мкм2 ув.200 S одной С-кл, с положительной реакцией на Cal, мкм2 СДК, мкм ПФА С-клеток
1 Плоды 30-35 дн. (п=9) 138,00±2,89* 6091,78±168,07 3256,09±403,69** 44,07±0,59* 5,07±0,06* 35,00±0,89
2 Плоды 40-45 дн. (п=6) 121,78±2,33 6045,82±183,21 4723,92±570,26 49,58±1,02 5,32±0,06 32,37±0,71
3 Новорожд. щенки (п=5) 119,60±7,21* 6057,33±387,40 6734,60±629,84 50,94±1,90* 5,56±0,08* 33,23±2,01
4 Собаки 4-6 мес. (п=5) 53,07±4,17* 4108,50±335,21* 4749,29±854,53 77,47±2,10** 6,27±0,19* 16,93±1,61*
5 Собаки 1 год (п=5) 52,87±2,70 3719,28±200,21* 5956,89±403,17 70,38±1,44 6,42±0,14 17,01±0,98*
6 Собаки 10-12 лет (п=7) 56,81±1,86* 3435,36±117,23* 5532,14±201,68 60,64±1,26** 6,51±0,07* 18,49±0,63*
7 Собаки 15 лет (п=5) 87,47±4,57*# 4993,28±292,98* 6240,82±361,68 57,06±1,53* 5,94±0,07* 25,97±1,38**
Примечание: данные представлены как M±m; * - р < 0,05, статистически значимое отличие от новорожденных щенков (3 группа), тест Тьюки; # - р < 0,05, статистически значимое отличие от собак в возрасте 1 года (5 группа), тест Тьюки.
критерием Тьюки (табл. 1). Различия определены при уровне значимости р < 0,05. Статистический анализ выполняли с помощью программного обеспечения Statistica 6.0 (StatSoft, Россия).
Результаты и обсуждение
С целью изучения строения ЩЖ собак разных возрастных групп было проведено морфометрическое исследование, полученные результаты были подвергнуты дальнейшей статистической обработке. Дисперсионный анализ выявил влияние фактора «возраст» на все исследуемые параметры (табл. 1). Последующее межгрупповое сравнение по критерию Тьюки показало статистически значимое отличие ряда морфоме-трических показателей состояния ЩЖ собак исследуемых возрастных групп (табл. 2).
Проведенное нами гистохимическое исследование на мукополисахариды (ШИК-реакция), а также экспрессия клетками ЩЖ 30-35-дневных плодов собаки ряда белков (в т. ч. кальцитонина) подтвердили, что на данном сроке железа является функционально активной, при этом не все гистологические структуры в ней полностью сформированы. Снаружи железа покрыта тонкой соединительнотканной капсулой. Трабекулы железы выражены слабо, хотя выявление аргентофильных волокон позволяет увидеть тончайшие межклеточные пространства вокруг будущих фолликулов. Паренхима железы представлена преимущественно эпителиальными тяжами из крупных кубических тироцитов, формирующих небольшие фолликулы диаметром 7-14 мкм. В части активных фолликулов определяется ШИК-положительное вещество, но доля таких фолликулов по сравнению с неактивными фолликулами еще не велика. IPAS у плодов данной возрастной группы составил 23,14±0,83 %. Значения ПЭИ и ПНК также не высоки и составили 1,92±0,11 и 0,96±0,05 соответственно. Отмечена высокая пролифе-ративная активность железы. IpSNA составил 33,42±1,16 % и был статистически значимо больше, чем в других исследованных возрастных группах. Важно отметить, что экспрессия PCNA в центральных участках железы
оказалась значительно выше, чем на периферии. Сосудистая сеть и строма железы развиты слабо. Площадь стромального компонента железы в исследованном поле зрения составила 6614,09±222,09 мкм2.
К 40-45 дню пренатального развития происходило увеличение диаметра фолликулов. Возрастала высота фолликулярного эпителия. Диаметр ядра тироцитов в данной возрастной группе оказался статистически значимо выше, чем у 30-35-дневных плодов. Увеличиваются ПЭИ, ПНК и ФИ, что указывает на возрастающую функциональную активность железы. Число фолликулов с ШИК-положительным коллоидом в просвете больше, чем у 30-35-дневных плодов, 1рАЗ+ при этом статистически значимо выше. Доля соединительнотканной стромы остается практически неизмененной, а индекс пролиферации железы 40-45-дневных плодов снижается до 21,25±0,44 %.
У новорожденных щенков паренхима ЩЖ представлена хорошо сформированными фолликулами, большинство из которых содержит в умеренном количестве ШИК-положительное вещество. ГРАБ статистически значимо выше, чем у плодов изученных возрастных групп. Площадь стромального компонента возрастает. Увеличиваются высота фолликулярного эпителия, средний диаметр тироцитов, ФИ, ПЭИ, ПНК. Тироциты характеризуются кубической, реже призматической формой, ядра клеток округлые, светлые. В интерфолликулярных пространствах обнаруживается небольшое количество смешанных эпителиальных элементов, представляющих собой как группы парафол-ликулярных С-клеток, так и зачатки будущих фолликулов. Капсула железы сформирована, представлена тяжами из коллагеновых и ретикулярных волокон, отдающих в паренхиму железы большое количество тонких трабекул и окружающих фолликулы железы по периферии. К моменту рождения существенно возрастает васкуляризация органа. Сосуды железы расширены, часто полнокровны.
К 4-6 месяцу ЩЖ имеет классическое строение. Определяется большое количество тиреоидных фолликулов диаметром 35-50 мкм, часто выстланных призматиче-
Рис. 1. Срез щитовидной железы (ЩЖ) 45-дневного плода собаки. Импрегнация солями серебра с выявлением аргентофильных волокон. Продукты гистохимической реакции окрашены в черный цвет. Ув. 200.
Рис. 3. Срез ЩЖ собаки в возрасте 1 года. Импрегнация солями серебра с выявлением аргентофильных волокон. Продукты гистохимической реакции окрашены в черный цвет. Ув. 200.
Рис. 5. Срез ЩЖ 35-дневного плода собаки. Иммуно-гистохимическая реакция на РСКА. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 200.
Рис. 7. Срез ЩЖ собаки в возрасте 4 мес. ШИК-реакция по Мак-Манусу. ШИК-положительный коллоид окрашен в красный цвет. Ув. 400.
Рис. 2. Срез ЩЖ новорожденного щенка. Импрегнация солями серебра с выявлением аргентофильных волокон. Продукты гистохимической реакции окрашены в черный цвет. Ув. 200.
Рис. 4. Срез ЩЖ собаки в возрасте 15 лет. Импрегнация солями серебра с выявлением аргентофильных волокон. Продукты гистохимической реакции окрашены в черный цвет. Ув. 200.
Рис. 6. Срез ЩЖ новорожденного щенка. Иммуноги-стохимическая реакция на РСКА. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 200.
Рис. 8. Срез ЩЖ собаки в возрасте 4 мес. ШИК-реакция по Мак-Манусу. Флуоресцентная микроскопия. Ув. 400.
Рис. 9. Срез ЩЖ 35-дневного плода собаки. С-клеточный комплекс отмечен стрелкой. Иммуно-гистохимическая реакция на ^Е. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 25.
Рис. 10. Срез ЩЖ новорожденного щенка. С-клеточный комплекс. Иммуногистохимическая реакция на №Е. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 100.
Рис. 11. Срез ЩЖ 35-дневного плода собаки. Имму-ногистохимическая реакция на кальцитонин. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 1000.
Рис. 13. Срез ЩЖ новорожденного щенка. Иммуно-гистохимическая реакция на кальцитонин. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 1000.
Рис. 15. Срез ЩЖ собаки в возрасте 1 года. Иммуно-гистохимическая реакция на кальцитонин. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 1000.
Рис. 12. Срез ЩЖ 45-дневного плода собаки. Имму-ногистохимическая реакция на кальцитонин. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 1000.
Рис. 14. Срез ЩЖ собаки в возрасте 4 мес. Иммуно-гистохимическая реакция на кальцитонин. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 1000.
Рис. 16. Срез ЩЖ собаки в возрасте 10 лет. Иммуно-гистохимическая реакция на кальцитонин. Продукты реакции окрашены в коричневый цвет. Ув. 1000.
ским эпителием. Ядра тиреоцитов округлые, с умеренным содержанием хроматина, смещены к базальному полюсу. Диаметр ядра тироцитов статистически значимо выше, чем у новорожденных щенков, и составляет 4,89±0,09 мкм. На апикальном полюсе некоторых тироцитов определяются очертания микроворсинок. Фолликулы железы почти полностью заполнены коллоидом, дающим положительное ШИК-окрашивание. 1рдз статистически значимо выше, чем у новорожденных щенков. Значительно увеличивается доля соединительнотканной стромы, причем площадь аргентофильных волокон в поле зрения возрастает по сравнению с новорожденными животными почти в 2 раза. Заметно увеличиваются ПЭИ и ПНК, а 1ргад становится существенно ниже.
В возрасте 1 года в ЩЖ собак отмечаются изменения, характеризующиеся увеличением ПЭИ, ПНК, ФИ. Данные показатели имеют статистически значимые отличия от других возрастных групп. Высота фолликулярного эпителия претерпевает незначительные изменения по сравнению с 4-6-месячными собаками. Диаметр ядра тироцитов варьирует в пределах 4,5-5 мкм. Увеличиваются площадь стромы железы и ГрдБ, достигающий в данной возрастной группе максимальных значений. Пролиферативная активность железы по сравнению с 4-6 месячными животными снижается в 2 раза и составляет 4,72±0,28 %.
К 10-12 году жизни сохраняется тенденция к увеличению ПЭИ, ПНК и ФИ. Значения ПНК и ПЭИ статистически значимо выше, чем у собак в возрасте 1 года. Заметно снижается высота фолликулярного эпителия, ГРАБ также становится статистически значимо ниже. Уменьшается пролиферативная активность железы. 1ртад в данной возрастной группе составляет 2,48±0,25 %. Увеличение ФИ на фоне снижения высоты фолликулярного эпителия и степени накопления ШИК-положительного вещества объясняется, по-видимому, компенсаторными процессами, возникающими в тиреоидной ткани в ответ возрастную гипофункцию органа. В составе фолликулов железы, а также в интерфолликулярных пространствах выявлялись одиночные клетки Ашкенази,
характеризующиеся крупными размерами, светлой эозинофильной цитоплазмой и темными округлыми или слегка уплощенными гиперхромными ядрами.
У старых собак в возрасте 15 лет и старше были отмечены те же изменения, что и у животных в возрасте 10-12 лет. Паренхима железы была представлена увеличенными, часто растянутыми фолликулами, выстланными нередко уплощенными эпителиоцита-ми. Ядра клеток округлые, гиперхромные. 1рдз и пролиферативная активность железы были снижены. Отмечалось увеличение доли соединительнотканной стромы в составе железы, иногда с очагами разрастания фиброзной ткани на месте фолликулов.
С-клетки ЩЖ собак. На всех этапах онтогенеза в ЩЖ собак иммуногистохимиче-ски выявлялись интерфолликулярные клетки (или С-клетки), претерпевающие в разные периоды жизни ряд морфологических изменений. У 30-35-дневных плодов интерфолликулярные клетки располагались как отдельно, так и группами по 4-8 клеток. В центральных участках железы плотность расположения С-клеток оказалась наиболее высокой. Интерфоликулярные клетки отличались сравнительно небольшими размерами: площадь кальцитонин-положительных клеток составляла 44,07±0,59 мкм2, диаметр ядра варьировал в среднем от 5,5 до 6-6,5 мкм. При этом у многих плодов данной возрастной группы С-клетки проявляли слабую реакцию на кальцитонин и NSE, но хорошо окрашивались на синаптофизин. По нашему мнению, это связано с высокой степенью дегрануляции С-клеток и выполнением ими паракринной функции в отношении фолликулярного эпителия, а также недостаточным накоплением гормонов в секреторных гранулах.
У 40-45-дневных плодов статистически значимо увеличиваются размеры парафол-ликулярных клеток, возрастает площадь кальцитонин-положительного материала в пересчете на одну клетку и СДК парафолли-кулярных клеток. Экспрессия кальцитонина и также возрастают. Однако ввиду развития паренхимы железы и рассредоточения С-клеток, количество и площадь их в поле
зрения оказывается ниже, чем в предыдущей группе. С этим же связано снижение показателя ИФА С-клеток. Схожая тенденция сохраняется и у новорожденных животных, однако различия между указанными группами недостоверны. Количество С-клеток, с концентрацией гранул на сосудистом полюсе у новорожденных щенков оказывается заметно ниже, чем у плодов.
Наибольшие размеры интерфолликулярные клетки имеют у взрослых собак. В возрасте 4-6 месяцев площадь одной С-клетки достигает 77,47±2,10 мкм2, а СДК составляет 6,27±0,19 мкм. Данные показатели статистически значимо выше, чем у новорожденных собак. Ядра клеток увеличены в размере, светлые, округлой или овальной формы. Часть ядер с неровными контурами, вытянутые, в некоторых случаях с формированием выпячиваний и углублений на кариолемме. При этом клетки представляются функционально активными и в высокой степени экспрессируют кальцитонин и NSE. По мере взросления собак (1 год, а позднее и 10-12 лет) размеры ядер С-клеток возрастают, а площадь их статистически значимо снижается по сравнению с показателями собак в возрасте 4-6 месяцев, что указывает на увеличение с возрастом ядерно-цитоплаз-матического соотношения интерфолликулярных клеток. Изменения микроструктуры С-клеток сопровождаются повышением ИФА, достигающего наибольших значений у старых животных. У собак в возрасте 15 лет и старше отмечалось статистически значимое снижение СДК и площади пара-фолликулярных клеток по сравнению с собаками в возрасте 1 года. В то же время определялось статистически значимое увеличение количества С-клеток и кальцитонин-положи-тельного материала в поле зрения по сравнению с молодыми животными, что могло быть обусловлено возрастной гиперплазией интерфолликулярного аппарата.
Наряду с уже описанными интерфолликулярными клетками, в ЩЖ плодов собак и реже у взрослых животных выявлялись группы клеток, представленные кальцитонин- и NSE-положительными клетками, связанными с другими эпителиальными структурами.
Похожие структуры описаны в литературе как остатки ультимобранхиальных телец или С-клеточные комплексы [10]. Они встречались в основном вблизи паращитовидных желез, были отделены от паренхимы ЩЖ тонкими прослойками соединительной ткани. С-клеточные комплексы были представлены как типичными С-клетками, так и слабо дифференцированными клетками, формирующими к 40-45 дням жизни плода небольшие фолликулоподобные структуры в составе комплексов. Среди прочих в С-клеточных комплексах встречались группы тесно связанных фолликулов, образованных призматической формы слегка вытянутыми NSE-положительными клетками с овальными удлиненными ядрами и слабогранулиро-ванной цитоплазмой, не дающими положительную реакцию на кальцитонин. С-клетки в указанных комплексах имели строение, сходное с диффузно рассредоточенными в паренхиме железы интерфолликулярными клетками, были объединены в большие группы из 20-40 клеток и редко располагались одиночно.
Заключение
На основании полученных данных можно сделать выводы о морфофункциональном состоянии ЩЖ собак в возрастном аспекте. ЩЖ является функционально активной уже у 30-35-дневных плодов. К моменту рождения она полностью сформирована. В гистогенезе ЩЖ собаки отмечаются равномерные изменения основных показателей, характеризующих эндокринную активность тиреоидной ткани. Происходит увеличение высоты тиреоидного эпителия, ПЭИ, ПНК, ФИ. Увеличивается диаметр ядра тироцитов. Возрастает доля фолликулов с ШИК-положительным коллоидом в просвете. У старых животных паренхима железы была представлена растянутыми фолликулами, выстланными нередко уплощенными эпителиоцитами, с уменьшенными гиперх-ромными ядрами. I у старых животных оказался ниже, чем у собак в возрасте от 4-6 месяцев до года. Интересно отметить, что пролиферативная активность железы после рождения заметно снижается, а доля
соединительнотканной стромы существенно возрастает.
В строении С-клеток ЩЖ собак также отмечаются яркие возрастные изменения, проявляющиеся в увеличении диаметра ядра и площади клеток, возрастании экспрессии каль-цитонина и №Е, увеличении функциональной активности, достигающей наибольших значений у плодов, новорожденных щенков и старых собак. Выявлена тенденция к увеличению с возрастом ядерно-цитоплазматического соотношения С-клеток, снижению количества клеток с концентрацией секреторных гранул на сосудистом полюсе, уменьшению размеров С-клеток и увеличению их количества у старых животных. Обнаружено наличие С-клеточных комплексов в ЩЖ плодов и взрослых собак, содержащих помимо типичных кальцитонин и №Е-положительных клеток эпителиальные и фолликулоподобные структуры, образованные слабо-дифференцированными клетками, не проявляющими сходства ни к тироцитам, ни к типичным С-клеткам. Описанные в литературе похожие структуры считают остатками ультимобранхиальных телец, дающих начало не только С-клеткам, но и возможно фолликулярным эпителоицитам ЩЖ. Концентрация секреторных гранул на сосудистом полюсе интерфолликулярных клеток у плодов наряду с высокой экспрессией PCNA в участках с большей плотностью расположения С-клеток позволяют предположить особое значение интерфолликулярных клеток в созревании и дифференцировке тиреоидной ткани.
Список использованной литературы
1. Абламейко, С. В. Обработка оптических изображений клеточных структур в медицине / С. В. Абламейко, А. М. Недзьведь. - Мн. : ОИПИ НАН Беларуси, 2005. - 156 с.
2. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия / Г. Г. Автандилов. - М. : Медицина, 1990. - 284 с.
3. Глод, Д. Ю. Сравнительная морфофункциональ-ная характеристика щитовидной железы у кошек и собак / Д. Ю. Глод // Российский ветеринарный журнал (мелкие домашние и дикие животные). - 2007. -№ 2-3. - С. 22-24.
4. Коржевский, Д. Э. Теоретические основы и практическое применение методов иммуногистохи-мии / Д. Э. Коржевский. - СпецЛит, 2010. - 124 с.
5. Лычкова, А. Э. Нервная регуляция функции щитовидной железы / А. Э. Лычкова // Вестник РАМН. Актуальные вопросы патофизиологии. - № 6. -2013. - С. 49-55.
6. Пилов, А. X. Морфологическая и функциональная характеристики щитовидной железы домашних животных / А. X. Пилов // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2003. - Вып. 3. -С. 62-63.
7. Труш, Н. В. Сравнительная и возрастная морфологическая характеристика щитовидной, паращито-видных желез домашних и диких животных: методическое пособие. - Благовещенск, 2004. - 138 с.
8. Fagman, H. / Morphogenetics of early thyroid development / H. Fagman, M. Nilsson // Journal of Molecular Endocrinology. - 2011. - 46. - P. 33-42.
9. Kameda, Y. Expression of the epithelial marker E-cadherin by thyroid C cells and their precursors during murine development / Y. Kameda, T. Nishimaki, O. Chisaka et al. // J. Histochem Cytochem. - 2007. -55. - P. 1075-1088.
10. Leblanc, B. Immunocytochemistry of Thyroid C-Cell Complexes in Dogs / B. Leblanc, G. Paulus, M. Andreu, M. C. Bonnet // Vet. Pathol. - 1990. - 27. -P. 445-452.
~o
л
ffl 2 Ш
IT Ветеринарная :клиника
VBepeHHoevb
b знай*«*-
Журнал «Ветеринарная клиника» ежемесячное научно-практическое издание, в котором освещаются вопросы ветеринарной медицины мелких домашних и экзотических животных.
На страницах журнала публикуются: У интервью с ведущими ветеринарными специалистами (рубрика *УЕТ-персош>»); V статьи, освещающие вопросы лечения и профилактики заболеваний мелких домашн;
животных (рубрики «Терапия», «Онкология*, «Хирургия», «Стоматология»)-, У информация о новейших препаратах (рубрика «Фармакологиям)1 У информация о современных методиках диагностики заболеваний (рубрика «Диагно.
Приглашаем к сотрудничеству авторов и рекламодателей.
По всем вопросам обращайтесь в редакцию по телефонам: (343)21476-30,8-912-046-78-45. Адрес редакции: 620142, г. Екатеринбург, ул. Белинского, 112а. E-mail: [email protected].
