CC BY
44
© О. Я. Назаренко
УДК 618. 11-006. 2:618. 11-008. 61-089-055. 26 О. Я. Назаренко
ОСОБЕННОСТИ ГЕМОТКАНЕВОГО БАРЬЕРА ЖЕЛТОГО ТЕЛА ПРИ АПОПЛЕКСИИ ЯИЧНИКА ПО ДАННЫМ ЭКСПРЕССИИ СЭ34 ЭНДОТЕЛИОЦИТАМИ И КОЛЛАГЕНА IV ТИПА БАЗАЛЬНЫМИ МЕМБРАНАМИ КАПИЛЛЯРОВ
Одесский национальный медицинский университет (г. Одесса) Военно-медицинский клинический центр Южного региона (г. Одесса)
Данная работа является фрагментом комплексной НИР «Оптимізація діагностичних та лікувальних заходів при захворюваннях репродуктивної системи жінки з урахуванням патогенетичних молекулярно-генетичних механізмів», № гос. регистрации 01074011173.
Вступление. Желтое тело - преходящая, периодически формирующаяся и подвергающаяся инволюции структура яичника, физиологическая целесообразность которой заключается в секреции стероидов и пептидов, беременности [1]. В течение первых трех дней после овуляции, наряду с быстрым размножением клеток гранулезы, со стороны thecae internae в полость постовуляторного фолликула происходит интенсивное врастание образованных de novo капилляров. В результате этого между 8-м и 9-м днями после овуляции формируется один из самых высоких уровней кровотока в организме человека [2; 3]. Биологический смысл неоангиогенеза жёлтого тела - это адекватная выработка стероидов из холестерина (XC) для адекватной прогестероно-вой поддержки развивающейся беременности. Иногда врастание микрососудов в первичную полость может привести к кровотечению, что становится причиной острого хирургического вмешательства по поводу апоплексии яичника ^Я) [4; б].
CD34 - мембранный белок, молекула межклеточной адгезии, играющая роль в процессе неоангиогенеза, опосредует связывание эндотелиоцитов с внеклеточным матриксом базальных мембран и форменными элементами крови. Служит белковым скаффолдом для присоединения специфичных гли-канов, который позволяет лейкоцитам и тромбоцитам прикрепляться клектинам,экспрессированным клетками эндотелия. Кроме того, высокогликозили-рованный CD34 предоставляет углеводные лиганды для селектинов. Сегодня CD34 используется во многих научных исследованиях как ключевой маркер ангиогенной и функциональной активности эндотелия [6-8].
Другой изучаемый маркёр состояния микро-сосудистого русла - коллаген IV типа - основной структурный компонент базальной мембраны капилляров. Благодаря коллагену IV типа базальные мембраны обладают механической стабильностью и нерастворимостью [9; 10]. В последние годы активно изучается роль нарушений синтеза этого типа
коллагена в этиопатогенезе как генитальной, так и экстрагенитальной патологии [11; 12]
Цель работы - определить морфологические особенности гемотканевого барьера желтого тела у больных с AЯ при различных клинических вариантах течения заболевания по данным экспрессии CD34 эндотелиоцитами и содержанию коллагена IV типа в базальных мембранах капилляров.
Объект и методы исследования. Было обследовано 30 (100,0%) пациенток с AЯ, возникшей вследствие повреждения сосудов желтого тела и кисты желтого тела. Всем пациенткам, в связи с вну-трибрюшным кровотечением яичникового происхождения, была выполнена лапароскопическая операция в объеме резекции яичника с удалением источника кровотечения. Исследуемые женщины были разделены на три равные группы в зависимости от объема интраабдоминального кровотечения. В I группу включены женщины с гемоперитонеумом до 200мл, во II- пациентки с внутрибрюшным кровотечением объемом 200-500 мл, в III группу - больные, у которых гемоперитонеум превышал 500мл.
Иммуногистохимическое исследование удаленного оперативным путем источника овариального кровотечения проводили на парафиновых срезах толщиной 5-6 мкм непрямым и прямым методами Кунса по методике Brosman (1979) [13]. Коллаген IV типа определяли с помощью моноклональных антител (MI<A), меченных ФИТЦ к соответствующему типу коллагена, CD34 - MI<A, меченными ФИТЦ к CD34 -высокогликозилированному трансмембранному белку типа 1 (сиаломуцин), участвующему в межклеточной адгезии (cell-cell adhesion) и являющемуся маркером эндотелия и предшественников лимфопоэза. В качестве люминесцентной метки использовали F (ab)-2 - фрагменты кроличьих антител против иммуноглобулинов мыши, меченных ФИТЦ. Компьютерно- морфометрическое исследование проводили с помощью люминесцентного микроскопа «Axioskor 40». Оптическую плотность иммунофлюоресценции определяли по методу Г. И. Губиной-Вакулик и соавторов (2009) с помощью мікроскопа «Axioskor 40» и программного обеспечения Biostat. exe [14]. Цифровые данные обработаны методами вариационной статистики. Проведен корреляционно-регрессионный анализ.
Рис. 1. Слабое, местами умеренное свечение коллагена IV типа в базальных мембранах сосудов желтого тела - I клиническая группа.
Прямой метод Кунса с МКА к коллагену IV типа, х400.
Рис. 2. Ярко светящиеся эндотелиоциты, экспрессирующие рецепторы к ОР34 в сосудах желтого тела яичника - наблюдения I группы. Прямой метод Кунса с МКА к ОР34, х400.
Рис. 3. Неравномерное свечение коллагена IV типа в базальной мембране сосуда желтого тела яичника -наблюдение II группы. Прямой метод Кунса с МКА к коллагену IV типа, х400.
Результаты исследований и их обсуждение.
При иммуногистохимическом исследовании микропрепаратов пациенток I группы, обработанных МКА к коллагену IV типа, обнаружено преимущественно линейное, местами прерывистое специфическое свечение в стенках сосудов желтого тела. Интенсивность иммунофлюоресценции была неоднородной - отмечались зоны как яркого, так и слабого свечения. Преобладало свечение умеренной интенсивности. Оптическая плотность иммунофлюоресценции коллагена IV типа в сосудах желтого тела яичников пациенток с АЯ I группы составила (0,89±0,04) усл. ед. (рис. 1).
В препаратах, обработанных МКА к 0034, свечение выявлялось как в стенке сосудов, что соответствовало локализации эндотелия (последнее определялось при сопоставлении с препаратами, окрашенными гематоксилином и эозином), так и в строме желтого тела, поскольку известно, что рецепторы к 0034 способны экспрессировать не только эндотелиоциты, но также миофибробласты и фибробласты (рис. 2) Последние в большом количестве присутствуют в строме яичника, в том числе и желтого тела. Мы определили интенсивность свечения клеток, экспрессирующих рецепторы к 0034, как в стенках сосудов, так и в строме желтого тела.
Как и в I группе наблюдений, иммуногистохимически в микропрепаратах II группы, обработанных МКА к коллагену IV типа, в стенках сосудов желтого тела преобладало линейное свечение, изредка прерывистого характера. Интенсивность иммунофлюоресценции была неоднородной, а по сравнению с I группой - и ярче выраженной (рис. 3). Практически не отмечалось зон со слабой иммунофлюоресценцией. Как результат, показатель оптической плотности иммунофлюоресценции коллагена IV типа в сосудах желтого тела яичников во II группе наблюдений превысил таковой в наблюдениях I группы (табл. 1).
Аналогично I группе, в препаратах II группы, обработанных МКА к 0034, свечение выявлялось как в стенке сосудов, что соответствовало локализации эндотелия, так и в строме желтого тела (рис. 4). Обращало на себя внимание меньшее количество клеток, экспрессирующих эти рецепторы, в первую очередь, в стенке сосудов, тогда как в строме их количество практически не изменилось по сравнению с наблюдениями I группы.
Таблица 1
Оптическая плотность иммунофлюоресценции коллагена IV типа в сосудах желтых тел яичников в зависимости от объёма гемоперитонеума, усл. ед., М±т
Оптическая плотность иммунофлюоресценции I группа II группа III группа
Интенсивность свечения 0,89+0,04 1,32+0,04 * 1,49+0,03 **
Примечание: * - Р<0,05 по сравнению с показателем I группы;
** - Р<0,05 по сравнению с показателем II группы.
Рис. 4. Немногочисленные умеренно флюоресцирующие эндотелиоциты, экспрессирующие рецепторы к ОР34 в сосудах желтого тела яичника - наблюдения II группы. Прямой метод Кунса с МКА к ОР34, х400.
Рис. 5. Яркое свечение коллагена IV типа в утолщенной базальной мембране сосуда желтого тела яичника - наблюдения III группы. Прямой метод Кунса с МКА к коллагену IV типа, х400.
Рис. 6. Слабое свечение немногочисленных эндотелиоцитов, экспрессирующих рецепторы к ОР34, - наблюдение III группы. Прямой метод Кунса с МКА к ОР34, х 400.
Как следует из табл. 2, показатель оптической плотности иммунофлюоресценции эндотелиоцитов в сосудах желтого тела яичников пациенток с АЯ II группы ниже, чем в наблюдениях I группы. В то же время показатели оптической плотности иммунофлюоресценции стромальных элементов желтого тела практически не отличаются.
В микропрепаратах III группы, обработанных МКА к коллагену IV типа, преобладало яркое свечение более или менее выраженной интенсивности, как правило, линейного характера (рис. 5). Интенсивность иммунофлюоресценции по сравнению с I группой была ярче выражена, тогда как значительных отличий по сравнению с наблюдениями II группы не обнаружено.
Таблица 2
Оптическая плотность иммунофлюоресценции Ой34 в сосудах и строме желтых тел яичников в зависимости от объёма гемоперитонеума, усл. ед., М±т
Оптическая плотность иммуно- флюоресценции I группа II группа III группа
Стенка сосудов 0,61±0,05 0,49±0,04* 0,43±0,05**
Строма 0,42±0,08 0,43±0,02 0,52±0,06**
Примечание: * - Р<0,05 по сравнению с показателем I группы; ** - Р<0,05 по сравнению с показателем II группы.
В III группе свечение коллагена IV типа в базальных мембранах сосудов желтого тела оказалось максимальным, что может указывать на наличие признаков избыточного склероза в de novo образованных в стенках микрососудов жёлтого тела.
При обработке препаратов III группы наблюдения МКА к CD34 визуально по сравнению с наблюдениями I группы выявлялся выраженный дефицит клеток, экспрессирующих CD34, в первую очередь, в стенке сосудов. В то же время, по сравнению с наблюдениями II группы, зафиксировано увеличение количества клеток, экспрессирующих эти рецепторы (рис. 6). Показатель оптической плотности иммунофлюоресценции эндотелиоцитов в сосудах желтого тела яичников у пациенток III группы достоверно ниже, чем в наблюдениях I и II групп, а показатель оптической плотности иммунофлюоресценции стромальных элементов желтого тела достоверно повышен в наблюдениях III группы (табл. 2).
В наблюдениях I группы в сосудистых стенках микроциркуляторного русла выявлены умеренное накопление коллагена IV типа в составе базальных мембран и достаточно активная экспрессия эн-дотелиоцитами CD34. Адгезивные свойства стромальных клеток желтых тел I группы невысоки, что, возможно, связано со склеротическими процессами в интерстиции. Иммуногистохимические
особенности со стороны стромально-сосудистого и II групп и достоверно повышались в III группе, не-
и эпителиального компонентов желтых тел II группы смотря на максимальный объем внутрибрюшного
подобны таковым в наблюдениях I группы. В сосуди- кровотечения. Достоверное увеличение количества
стых стенках при наблюдениях III группы обнаруже- коллагена IV типа в базальных мембранах сосудов
ны пршнаш избыточного накоплена коллагена ^ желтого тела препаратов II и III групп может свиде-
типа в составе базальных мембран и резкое сниже- тельствовать о наличии избыточных склеротических
ние экспрессам эндотелиоцитами 0034 Между ко- изменений, повышающих ломкость капиллярной
личеством коллагена IV типа в составе сосудистых базальных мембран и интенсивностью экспресии
рецепторов к 0034 имеет место статистически достоверная отрицательная взаимосвязь (г=-0,7645).
Выводы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют о наличии определенных им-муногистохимических особенностей со стороны стромально-сосудистого и эпителиального компонентов в источнике АЯ, в зависимости от объ-
стенки, что становится причиной гемоперитонеума большего объема. В свою очередь, функциональная активность и адгезивные свойства эндотелиоцитов микроциркуляторного русла de novo образованных капилляров желтого тела были минимальными в клинических случаях АЯ, сопровождаемых значительным объемом внутрибрюшного кровотечения.
Перспективы дальнейших исследований.
ема внутрибрюшного кровотечения. Ддгезивные Поскоёьку в ПосЛедНие годы отмечается рост ча-
свойства эндотелиоцитов, зависящие от состояния стоты АЯ среди женщин раннег° репродуктивн°го
метаболических процессов в клетках, убывают от I возраста, изучение с°ст°яния сосудисто-эндоте-группы, характеризующейся минимальным гемопе- лиаёьного и стромаёьного компонентов источников
ритонеумом, к III группе, где объём гемоперитонеу- вНутрибрюШНого кровотечеНия яичНиковой этио-
ма был максимальным. В то же время, адгезивные л°гии будет сп°собств°вать пониманию этиопато-
свойства стромальных элементов желтого тела, генеза заболевания, что определяет актуальность
отражающие функциональную клеточную актив- данной темы и делает необходимым проведение
ность, практически не отличались в наблюдениях I дальнейших исследований.
Список литературы
1. Запорожан В. M. Гінекологічна патологія: Дтлас: Навч. посібник I В. M. Запорожан, M. Р. Цегельський. - Одеса: Одес. держ. мед. ун-т, 2002. - 308 С.
2. Mарченко Л. A. Желтое тело. Mеханизмы формирования и регресса I Л. A. Mарченко II Гинекология. - 2000. - Т. 2, № 5.
3. Mорфогенез и гистофизиология жёлтого тела I О. В. Волкова, Т. Г. Боровая, M. И. Пекарский, Ю. В. Полынцев II Aрхив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1985. - Т. LXXXVIII, № 3. - С. 5-19.
4. Запорожан В. M. Aкyшерcтво і гінекологія: підруч. для післядиплом. освіти лікарів, студентів, магістрів, аспірантів вищих мед. навч. закладів III-IV рівнів акредитації, клін. ординаторів: У 2-х т. I В. M. Запорожан, M. П. Цегельський, Н. M. Рожковська. - Одеса: Одес. держ. мед. ун-т, 2005. - Т. 2: Гінекологія. - 418 С.
5. Гладчук I. З. Aпоплекciя яєчника в сучасній гінекології I I. З. Гладчук, В. Л. Кожаков, О. В. Якименко II Репродуктивное здоровье женщины. - 2005. - № 4 (24). - С. 56-58.
6. CD34: structure, biology, and clinical utility I D. S. Krause, M. J. Fackler, C. I. Civin, W. S. May II Blood. - 2006. - Vol. 87 (1). -P. 1-13.
7. Siemerink M. J. Mechanisms of ocular angiogenesis and its molecular mediators I M. J. Siemerink, A. J. Augustin, R. O. Schlingemann II Dev. Ophthalmol. - 2010. - Vol. 46. - P. 4-20.
8. Expression of the CD34 gene in vascular endothelial cells I L. Fina, H. V. Molgaard, D. Robertson [etal.] II Blood. - 1999. -Vol. 75 (12). - P. 2417-2426.
9. Nikravesh M. R. Pattern of collagen IV expression in glumerular and mesangial basementmembrane during fetal and postnatal period of BALBIc mice I M. R. Nikravesh, M. Jalali, M. H. Karimfar [etal.] II Journal of Cell and Molecular Research. - 2009. -Vol. 1, N 2. - P. 90-95.
10. Ottani V. Collagen structure and functional implications I V. Ottani, M. Raspanti, A. Ruggeri II Micron. - 2001. - N 32. -P. 251-260.
11. Определение роли коллагена IV типа в патогенезе миомы матки I С. В. Савельев, С. Н. Буянова, Е. Л. Бабунашвили, M. В. Mгелиашвили II Российский вестник акушера-гинеколога. - 2007. - № 5 (21). - С. 51-57.
12. Филоненко Т. Г. Особенности локализации коллагена IV при фиброзно-кавернозном туберкулёзе I Т. Г. Филоненко II Таврический медико-биологический вестник. - 2012. - T. 15 (1). - С. 272-276.
13. Brosman M. Immunofluorescencne vysetrovanie formal-parafinovego materialu I M. Brosman II Cs. patol. - 1979. - Vol. 15, № 4. - P. 215-220.
14. Патент на корисну модель № 46489 G01N 33I00. Спосіб кількісного визначення вмісту антигену в біологічних тканинах I Губіна-Вакулик Г. I., Сорокіна I. В., Mарковcький В. Д., Купріянова Л. С., Сидоренко Р. В. - 25. 12. 2009. - Бюл. № 4.
УДК 618. 11-006. 2:618. 11-008. 61-089-055. 26
ОСОБЕННОСТИ ГЕМОТКАНЕВОГО БАРЬЕРА ЖЕЛТОГО ТЕЛА ПРИ АПОПЛЕКСИИ ЯИЧНИКА ПО ДАННЫМ ЭКСПРЕССИИ СD34 ЭНДОТЕЛИОЦИТАМИ И КОЛЛАГЕНА IV ТИПА БАЗАЛЬНЫМИ МЕМБРАНАМИ КАПИЛЛЯРОВ
Назаренко О. Я.
Резюме. В работе представлены результаты иммуногистохимического изучения сосудистоэндотелиального и стромального компонентов основного источника внутрибрюшного кровотечения овариальной этиологии - жёлтого тела и кисты жёлтого тела яичника. В удалённых в процессе оперативного вмешательства макропрепаратах на иммуногистохимическом уровне изучались особенности экспрессии эндотелием капилляров и клетками стромы желтого тела трансмембранного белка межклеточной адгезии - CD34, а также основного белка базальных мембран капилляров - коллагена IV типа. Установлена статистически достоверная отрицательная взаимосвязь (r=-0,7645) между количеством коллагена IV типа в составе сосудистых базальных мембран и интенсивностью экспрессии эндотелиоцитами CD34. Достоверное увеличение количества коллагена IV типа в базальных мембранах сосудов желтого тела может свидетельствовать о наличии избыточных склеротических изменений, повышающих ломкость капиллярной стенки, что становится причиной гемоперитонеума большего объема.
Ключевые слова: апоплексия яичника, молекулы межклеточной адгезии, CD34, коллаген IV типа, желтое тело яичника, иммуногистохимия.
УДК 618. 11-006. 2:618. 11-008. 61-089-055. 26
ОСОБЛИВОСТІ ГЕМОТКАНИННОГО БАР’ЄРУ ЖОВТОГО ТІЛА ПРИ АПОПЛЕКСІЇ ЯЄЧНИКА ЗА ДАНИМИ ЕКСПРЕСІЇ СD34 ЕНДОТЕЛІОЦИТАМИ Й КОЛАГЕНУ IV ТИПУ БАЗАЛЬНИМИ МЕМБРАНАМИ КАПІЛЯРІВ
Назаренко О. Я.
Резюме. У роботі представлені результати імуногістохімічного вивчення судинно-ендотеліального й стромального компонентів основного джерела внутрішньочеревної кровотечі оваріальної етіології - жовтого тіла й кісти жовтого тіла яєчника. У вилучених в процесі оперативного втручання макропрепаратах на імуногістохімічному рівні вивчалися особливості експресії ендотелієм капілярів і клітинами строми жовтого тіла трансмембранного білка міжклітинної адгезії - CD34, а також основного білка базальних мембран капілярів - колагену IV типу. Встановлено статистично вірогідний негативний взаємозв’язок (r=-0,7645) між кількістю колагену IV типу в складі судинних базальних мембран й інтенсивністю експресії ендотеліоцитами CD34. Вірогідне збільшення кількості колагену IV типу в базальних мембранах судин жовтого тіла може свідчити про наявність надлишкових склеротичних змін, що підвищують ламкість капілярної стінки, що стає причиною гемоперитонеума більшого об’єму.
Ключові слова: апоплексія яєчника, молекули міжклітинної адгезії, CD34, колаген IV типу, жовте тіло яєчника, імуногістохімія.
UDС 618. 11-006. 2:618. 11-008. 61-089-055. 26
The Peculiarities Of The Corpus Luteum Haemo-Tissue Barrier In Case Of Ovarian Apoplexy Using Both Cd34 Endotheliocites And Iv Collagen Type Expression By Capillary Basal Membranes
Nazarenko O. Ya.
Summary. Immune-histochemical data are presented concerning investigation of both vascular-endothelial and stromal components of intraabdominal bleeding major source - corpus luteum and ovarian corpus luteum cyst. The peculiarities of intercellular adhesion transmembrane protein CD34 together with capillaries base membranes main protein IV collagen type expressions by both capillary endotheliocites and corpus luteum stromal cells were studied using macrosamples obtained during surgical interventions. The significantnegative relation (r=-0,7645) was calculated between IV collagen type contentinside vascular base membranes and CD34 expressions intensity by endotheliocites. An importantIV collagen type contentinside corpus luteum vessels base membranes increase mightbe in favour of vascular extrasclerotic changes formation thatresultin capillary wall fragile and possible reason of haemoparitoneum large volume.
Key words: ovarian apoplexy, intercellular adhesion molecules, CD34, IV type of collagen, ovarian corpus luteum, immune-histochemistry.
Стаття надійшла 31. 07. 2012 р.
Рецензент - проф. Громова А. М.
