CC BY
35
ВЕСТНИК ВолГМУ
1
2007
УДК 116-006.04-085.28.275.2-085.275.4].015.046.076.9(045)
ОСОБЕННОСТИ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ НАРУШЕНИЙ ИММУННОГО ОТВЕТА, ОБУСЛОВЛЕННЫХ ПРИМЕНЕНИЕМ
ЦИКЛОФОСФАМИДА
П. Ф. Забродский, Г. С. Терентюк, И. А. Плахута, В. В. Серов
Саратовский военно-медицинский институт
В экспериментах на беспородных и линии СВА мышах установлено: иммуномодуляторы - Т-активин, мие-лопид и полиоксидоний, применяемые ежедневно в дозе 10 мкг/кг в течение 10 дней, при использовании цикло-фосфамида в режиме повышенной "дозовой плотности" способствуют существенному восстановлению активности естественных клеток-киллеров, антителозависимой клеточной цитотоксичности, функции макрофагов.
Ключевые слова: циклофосфамид, иммунодепрессия, коррекция, иммуномодуляторы.
FEATURES OF PHARMACOLOGICAL REGULATION OF IMMUNE RESPONSE DISTURBANCES CAUSED BY CYCLOPHOSPHAMIDE
P. F. Zabrodskii, G. S. ТегеМшк, I. A. Plakhuta, V. V. Serov
Abstract. In experiments on outbred and CBA line mice we have established that such immunomodulators as T-activine, mielopide and polyoxidonium in the dose of 10 |jg/kg daily for ten days while administering cyclophosphamide as a "dose-dense" chemotherapy invoked significant restorative activity of natural killers, antibody-dependent mediate cell-mediated cytotoxicity, function of macrophages.
Key words: cyclophosphamide, immunosuppression, correction, immunomodulators.
Важнейшей составляющей современной химиотерапии является иммунореабилитация, направленная на реадаптацию поврежденной иммунной системы до уровня, достаточного для обеспечения как противоинфекционой, так и противоопухолевой устойчивости организма. При лечении большинства злокачественных опухолей с успехом применяется циклофосфамид (ЦФ) -цитостатическое алкилирующее средство. Однако хорошо известно, что Цф проявляет выраженное иммунодепрессивное действие, демонстрируя супрессорную активность как в отношении пролиферирующих, так и "покоящихся" иммуно-компетентных клеток [5, 7]. Препарат является цитотоксичным для В-лимфоцитов и угнетает их стимулированную пролиферацию, оказывает редуцирующее действие на активность Т-лим-фоцитов, ингибируя выработку ими интерлейки-на-2, кроме того, он повреждает естественные клетки-киллеры - ЕКК [6]. Эти особенности высокоэффективного в онкологической практике препарата определяют необходимость уточнения способов фармакологической коррекции нарушенных функций иммунной системы путем применения иммуномодулирующих средств.
К иммуномодуляторам, восстанавливающим функционирование фагоцитов и ЕКК, а также дефекты гуморального иммунитета, относят по-лиоксидоний (ПО); средством, восстанавливающим гуморальный иммунитет, считают миелопид; к препаратам, регулирующим функционирование Т-клеточного звена причисляют Т-активин [4]. Так, иммуностимулирующий эффект Т-активина обусловлен активацией Т-лимфоцитов и макрофагов, участвующих в реализации Т-зависимых
иммунных реакций и антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) ЕКК [3]. Действие миелопида обусловлено не только его активирующим влиянием на В-клеточные иммунные реакции [4], но прямо или косвенно и на другие иммунные реакции [2, 5]. Учитывая эффективность Т-активина [2] и миелопида [5] при некоторых иммунодефицитных состояниях, целесообразно провести сравнительную оценку их действия на иммунные реакции после применения ЦФ [2, 6, 7, 9]. Иммуностимуляция при использовании ПО связана с его антиоксидантным, иммунокорреги-рующим, детоксиксикационным, гепатопротек-тивным, а также мембраностабизизирующим действиями [8]. Следует полагать, что обусловленные влиянием ЦФ нарушения иммунного го-меостаза могут быть в определенной степени восстановлены применением ПО.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Оценить сравнительную эффективность Т-активина, миелопида и ПО при фармакологической коррекции нарушений иммунного ответа, развившихся при моделировании в экспериментах на животных методики использования ЦФ в режиме повышенной "дозовой плотности" [11].
МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проводились на беспородных и линии сВа мышах обоего пола массой 18-22 г. ЦФ вводили внутрибрюшинно в дозе 150 мг/кг на 1, 4 и 7-й дни исследования [11, 12]. Иммуностимуляторы - Т-активин, миелопид, ПО - вводили внутримышечно ежедневно в дозе 10 мкг/кг с 1-го по 10-й день исследования. Показатели системы
1
ВЕСТНИК ВолГМУ
иммунитета оценивали через 10 суток после совместного применения ЦФ и иммуномодуляторов методами, общепринятыми в экспериментальной иммунофармакологии [2]. Гуморальную иммунную реакцию к Т-зависимому (эритроцитам барана - ЭБ) и Т-независимому (У1-Дд) антигенам определяли по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке через 4 суток после внутри-брюшинной иммунизации неинбредных мышей данными антигенами в дозах 2108 клеток и 8 мкг/кг соответственно на 6-е сут. после применения препаратов. В использованных тестах гуморальная иммунная реакция на введение ЭБ характеризует способность макрофагов и Т-лимфоцитов участвовать в продукции В-лимфоцитами (плазматическими клетками) 1дМ, а на введение У1-Дд -способность В-клеток синтезировать 1дМ [5]. АЗКЦ (функцию К-клеток) исследовали спектрофото-метрически с использованием спленоцитов на 10-е сутки от начала использования препарата у иммунизированных 108 ЭБ беспородных мышей на 6-е сутки после иммунизации. Активность ЕКК определяли по показателю естественной цитоток-сичности (ЕЦ) спектрофотометрически.
Способность макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа (СМИГИО) исследовали по числу АОК к ЭБ у мышей-реципиентов линии СВА. Макрофаги от сингенных мышей-доноров переносили реципиентам на 10-е сут. после комбинированного применения изучаемых препаратов. За 1,5 ч до переноса перитонеаль-ных макрофагов в брюшную полость мышам-донорам вводили 2,5108 ЭБ в 0,1 мл физиологического раствора [10]. Полученные данные обрабатывали статистически с использованием критерия достоверности Стьюдента.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Применение ЦФ вызывало вторичное имму-нодефицитное состояние, которое характеризовалось значимой редукцией Т-зависимого анти-телообразования (числа АОК к ЭБ) и Т-неза-висимой антителопродукции (числа АОК к У1-Дд). Так, число АОК к ЭБ и У1-Дд снижалось соответственно в 4,57 и 4,38 раз (р<0,05) (табл. 1). При этом по сравнению с показателями после изолированного воздействия ЦФ, миелопид, Т-активин и ПО, применявшиеся комбинированно с цито-статиком, повышали тимусзависимое антитело-образование соответственно в 3,34; 2,56 и 3,09 раз (р<0,05), а Т-независимое - в 3,16; 2,62 и 2,81 раз (р<0,05) соответственно.
В результате изолированного воздействия ЦФ существенно снижались активность ЕКК, АЗКЦ, а также способность макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа - соответственно в 3,24; 3,41 и 3,48 раз (р<0,05). Применение миелопида, Т-активина и ПО в комбинации с ЦФ вызывало увеличение по сравнению с параметрами после воздействия только цитостатика ЕКК в 1,99; 2,4 и 2,74 раза (р<0,05); АЗКЦ - в 2,0; 2,50 и 2,93 раза соответственно (р<0,05), а способ-
ность макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа - в 2,39; 2,82 и 3,14 раз (табл. 2).
Таблица 1
Влияние иммуностимуляторов на гуморальные иммунные реакции мышей после воздействия ЦФ (п = 8-12), М±т
Серии опытов АОК к ЭБ, 103 АОК к У1-Дд, 103
Контроль 39,8±2,8 30,2±2,3
ЦФ 8,7±0,9* 6,9±0,8*
ЦФ + миелопид 29,1 ±2,1** 21,8±2,2**
ЦФ + Т-активин 22,3±2,0** 18,1 ±1,8**
ЦФ + ПО 16,9±1,6** 14,4±1,3**
Примечание. Здесь и далее в табл. 2: * - р<0,05 по сравнению с контролем; ** - р<0,05 по сравнению с контролем и показателем при использовании ЦФ.
Таблица 2
Влияние иммуностимуляторов на клеточные иммунные реакции мышей и СМИГИО после воздействия ЦФ (п = 8-12), М±т
Серии опытов ЕЦ, % АЗКЦ, % СМИГИО, АОК к ЭБ, 103
Контроль 32,1 ±2,1 10,9±0,9 9,8±0,7
ЦФ 9,9±0,1,1* 3,2±0,3* 2,8±0,2*
ЦФ + миелопид 19,7±1,4** 5,9±0,5** 6,7±0,8**
ЦФ + Т-активин 23,8±1,9** 7,5±0,6** 7,9±0,6**
ЦФ + ПО 28,1 ±1,7** 9,4±0,7** 8,8±0,8**
Механизм редукции ЦФ гуморальных, клеточных иммунных реакций и способности макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа обусловлен истощением В-клеточно-зависимых пулов в селезенке и лимфоузлах, супрессией функции моноцитарно-макрофагальной системы, прямого повреждения ЦФ незрелых компонентов костномозговой ткани с последующим сокращением числа и снижением активности эффектор-ных клеток вследствие алкилирования молекул энзимов макрофагов и иммунокомпетентных клеток, а также в результате перекрестного связывания цепи ДНК и нарушения их деления продуктами метаболизма ЦФ [5].
Изучение сравнительной эффективности иммуномодуляторов на модели применения ЦФ с большой "плотностью" дозы [11] показало, что по степени эффективности в отношении гуморального иммунного ответа иммуностимуляторы в порядке увеличения эффекта располагались в последовательности: миелопид, Т-активин, по-лиоксидоний, а в отношении клеточного иммунного ответа - в последовательности: полиокси-доний, Т-активин, миелопид. Степень повышения способности макрофагов к индукции гуморального иммунного ответа исследованных препаратов увеличивалась в порядке: полиоксидоний, Т-акти-вин, миелопид.
Отдельными авторами высказывается предположение, что антитела при определенных условиях могут блокировать взаимодействие эффекторов противоопухолевого иммунитета с клетками-мишенями опухоли, тем самым благоприятствуя иммуностимуляции опухолевого роста [6, 12]. Учитывая данный феномен и результаты наших исследований, следует полагать, что в качестве наиболее эффективного препарата для коррекции иммунодефицита, обусловленного химиотерапией ЦФ, целесообразно рассматривать ПО как препарат активирующий преимущественно клеточное звено иммунитета. Следует отметить, что имму-нореабилитирующее (иммунопротективное) воздействие полиоксидония реализуется путем повышения продукции Т-лимфоцитами цитокинов, стимулирующих синтез иммуноглобулинов. Поли-оксидоний также увеличивает синтез мононуклеа-рами И-2, являющегося одним из индукторов функциональной активности цитотоксических клеток, а также И-1 и факторов некроза опухоли (а и р), играющих ключевую роль в запуске "цитоки-нового каскада", обеспечивающего защиту организма от цитостатического воздействия ЦФ [1].
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, в результате экспериментальной оценки сравнительной эффективности Т-активина, миелопида и ПО при фармакологической регуляции нарушений иммунного ответа, развившихся при моделировании на животных методики использования ЦФ в режиме повышенной "дозовой плотности", можно заключить, что
2007
иммуномодулирующие свойства полиоксидония наиболее соответствуют потребностям клиники при коррекции данной разновидности иммуноде-прессии. В качестве препарата выбора у больных, получающих химиотерапию ЦФ в режиме "высокой плотности" дозы, не исключается использование Т-активина.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бережная Н. М., Чехун В. Ф. Система интер-лейкинов и рак. - Киев: ДИА, 2000. - 224 с.
2. Забродский П. Ф, Лим В. Г., Мальцева Г. М. и др. Иммунотропные свойства холинергических веществ / Под ред. П. Ф. Забродского. - Саратов: Научная книга, 2005. - 251 с.
3. Имантаева Г. М. // Аллергол. и иммунология. -2005. - Т.6. - № 2. - С. 246-247.
4. Нестерова И. В. // Там же. - С. 139-140.
5. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология / Пер. с англ. - М.: Мир, 2000. - 582 с.
6. Савцова З. Д., Шпильова C. I., Тарутинов В. I. // Онкология. - 2000. - № 4. - С. 267-271.
7. Хаитов Р. М, Игнатьева Г. А, Сидорович И. Г. Иммунология. - М.: Медицина, 2000. - 430 с.
8. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. // Иммунология. -2005. - Т. 26, № 4. - С. 197-201.
9. Цепелев В. Л., Цепелев С. Л., Курупанов С. И. // Бюлл. СО РАМН. - 2003. - №1. - С. 84-86.
10. Argyris B. F. // Immunol. - 1967. - Vol. 99, № 4. -P. 744-750.
11. Fornier M., Norton L. // Breast Cancer Res. -2005. - Vol. 7. - P. 64-69.
12. Gilewski T., Norton L. // Diseases of the Breasts / Ed. by J. R. Harris and M. E. Lippman. - Philadelphia, 1996. - P. 751-768.
УДК 616-006.04-091.8
О НЕКОТОРЫХ ПАРАМЕТРАХ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ДЛЯ ОЦЕНКИ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ ОРГАНОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ
И. П. Шабалкин, И. Г. Богуш, А. С. Ягубов
Российский онкологический научный центр им. Н. Н. Блохина РАМН, г. Москва
С помощью метода цитофотометрии установлено, что такие параметры, как критерий Кфаген и модальный класс клеток, можно использовать для оценки функционального состояния клеточной популяции.
Ключевые слова: клеточная популяция, цитофотометрия.
ON SOME PARAMETERS USED FOR EVALUATION OF CELL POPULATIONS UNDER DIFFERENT INFLUENCES
I. P. Shabalkin, I. G. Bogush, A. S. Yagubov
Abstract. Cytophotometric method was helpful in establishing that such parameters as Kgenfa criterion and the modal class of cells can be used for estimation of functional state of cell population.
Key words: cell population, cytophotometry.
Анализ морфо-функционального состоя- влиянием различных факторов может меняться ния популяций клеток свидетельствует, что под их функциональное состояние [3, 4]. Поскольку
