CC BY
0
ОСОБЕННОСТИ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ В-ЛИМФОЦИТОВ У БЕРЕМЕННЫХ С ПРЕЭКЛАМПСИЕЙ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИНДЕКСА МАССЫ ТЕЛА
УДК 618.3-06:612.017.1
3.1.4 — акушерство и гинекология; 3.2.7 — клиничсекая иммунология, аллергология Поступила 10.04.2024
З.С. Хизриева, А.В. Кудряшова, И.А. Панова, Е.А. Рокотянская, К.Д. Рукавишников
ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Министерства здравоохранения РФ, Иваново
Цель исследования — выявить особенности дифференцировки В-лимфоцитов у женщин с преэклампсией в зависимости от индекса массы тела.
Материалы и методы. Проведен проспективный анализ 131 клинического случая преэклампсии. Материалом для исследования служила периферическая кровь от 131 пациентки с преэклампсией, с различным индексом массы тела. Методы включали проточную цитофлуориметрию, иммуноферментный анализ. Математический анализ данных проводился в пакете прикладных лицензионных программ Microsoft Office 2010, Statistica for Windows 13.0, l^dCa^ 7.4.4.1 с использованием персонального компьютера.
Результаты. У женщин с преэклампсией содержание популяций В-лимфоцитов (CD19+, CD20+), плазмоцитов (CD19+ CD20- CD38+), регуляторных В-клеток (CD20+ IL-10+), иммуноглобулинов G, A, M, IL-2, IL-5, IL-15 в зависимости от индекса массы тела не различалось. В группе женщин с высоким индексом массы тела отмечалось повышение уровня В-лимфоцитов, экспрессирующих TLR9 (CD20+ CD289+). Низкие значения показателя относительного содержания периферических TLR9-позитивных В-лимфоцитов, менее 24,1%, у всех женщин с преэклампсией позволяют прогнозировать церебральную ишемию у новорожденного.
Заключение. Исследование показателей дифференцировки В-клеток, иммуноглобулинов, а также цитокинов, регулирующих пролиферацию и дифференцировку В-клеток, не выявило значимых различий в группах женщин с преэклампсией с нормальным и высоким индексом массы тела. Повышение относительного содержания TLR9-позитивных клеток в популяции CD20+ В-лимфоцитов у женщин с преэклампсией и индексом массы тела более 25 кг/м2 может определяться стимулирующим воздействием молекулярных паттернов, высвобождающихся при повреждении клеток плаценты и жировой ткани.
Ключевые слова: преэклампсия; избыточная масса тела; популяция В-лимфоцитов; TLR9; перинатальные исходы.
DIFFERENTIATION OF B-LYMPHOCYTES IN PREGNANT WOMEN WITH PREECLAMPSIA
Z.S. Khizrieva, A.V. Kudryashova, I.A. Panova, E.A. Rokotyanskaya, K.D. Rukavishnikov
Ivanovo Scientific Research Institute of Motherhood and Childhood named after V.N. Gorodkov, Ivanovo
Purpose of the study — to identify features of B-Lymphocyte differentiation in women with preeclampsia depending on body mass index.
Materials and methods: A prospective analysis of 131 clinical cases of preeclampsia was carried out. The material for the study was peripheral blood from 131 patients with preeclampsia, with different body mass index. Methods included flow cytometry and enzyme immunoassay. Mathematical analysis of the data was carried out in the application license package Microsoft Office 2010, Statistica for Windows 13.0, MedCalc 7.4.4.1 using a personal computer.
Results: In women with preeclampsia, the content of populations of B-lymphocytes (CD19+, CD20+), plasma cells (CD19+ CD20- CD38+), regulatory B-cells (CD20+ IL-10+), immunoglobulins G, A, M, IL-2, IL-5, IL-15 did not differ depending on body mass index. In the group of women with high body mass index, there was an increase in the level of B-lymphocytes expressing TLR9 (CD20+ CD289+). Low values of the relative content of peripheral TLR9-positive B-lymphocytes, less than 24.1%, in all women with preeclampsia predict cerebral ischemia in the newborn.
Conclusions: A study of indicators of B-cell differentiation, immunoglobulins, as well as cytokines that regulate the proliferation and differentiation of B-cells did not reveal significant differences in the groups of women with preeclampsia with normal and high body mass index. The increase in the relative content of TLR9-positive cells in the CD20+ B-lymphocyte population in women with preeclampsia and a body mass index of more than 25 kg/m2 may be determined by the stimulating effect of molecular patterns released when placental cells and adipose tissue are damaged.
Key words: preeclampsia; overweight; B-lymphocyte population; TLR9; perinatal outcomes.
ВВЕДЕНИЕ
В настоящее время в структуре экстрагенитальной патологии одно из ведущих мест занимают болезни эндокринной системы, в том числе ожирение [1]. Распространенным осложнением беременности в этой группе женщин являются преэклампсия (ПЭ) и геста-ционная артериальная гипертензия. Доказано, что ожирение является одним из значимых факторов риска развития ПЭ у беременных, в том числе на фоне хронической артериальной гипертензии (ХАГ) [2, 3]. У беременных женщин с ожирением часто наблюдаются повышенные значения артериального давления с ранних сроков беременности, эндотелиальная дисфункция и нарушение иммунного ответа [4].
Жировая ткань — активный эндокринный и пара-кринный орган, синтезирующий различные вещества, называемые адипокинами. Они участвуют в процессах метаболизма глюкозы и липидов, ангио-генеза, воспаления и регуляции артериального давления [5]. Жировая ткань —богатый источник про-воспалительных цитокинов и белков комплемента,
которые участвуют в патогенезе ПЭ, способствуя экспрессии антиангиогенных факторов у матери [2]. Кроме того, ожирение связано с более высокой частотой патологии плода и новорожденного, а также с долгосрочными последствиями для потомства, включая повышенную заболеваемость аллергией, астмой и нарушениями обмена веществ [6].
В проведенных ранее нами исследованиях у женщин с ПЭ в периферической крови было выявлено повышение относительного содержания В1-клеток, плазмоцитов, В-клеток памяти и снижение уровня регуляторных клеток ^-10+ Вгед, уровня сывороточных 1дМ, а также интерлейкинов 1Ь-2 и 1Ь-15, регулирующих пролиферацию В-лимфоцитов [7]. В большом обзоре M.Maдatti et а1. популяция В-лимфоци-тов рассматривается как доминирующий компонент патогенеза ПЭ [8]. Показано, что при ПЭ в периферической крови определяется широкий спектр аутоан-тител к клеткам различных органов и к компонентам экстрацеллюлярного матрикса [9]. В большинстве исследований отмечается роль популяции В1-клеток и продуцируемых ими аутоантител к рецептору анги-
отензина 1 (АТ1) в аутоиммунных реакциях на системном уровне и в плаценте [8, 10]. Все это свидетельствует об участии В-клеток в развитии воспалительных и аутоиммунных реакций при данном осложнении беременности.
Главным источником стимулов, определяющих развитие патологических иммунных реакций при ПЭ, является плацента. Основополагающим звеном плацентарных нарушений выступают плацентарная ишемия и гипоксия, которые в свою очередь запускают процессы высвобождения провоспали-тельных, антиангиогенных и прокоагулянтных факторов, а также антигенов плодового происхождения, влияющих на активность В-лимфоцитов [11, 12].
Согласно литературным данным, плацента при преэклампсии подвержена митохондриальной дисфункции, а именно окислительному стрессу, ввиду нарушения баланса между прооксидантными и ан-тиоксидантными системами [13, 14]. Митохондриаль-ная дисфункция сопровождается повреждением митохондрий и выбросом большого уровня DAMP (Damage-associated molecular pattern), который является молекулярным паттерном, связанным с повреждениями клеток. Эти молекулы взаимодействуют с Толл-подобными рецепторами (TLR, Toll-like receptor) клеток иммунной системы, активируя их и стимулируя каскад реакций иммунной системы [13, 15]. В-клетки человека экспрессируют несколько TLR (TLR6, TLR7, TLR9, TLR10). Особого внимания заслуживает TLR9, поскольку он экспрессируется в В-клет-ках человека на высоком уровне. Показано, что нарушение регуляции ответа TLR9 в В-клетках — важный фактор патогенеза аутоиммунных заболеваний [16]. В то же время стимуляция TLR9 В-клеток и активация CD40 индуцируют выработку IL-10 и иммуно-супрессивную функцию специфических подпопуля-ций IL-10+ B-клеток [17].
Регуляторные В-клетки (Breg) — достаточно разнообразная клеточная популяция, но большинство их супрессорных эффектов связывают со способностью продуцировать IL-10 [18]. Breg способствуют поддержанию беременности и толерантности к по-луаллогенным антигенам плода путем подавления провоспалительных и аутоиммунных реакций [8, 18].
Процессы дифференцировки В-клеток регулируются комплексом цитокинов, важнейшими из которых являются IL-2, IL-5 и IL-15. По данным литературы, в сыворотке периферической крови женщин с ПЭ уровень IL-2 и IL-15 весомо превышает значения при неосложненной беременности [19, 20]. IL-2 способствует пролиферации В-клеток, усилению секреции антител, а IL-15 регулирует выживание клеток памяти в отсутствие антигена [21]. IL-5 может стимулировать пролиферацию и дифференцировку B1-и В2-лимфоцитов в плазматические клетки [22].
Таким образом, процесс дифференцировки В-лим-фоцитов определяется балансом активирующих
и ингибирующих факторов, уровень экспрессии которых может значительно изменяться при избыточном накоплении жировой ткани. Это определяет актуальность исследования особенностей дифференцировки В-лимфоцитов у женщин с ПЭ, в том числе возникшей на фоне ХАГ, в зависимости от индекса массы тела (ИМТ).
Цель исследования — выявить особенности дифференцировки В-лимфоцитов у женщин с преэклампсией в зависимости от индекса массы тела.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Проанализированы данные анамнеза, течения беременности, исходы родов и результаты иммунологического обследования 131 пациентки с преэ-клампсией, в том числе на фоне ХАГ, родоразрешен-ной на базе ФГБУ «Ив НИИ МиД имени В.Н. Городкова» Минздрава России. Первую группу составили 78 беременных с ИМТ более 25 кг/м2, вторую — 53 женщины с нормальным ИМТ (менее 25 кг/м2). Критерии включения — беременные с умеренной и тяжелой ПЭ, в том числе возникшей на фоне ХАГ. Критериями исключения стали вторичная (симптоматическая) артериальная гипертензия, сахарный диабет, в том числе гестационный, беременность многоплодная и после применения вспомогательных репродуктивных технологий.
Популяционный и субпопуляционный состав В-клеток определяли методом проточной цито-флуориметрии в периферической венозной крови, взятой в пробирки, содержащие 2,7% раствор эти-лендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) из расчета 3 мл крови на 1 мл раствора ЭДТА. Далее к 100 мкл крови прибавляли по 5 мкл соответствующих моноклональных антител и инкубировали 30 мин в темноте при комнатной температуре. Для определения уровня клеток использовали следующее сочетание моноклональных антител: плазмо-цитов анти-^19-АРС (клон IM2470, Beckman Coulter, Франция), анти-CD20-FITC (клон IC0-180, ООО «Сорбент», Россия), анти-CD38-РЕ (клон LS198-4-3, Beckman Coulter, Франция); регулятор-ных В-клеток — анти-CD20-FITC (клон IC0-180, ООО «Сорбент», Россия) и анти-^-10-РЕ (клон JES3-9D7, eBioscience, США); В-клеток анти-CD20-FITC (клон IC0-180, ООО «Сорбент», Россия), экс-прессирующих толл-лайк-рецептор 9-го типа (TLR9) анти-CD289-PE (клон eB72-1665, eBios-cience, США). Исследование относительного содержания IL-10+ Breg проводили по внутриклеточному окрашиванию CD20+ лимфоцитов интерлей-кином-10 в соответствии с методическим руководством к набору IntraPrep (Beckman Coulter, Франция). В популяции CD20+ лимфоцитов определяли уровень клеток, поверхностно экспресси-рующих TLR9 (surface, sTLR9+). После инкубации
blOOd-CDI 9+CD20-CD38 +
' I I 1 I ] I 1 г I [ I I I 1 J 1 i г т I I I I I J f
50 1DD ISO 200 250 FSC-A (X1-OOB)
bl00d-CD19+CD20-CD38+
< о -
I
о ' со со !
Р 2
I шш[ г iiiTTKf г i TTimj 1 т rmq 1Û2 Ю3 10* 103 CD19 АРС-А
blOOd-CD1 9+CD20-CD38+
<ч-
d) S
CL.
CO
О s
О
Q1 QZÏ5&;', ч>>:ч
Q3
10
10 10 CD 2 0 FITC-A
ю
а
б
сэ -
а -
-
•¿S <-* -
< а -
О
го -
со Oj
blOQd-CD20+IL-1
III Ilill I III Mill I I P2 i iiiii i 111 inn i
10
10 10
CD-20 FITC-A
blood-CD20+lL-10+
10 10'
IL-10 P£-A
тпц i 10" 10S
blOOd-CD20+TLR9+
10 10 10 10 TLR9 PË-A
Определение клеточных популяций В-лимфоцитов
в
д
г
е
проводился лизис эритроцитов раствором LysingSolution в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя реактива (Becton Dickinson, США). Учет клеток проводили на приборе FACSCantoll (Becton Dickinson, США) в программе FACSDiva. Настройку цитометра для фенотипиро-вания осуществляли по стандартному протоколу с применением изотипического контроля и контроля неокрашенных клеток [23].
На графике прямого и бокового светорассеяния ограничивали область лимфоцитов (первый гейт) (см. рисунок, а) и определяли относительное содержание CD20+, CD19+ клеток в общем пуле лимфоцитов. При построении второго гейта среди всех лимфоцитов ограничивали область клеток, экспрессиру-ющих CD19 (см. рисунок, б) для определения популяции плазмоцитов CD19+ CD38+ CD20 (см. рисунок, в), или экспрессирующих CD20 (см. рисунок, г) для определения популяций регуляторных CD20+ IL-10+ клеток (см. рисунок, д) и TLR9-позитивных клеток CD20+ TLR9+ (см. рисунок, е). Уровень клеток рассчитывался как их процентное содержание во втором гейте.
Сывороточное содержание цитокинов IL-2, IL-5,
IL-15 определяли на приборе Luminex200 (Bio-Rad, США) с использованием набора Bio-PlexProHuman-Cytokinepanel, 27-Plex (Bio-Rad, США). Сывороточное содержание IgA, IgM, IgG оценивали методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) тест-системами «Иммуноскрин» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия) на микропланшетном ридере Multiscan FC (Termo Fisher Scientific, КНР).
Математический анализ полученных данных проводился в пакете прикладных лицензионных программ Microsoft Office 2010, Statistica for Windows 13.0, MеdCalc 7.4.4.1 с использованием персонального компьютера. Для оценки значимости распределения качественного признака между группами применяли критерий х2. Используя критерии Колмогоровa и Ша-пиро-Уилга, осуществляли проверку рядов данных на нормальность распределения. Количественное описание величин с нормальным распределением выполнялось с помощью подсчета среднего арифметического и стандартной ошибки среднего (M±m). Различия между группами оценивались по t-крите-рию Стьюдента. Если распределение отличалось от нормального, значения величин представлялись в виде медианы с указанием 25-го и 75-го перценти-
лей — Ме (025%-075%). Если распределение отличалось от нормального, достоверность различий между показателями оценивалась с помощью критерия Манна-Уитни. Уровень значимости р<0,05 расценивался как статистически значимый.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Средний возраст женщин в группах не различался, в первой группе составил 31,9 [26,0-37,0] года, во второй — 31,1 [27,5-35,5] года (р>0,05). Группы были сопоставимы по степени тяжести преэклампсии (табл. 1). Ранняя ПЭ (манифестация гипертензивных расстройств и протеинурии до 34 нед беременности) встречалась в обеих группах без статистически значимых различий (52,8 и 64,0% соответственно, р>0,05). Средний срок родоразрешения в первой группе составил 34,7 [31,40-37,20] нед, во второй — 33,1 [31,2-36,3] нед (р>0,05). Преждевременные роды в первой группе произошли у 57 женщин (73%
случаев), во второй группе — у 40 женщин (75,4% случаев, р>0,05). Перинатальная патология у новорожденных в первой группе отмечена в 76,9% случаев, во второй — в 75,4% (р>0,05). Ведущее место в структуре перинатальной патологии занимало перинатальное поражение центральной нервной системы, в первой группе данная патология отмечена в 58,9% случаев (46 новорожденных), во второй — в 60% (32 новорожденных) (р>0,05).
В ходе оценки иммунного статуса женщин с ПЭ и различным ИМТ не выявлены статистически значимые различия в содержании в периферической крови CD19+ В-лимфоцитов (3,95% [2,38-6,18] и 4,80% [3,50-7,40] соответственно, р>0,05) и CD20+ В-лимфоцитов (4,10% [2,50-7,20] и 5,10% [4,00-7,90] соответственно, р>0,05).
Содержание плазмоцитов и регуляторных клеток в популяции В-лимфоцитов в периферической крови также статистически не различалось (р>0,05) (табл. 2).
Таблица 1
Степени тяжести преэклампсии в группах, число наблюдений N (%)
Степень тяжести преэклампсии Женщины с ИМТ более 25 кг/м2, n=78 Женщины с ИМТ менее 25 кг/м2, n=53
Умеренная ПЭ 46 (59,0) 33 (62,2)
Тяжелая ПЭ 32 (41,0) 20 (37,8)
Таблица 2
Содержание плазмоцитов, регуляторных клеток и клеток, экспрессирующих sTLR9, в популяции В-лимфоцитов в периферической крови женщин с преэклампсией
Показатель, %, Ме (Q25%-Q75%) Женщины с ПЭ и ИМТ более 25 кг/м2 Женщины с ПЭ и ИМТ менее 25 кг/м2 р
CD19+ CD20-CD38+ 3,35 (1,65-6,95), n=78 4,40 (1,30-9,10), n=53 0,837
CD20+ IL-10+ 17 (11,70-21,50), n=78 15,6 (9,10-17,80), n=53 0,412
CD20+sTLR9+ 33,5 (14,8-43,6), n=26 9,7 (4,9-18,6), n=28 0,000
Таблица 3
Содержание IL-2, IL-5, IL-15 в сыворотке периферической крови женщин с преэклампсией
Показатели, пкг/мл, Ме (Q25%-Q75%) Женщины с ИМТ более 25 кг/м2, n=78 Женщины с ИМТ менее 25 кг/м2, n=53 р
IL-2 10,05 (3,00-15,62) 9,18 (2,64-14,94) 0,353
IL-5 3,00 (3,00-4,49) 3,00 (3,00-3,10) 0,777
IL-15 41,59 (7,00-57,60) 30,91 (9,11-68,61) 0,820
Таблица 5
Содержание sTLR9+ клеток в популяции С020+ лимфоцитов в группах женщин с преэклампсией, родивших детей с церебральной ишемией и без нее
Таблица 4
Содержание иммуноглобулинов в сыворотке периферической крови женщин с преэклампсией
Показатели, г/л, Ме (025%-075%) Женщины с ИМТ более 25 кг/м2, п=78 Женщины с ИМТ менее 25 кг/м2, п=53 р
ДО 2,34 (1,85-2,94) 2,51 (2,03-3,04) 0,671
ДО 12,01 (8,32-16,15) 11,37 (7,91-12,89) 0,163
^М 1,83 (1,17-2,48) 1,54 (1,25-2,61) 0,996
Содержание £1^9+ клеток, %, Ме (025%-075%) Отсутствие церебральной ишемии у новорожденных Наличие церебральной ишемии у новорожденных р
Женщины с преэклампсией, п=54 43,00 (33,45-49,90) 11,95 (6,40-16,65) 0,000
Женщины с преэклампсией и ИМТ более 25 кг/м2, п=26 40,20 (33,45-45,65) 14,80 (10,20-19,80) 0,000
Женщины с преэклампсией и ИМТ менее 25 кг/м2, п=28 48,05 (37,90-52,10) 7,6 (4,10-15,70) 0,002
При этом у женщин с ПЭ и ИМТ более 25 кг/м2 значимо возрастало относительное содержание В-лим-фоцитов, экспрессирующих TLR9, по сравнению с женщинами с нормальным ИМТ (см. табл. 2).
Исследование сывороточного содержания цитоки-нов, регулирующих пролиферацию и функциональную активность В-клеток, показало, что уровень ^-2, ^-5, ^-15 в популяции CD20-позитивных В-лимфоци-тов в периферической крови женщин с преэклампсией не имел зависимости от ИМТ (р>0,05) (табл. 3).
Содержание иммуноглобулинов основных классов G, А, М в сыворотке периферической крови не имело статистически значимых различий в сравниваемых группах (р>0,05) (табл. 4).
Учитывая тот факт, что ожирение матери влияет на формирование неонатальной патологии [9], мы провели статистический анализ показателей содержания плазмоцитов, ^-10+ Вгед и sTLR9+ В-лимфо-цитов в группах женщин с различным ИМТ в зависимости от перинатальной патологии у новорожденных. Это исследование выявило, что только один из показателей — относительное содержание sTLR9+ клеток в популяции CD20+ лимфоцитов — значимо различался при рождении детей с церебральной ишемией (табл. 5).
Результаты исследования показали, что для
всех женщин с ПЭ, в том числе в группах с различным ИМТ, при развитии церебральной ишемии у новорожденных было характерно сниженное содержание sTLR9+ В-лимфоцитов. На основании полученных данных разработан «Способ прогнозирования церебральной ишемии новорожденных от матерей с преэклампсией», отличающийся тем, что в сроке 24-40 нед беременности в периферической крови определяют относительное содержание клеток, экспрессирующих поверхностную форму TLR9 в популяции CD20+ В- лимфоцитов (sTLR9+ В-лимфоциты) и при их значении, равном 24,1% или менее, прогнозируют рождение ребенка с церебральной ишемией с точностью 96,8% (заявка № 2023132785 «Способ прогнозирования церебральной ишемии новорожденных от матерей с преэклампсией»).
ОБСУЖДЕНИЕ
Предварительный анализ литературы поставил ряд вопросов, на которые мы старались ответить в нашем исследовании. Анализ течения преэ-клампсии и исхода беременности в группах женщин с различными значениями ИМТ не выявил статистически значимых различий в сравниваемых группах.
Несмотря на то, что повышенный ИМТ ассоциируется с поздним началом преэклампсии [24], мы не выявили зависимости манифестации ПЭ от ИМТ.
В последние годы накопилось много данных о том, что в развитии ПЭ участвуют аномальные иммунные реакции. Однако степень выраженности этих реакций значительно варьирует, в зависимости от сопутствующих «предгравидарных» факторов, одним из которых является избыточная масса тела. Большинство авторов сходится во мнении, что при ожирении в жировой ткани развивается низкоуровневое хроническое воспаление [25-27]. Индукторами воспалительной реакции выступают насыщенные жирные кислоты, лептин, молекулярные паттерны, связанные с гипоксией, повреждением гипертрофированных адипоцитов (Damage associated molecular pattern) [25]. В дополнение к классическим полипептидам адипокинам и цито-кинам, адипоциты могут продуцировать и секрети-ровать внеклеточные везикулы, содержащие ли-пиды, белки и ДНК [26]. Предполагается, что внеклеточные везикулы жировой ткани регулируют метаболические и иммунные реакции как в ближайшем микроокружении, так и в отдаленных тканях [28].
В последнее время в литературе появилось много данных об участии популяции В-лимфоци-тов в патогенезе преэклампсии. Их роль в реализации воспалительной реакции определяется способностью дифференцироваться в плазматические клетки, продуцирующие антитела, в том числе и аутоантитела; регуляторные В-клетки, ограничивающие чрезмерное развитие иммунного ответа [8, 9, 29]. В ряде работ было показано, что ПЭ сопровождается увеличением содержания и активации периферических и децидуальных В-лимфоцитов [8, 29], ростом популяций В1-лим-фоцитов [9], усилением продукции аутоантител и антител к рецептору 1 типа AnglI (A^R) [7]. Показано, что у беременных с гипертензивными расстройствами изменение характера дифференци-ровки В-лимфоцитов ассоциируется с усилением жесткости сосудистой стенки и повышением уровня артериального давления [19]. Среди факторов, провоцирующих активацию клеток иммунной системы у беременных с гипертензивными расстройствами, наиболее значимыми считаются поступающие в кровоток матери микрочастицы плацентарного, тромбоцитарного и эндотелиального происхождения [30].
Все эти данные свидетельствуют о том, что В-кле-точное звено иммунитета у женщин с преэклампсией при ожирении должно испытывать двойное стимулирующее влияние, как со стороны плацентарного компартмента, так и со стороны жировой ткани.
В нашем исследовании содержание В-лимфоци-тов, плазмоцитов и регуляторных В-лимфоцитов
в группах женщин с различными значениями ИМТ не различалось. Как известно, стимулировать пролиферацию В-клеток способны IL-2 и IL-5. Кроме того, IL-5 регулирует дифференцировку B-лимфо-цитов в плазматические клетки, а IL-15 регулирует выживание клеток памяти в отсутствие антигена [30, 31]. Следовательно, отсутствие значимых изменений в содержании В-лимфоцитов, плазмоцитов и регуляторных В-клеток согласуется с полученными данными о сопоставимых сывороточных уровнях IL-2, IL-5 и IL-15 в сравниваемых группах. В то же время мы отметили рост уровня В-лимфо-цитов, экспрессирующих поверхностную форму толл-подобного рецептора 9-го типа, в группе женщин с высокими значениями ИМТ. Скорее всего, изменение данного показателя определяется стимуляцией В-клеток Toll-белками и отражает более высокий уровень их активации в группе женщин с высокими значениями ИМТ.
Толл-подобные рецепторы 9-го типа отвечают за стимуляцию DAMP (Damage-associated molecular pattern), который является молекулярным паттерном, связанным с повреждениями клеток. TLR9 распознает фрагменты ДНК, высвобождаемые из клеток-хозяев [31]. В жировой ткани различные стрессовые факторы высвобождают фрагменты ДНК и/или ядерные белки в виде DAMP из дегене-рированных адипоцитов, а способность TLR9 распознавать собственную ДНК может индуцировать воспаление при аутоиммунных заболеваниях [32]. Ранее считалось, что TLR9 является внутриклеточным рецептором распознавания образов (PRR). В настоящее время известно, что локализация TLR9 возможна как внутри эндосом (eTLR9), так и на поверхностной мембране В-клеток (sTLR9) [31, 32]. Существуют также исследования, предполагающие, что sTLR9 может быть своего рода негативным регуляторным фактором для B-клеток, противодействуя чрезмерной активации эндосомальной формы данного рецептора, тем самым ограничивая активацию аутореактивных В-клеток [29, 32]. В связи с этим заслуживает особого внимания установленный нами факт низкого содержания В-лимфоцитов, экспрессирующих TLR9, у всех женщин с преэклампсией, родивших детей с церебральной ишемией. Для преэклампсии характерно избыточное поступление в кровоток матери фе-тальной ДНК в результате некроза и апоптоза клеток плаценты [12]. Вероятно, при высоком уровне периферических sTLR9+ В-клеток матери сдерживается чрезмерное развитие аутоиммунных реакций в отношении плодово-плацентарных тканей, а при их низком уровне патологические реакции усугубляются. Это может создавать порочный круг поражения плацентарных структур, тем самым способствуя гипоксии плода и формированию церебральной ишемии новорожденных.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Исследование показателей дифференцировки В-клеток, а также цитокинов, регулирующих пролиферацию и дифференцировку В-клеток, не показало значимых различий в группах женщин с преэклампсией с нормальным и высоким индексом массы тела. Однако в группе женщин с индексом массы тела более 25 кг/м2 отмечалось повышение относительного содержания TLR9-позитив-ных клеток в популяции CD20+ В-лимфоцитов, что может определяться стимулирующим воздействием молекулярных паттернов, высвобождающихся при повреждении из клеток плаценты и жировой ткани. В то же время анализ данных показал, что у всех женщин с преэклампсией снижение уровня В-лимфоцитов, экспрессирующих мембранную форму TLR9, в значительной степени коррелирует с развитием церебральной ишемии у новорожденных. Эти данные свидетельствуют о том, что содержание TLR9-позитивных В-лимфоцитов в периферической крови женщин с преэклампсией в сроки 24-40 нед гестации является прогностическим критерием данной патологии новорожденного.
Финансирование исследования и конфликт интересов. Исследование не финансировалось каким-либо источником, и конфликты интересов, связанные с данным исследованием, отсутствуют.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Серегина Д.С., Николаенков И. П., Кузьминых Т.У. Ожирение — ведущее патогенетическое звено патологического течения беременности и родов. Журнал акушерства и женских болезней 2020; 69(2): 73-82, https://doi.org/10.17816/J0WD69273-82. Seryogina D.S., Nikolayenkov I. P., Kuzminykh T. U. Obesity represents a strong pathogenetic link with the pathology of pregnancy and childbirth. Zhurnal akusherstva i zhenskikh bolezney 2020; 69(2): 73-82, https://doi.org/10.17816/JOWD69273-82.
2. Olson K.N., Redman L.M., Sones J.L. Obesity "complements" preeclampsia. Physiol Genomics 2019; 51(3): 73-76, https://doi. org/10.1152/physiolgenomics.00102.2018.
3. Панова И.А., Малышкина А.И., Рокотянская Е.А., Смирнова Е.В. Факторы риска присоединения преэклампсии у женщин с хронической артериальной гипертензией. Российский вестник акушера-гинеколога 2014; 14(6): 37-42. Panova I.A., Malyshkina A.I., Rokotianskaia E.A., Smirnova E.V. Risk factors for addition of preeclampsia in women with chronic hypertension. Rossiyskii vestnik akushera-ginekologa 2014; 14(6): 37-42.
4. Ramsay J.E., Ferrell W.R., Crawford L., Wallace A.M., Greer I.A., Sattar N. Maternal obesity is associated with dysregulation of metabolic, vascular, and inflammatory pathways. Clin Endocrinol Metab 2002; 87(9): 4231-4237, https://doi.org/10.1210/jc.2002-020311.
5. Poniedziatek-Czajkowska E., Mierzynski R., Leszczynska-Gorzelak B. Preeclampsia and obesity — the preventive role of exercise. Int J Environ Res Public Health 2023; 20(2): 1267, https://doi.org/10.3390/ijerph20021267.
6. Царева С.Н., Царев В.П. Роль абдоминального ожирения у беременных в формировании плацентарной недостаточности и преэклампсии. Медицинский журнал 2019; (2): 2832. Tsareva S.N., Tsarev V.P. The role of abdominal obesity in pregnant women in the formation of placental insufficiency and preeclampsia. Meditsinskiy zhurnal 2019; (2): 28-32.
7. Панова И.А., Кудряшова А.В., Панащатенко А.С., Рокотянская Е.А., Малышкина А.И., Парейшвили В.В., Харламова Н.В. Характер дифференцировки В-лимфоцитов у женщин с гипертензивными расстройствами при беременности. Клиническая лабораторная диагностика 2021; 66(8): 489-495, https://doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-8-489-495. Panova I.A., Kudryashova A.V., Panashchatenko A.S., Rokotyanskaya E.A., Malyshkina A.I., Parejshvili V.V., Harlamova N.V. Character of B-lymphocytes differentiation in women with hypertensive disorders during pregnancy. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika 2021; 66(8): 489-495, https://doi.org/10.51620/0869-2084-2021-66-8-489-495.
8. Magatti M., Masserdotti A., Cargnoni A., Papait A., Stefani F.R., Silini A.R., Parolini O. The role of B cells in PE pathophysiology: a potential target for perinatal cell-based therapy? Int J Mol Sci 2021; 22(7): 3405, https://doi.org/10.3390/ijms22073405.
9. Мальсагов А.А., Цахилова С.Г., Сакварелидзе Н.Ю., Смирнова Л.Е., Бегизова А.М., Малышева Е.М., Жарков Н.В., Меджито-ва М.К. Клинико-диагностическое значение определения ауто-антител у беременных с преэклампсией. Проблемы репродукции 2020; 26(1): 90-94, https://doi.org/10.17116/repro20202601190. Malsagov A.A., Tsakhilova S.G., Sakvarelidze N.Yu., Smirnova L.E., Begizova A.M., Malysheva E.M., Zharkov N.V., Medzhitova M.K. The clinical significance of natural autoantibodies for the diagnosis of preeclampsia. Problemy reproduktsii 2020; 26(1): 90-94, https://doi. org/10.17116/repro20202601190.
10. Yang X., Wang F., Lau W. B., Zhang S., Zhang S., Liu H., Ma X.- L. Autoantibodies isolated from preeclamptic patients induce endothelial dysfunction via interaction with the angiotensin II AT1 receptor. Cardiovasc Toxicol 2014; 14(1): 21-29, https://doi. org/10.1007/s12012-013-9229-8.
11. Керкешко Г.О., Кореневский А.В., Соколов Д.И., Сельков С.А. Роль взаимодействия экстраклеточных микровезикул трофоб-ласта с клетками иммунной системы и эндотелия в патогенезе преэклампсии. Медицинская иммунология 2018; 20(4): 485-514, https://doi.org/10.15789/1563-0625-2018-4-485-514. Kerksehko G.O., KorenevskyA.V., Sokolov D.I., Selkov S.A. The role of interactions between trophoblastderived extracellular microvesicles, immune cells and endothelium in pathogenesis of pre-eclampsia. Meditsinskaya immunologiya 2018; 20(4): 485-514, https://doi.org/10.15789/1563-0625-2018-4-485-514.
12. Красный А.М., Грачева М.И., Садекова А.А., Вторушина В.В., Балашов И.С., Кан Н.Е., Боровиков П.И., Кречетова Л.В., Тютюн-ник В.Л. Комбинированное исследование общей, фетальной ДНК, цитокинов в плазме крови матери при преэклампсии. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2017; 164(12): 686-691. Krasnyy A.M., Gracheva M.I., Sadekova A.A., Vtorushina V.V., Balashov I.S., Kan N.E., Borovikov P.I., Krechetova L.V., Tyutyunnik V.L. Combined study of total, fetal DNA, cytokines in maternal blood plasma in preeclampsia. Byulleten' eksperimental'noy biologii i meditsiny 2017; 164(12): 686-691.
13. Кулида Л.В., Рокотянская Е.А., Малышкина А.И., Панова И.А.,
Майсина А. И. Морфологические и иммуногистохимические изменения плаценты при преэклампсии и их связь с перинатальными исходами. Российский вестник акушера-гинеколога 2019; 19(1): 27-32, https://doi.org/10.17116/rosakush20191901127. Kulida L.V., Rokotianskaia E.A., Malyshkina A.I., Panova I.A., Maisina A.I. Placental morphological and immunohistochemical changes in preeclampsia and their relationship to perinatal outcomes. Rossiyskii vestnik akushera-ginekologa 2019; 19(1): 27-32, https://doi.org/10.17116/ rosakush20191901127.
14. Marin R., Chiarello D. I., Abad C., Rojas D., Toledo F., Sobrevia L. Oxidative stress and mitochondrial dysfunction in early-onset and late-onset preeclampsia. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis 2020; 1866(12): 165961, https://doi.org/10.10Wj.bbadis.2020.165961.
15. Микаелян А.Г., Марей М.В., Суханова Ю.А., Вишнякова П.А., Булатова Ю.С., Пятаева С.В., Цвиркун Д.В., Тетру-ашвили Н.К., Высоких М.Ю. Характеристика состава микровезикул крови при физиологической беременности и беременности, отягощенной синдромом задержки роста плода. Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение 2019; 7(4): 25-31, https://doi.org/10.24411/2303-9698-2019-14002. Mikaelyan A.G., Marey M.V., Sukhanova Yu.A., Vishnyakova P.A., Bulatova Yu.S., Pyataeva S.V., Tsvirkun D.V., Tetruashvili N.K., Vysokikh M.Yu. Characteristics of the microvesule composition in physiological pregnancy and pregnancy complicated by the intrauterine growth restriction. Akusherstvo i ginekologiya: novosti, mneniya, obuchenie 2019; 7(4): 25-31, https://doi. org/10.24411/2303-9698-2019-14002.
16. Green N.M., Marshak-Rothstein A.Toll-like receptor driven B cell activation in the induction of systemic autoimmunity. Semin Immunol 2011; 23(2): 106-112, https://doi.org/10.1016/j. smim.2011.01.016.
17. Iwata Y., Matsushita T., Horikawa M., Dilillo D.J., Yanaba K., Ven-turi G.M., Szabolcs P.M., Bernstein S.H., Magro C.M., Williams A.D., Hall R.P., St Clair E.W., Tedder T.F. Characterization of a rare IL-10-competent B-cell subset in humans that parallels mouse regulatory B10 cells. Blood 2011; 117(2): 530-541, https://doi. org/10.1182/blood-2010-07-294249.
18. Glass M.C., Glass D.R., Oliveria J.P., Mbiribindi B., Esquivel C.O., Krams S.M., Bendall S.C., Martinez O.M. Human IL-10-producing B cells have diverse states that are induced from multiple B cell subsets. Cell Rep 2022; 39(3): 110728, https://doi.org/10.1016/j.celrep.2022.110728.
19. Кудряшова А.В., Панова И.А., Рокотянская Е.А., Панащатен-ко А.С. Сывороточное содержание цитокинов, регулирующих пролиферацию и дифференцировку лимфоцитов при гипертензивных расстройствах у беременных. Российский иммунологический журнал 2019; 13(2-1): 353-355, https://doi.org/10.31857/S102872210006625-2. Kudryashova A.V., Panova I.A., Rokotyanskaya E.A., Panaschatenko A.S. Serum content of cytokines regulating proliferation and differention of lymphocytes in hypertensive disorders in pregnant women. Rossiyskiy immunologicheskiy zhurnal 2019; 13(2-1): 353-355, https://doi. org/10.31857/S102872210006625-2.
20. Szarka A., Rigo J.Jr., Lazar L., Beko G., Molvarec A. Circulating cytokines, chemokines and adhesion molecules in normal pregnancy and preeclampsia determined by multiplex suspension array. BMC Immunol 2010; 11: 59, https://doi.org/10.1186/1471-2172-11-59.
21. Kanti Ghosh A., Sinha D., Mukherjee S., Biswas R., Biswas T. IL-15 temporally reorients IL-10 biased B-1a cells toward IL-12
expression. Cell Mol Immunol 2016; 13(2): 229-239, https://doi. org/10.1038/cmi.2015.08.
22. Kim H.S., Lee M.B., Lee D., Min K.Y., Koo J., Kim H.W., Park Y.H., Kim S.J., Ikutani M., Takaki S., Kim Y.M., Choi W.S. The regulatory B cell-mediated peripheral tolerance maintained by mast cell IL-5 suppresses oxazolone-induced contact hypersensitivity. Sci Adv 2019; 5(7): eaav8152, https://doi.org/10.1126/sciadv.aav8152.
23. Хайдуков С. В. Подходы к стандартизации метода проточной цитометрии для иммунофенотипирования. Настройка цитоме-тров и подготовка протоколов для анализа. Медицинская иммунология 2007; 9(6): 569-574, https://doi.org/10.15789/1563-0625-2007-6-569-574. Khaidukov S.V. Approaches to standardization of the flow cytometry method for cells immunophenotiping. Cytometrs adjustment and preparation of protocols for analysis. Meditsinskaya immunologiya 2007; 9(6): 569-574, https://doi.org/10.15789/1563-0625-2007-6-569-574.
24. Robillard P.-Y., Dekker G., Scioscia M., Saito S. Progress in the understanding of the pathophysiology of immunologic maladaptation related to early-onset preeclampsia and metabolic syndrome related to late-onset preeclampsia. Am J Obstet Gynecol 2022; 226(2S): S867-S875, https://doi.org/10.1016/j.ajog.2021.11.019.
25. Khanna D., Khanna S., Khanna P., Kahar P., Patel B.M. Obesity: a chronic low-grade inflammation and its markers. Cureus 2022; 14(2): e22711, https://doi.org/10.7759/cureus.22711.
26. Keller S., Sanderson M.P., Stoeck A., Altevogt P. Exosomes: from biogenesis and secretion to biological function. Immunol Lett 2006; 107(2): 102-108, https://doi.org/10.1016/j.imlet.2006.09.005.
27. Huang Z., Xu A. Adipose extracellular vesicles in intercellular and inter-organ crosstalk in metabolic health and diseases. Front Immunol 2021; 12: 608680, https://doi.org/10.3389/fimmu.2021. 608680.
28. Посисеева Л.В., Сотникова Н.Ю., Панова И.А. и др. Иммунные механизмы развития гестоза. Иваново; 2008. Posiseeva L.V., Sotnikova N.Yu., Panova I.A. et al. Immunnye mekhanizmy razvitiya gestoza [Immune mechanisms of development of gestosis]. Ivanovo; 2008.
29. Lima J., Cambridge G., Vilas-Boas A., Martins C., Borrego L. M., Leandro M. Serum markers of B-cell activation in pregnancy during late gestation, delivery and the postpartum period. Am J Reprod Immunol 2019; 81(3): e13090, https://doi.org/10.1111/aji.13090.
30. Krieg A.M. CpG motifs in bacterial DNA and their immune effects. Annu Rev Immunol 2002; 20: 709-760, https://doi.org/ 10.1146/annurev.immunol.20.100301.064842.
31. Gilliet M., Cao W., Liu Y.-J. Plasmacytoid dendritic cells: sensing nucleic acids in viral infection and autoimmune diseases. Nat Rev Immunol 2008; 8(8): 594-606, https://doi.org/10.1038/nri2358.
32. Mielcarska M.B., Bossowska-Nowicka M., Toka F. N. Cell surface expression of endosomal toll-like receptors-A necessity or a superfluous duplication? Front Immunol 2020; 11: 620972, https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.620972.
ИНФОРМАЦИЯ ОБ АВТОРАХ:
З.С. Хизриева, аспирант 2-го года обучения по специальности «Акушерство и гинекология» ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, Иваново;
A.В. Кудряшова, д.б.н., ведущий научный сотрудник лаборатории клинической иммунологии ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени
B.Н. Городкова» Минздрава России, Иваново;
И.А. Панова, д.м.н., профессор, зав. отделом акушерства и гинекологии ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, Иваново;
Е.А. Рокотянская, д.м.н., доцент кафедры акушерства и гинекологии, неонатологии, анестезиологии и реаниматологии ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт мате-
ринства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, Иваново;
К.Д. Рукавишников, младший научный сотрудник лаборатории клинической иммунологии ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, Иваново.
Для контактов: Хизриева Заира Сайпутдиновна, е-mail: Zaira_Khizrieva@mail.ru
