CC BY
22
gucred infectious bovine keratoconjunctivitis// 844.
Am. Veter. Res. - 1989, Vol. 50, № 6. - P. 838-
ВЛИЯНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОГО СТИМУЛЯТОРА ПО В.П.ФИЛАТОВУ, С ДОБАВЛЕНИЕМ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ НА БИОХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ КРОВИ ТЕЛЯТ
Овсянников А.П.,Сунагатуллин Ф.А.; Хайруллин Д.Д.
Резюме
Комплексное применение биологического стимулятора по В.П. Филатову с добавлением микроэлементов, позволило скорректировать биохимические показатели крови и повысить защитные силы организма телят.
THE IMPACT OF A BIOLOGICAL PACEMAKER ACCORDING TO VP. FILATOV, WITH THE ADDITION OF MICROELEMENTS ON BIOCHEMICAL COMPOSITION OF BLOOD OF CALVES
Ovsyannikov A.P., Sungatullin F.A., Khayrullin D.D. Summary
The complex application of a biological pacemaker according to V. P. Filatov with the addition of trace elements improved blood biochemical parameters and increase protective forces of the organism of calves.
УДК 599.733.1
ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КУЛЬТУР P. MULTOCIDA ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ ЖИВОТНЫХ В УСЛОВИЯХ АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ
Полковниченко А.П. - к.б.н., доцент; Полковниченко П.А. - аспирант; Воробьев Д.В. - д.б.н., профессор; Воробьев В.И. - д.б.н., зав. кафедрой Астраханский государственный университет
Ключевые слова: пастереллез, культура, серотип, вирулентность, бактерионосители. Key words: pasteurellosis, culture, serotype, virulence, carriers.
Пастереллез - инфекционное заболевание, поражающее домашних и диких животных. Оно характеризуется септицимией и геморрагическим воспалением слизистых оболочек кишечника и респираторного тракта. Наиболее частый путь заражения - алиментарный и аэрогенный. Болезнь протекает обычно сверхостро, остро, подостро и хронически. Период инкубации у животных может длиться от нескольких часов до трех суток. По статистике летальность колеблется от 10 до 80% [6]. Наиболее часто заболевание поражает ягнят и мышей. При сверхостром течении гибель животных может наступить даже без проявления признаков болезни. В острых случаях заболевание характеризуется лихорадкой и катарально-фибринозным воспалением дыхательных путей, кашлем, насморком и геморрагическим энтеритом. Болезнь зачастую принимает и хроническое течение, при этом наблюдается исхудание, анемия и поражение суставов [6]. Пастерел-
лез является недостаточно изученной патологией, которая часто встречается в Астраханской области и поэтому исследование этого заболевания актуально для животноводства Нижней Волги. В фермерских хозяйствах области, где используется в основном замкнутая схема разведения животных наиболее часто имеет место хроническая форма болезни. Эта форма заболевания характеризуется в основном поражением респираторного тракта, гибелью ягнят, а так же снижением их продуктивности. При этом большое количество ягнят при бонитировке отбраковывается. Основным источником возбудителя инфекции в данных предприятиях являются животные - бактерионосители. Главной причиной респираторного пастерел-леза в овцеводческих хозяйствах Астраханской области являются различные серологические варианты культур P. Multocida. По данным В.Т. Котова (1974) [6], Колычева Н.М., Кисленко В.Н. (2010) [5], известно, что
основная роль в этиологии заболевания у ягнят принадлежит P. Multocida серотипов А и Д. Анализ данных, полученные сотрудниками кафедры ветеринарной медицины Астраханского государственного университета за 2012- 2017 годы, показывает, что пастереллы серотипа А выделяются гораздо чаще, чем серотипа Д.
Целью работы являлось изучение особенностей биологических свойств и серова-риантной принадлежности культур P. Multocida, полученных от заболевших ягнят с хроническими проявлениями респираторного тракта в условиях небольшого частного хозяйства.
Материалы и методы. Работа выполнялась в условиях личного подсобного хозяйства «Дед Щукарь» Камызякского района Астраханской области. Поголовье овец на момент проведения исследования составляло 250 голов. При проведении общеклинического исследования поголовья овец было выделено 38 голов с клиникой хронического поражения дыхательных путей. В целях подтверждения диагноза, был проведен диагностический забой 5 голов овец. Для получения культуры P. Multocida, использовался биологический способ, в ходе которого из изьятых кусочков легких была приготовлена суспензия на физиологическом растворе в соотношении 1:5. Полученной суспензией в дозе 0,3см3, внутрибрюшинно было заражено 3 головы белых мышей. За подопытными животными велось наблюдение в течение пяти суток. С целью получения по возможности чистой культуры пастерелл, был проведен забор крови из сердца клинически больных зараженных белых мышей и посев в МПБ, который инкубировали в термостате при температуре 37°С. Для того, чтобы подробнее изучить тинкториальные свойства выделенных культур пастерелл, провели окраску мазков по Гимза-Романоскому приготовленных из крови павших зараженных мышей. Суточные бульонные культуры были окрашены по Граму. Биохимические свойства полученных культур исследовались согласно общепринятых методик [3]. В качестве изучения способности полученных микроорганизмов расщеплять сахара, в виде тест-обьектов были использованы углеводы: сахароза, глюкоза, мальтоза, ксилоза, галактоза, арабиноза и др.
Углеводы добавлялись в специальную среду, которая состояла из пептона 10гр., №0-5 гр., вода дистилированная 1000 см3 и индикатор Андреде 10 см3. Приготовленную
таким образом питательную среду стерилизовали автоклавированием при температуре 121°С - 15 минут, после чего добавлялись углеводы до 1%. Перед этим углеводы были простерилизованы текучим паром в виде 10% растворов по 30 минут, два дня - дробно [3].Также было проведено определение сероводорода, индола, ферментов желатиназы, каталазы и уреазы - с целью изучения проте-олитических свойств полученных культур. В ходе работы была проведена идентификация выделенных пастереллнесерологическим методом типирования, с использованием гиалу-ронидазыстафилокка и акрифлавина. Для чего на поверхность кровяного агара в чашки Петри высевали суточную полученную культуру - для идентификации P. Multocida серо-вара А. Затем перпендикулярно штриху посева засевалась суточная бульонная культура Staphilococcusaureus. Засеянные чашки Петри помещались в термостат для инкубации на 24 часа при температуре 37°С с целью проведения учета роста культур. Для идентификации P. Multocida серовара Д, полученную культуру пастерелл высевали также на кровяной агар. При этом, инкубация проводилась 24 часа при температуре 37°С, после чего делался пересев в пробирки в которых содержался бульон Хоттингера в объеме 3 см3. В дальнейшем проводилась инкубация 18 часов, при 37°С. После чего полученные бульонные культуры помещались в центрифужные пробирки и центрифугировались 20 минут при 3000 оборот/мин. После центрифугирования сливалось 2,5 см3надосадочной жидкости, в осадок (осевшие клетки) добавлялся свежеприготовленный водный раствор нейтрального акрифлавина 1:500 в обьме 0.5 см3. Затем раствор перемешивался и его оставляли при комнатной температуре на 20 минут, после этого проводилось чтение реакции. Путем биологической пробы на белых мышах изучалась патогенность эпизоотических культур пастерелл. С этой целью использовалась 24 часовая бульонная культура. Полученную культуру разводили физиологическим раствором 1:1, которую вводили подкожно в объеме 0,2 см3 трем белым мышам. За подопытными мышами велось наблюдение в течение 14 суток [5].
Результаты исследования. В ходе общеклинического обследования животных данного хозяйства мы констатировали хроническое поражение респираторного тракта. Клиника заболевания выражалась в угнетении животных, снижении аппетита, отставанием в росте, субфебрильной температурой
тела порядка 39°С - 39,5°С. У отдельных животных регистрировался серозно-катаральный коньюнктивит, а иногда и двусторонний гнойный ринит. При аускультации регистрировали жесткое везикулярное дыхание и мелкопузырчатые хрипы. Картина вскрытия показала увеличение медиасти-нальных и заглоточных лимфатических узлов, селезенки. На вскрытии отдельных трупов отмечалось скопление серозно-фибринозного эксудата в плевральной полости и очаги гнойно-фибринозного воспаления в легких.
От заболевших ягнят было выделено 14 культур пастерелл. Полученные культуры микроорганизмов выглядели как мелкие кок-кобактерии. Их расположение разное, от одиночных, парных до коротких цепочек. При просмотре мазков крови из сердца убитых мышей, при окраске по Гимза-Романовскому отмечалась биполярность. Изучая мазки суточных бульонных культур, мы отмечали мелкие Грам (-) овоидные палочки. Изучая рост культуры в МПБ через 9 часов, мы отметили легкую опалесценцию, и «муаровые волны» при встряхивании, S -форма роста. Анализируя рост культур на вторые сутки, можно отметить нарастание помутнения бульона, осадок, который поднимался вверх в виде косички. В дальнейшем бульон просветлялся - 3-4 сутки. Таким образом, мы наблюдали переход культуры в М - форму. Изучая рост культур на МПА, можно отметить, что в течение трех суток разрастались мелкие и росинчатые колонии возбудителя, S - формы колоний. Затем колонии мутнели (4 - 5 день) и увеличивались в размерах. Таким образом, данная культура переходила в М - форму. В качестве эксперимента мы добавили к МПА 5% дефибриниро-ванной крови, что резко повысило интенсивность роста. При этом колонии микроорганизмов сразу формировались в М-форму. Полученные колонии были слизистыми, непрозрачными, красно-коричневого цвета. Зоны гемолиза мы не наблюдали.
Обсуждение результатов. У полученных культур пастерелл биохимические свойства различались. Но при этом все культуры разлагали глюкозу, сахарозу, декстрозу, фруктозу, маннозу, галактозу до образования кислоты без газа. Полученные культуры микроорганизмов не сбраживали мальтозу, арабинозу, рамнозу, лактозу, рафинозу, не расщепляли дульцит и инулин, глицерин, салицин, не свертывали молоко и не разжижали желатин. Все выделенные нами культу-
ры пастерелл были каталазоположительные, востанавливали нитраты до нитритов и были отрицательные реакции Фогеса-Проскауэра и с метиловым красным. Обобщив полученные результаты, мы идентифицировали выделенные культуры как P. Multocida. Изучая полученные микроорганизмы пастерелл, мы провели их типизацию с использованием гиалу-ронидазы стафилококка. При этом, у 10 культур мы отметили уменьшение размера и полное отсутствие флюоресценции у колоний культур которые примыкали к линии роста стафилококков. Мы отметили это как признак P. Multocidaсеровара А. В результате типизации с использованием водного раствора акрифлавина, было установлено, что 4 полученные культуры выглядели как крупнохлопчатый флокулят - это признак P. Multocida серовара Д. Выделенные нами культуры оказались патогенными для белых мышей. При этом 10 культур пастерелл убивали в разведении 1:1 большую часть мышей за 4-5 суток. Остальные культуры пастерелл были менее патогенными, белых мышей убивали только нативные бульонные культуры в течение 6-7 суток, что характерно для P. Multocida серовара Д. Десятикратное разведение исследуемых культур микроорганизмов не вызывало гибель мышей.
В заключение можно отметить, что от 38 голов ягнят с хроническим респираторным синдромом мы выделили 14 культур P. Multocida. Полученные микроорганизмы представляли два серологических варианта. Десять выделенных культур мы отнесли к серовару А, а четыре культуры были типизированы как P. Multocida серовара Д.
Выводы. 1. При хроническом респираторном синдроме у ягнят частного хозяйства «Дед Щукарь» выделено 14 культур P. Multocida. При этом 10 полученных культур были нами отнесены к серологическому варианту А, оставшиеся 4 культуры были представлены сероваром Д. 2. Отличия биохимических свойств и вирулентность полученных культур пастерелл совпадают с их серовари-антной принадлежностью.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Ашмарин, И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев // Л. Медгиз, 1962. - 178 с.
2. Геведзе, В.И. Пастереллез крупного рогатого. - Минск, Урожай, 1989. - 135 с.
3. Орлов, Ф.М. Общие микробиологические методы исследования. - М.., Сельхоз-издат, 1963. - 567с.
4. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т.1: Пер. с анг./Под ред. Дж. Хоула. - М.: Мир, 1997. - 289 с.
5. Руководство по микробиологии и иммунологии /Н.М. Колычев и др. - Новоси-
бирск: Арта, 2010. - 256 с.
6. Эпизоотология. Под ред. проф. Р.Ф. Сосова. 2-е, испр. и доп. М., Колос, 1974. -536 с.
ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ КУЛЬТУР P. MULTOCIDA ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ ЖИВОТНЫХ В УСЛОВИЯХ АСТРАХАНСКОЙ ОБЛАСТИ
Полковниченко А.П., Полковниченко П.А., Воробьев Д.В., Воробьев В.И.
Резюме
Пастереллез (Pasteurellosis) - геморрагическая септицемия - инфекционная болезнь многих видов млекопитающих и птиц, характеризующаяся при остром течении симптомами септицемии, при подостром и хроническом - преимущественным поражением легких. Пастереллез является актуальной проблемой для современного овцеводства. Пастереллез широко распространен во всех странах мира. Обычно он отмечается спорадически и протекает хронически, но в условиях, способствующих его распространению, проявляется как эпизоотия. Заболевание характеризуется высокой летальностью, от 10 до 80%. В небольших овцеводческих хозяйствах, где используется замкнутая система воспроизводства животных, распространена хроническая форма болезни, которая характеризуется преимущественным поражением респираторного тракта и сопровождается гибелью животных и снижением их продуктивности. Значительное количество ягнят бракуется при бонитировке. Данное заболевание является большой проблемой овцеводства Астраханской области, при этом оно недостаточно изучено применительно к условиям региона. В данной статье описаны особенности биологических свойств культур P. Multocida, которые были выделены от больных ягнят с преимущественным поражением респираторного тракта в условия небольшого фермерского хозяйства Астраханской области. Установлено, что среди овцепоголовья превалирует хроническое течение заболевания. В ходе исследования было выделено 14 культур пастерелл с их типизацией, используя гиалуронидазу стафилококка. Установлено, что выделенные микроорганизмы представляют два серологических варианта. Всего выделено 14 культур пастерелл, десять из которых были отнесены в сероварианту А, а четыре культуры были типизированы как P. Multocida серовара Д.
ESPECIALLY THE BIOLOGICAL PROPERTIES OF CULTURES OF P. MULTOCIDA ISOLATED FROM ANIMALS IN THE CONDITIONS OF ASTRAKHAN REGION
Polkovnichenko A.P., Polkovnichenko P.A., Vorob'ev D.V., Vorob'ev V.I.
Summary
Pasteurellosis (Pasteurellosis) - hemorrhagic septicemia is an infectious disease of many species of mammals and birds, characterized by acute symptoms of septicemia, with subacute and chronic - predominant lung involvement. Pasterella is an actual problem for modern sheep breeding. Pasteurellosis is widespread in all countries of the world. Usually it is noted sporadically and proceeds chronically, but in conditions conducive to its spreading, it manifests as an epizootic. The disease is characterized by high lethality, from 10 to 80%. In small sheep farms, where a closed system of reproduction of animals is used, the chronic form of the disease is widespread, which is characterized by a primary lesion of the respiratory tract and is accompanied by the death of animals and a decrease in their productivity. A significant number of lambs are rejected at a bonitization. This disease is a big problem of sheep breeding in the Astrakhan region, and it has not been sufficiently studied in relation to the conditions of the region. This article describes the features of the biological properties of P. Multocida cultures, which were isolated from lambs with primary lesions of the respiratory tract in conditions of a small farm in the Astrakhan region. It was found that chronic disease prevails among the sheep head. In the study, 14 cultures of pasterel were isolated with their typing using staphylococcal hyaluronidase. It was established that the isolated microorganisms represent two serological variants. A total of 14 pasterel cultures were isolated, ten of which were assigned to serovariant A, and four cultures were typified as P. Multocidaserovar D.
