CC BY
47
УДК [616.127- 005.8:616.12 - 008.46]:517.175.852
ОСОБЕННОСТЬ ВЛИЯНИЯ ПРИ ПОСТИНФАРКТНОЙ СЕРДЕЧНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТИ АНГИОТЕНЗИНА II И ИНТЕРЛЕЙКИНА-6 НА ЭКСПРЕССИЮ БЕЛКА CCNt И АКТИВНОСТЬ ЕГО ГЕНА В МИОКАРДЕ ЛЕВОГО ЖЕЛУДОЧКА СЕРДЦА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
С. Н. Литвинович
УО «Гродненский государственный медицинский университет»
На 8-недельных лабораторных мышах изучено влияние при постинфарктной сердечной недостаточности ангиотензина II (АГ-II) и интерлейкина-6 (ИЛ-6) на экспрессию белка CCN1 и активность его гена в миокарде левого желудочка сердца в эксперименте. Установлено, что при постинфарктной сердечной недостаточности ангиотензин II в 2,7раза (p<0,005) увеличивает экспрессию белка CCN в кардиомиоцитах экспериментальных животных, не влияя на активность гена белка CCN. В то же время, интерлейкин-6 не оказывает своего влияния как на экспрессию белка CCN,, так и на активность гена белка CCN. При постинфарктной сердечной недостаточности антагонист рецептора АТ — телмисартан - приводит к уменьшению экспрессии белка CCN в 2,7 раза (p<0,005), не влияя на активность гена белка CCN2в миокарде левого желудочка и увеличивает сократительную способность миокарда левого желудочка сердца на 26,3% (p<0,05) у экспериментальных животных.
Ключевые слова: постинфарктная сердечная недостаточность, эксперимент, ангиотензин II, интерлейкин-6, телмисартан, белок CCN, ген белка CCN , кардиомиоцит.
The experimental effect of angiotensin II and interleukin-6 on protein CCN 1 expression and its gene activity in the myocardium of the left cardiac ventricle was studied on 8-week laboratory mice. It has been established that in post infarction cardiac insufficiency angiotensin II increases protein CCN 1 expression in cardiomyocytes 2,7-fold (p<0,005) and does not affect the activity of its gene. At the same time interleukin-6 does not affect either protein CCN 1 expression or the activity of gene in the protein under discussion. In post infarction cardiac insufficiency telmisartan leads to the decrease in protein CCN expression 2,7-fold (p<0,005) without any effect on the gene activity of CCN 1 protein and increases the contractile capacity of the myocardium of the left ventricle ofthe heart by 26.3% (p< 0,05) in the experimental animals.
Key words: post infarction cardiac insufficiency, experiment, angiotensin II, interleukin-6, telmisartan, protein CCN , protein CCN2 gene, cardiomyocyte.
Введение
Одной из важных проблем здравоохранения Республики Беларусь является профилактика факторов риска, вызывающих ишемию тканей. Данной патологии подвержены любые органы, в том числе мозг и сердце, и её развитие приводит к острой ишемии с гибелью тканей или к длительной гипоксии с дегенеративными изменениями. В последние годы учёными всё больше внимания уделяется профилактике подобных осложнений путём индукции роста сосудов, доставляющих кровь к поражённому участку [4]. В связи с этим остается весьма актуальной разработка альтернативных методов улучше -ния кровоснабжения ишемизированных тканей.
Терапевтический ангиогенез, который нередко называют биологическим шунтированием, представляет собой новую тактику улучшения перфузии ишемизирован-ных тканей путём усиления естественных, но недостаточных процессов неоваскуляризации. Разработке данной лечебной тактики способствовало развитие современных представлений о молекулярных и клеточных механизмах регуляции роста и ремоделирования кровеносных сосудов. Толчок к интенсивному исследованию этих механизмов был дан Джоном Фолкманом, предложившим гипотезу о том, что прогрессирующее развитие злокачественных опухолей зависит от их васкуляризации [6]. Рост и образование сосудов в постнатальном периоде развития организма осуществляется через ангиогенез, артериогенез и васкулогенез.
Причастность иммунной системы к патогенезу хронической сердечной недостаточности (ХСН) лишь на первый взгляд может показаться сомнительной. Однако иммунная защита организма активируется не только при
взаимодействии с инфекционными агентами, но и при ишемии, гемодинамической перегрузке и других воздействиях на сердце, являющихся причиной развития диас-толической и (или) систолической дисфункции. Патогенетическая роль провоспалительных цитокинов при ХСН в настоящее время является предметом специальных исследований [1]. Молекулярные механизмы, лежащие в основе цитокининдуцируемого нарушения сократительной способности и ремоделирования миокарда, до конца не определены [2].
CYR 61 (ангиогенный протеин, богатый цистеином ) представляет собой белок, выделяемый во внеклеточное пространство, и посредством интегринов влияющий на процессы ангиогенеза и заживления [9]. CYR 61 принадлежит к группе белков CCN, название его происходит от первых букв сокращенных названий трёх ранее открытых представителей этих белков: CYR 61, CTGF (Connective Tissue Growth Factor), NOV (Nephrobl a stoma Overexpressed). В его состав входят также белки WISP 1, 2, 3. Характеризуются они близким строением (за исключением WISP 2, который состоит из 4 модулей), а также большим содержанием цистеина (до 10% молекулярной массы). С учётом многочисленных исследований и разнообразия названий, в 2003 году были опубликованы новые данные, касающиеся номенклатуры белков этого семейства [8]. Упорядочены названия в порядке открытия, определены номера от 1 до 6 под общим названием - CCN. Таким образом, белок CYR 61 получил название CCN1.
Цепь pro-CCNj состоит из 421 аминокислоты. После принятия третичной структуры и удаления сигнального пептида остаточная длина цепи CCN х составляет 381 ос-
таток аминокислот (в том числе 38) - цистеина, с общей массой 42026,5 Дальтона. Изоэлектрическая точка этого белка составляет 8,0.
Таким образом, CCNj является белком, выделяемым во внеклеточное пространство, связывающим белки, протеогликаны матрикса и действующим на клетки посредством интегринов [9]. Его секреция происходит в течение 15-20 минут от начала трансляции [5].
Ген CCN1 был открыт в 1985 году в качестве «immediate early gene», который подвергается экспрессии во время перехода мышиных фибробластов с фазы G0 к G1 под влиянием ростовых факторов [7]. Ген CCN1 имеет длину около 3 тысяч пар оснований, состоит из 5 экзонов, отделённых 4 короткими интронами. У человека он находится на коротком плече первой хромосомы, а его локус обозначен как 1р22.3-р31 [3]. Мышиный аналог этого гена находится на 3 хромосоме, в области, аналогичной короткому плечу 1 хромосомы человека. У взрослых особей наибольшая экспрессия CCN1 наблюдается в лёгких, потом в селезёнке, сердце и печени [5].
Особенность гена CCN свидетельствует о существенной его роли в ключевых процессах выживания, таких как эмбриогенез или межклеточная передача сигналов. Ген CCNj содержит последовательности, близкие, к двум генам плодовой мухи (short gastrulation and twisted gastrulation), эти два гена необходимы для процессов эмбриогенеза, обуславливающих правильное вентраль-но-дорзальное ориентирование зародыша.
Существуют доказательства, что CCN является белком, индуцированным в результате реакции на повреждение ткани или стрессовый раздражитель. Однако пути внутриклеточной передачи, связанные с данным процессом, зависят от типа клеток или типа действующего раздражителя. Глубокое изучение такой регуляции дает возможность для разработки вещества, выборочно тормозящего или стимулирующего экспрессию CCN j в определённых тканях. Однако всё ещё остаётся много неизвестного в протекании данных процессов, что исключает возможность безопасного в них вмешательства.
Целью нашего исследования явилось изучение при постинфарктной сердечной недостаточности особенностей влияния ангиотензина II и интерлейкина-6 на экспрессию белка CCN1 и активность его гена в миокарде левого желудочка сердца в эксперименте.
Материалы и методы
Экспериментальные исследования проводились на чёрных 8-недельных лабораторных мышах, которые были разделены на следующие группы:
1 группа - 12 самцов мышей C57BL6/J, у которых выполнена операция без перевязки передней межжелудочковой ветви левой венечной артерии (КОНТРОЛЬ C57BL6/J);
2 группа - 9 самцов мышей C57BL6/J, у которых произведена перевязка передней межжелудочковой ветви левой венечной артерии (ИМ C57BL6/J);
3 группа - 10 самцов мышей, с отсутствующим у них геном ИЛ-6 C57BL6 IL-6-/-TMKop/ и выполненой операцией без перевязки передней межжелудочковой ветви левой венечной артерии (КОНТРОЛЬ C57BL6 IL-ó-/-™/
4 группа - 14 самцов мышей с отсутствием гена ИЛ-6 C57BL6 IL-6-/-™Kop/ и произведенной перевязкой передней межжелудочковой ветви левой венечной артерии (ИМ C57BL61L-6-/-TMKop/);
5 группа - 15 самцов мышей C57BL6/J, у которых была перевязана передняя межжелудочковая ветвь левой венечной артерии и в течение последующих 8 недель получавшие антагонист рецептора АТ1 - телмисартан,
растворённый в воде для питья в дозе 1мг/кг массы тела (ИМ C57BL6/J+TEL).
Экспериментальные исследования проводились со строгим соблюдением требований Европейской конвенции (Страсбург, 1986) по содержанию, кормлению и уходу за подопытными животными, а также выводу их из эксперимента и последующей утилизацией.
Операции проводились под 1,5% изофлюрановым наркозом. Животное фиксировалось на спине с ротацией вправо, что предназначалось для лучшей экспозиции сердца и левого желудочка. Операция выполнялась на операционном столе при температуре 37°С. Торакото-мия проводилась в 5 левом межреберье. После вскрытия грудной клетки и перикарда осуществлялась перевязка передней межжелудочковой ветви левой венечной артерии под микроскопом проленом № 6.0 атравматической иглой. Шов проходил под артерией на расстоянии 1-3 мм от верхушки нормально расположенного ушка левого предсердия. Факт перевязки данной артерии подтверждался изменением интенсивности окраски миокарда ниже места перевязки, а также видимым нарушением сократимости миокарда левого желудочка. Сердечная венозная сеть сердца определялась и не наблюдалось закупорки вен при указанных манипуляциях. Грудную клетку зашивали проленом с репозицией мышц, а кожу -при помощи кетгута. В последующем экспериментальное животное помещалось в клетки со столиком-инкубатором, который поддерживал постоянную температуру 37°C, на 2 часа. Антибиотики в процессе эксперимента не назначались. Раны заживали без явно выраженной инфекции, что подтверждалось в последующем при аутопсии. Животные выводились из опыта путем дека-питации через 8 недель.
Проведено генотипирование, которое позволило подтвердить наличие или отсутствие функционального гена интерлейкина-6 у экспериментальных животных. Для определения экспрессии белка CCN^ сердце применялись методы Вестерн Блоттинга и иммуногистохимичес-кий. Методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени оценена активность гена белка CCN t в кардиомиоцитах левого желудочка. Для статистической обработки результатов исследования была создана база данных в программе Microsoft Office Excel 2010. Данные обрабатывались непараметрическими методами с использованием пакета прикладных программ STATISTICA 8.0. Количественные данные представлены в виде медианы и межквартильного размаха (между 25 и 75 процентилями). Для оценки значимости различий количественных параметров между двумя независимыми выборками использован критерий Манна-Уитни. Уровень p<0,05 принимался за статистически значимый.
Результаты исследования
Непосредственно перед выведением животных из эксперимента была произведена эхокардиография из левого парастернального доступа в М-режиме у животных во всех группах с перевязанной межжелудочковой ветвью левой венечной артерии при помощи ультразвуко -вого сканера Medical Sistems Vivid 7 и датчика 12 МГц фирмы General Electric, США под перитонеальным наркозом с применением растворов кетамина и ксилазина в дозах, соответственно, 120 мг/кг и 3 мг/кг массы тела. Оценена в см2 площадь рубцовой ткани на участке инфаркта. Результаты представлены на рисунке 1.
Как следует из рисунка 1, в трёх группах экспериментальных животных (ИМ C57BL6/J), (ИМ С57ВШ1+ТЕЛ), а также в группе (ИМ C57BL6 IL-6-/-TMKopf) с произведенной перевязкой передней межжелудочковой ветвью ле-
Рисунок 1 - Площадь соединительной ткани на участке инфаркта миокарда
вой венечной артерии, размер площади соединительной ткани на участке инфаркта миокарда был схожим. Так, в группе экспериментальных животных с наличием гена ИЛ-6 и произведенной перевязкой передней межжелудочковой ветвью левой венечной артерии (ИМ С57ВЬ6/ I) площадь рубцовой ткани на участке инфаркта миокарда составила 0,12 [0,09-0,15] см2. Аналогичные данные наблюдались и в группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 (ИМ С57БЬ6 ^-6-/-™°^) -0,115 [0,09-0,14] см2. В группе экспериментальных животных с перевязанной передней межжелудочковой ветвью левой венечной артерии, которые в течение последующих 8 недель получали антагонист рецептора АТ - тел-мисартан, тем самым ограничивая воздействие на клетку АГ-11 (ИМ С57ВЬ6/Л + ТЕЛ), площадь рубцовой ткани на участке инфаркта миокарда составила 0,12 [0,10-0,15] см2. Достоверных различий в площади рубцовой ткани на участке инфаркта миокарда в группах экспериментальных животных не выявлено.
Для установления нарушения сократительной способности левого желудочка сердца по короткой оси определялся показатель соотношения между конечной систолической и конечной диастолической площадью левого желудочка сердца. Данные исследования представлены на рисунке 2.
в §
8 3 о а
3 о | £
1=1 &
ш
о Медиана I I 25%-75% "Г Разг^ах без выбр.
*** отличие от группы контроля С57Б16/Л р<0,0005; +++ отличие от группы контроля С57БЬ6 1Ь-6-/- ТМКорГ р<0,0005;
# отличие от группы ИМ С57Б16./Л р<0,05. Рисунок 2 - Показатель сократительной способности левого желудочка сердца
Как видно из рисунка 2, показатель соотношения между конечной систолической и конечной диастоличес-кой площадью левого желудочка сердца у трёх групп экспериментальных животных, которым произведена перевязка передней межжелудочковой ветви левой венечной артерии, был схожим и составлял: в группе экспериментальных животных с наличием у них гена ИЛ-6 (ИМ С57ВЬ6/Л) - 19,0 [13,0-21,0]%, в группе экспериментальных животных, которые после перевязки вышеназванной артерии в течение последующих 8 недель получали антагонист рецептора АТ 1-телмисартан (ИМ С57ВЬ6/Л+ТЕЛ) - 24,0 [19,0-27,0]%, а в группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 (ИМ С57БЬ6 ]Ь-6-/-ШКорГ) -21,5 [15,0-25,0]%.
При сравнении группы животных с постинфарктной сердечной недостаточностью, которые в течение 8 недель получали антагонист рецептора АТ1 - телмисартан (ИМ С57ВЬ6/Л+ТЕЛ), произошло увеличение показателя сократительной способности левого желудочка сердца на 26,3% (р<0,05) по сравнению с аналогичной экспериментальной группой животных, не получавших препарат. Достоверных различий в показателе сократительной способности левого желудочка сердца между группами экспериментальных животных как с наличием (ИМ С57ВЬ6/Л), так и с отсутствием гена ИЛ-6 (ИМ С57БЬ6 1Ь-6-/-™Кор' ) не наблюдалось.
При сравнении экспериментальной (ИМ С57ВЬ6/Л) группы животных с контрольной (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6Л) отмечено снижение показателя соотношения между конечной систолической и конечной диастолической площадью левого желудочка сердца в 3,1 раза (р<0,0005). В группе экспериментальных животных, получавших тел-мисартан (ИМ С57ВЬ6/Л+ТЕЛ), искомый показатель снизился в 2,4 раза (р<0,0005) по сравнению с контрольной (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6/Л) группой. Кроме того, в 2,7 раза (р<0,0005) произошло снижение вышеназванного показателя в группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 (ИМ С57БЬ6 1Ь-6-/-™Кор) по сравнению с контрольной группой животных аналогичного генотипа (КОНТРОЛЬ С57БЬ6 ^-6-/-™°^). При сравнении контрольных групп животных достоверных различий не наблюдалось, поскольку искомый показатель составлял: с наличием гена ИЛ-6 (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6Л) - 59,0 [58,0-60,0]%, а с отсутствием гена ИЛ-6 (КОНТРОЛЬ С57БЬ6 1Ь-6-/-шКр) - 58,0 [57,0-59,0]%.
В результате сравнения экспериментальных групп животных с произведенной у них перевязкой передней межжелудочковой ветвью левой венечной артерии и контрольных, наблюдались значительные различия в показателе сократительной способности левого желудочка сердца (р<0,0005), что указывает на развитие сердечной недостаточности в экспериментальных группах животных.
Методом Вестерн-Блоттинга было изучено при постинфарктной сердечной недостаточности воздействие АГ-П на экспрессию белка ССМ1 в левом желудочке сердца у экспериментальных животных. Результаты исследования представлены на рисунке 3.
Как следует из рисунка 3, максимальное увеличение экспрессии белка ССЦ наблюдалось в группе экспериментальных животных с постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57ВЬ6/Л). В данной группе экспериментальных животных экспрессия белка СС^ составила 2,21 [1,47-3,1] у.е. Так, по сравнению с контрольной группой животных (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6/Л), где показатель экспрессии белка СС^был 0,75 [0,54-1,55] у.е., произошло увеличение показателя экспрессии белка СС>} в вышеназванной экспериментальной группе животных в 2,9
»
□
!
ци ++
J _
□ Меднана
I-1 25^-75-!.
I Размах без выбр.
пе экспериментальных животных с постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57ВЬ6/Х), что свидетельствует об увеличенной экспресии белка СС^ в кардио-миоцитах по сравнению с контрольной (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6/Х) группой животных.
В группе экспериментальных животных с постинфарктной сердечной недостаточностью, которые в течение 8 недель получали антагонист рецептора АТ -телмисар-тан (ИМ С57ВЬ6Л+ТЕЛ), тем самым было ограничено воздействие на клетку АГ-11, экспрессия белка СС>1 составила 0,81 [0,77-0,98] у.е. При сравнении вышеназванной группы с аналогичной экспериментальной группой, животные в которой не получали данный препарат (ИМ С57ВЬ6/Х), отмечалось уменьшение у них экспрессии белка СС^ в кардиомиоцитах в 2,7 раза (р<0,005), а при сравнении с контрольной группой (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6/ I) - искомый показатель увеличился на 8% (р>0,05), подтверждением чему служат рисунки 6, 4 и 5.
** отличие от группы контроль С57БЬ6/Л р<0,005; ++ отличие от группы ИМ С57ВЬ6.'/Л р<0,005. Рисунок 3 - Экспрессия белка ССМ ] в исследуемых группах
раза (р<0,005). Доказательством этого утверждения могут служить рисунки 4 и 5, на которых показана экспрессия белка СС^ в кардиомиоцитах, определённая имму-ногистохимическим методом (специфический продукт реакции имел коричневый цвет разной степени интенсивности).
Рисунок 4 - Экспрессия белка ССМ в кардиомиоцитах. Группа животныгх ИМ С57 БЬ6/1. Иммунопероксидазная реакция. 0400
Рисунок 5 - Экспрессия белка ССМг в кардиомиоцитах. Контрольная группа животныгх С57 ВЬ6/3. Иммунопероксидазная реакция. 0400
Анализ рисунков 4 и 5 подтверждает, что наибольшая интенсивность коричневой окраски наблюдается в груп-
Рисунок 6 - Экспрессия белка ССМ в кардиомиоцитах.
Группа животных ИМ С57 БЬ6/1 +ТЕЛ.
Иммунопероксидазная реакция. 0400
Анализируя приведенные выше рисунки, можно утверждать, что наибольшая интенсивность коричневой окраски, наблюдаемая в группе экспериментальных животных с постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57ВЬ6Л), характеризует повышенную экспрессию белка СС^ в кардиомиоцитах у животных данной экспериментальной группы.
Результаты исследования по экспериментальной группе животных (ИМ С57ВЬ6Л+ТЕЛ) свидетельствуют о том, что АГ-11 увеличивает в 2,7 раза (р<0,005) экспрессию белка ССЫ^ в кардиомиоцитах у экспериментальных животных при постинфарктной сердечной недостаточности.
Результат воздействия ИЛ-6 на экспрессию белка СС^ в кардиомиоцитах при постинфарктной сердечной недостаточности представлен на рисунке 7.
В группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 и развившейся постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57БЬ6 1Ь-6-/-™к°р/) экспрессия белка СС^ в кардиомиоцитах составила 1,4 [1,21-2,8] у.е и практически не отличалась от контрольной группы животных (КОНТРОЛЬ С57БЬ6 1Ь-6-/-™Кор() с аналогичным генотипом 1,27 [0,85 - 2,56] у.е.
На 36,6% (р>0,05) произошло снижение экспрессии белка СС^ в группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 и развившейся постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57БЬ6 1Ь-6-/-™к°р/) по сравнению с аналогичной группой экспериментальных животных с наличием гена ИЛ-6 (ИМ С57ВЬ6Л), где показатель экспрессии белка СС^ в кардиомиоцитах со-
Рисунок 7 - Экспрессия белка ССМ 1 в исследуемых группах
ставил 2,21 [1,47-3,1] у.е. Подтверждением данному утверждению служат рисунки 8, 9 и 4, на которых показана экспрессия белка ССМ^ в кардиомиоцитах, определённая иммуногистохимическим методом (специфический продукт реакции имеет коричневый цвет разной степени интенсивности).
Рисунок 8 - Экспрессия белка ССМ1 в кардиомиоцитах. Группа животных (ИМ С57БЛ6 1Ь-6-/-ТМКо1"). Иммунопероксидазная реакция. 0400
Рисунок 9 - Экспрессия белка ССМ1 в кардиомиоцитах. Группа животных (КОНТРОЛЬ С57БЬ6 1Ь-6-/- ™к°-1). Иммунопероксидазная реакция. 0400
Как следует из рисунков 8 и 9, отмечается схожая степень интенсивности коричневой окраски как в контрольной группе животных (КОНТРОЛЬ С57БЬ6 1Ь-6-/-™Кор'), так ив экспериментальной (ИМ С57БЬ6 ^-6-/-™^
группе. Это свидетельствует об одинаковой экспресии белка ССМ^ в кардиомиоцитах у животных вышеназванных групп. При анализе рисунков 8 и 4 снижение интенсивности коричневой окраски наблюдается в группе экспериментальных животных с развившейся постинфарктной сердечной недостаточностью и отсутствием гена ИЛ-6 (ИМ С57БЬ6 1Ь-6-/-шкр) по сравнению с экспериментальной группой животных, у которых присутствовал ген ИЛ-6 (ИМ С57ВЬ6/Х). Это свидетельствует о том, что на основании данных иммуногистохимического метода исследования и Вестерн Блоттинга в группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 и развившейся постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57БЬ6 ^-6-/-™^ отмечается на 36,6% (р>0,05) снижение экспрессии белка СС^в кардиомиоцитах.
Как показали наши исследования, в контрольной группе животных (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6Л) активность гена белка СС^в кардиомиоцитах была на уровне 0,61 [0,47-1,36] у.е. У экспериментальных животных с постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57ВЬ6/Х) показатель активности гена белка ССМ{ в кардиомиоцитах снизился на 9,8% (р>0,05) по сравнению с контрольной группой животных (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6Л) и составил 0,55 [0,371,31] у.е. В группе экспериментальных животных с постинфарктной сердечной недостаточностью, которые в течение 8 недель получали антагонист рецептора АТ 1 -телмисартан (ИМ С57ВЬ6Л+ТЕЛ), и тем самым ограничивалось воздействие АГ-11 на клетку, отмечалось снижение активности гена белка ССМ 1в кардиомиоцитах на 14,5% (р>0,05) по сравнению с аналогичной экспериментальной группой животных, не получавших данный препарат (ИМ С57ВЬ6Л), и на 23% (р>0,05) по сравнению с контрольной группой животных (КОНТРОЛЬ С57ВЬ6/Х). В искомой экспериментальной группе животных (ИМ С57ВЬ6Л+ТЕЛ) показатель активности гена белка ССМ[ в кардиомиоцитах составил 0,47 [0,4-1,29] у.е. Результаты данного исследования отражены на рисунке 10.
Рисунок 10 - Активность гена белка ССМ 1 в исследуемых группах
Результаты исследования по экспериментальной группе животных с постинфарктной сердечной недостаточностью, которые в течение 8 недель получали антагонист рецептора АТ 1- телмисартан (ИМ С57ВЬ6Л+ТЕЛ) - свидетельствуют о том, что АГ-11 приводит к увеличению активность гена белка СС^на 14,5% (р>0,05).
В группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 и развившейся постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57БЬ6 !Ь-6-/-шк°р/) активность
гена белка СС^ в кардиомиоцитах составила 0,53 [0,451,08] у.е., а в контрольной группы животных (КОНТРОЛЬ С57БЬ6 ГЬ-6-/- ™Кор() с аналогичным генотипом - 0,42 [0,34-0,61] у.е.
В то же время, у экспериментальных животных с постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57ВЬ6Л) показатель активности гена белка СС^1 в кардиомиоцитах имел значение 0,55 [0,37-1,31] у.е.
Как видно из рисунка 11, в группе экспериментальных животных с отсутствием гена ИЛ-6 и развившейся постинфарктной сердечной недостаточностью (ИМ С57БЬ6 1Ь-6-/- ™КорИ) произошло увеличение активности гена белка СС^ в кардиомиоцитах на 26,1% (р>0,05) при сравнении с контрольной группой животных, у которых отсутствовал ген ИЛ-6 (КОНТРОЛЬ С57БЬ61Ь-6-/-™Кр/).
Рисунок 11 - Активность гена белка ССМ1 в исследуемых группах
При сравнении групп экспериментальных животных с развившейся постинфарктной сердечной недостаточностью как с отсутствием гена ИЛ-6 (ИМ С57БЬ6 1Ь-6-/-™КорР)^ так и с его наличием (ИМ С57ВЬ6Л) значимых различий в показателе активности гена белка СС^ в кардиомиоцитах не наблюдалось. Поскольку значение активности гена белка СС^ в экспериментальной группе (ИМ С57БЬ6 ¡Ь-6-/-шкр) составило 0,53 [0,45-1,08] у.е., а в группе (ИМ С57ВЬ6Л) - 0,55 [0,37-1,31] у.е., очевидно, что ИЛ-
6 не оказывает своего влияния на активность гена белка CCNj в кардиомиоцитах у экспериментальных животных при постинфарктной сердечной недостаточности.
Выводы
При постинфарктной сердечной недостаточности ангиотензин II в 2,7 раза (p<0,005) приводит к увеличению экспрессии белка CCN^ кардиомиоцитах, не влияя на активность гена искомого белка у экспериментальных животных.
Интерлейкин-6 при постинфарктной сердечной недостаточности не оказывал своего влияния как на экспрессию белка CCNp так и на активность гена белка CCN в миокарде левого желудочка сердца у экспериментальных животных.
При постинфарктной сердечной недостаточности антагонист рецептора АТ х- телмисартан - приводит к уменьшению экспрессии белка CCN^ 2,7 раза (p<0,005), не влияя на активность гена белка CCNf в миокарде левого желудочка и увеличивает сократительную способность миокарда левого желудочка сердца на 26,3% (p<0,05) у экспериментальных животных.
Литература
1 . Белен ков, Ю.Н. Нейрогормоны и цитокины при сердечной недостаточности: новая теория старого заболевания? / Ю.Н. Беленков, Ф.Т. Агеев, В.Ю. Мареев // Сердечная недостаточность.
- 2000. - № 4. - С. 135-138.
2 . Им мунопатолог ия застойн ой серд ечной н едостаточнос-ти: роль цитокинов / Е.Л. Насонов [и др.] // Кардиология. - 1999.
- № 3. - С. 66-73.
3 . Chromosomal mapping and expression of the huma n cyr61 gene in tumour cells from the nervous system / C. Martinerie [et al.] // Mol. Pathol. - 1987. - Vol. 50. - P. 310-316.
4. Clinician guide to angiogenesis / N.P. Fam [et al.] // Circulation.
- 2003. - Vol. 108. - P. 2613-2618.
5 . Expression of CYR61, a growth factor-inducible immediate-early gene / T.P. O'Brien [et al.] // Mol. Cell. Biol. - 1990. - Vol. 10.
- P. 3569-3577.
6 . Folkman, J. Tumor angiogenesis: therapeutic implications / J. Folkman // N. Engl. J. Med. - 1971. - Vol. 285 - P. 1182-1186.
7 . Lau, L.F. Identification of a set of genes expressed during the G0/G1 tra nsition of cultu red mouse cells / L.F. Lau, D. N athans // Embo. J. - 1985. - Vol. 4. - P. 3145-3151.
8. Proposal for a unified CCN nomenclature / D.R. Brigstock [et al.] // Mol. Pathol. - 2003. - Vol. 56. - P. 127-128.
9 . Ya ng, G .P. Cyr6 1 , produ ct of a growth fa ctor-indu cible immediate early gene, is associated with the extracellular matrix and the cell surface / G.P. Yang, L.F. Lau // Cell Growth Differ. - 1991. -Vol. 2. - P. 351-357.
Поступила 26.01.2012
