Научная статья на тему 'Особенность АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров'

Особенность АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров Текст научной статьи по специальности «Агробиотехнологии»

CC BY
227
48
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Журнал
Вестник аграрной науки
ВАК
AGRIS
RSCI
Область наук
Ключевые слова
АТФАЗНАЯ АКТИВНОСТЬ / NA/K-АТФАЗА / ЭРИТРОЦИТЫ / ЦЫПЛЯТА-БРОЙЛЕРЫ / ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКАЯ МЕМБРАНА / ЯДРА

Аннотация научной статьи по агробиотехнологии, автор научной работы — Мосягин В. В., Максимов В. И., Фурман Ю. В.

В результате проведенных биохимических исследований предложен метод выделения чистых препаратов ядерной и цитоплазматической мембран эритроцитов цыплят-бройлеров. Выявлены особенности влияния ионов Na+ и К+ , Ca2+ и аниона бикарбоната на активность АТФазы, локализованной в этих мембранах. Дисперсионный анализ показал, что ионы Na+ и K+ детерминируют АТФазную активность цитоплазматических мембран на 97%, ионы Ca2+ на 87% и HCO3анион на 96% с высокой степенью достоверности. Активность АТФазы ядер не зависела от наличия ионов Na+,K+ и Ca2+ (P>0,05) и была детерминирована ионами HCO3на 96% (P

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по агробиотехнологии , автор научной работы — Мосягин В. В., Максимов В. И., Фурман Ю. В.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Особенность АТФаз ядерных и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров»

В свою очередь, анализ результатов первых трех опоросов показал, что воспроизводительные качества у свинок, подвергавшихся физиологической стимуляции пробником-крипторхом, были выше, чем у животных, не имевших контакта с самцом. На основе результатов научно-производственных опытов по использованию пробника-крип'орха в качес'ве «биологического стимулятора» производству был предложен способ стимуляции (патент на изобретение № 1738195).

Таким образом, результаты проведённых исследований свиде'ельс'вую' о 'ом, ч'о разрабо'анные нами способы подго'овки самцов-пробников не сложные по своему исполнению, не сопровождаю'ся осложнениями и не 'ребую' больших затрат. При этом подготовленных пробников можно использова'ь как для выявления половой охоты, так и для биологической стимуляции половой функции у самок.

Литература

1. Бабанин, H.A. Способ подготовки хряка-пробника [Текст] /H.A. Бабанин, О.Б. Сеин // Патент на изобретение №2366382. - 2009, Бюл. №. - С.1.

2. Масалов, B.H. Способ подготовки быков-

пробников [Текст] /B.H. Масалов, О.Б. Сеин,

A.С. Козлов, O.B. Абрамов, И.А. Козлов // Патент на изобретение .№2314063. - 2008, Бюл. №1. - С.1.

3. Сеин, О.Б. Способ подготовки хряка-пробника [Текст] /О.Б. Сеин, H.A. Бабанин // Свидетельство на рацпредложение Главного управления ветеринарии №439-11/2 408-66.

4. Сеин, О.Б. Способ биологической стимуляции репродуктивной функции ремонтных свинок [Текст] /О.Б. Сеин, Н.А.Бабанин, А.Д. Колупаев // Патент на изобретение №1738195. - 1992, Бюл. №21. - С.1.

5. Шипилов, B.С. Физиологические основы

профилактики бесплодия коров [Текст] /

B.С. Шипилов // М.: Колос, 1977. - 335с.

УДК 636.5.086.34:577.1

В.В. Мосягин, кандидат биологических наук В.И. Максимов, доктор биологических наук ФГОУ ВПО «МГАВМиБ им. К.И.Скрябина»

Ю.В. Фурман, доктор биологических наук, член-корреспондент РАЕН Курский институт социального образования (филиал) РГСУ

ОСОБЕННОСТЬ АТФаз ЯДЕРНЫХ И ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИХ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ

ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ

В результате проведенных биохимических исследований предложен метод выгделения чистыгх препаратов ядерной и цитоплазматической мембран эритроцитов цытлят-бройлеров. Выгявленыг особенности влияния ионов N0+ и К+, Са2+ и аниона бикарбоната на активность АТФазыг, локализованной в этих мембранах. Дисперсионныт анализ показал, что ионыг N0+ и К+ детерминируют АТФазную активность цитоплазматических мембран на 97%, ионыг Са2+ - на 87% и НС03- анион - на 96% с выгсокой степенью достоверности. Активность АТФазыг ядер не зависела от наличия ионов N0+,К и Са2+ (Р>0,05) и быта

детерминирована ионами НСО3 на 96% (Р<0,01).

Ключевые слова: АТФазная активность, Na/K-АТФаза, эритроциты , цыплята-бройлеры , цитоплазматическая мембрана, ядра.

Наиболее удобными объектами для изучения функционирования АТФаз являются препараты, получаемые из эри'роци'ов, почек и мозга, ч'о объясняется легкостью получения достаточно активных мембранных препаратов из этих объектов [2, 3].

Однако возрастные изменения морфологии и функции эри'роци'ов п'иц изучены недос'а'очно. Это связано с их более сложным строением, заключающимся в наличии ядра, а в молодых эритроцитах - и митохондрий [1, 5, 6, 9].

С этим фактором связаны также и особенности работы №+, К+-насоса у птиц. Применение специфического ингиби'ора э'ой

аденозинтрифосфатазы - уабаина в концентрации 2,0100,0 мМ не вызывает существенного подавления ак'ивнос'и АТФазы, выделенной из 'каней цыпля'. Ак'ивнос'ь э'ого фермен'а без добавления ионов в среду инкубации сравни'ельно низкая, однако с

As a result of biochemical studies propose a method for isolating pure preparations of nuclear and cytoplasmic membranes of erythrocytes of broiler chickens. The features of the influence of ions Na+, K , Ca2 and HCO3 on activity ATPase, localised in these membranes are revealed. The dispersive analysis has shown that ions Na+, K determine ATPase activity of cytoplasmatic membranes on 97 %, ions Ca2 - on 87 % and HCO3- - on 96 % with high degree of reliability. Activity ATPase of nuckear did not depend on presence of ions Na+, K , Ca2 (P> 0,05) and has been determined by ions HCO3- on 96 % (P <0,01).

Key words: ATPase ACTIVITY, NA/K-ATPase, erythrocytes, CHICKENS-BROILERS, the CYTOPLASMATIC MEMBRANE, NUCLEAR.

возрастом она увеличивается, достигая максимума у половозрелых кур. В присутствии ионов Na+, K+, Mg2+, Ca2+ активность соответствующих энзимов значительно возрастала. Максимальная активность аденозинтрифосфатазной реакции в гомогенатах тканей наблюдалась при концентрации ионов натрия в среде инкубации - 130 мМ и калия - 20 мМ, причем натрий увеличивал активность фермента значительно сильнее калия [11, 12].

В связи с выше изложенным, целью работы было получение чис'ых препара'ов ци'оплазма'ических и ядерных мембран эритроцитов цыплят-бройлеров и изучение влияния ионов Na+ и К+ , Ca2+ и аниона бикарбоната на активность АТФаз локализованных в них.

Материалы и методы

Ма'ериалом для исследования были эри'роци'ы цыплят-бройлеров кросса «ISA», суточного возраста.

Для изучения АТФаз, локализованных в ядерных и цитоплазматических мембранах эритроцитов птиц нами был разработан метод выделения этих мембран методом замораживания-оттаивания в растворе сахарозы, содержащем 50 ммольл-1 трис-И2804 буфер (pH 7,4) с последующим центрифугированием 30 мин при 1000 об мин-1. В результате серии опытов было установлено, что оптимальным является 1,375 мольл-(р=1,176) раствор сахарозы, а наиболее полное разрушение клеток и выход ядер происходит при 3-х кра'ном замораживании о''аивании.

АТФазную активность оценивали по приросту неорганического фосфата после инкубации при 370С и выражали в наномолях неорганического фосфата (Фн) отщепленного 1 мг белка в 1 мин. При этом активность Mg2+ - АТФазы определяли в 50 мМ трис-И2Б04 буфере (pH 7,4) содержащем 60 мМ №С1, 2 мМ АТФ и 2 мМ MgC12. Активность Ма+, К+ - АТФазы измеряли в той же среде, заменяя 15 мМ МаС1 на

Рисунок 1 - Частичный гемолиз эритроцитов после первого замораживания-оттаивания. Видны не разрушенные ядерные клетки

іГ ж

- - ж:#«;

Рисунок 3 - B осадке ядра эритроцитов (после третьего замораживания-оттаивания и центрифугирования)

Результаты исследований по выяснению влияния ионов №+, К+’ Са2+ и НСО3- на активность АТФаз ядер и цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров суточного возраста представлены в таблице 1.

С целью выявления степени влияния ионов на АТФазы ядер и цитоплазматических мембран эри'роци'ов цыпля'-бройлеров был проведен однофакторный дисперсионный анализ. Независимым

15 мМ KCl. Ca +-АТФазную активность определяли, внося в среду 5х10-4 M CaCl2. Уровень HCO3--АТФазной активности оценивали по приросту неорганического фосфата при замене 30 мМ NaCl на 30 мМ NaHCO3 [4]. Неорганический фосфат

определяли спектрофотометрическим методом [8] при длине волны 390нм, а также по методу Чена (1957) в модификации Казеннова А.М. и соавт. [7].

Полученные в ходе исследований данные подвергались биометрической обработке на ПЭВМ с использованием пакетов прикладных программ [10].

Результаты исследования Микрофотографии осадка, полученного при выделении ядер и цитоплазматических мембран, представлены на рис. 1-4. Из этих рисунков видно, что после третьего цикла замораживания-оттаивания получали чистую от не разрушенных клеток фракцию ядер (рис. 3) и теней эритроцитов (рис. 4).

о •

Рисунок 2 - Микроскопическая картина суспензии эритроцитов после второго замораживания-оттаивания. Видны тени эритроцитов и ядра

Рисунок 4 - В супернатанте тени эритроцитов (после третьего замораживания-оттаивания и цен'рифугирования)

фак'ором при э'ом служило наличие в среде инкубации соответствующего иона. За нулевую точку отсчета принимали активность Mg2+-АТФазы.

Дисперсионный анализ показал, что ионы №+,К+ де'ерминирую' АТФазную ак'ивнос'ь

цитоплазматических мембран на 97%, ионы Са2+ - на 87% и ИС03- анион - на 96% с высокой степенью дос'овернос'и.

Т аблица 1 - Показатели АТ фазной активности цитоплазматических и ядерных мембран эритроцитов цыплят суточного возраста (нмоль Фн мг белка'1 -мин'1) и результаты дисперсионного анализа (п=10)

АТФаза мембраны Mg2+- Na+,K+- Ca2+ HCO3--

цитоплазматическая 8,32±0,12 12,37±0,13 10,36±0,14 12,15±0,13

Коэфф. детерминации - 0,97 0,87 0,96

F - 531,53 125,99 484,24

P - (P<0,01) (P<0,01) (P<0,01)

ядерная 4,89±0,18 5,08±0,14 5,05±0,15 14,61±0,43

Коэфф. детерминации - 0,03 0,02 0,96

F - 0,63 0,41 429,37

P - (P>0,05) (P>0,05) (P<0,01)

Активность АТФазы ядер не зависела от наличия в среде инкубации ионов Na+, K+ и Ca2+ (P>0,05) и была детерминирована ионами HCO3" на 96% (P<0,01).

Это, по-видимому, связано с отсутствием в ядерных мембранах эритроцитов цыплят-бройлеров Na+, K+ - чувствительной АТФазы.

Высокий уровень НС03--АТФазы ядерных оболочек и ци'оплазма'ических мембран объясняется, по-видимому, усиленными

энергетическими процессами, происходящими в тканях цыплят суточного возраста.

Заключение. АТФазы цитоплазматических и ядерных эритроцитов цыплят имеют существенные различия, проявляющиеся во влиянии на них ионов Na+ и K+, Ca2+ и аниона бикарбоната. Так, цитоплазматические мембраны эритроцитов содержат чувс'ви'ельные к э'им ионам АТФазные компонен'ы, а в ядерных оболочках ус'ановлено наличие только анион-чувствительной АТФазы.

Литература

1. Болотников, И.А. Гематология птиц [Текст] / И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев. - Л.: Наука, 1980. -116с.

2. Болдырев, А.А. Современное состояние

проблемы транспортных АТФаз и транспортные аденозинтрифосфатазы [Текст] / А.А. Болдырев. - М.: Изд-во МГУ, 1977. - 115 с.

3. Болдырев, А.А. Na/K-АТФаза - свойства и биологическая роль [Текс'] / А.А. Болдырев // Соросовский образовательный журнал. - 1998. -№4. - С.2-9.

4. Иващенко, А.Т. Выделение и свойства

аниончувс'ви'ельной аденозин'рифосфа'азы из мембран эри'роци'ов [Текс'] / А.Т. Иващенко,

И.А. Бушнева // Биохимия. - 1981. - Т.45, № 3. -

С. 486-488.

5. Игнатьев, В.В. Изменения некоторых

физиологических функций в эри'роци'ах человека и млекопи'ающих по сравнению с эри'роци'ами других видов животных / В.В. Игнатьев,

В.Н. Кидалов, А.А. Хадарцев, Н.И. Сясин

[Электронное издание]// Вестник новых медицинских технологий. - 2007. - Т.Х., №1. Режим доступа:

http://www.medtsu.tula.ru/VNMT/Bulletin/E2007-

1/E071.pdf

6. Ирисов, Э.А. Генеральные факторы

высокогорий и адаптации к ним птиц / Э.А. Ирисов // Сибирский экол. журн. - 1999. - № 5. - С.487-494.

7. Казеннов, A.M. Влияние стресса и ингибирования ацетилхолинэстеразы in vivo на свойства Ш+К+-Атфазы эритроцитов у крыс / A.M. Казеннов, М.Н. Маслова, В.Н. Дубровский, Е.А. Скверчинская, Ф.А. Рустамов, Т.В. Тавровская // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. - 1999. -Т. 35, №1. - С. 29-32.

8. Кондрашова, М.Н. Метод определения неорганического фосфата по спектрам поглощения молибдатных комплексов в ультрафиолете [Текст] / М.Н. Кондрашова, М.Н Лесогорова, С.Э. Шноль // Биохимия. - 1965. - Т.30, вып.3. - С. 567-562.

9. Липунова, Е.А. Цитокинетические показатели эри'роци'арного баланса у п'иц в физиологических условиях / Е.А. Липунова, М.Ю. Скоркина // Физиология организмов в нормальном и экстремальном состояниях/ под ред В.И. Гридневой.-Томск, 2001. - С. 31-33.

10. Макарова Н. В. Статистика в Excel / Макарова Н. В., Трофимец В. Я. // Учеб. пособие. — М.: Финансы и с'а'ис'ика, 2002. - 368с.

11. Степанян, Р.А. АТФазная активность плазма'ических мембран печеночной 'кани кур в онтогенезе [Текст] / Р.А. Степанян, А.А. Симонян // Биологический журнал Армении. - 1983. - Т.36, № 10. - С. 830-834.

12. Фурман, Ю.В. АТФазная активность, показа'ели белково-минерального обмена и продук'ивнос'и цыпля'-бройлеров при скармливании им пеп'идного препара'а из о'ходов кожевенного производства [Текст]: дисс. на соискание ученой степени канд. биол. наук / Ю.В. Фурман. - Курск, 1991. - 234с.

Вестник Орел Г Ay

апрель

№2(23)

2010

Теоретический и научно-практический журнал. Основан в 2005 году

Учредитель и издатель: Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Орловский государственный аграрный Университет»_____________________________________________

Редакционный совет: Парахин Н.В. (председатель) Амелин А.В. (зам. председателя) Астахов С.М.

Белкин Б.Л.

Блажнов А.А.

Брыкля О.А.

Буяров В.С.

Гуляева Т.И.

Гурин А.Г.

Гущина Т.В.

Дегтярев М.Г.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Зотиков В.И.

Иващук О.А.

Козлов А.С.

Кузнецов Ю.А.

Лобков В.Т.

Лысенко Н.Н.

Ляшук Р.Н.

Мамаев А.В.

Масалов В.Н.

Новикова Н.Е.

Павловская Н.Е.

Попова О.В.

Прока Н.И.

Савкин В.И.

Степанова Л.П.

Хромов В.Н.

Шендаков А.И. (ответств. секретарь) Ермакова Н.Л. (редак'ор)

Адрес редакции: 302019, г. Орел, ул. Генерала Родина, 69. Телефон: (4862)454037 Факс:(4862)454064 E-mail: nichоgau@yandex.ru E-mail: nich4@orelsau.ru

Свидетельство о регистрации ПИ 5ФС77-21514 от 11.07. 2005 г.

Технический редактор Мосина А.И. Сдано в набор 02.04.2010 Подписано в печа'ь 23.04.2010 Формат 60x84/8. Бумага офсетная. Гарни'ура Таймс.

Объём 12,5 усл. печ. л. Тираж 300 экз. Издательство Орел ГАУ, 302028, г. Орел, бульвар Победы, 19. Лицензия ЛР5021325 от 23.02.1999 г.

Журнал рекомендован ВАК Минобрнауки России для публикаций научных рабо', отражающих основное научное содержание кандидатских и докторских диссертаций

Содержание номера

Научное обеспечение развития высокотехнологичных сфер животноводства

Сальникова И.Н. Особенности и тенденции развития воспроизводственного потенциала

отрасли животноводства в Орловской области............................................. 2

Буяров B.C., Крайс В.В., Буяров A.B., Миронов Д.С., Беленихин В.А. Эффективность

современных технологий производства мяса бройлеров и практика их внедрения............. 7

Шендаков А.И. Комплексный анализ результатов селекции молочного скота в Орловской

области................................................................................ 16

Мошкина C.B., Козлов A.C. Научное обоснование кормления высокопродуктивного

молочного скота........................................................................ 22

Феофилова Ю.Б., Козлов A.C. Влияние режима скармливания кормов коровам на

количественный состав микроорганизмов симбионтов рубца................................. 24

Михеева Е.А., Масалов В.Н. Иммунохимические реакции организма крупного рогатого скота

под влиянием антигенов в разных радиационных зонах..................................... 26

Зулев Г.С. Изменение концентрации общих липидов в крови телят под влиянием разных доз

препарата «Эмицидин»................................................................... 28

Ляшук Р.Н., Шендаков А.И., Сурженков A.B. Селекционно-генетический потенциал

импортированного молочного скота....................................................... 30

Лещуков К.А., Мамаев A.B. Гемогормональный статус организма свиней при стимуляции

компенсаторно-адаптационных реакций.................................................... 32

Масалов В.Н., Сеин О.Б., Сеин Д.О. Новые способы подготовки самцов-пробников и их

использование в качестве «биологических стимуляторов».................................. 36

Мосягин В.В., Максимов В.И., Фурман Ю.В. Особенность АТФаз ядерных и

цитоплазматических мембран эритроцитов цыплят-бройлеров................................ 39

Горлов И.Ф., Емельянов А.А., Шалимова О А., Козлова Т.А., Киреева O.C., Стромская И.Я. Разработка состава съедобных пищевых плёнок и исследование фрактальных свойств

дистиллятов плодовых и ягодных культур в технологии производства мясных продуктов......42

Крюков В.И. Основные положения теории управления биологическими системами в генетическом мониторинге............................................................... 46

Инновации в растениеводстве

Козлов Ю.В., Самсонова Н.Е., Новикова Н.Е. Сравнительная оценка Мивала-Агро, брассиностероидных препаратов и протравителя семян при выращивании яровых зерновых на

дерново-подзолистой почве.............................................................. 54

Овсиенко С.М. Биостимуляторы - резерв повышения продуктивности яровой пшеницы.......... 59

Воронкова М.В., Павловская Н.Е. Оценка эффективности использования биологически активных компонентов растений в защите картофеля от колорадского жука (leptinotarsa

decemlineata Say)..................................................................... 62

Петелько А.И., Богачёва О.В. Влияние природных факторов на сток талых вод в центральном Нечерноземье........................................................................... 65

Интр одукция и зелёное стр оительство

Волчанская A.B., Фирсов Г.А., Лаврентьев Н.В. Клён японский (Acer japonicum Thunb.)

в Санкт-Петербурге..................................................................... 68

Дубовицкая О.Ю., Золотарева Е.В. Красивоцветущие деревья и кустарники для озеленения объектов малоэтажного строительства................................................... 72

Совершенствование экономических механизмов развития аграрного сектора

Клевцов С.М., Сафронов В.В., Клевцова М.Г. Региональный лизинговый потенциал для

отраслей АПК: исследование и анализ................................................... 77

Шалимов Д.В. Роль государственной поддержки кадрового потенциала АПК................... 82

Бердник-Бердыченко Е.Е., Алейнова М.В. Основы современного подхода к управлению

предприятием...........................................................................87

Суворова С.П., Ханенко М.Е., Панкратова Л.А. Принципы организации внутреннего аудита.. 91

Скрипка В.Н., Мельникова Е.В. Совершенствование порядка ведения расчетов по принятым обязательствам в бюджетном учете...................................................... 95

© ФГОУ ВПО Орел ГАУ, 2010

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.