CC BY
29
ОСНОВНЫЕ МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ПРИ РАКЕ ШЕЙКИ МАТКИ Кам ышов С.В. Email: [email protected]
Камышов Сергей Викторович - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник,
отдел химиотерапии, Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр онкологии и радиологии Министерство Здравоохранения Республики Узбекистан, г. Ташкент, Республика Узбекистан
Аннотация: целью исследования явилось изучение экспрессии молекулярно-биологических маркеров опухоли у больных раком шейки матки и их влияние на течение сопроводительной терапии.
Материал и методы: Наибольший эффект в увеличении 5-летней выживаемости больных РШМ оказывала схема сопроводительной иммунотерапии, включающая экстракорпоральную иммунофармакотерапию (ЭИФТ) с плазмаферезом: такое влияние данного метода проявлялось как при положительных, так и при отрицательных уровнях рассмотренных онкомаркеров.
Результаты и обсуждение. Проведённый анализ корреляции уровня онкомаркеров и 5-летней выживаемости больных, позволяет сделать вывод о том, что положительный уровень p53, VEGF и Ki-67 у больных РШМ, наряду с высокой пролиферативной активностью опухоли, может служить основанием для проведения данной категории пациенток сопроводительной иммунотерапии с ЭИФТ, что может существенно увеличить эффективность стандартных схем противоопухолевого лечения. Вывод: При положительном уровне данных окомаркеров, наряду с высокой пролиферативной активностью опухоли, можно рекомендовать проведение сопроводительной иммунотерапии с ЭИФТ с плазмаферезом.
Ключевые слова: рак шейки матки, адаптивный клеточный иммунитет, молекулярно-биологические маркеры, иммунотерапия.
MAIN MOLECULAR-BIOLOGICAL MARKERS IN CERVICAL
CANCER Kamishov S.V.
Kamishov Sergey Viktorovich - MD, PhD, Senior Researcher, CHEMOTHERAPY DEPARTMENT, REPUBLICAN SPECIALIZED SCIENTIFIC AND PRACTICAL MEDICAL CENTER OF ONCOLOGY AND RADIOLOGY, MINISTRY OF HEALTH OF THE REPUBLIC OF UZBEKISTAN, TASHKENT, REPUBLIC OF UZBEKISTAN
Abstract: the aim of the study was to study the expression of molecular-biological tumor markers in patients with cervical cancer, and their effect on the course of accompanying therapy.
Material and methods: The greatest effect in increasing the 5-year survival of patients with cervical cancer was provided by a scheme of accompanying immunotherapy, including EIPHT with plasmapheresis: this effect of the method manifested itself in both positive and negative levels of oncomarkers.
Results and discussion. The analysis of the correlation of the tumor markers level and 5-year survival of patients allows us to conclude that the positive level of p53, VEGF and Ki-67 in patients with cervical cancer, along with high proliferative activity of the tumor, may serve as a basis for conducting this category of patients of accompanying immunotherapy
with EIPHT, which can significantly increase the effectiveness of standard antitumor treatment regimens.
Conclusion: In case of a positive level of these markers, along with high proliferative activity of the tumor, it is possible to recommend carrying out accompanying immunotherapy with EIPHT with plasmapheresis.
Keywords: cervical cancer, adaptive cellular immunity, molecular-biological markers, immunotherapy.
УДК:615.028-614.03.46-8 DOI: 10.20861/2312-8089-2018-42-007
Актуальность. Открытия в области биологии клетки и экспериментальной онкологии определили развитие нового раздела онкологии. Стали известны многие механизмы контроля клеточного деления и апоптоза, поддержания генетической стабильности, путей передачи сигнала от рецепторов в ядро и др. [2, 3, 8, 10]. В настоящее время выявлены различные гены, белки и другие соединения, которые рассматриваются в качестве дополнительных прогностических факторов у больных злокачественными опухолями, в том числе и при онкогинекологических заболеваниях. Они обозначены как иммунологические и молекулярно-биологические маркеры. Большое внимание уделяется изучению молекулярно-биологических маркеров, характеризующих апоптоз, пролиферацию клетки и ангиогенез [1, 4, 5, 6, 7, 14]. К ним относятся р53, Вс1-2, Вах, Раз1, Кл67, УЕвР, Нег2/пеи. Изучение степени амплификации этих генов и экспрессии соответствующих рецепторов и белков стало одним из приоритетных разделов онкологии и для общей популяции больных злокачественными новообразованиями яичников. Вместе с тем, в специальной литературе встречаются лишь единичные публикации, посвященные клиническому значению этих маркеров у больных раком яичников [1, 2, 3, 9, 12]. Применение современных методов иммунотерапии в лечении онкогинекологических заболеваний c использованием новых возможностей изучения молекулярно-биологических маркеров, может дать информацию о прогнозе течения заболевания, содействовать назначению рационального и эффективного лечения, что и определяет актуальность данного исследования [4, 6]. Иммунотерапия со временем может оказаться наиболее перспективным методом лечения опухолей, так как является физиологически адекватным методом, восстанавливающим естественные силы организма больного для борьбы с неопластическим процессом и инфекционными осложнениями, нередко возникающими при лечении. Получение новых уникальных иммуномодулирующих препаратов создало качественно новую основу для коррекции нарушений иммунитета, появилась возможность воздействовать более избирательно на отдельные компоненты и звенья этой системы [1, 5, 10, 11]. Перспективным направлением в лечении злокачественных новообразований на современном этапе развития иммунотерапии является сочетание методов активации специфического и неспецифического иммунитета [8, 10, 11, 12, 14]. В отличие от обычных методов иммунотерапии, когда иммуномодулирующие препараты принимаются в виде таблеток, либо вводятся внутримышечно или внутривенно, использование методов экстракорпоральной иммунофармакотерапии (ЭИФТ) позволяет селективно выделить из крови непосредственно клетки иммунной системы - лейкоциты. Это направление иммунотерапии имеет большие перспективы в онкологической практике в связи с возможностью снимать последствия раковой и химиолучевой интоксикации, а также активировать собственную систему противоопухолевой защиты организма [3, 9, 11, 14]. Однако, в литературе крайне мало сведений об использовании метода ЭИФТ в лечении онкологических заболеваний. Многие методы иммунотерапии в области онкологии, используются пока еще эмпирически, отсутствуют четкие критерии показаний и противопоказаний в лечении злокачественных опухолей различных локализаций. Определение оптимальных доз препаратов,
последовательности различных воздействий на иммунную систему, их длительности, а также влияние методов иммунотерапии на ближайшие и отдаленные результаты противоопухолевой терапии, требуют усилий многих исследователей.
Исходя их вышесказанного, целью исследования явилось изучение экспрессии молекулярно-биологических маркеров опухоли у больных раком шейки матки и раком яичников, и их влияние на течение сопроводительной терапии.
Материал и методы исследования. Были обследованы молекулярно-биологические маркеры опухоли у больных раком шейки матки (РШМ) T2-3N0-iM0 стадий (II-III клинические стадии), которые находились на госпитализации в отделениях онкогинекологии и химиотерапии в 2008-2012гг. Иммуногистохимические методы исследования были проведены на гистологических препаратах операционно-биопсийного материала первичной опухоли больных, полученные до начала терапии. Образцы опухолевой ткани фиксировали в нейтральном забуференном формалине с обычной стандартной проводкой и заливкой в парафин. Гистологические препараты окрашивали обычными способами и проводили иммуногистохимические исследования. Парафиновые срезы депарафинировали и регидратировали по стандартной методике. Для визуализации иммуногистохимической реакции использовали DAB+систему [DakoCytomation, Дания]. Оценку результатов окрашивания проводили с применением светового микроскопа «Leica» (Германия) под увеличением х10; х20; х40. Для маркера оценивали локализацию окрашивания в клетке (ядро, цитоплазма, мембрана). Количество положительных клеток оценивали в зонах, содержащих их максимальное количество. У больных РШМ в иммуногистохимической оценке экспрессии p53 использовали моноклональные мышиные антитела к р53 (клон DO-7), Bc1-2 (клон 124), VEGF (клон VGI), Ki-67 (клон MIB-I)(DakoCytomation, Дания). Иммунотерапия в комплексе стандартной полихимиотерапии была проведена на трех группах больных: 1 группа - 26 больных РШМ без проведения иммунотерапии (контрольная группа); 2 группа - 26 больных РШМ в комплексе с экстракорпоральной иммунофармакотерапией (ЭИФТ); 3 группа - 28 больных РШМ в комплексе с ЭИФТ+плазмаферез (ЭИФТ+ПФ).
Полученные результаты и их обсуждение. Анализ показал, что наиболее высокие показатели 5-летней выживаемости отмечались в группе больных РШМ, которым проводилась ЭИФТ с плазмаферезом (ПФ). Так, в контрольной группе больных выживаемость с отрицательным уровнем р53 составила 62,4±4,8%, тогда как в группах с ЭИФТ и ЭИФТ+ПФ эти показатели составили 70,1±4,2 (р>0,05) и 70,2±4,2% (р>0,05) соответственно. При положительном значении данного онкомаркера, 5-летняя выживаемость составила 44,2±3,1% для контрольной группы без иммунотерапии и 56,2±2,2 (р<0,05) и 56,5±2,4% (р<0,05) для групп с применением методов иммунотерапии соответственно. Ген-супрессор р53 кодирует ядерный белок, модулирующий экспрессию генов, ответственный за репарацию ДНК, деление клеток и апоптоз. На сегодняшний день в литературе нет единого мнения относительно динамики экспрессии р53 при прогрессировании РШМ. Согласно данным ряда авторов, он может, как повышаться, так и снижаться при данном заболевании [6, 9, 18, 27].
Белку Bcl-2 принадлежит важная роль в регуляции апоптоза. Показано, что высо -кая степень экспрессии опухолевой клетки Bid (белка из семейства Bcl, играющего важную роль в регуляции апоптоза и интегрирующего сигналы для митохондрий), коррелирует с неблагоприятным прогнозом РШМ. Bcl-2 может полностью задерживать апоптоз, вызванный р53 и другими стимуляторами, в том числе цитостатическими препаратами, но не останавливает апоптоз, вызванный цитотоксическими Т-лимфоцитами [12, 14]. В различных работах было показано резкое и значимое усиление экспрессии Bcl-2 при локализованных формах РШМ по сравнению с начальными стадиями и последующее снижение экспрессии при
местнораспространенном процессе [5, 8, 9, 10]. Показатели 5-летней выживаемости в контрольной группе больных РШМ при рассмотрении маркера Bcl-2 в контрольной группе составили 54,2±2,4% при отрицательном его уровне и 40,9±2,5% - при его положительном значении. Соответственно, в группах с иммунотерапией данный показатель составил 69,4±3,2% (р<0,05) и 67,6±4,2% (р>0,05) при отрицательном уровне и 52,7±4,1% (р>0,05) и 64,2±4,8% (р>0,05) - при его положительном значении.
Основным активатором ангиогенеза считают фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), ответственный за пролиферацию и миграцию эндотелиальных клеток, а также имеющий непосредственное отношение к инвазии и метастазированию опухоли. Накоплены данные, подтверждающих участие VEGF и EGFR в построении сосудистого русла, росте и прогрессии злокачественных новообразований. Причем взаимодействие этих лигандов с трансмембранными тирозинкиназными рецепторами рассматривают как важнейший аутокринный путь промоции опухоли [14]. При отрицательном значении уровня VEGF в контрольной группе 5-летняя выживаемость пациенток составила 68,4±4,1% и при положительном - 56,0±3,60%. В группах больных, в которых применялась сопроводительная иммунотерапия, соответствующие значения при отрицательном значении VEGF составили 77,6±4,15 (р>0,05) и 76,2±5,5% (р>0,05), при положительном уровне данного онкомаркера -61,8±4,56 (р<0,05) и 68,8±4,18% (р<0,05). Антиген Ki-67 - это ядерный белок, экспрессия которого отмечается в активную фазу клеточного цикла, включая митоз. Согласно данным литературы, экспрессия Ki-67 повышается при поражении шейки матки. Пролиферативный индекс Ki-67 рассматривается как независимый прогностический показатель возникновения рецидива, общей и безрецидивной выживаемости, предсказательный фактор для определения чувствительности к химиотерапии (ХТ) и лучевой терапии (ЛТ). Индекс Ki-67 позволяет оценить степень злокачественности опухоли и прогнозировать течение заболевания в совокупности с другими факторами. Показано, что высокий уровень индекса Ki-67 сопряжен с неблагоприятным прогнозом. В частности, при высоком уровне Ki-67 отмечается ухудшение показателей безрецидивной и общей выживаемости больных раком молочной железы, яичника, толстой кишки, мочевого пузыря, саркомах мягких тканей и др. [11, 14]. Онкомаркер Ki-67 не обнаруживался в опухолях 7 больных РШМ, у которых в контрольной группе 5-летняя выживаемость составила 65,2±5,8%. При его положительном уровне в группе без иммунотерапии данный показатель составил 44,2±6,1%. В группах с проведением ЭИФИ и ЭИФТ + ПФ при отрицательном Ki-67, показатели выживаемости составили 76,4±7,9 (р>0,05) и 77,8±6,7% (р>0,05) соответственно, а при положительном - 57,8±5,9 (р<0,05) и 63,3±7,4% (р<0,05). При низком уровне индекса пролиферативной активности (ПА), который высчитывали по Ki-67, 5-летняя выживаемость у больных РШМ в группе без иммунотерапии составила 62,6±5,8, при высоком его уровне - 44,8±5,1%. В группах с применением имммунотерапевтических методов, 5-летняя выживаемость при низком индексе ПА составила 73,7±8,2 (р>0,05) и 78,1±7,7% (р>0,05), при высоком индексе -54,5±5,4 (р>0,05) и 62,2±6,4% (р<0,05). При изучении экспрессии молекулярно-биологических маркеров опухоли у больных РЯ было показано, что отрицательный уровень р53 был отмечен у 5 (16,6%) пациенток, положительный - у 25 (83,3%). Соответствующие показатели при изучении HER-2/neu обнаруживались у 24 (80,0%) и 6 (20,0%) больных, при изучении EGFR - у 21 (70,0%) и 9 (30,0%), VEGF - у 4 (13,3%) и 26 (86,7%) и при изучении Ki-67 - у 6 (20,0%) и 24 (80,0%) пациенток. Таким образом, у большей части больных РЯ уровень изучаемых онкомаркеров был положительным, за исключением HER-2/neu и EGFR, которые были отрицательными у 80,0 и 70,0% пациенток соответственно.
Список литературы / References
1. Begley J., Ribas A. Targeted therapies to improve tumor immunotherapy // Clinical cancer research, 2008. V. 14. P. 4385-4391.
2. Braun S., Hepp F., Kentenich C.R. et al. Monoclonal antibody therapy with edrecolamb in breast cancer patients: monitoring of elimination of disseminated cytokeratin-positive tumor cells in bone marrow // Clin. Cancer Res., 1999. V. 5. № 12. P. 3999-4004.
3. Cheever M.A. Twelve immunotherapy drugs that could cure cancers // Immunol Rev., 2008. V. 222. P. 357-368.
4. De Felice F., Marchetti C., Palaia I., Musio D., Muzii L., Tombolini V., Panici P.B. Immunotherapy of Ovarian Cancer: The Role of Checkpoint Inhibitors // Journal of Immunology Research, 2015. P.1-7.
5. Emens L.A. Breast cancer immunobiology driving immunotherapy: vaccines and immune checkpoint blockade // Expert Rev. Anticancer Ther., 2012. V. 12. № 12. P. 1597-1611.
6. Gajewski T.F. Cancer immunotherapy // Molecular oncology, 2012. V. 6. Is.2. P. 242-250.
7. Ito F., Chang A.E. Cancer immunotherapy. Current status and future directions // Surgical Oncology Clinics of North America, 2013. V. 22. № 4. P. 765-783.
8. Li Z., Chen L., Rubinstein M.P. Cancer immunotherapy: are we there yet? // Exp. Hematol. Oncol. -2013. -V.2. -N1. -P.33.
9. Maker A.V., Phan G.Q., Attia P., Yang J.C., Sherry R.M., Topalian S.L., Kammula U.S., Royal R.E., Haworth L.R., Levy C., Kleiner D., Mavroukakis S.A., Yellin M., Rosenberg S.A. Tumor regression and autoimmunity in patients treated with cytotoxic T lymphocyte-associated antigen 4 blockade and interleukin 2: a phase I/II study // Ann. Surg. Oncol., 2005. № 12. P.1005-1016.
10. Nawaz M., Fatima F., Nazarenko I., Ekström K., Murtaza I., Anees M., Sultan A., Neder L., Camussi G., Valadi H., Squire J.A., Kislinger T. Extracellular vesicles in ovarian cancer: applications to tumor biology, immunotherapy and biomarker discovery // Expert Rev. Proteomics, 2016. V. 13. № 4. P. 395-409.
СОВРЕМЕННАЯ ИММУНОФАРМАКОТЕРАПИЯ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ РАКА ШЕЙКИ МАТКИ Кам ышов С.В. Email: [email protected]
Камышов Сергей Викторович - кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник,
отдел химиотерапии, Республиканский специализированный научно-практический медицинский центр онкологии и радиологии Министерство Здравоохранения Республики Узбекистан, г. Ташкент, Республика Узбекистан
Аннотация: целью исследования явилась оценка эффективности сопроводительной иммунотерапии в комплексном лечении больных раком шейки матки в стационарных условиях.
Материал и методы. С этой целью были обследованы больные раком шейки матки (РШМ) T2-No-Mo стадий (II-III клинические стадии).
Результаты и обсуждения. В контрольной группе больных проведение химиотерапии приводило к выраженному проявлению признаков токсичности. Выраженность таких побочных проявлений химиотерапии, как анемия, лейкопения, ухудшение аппетита, тошнота и аллопеция, у части больных составляла третью степень токсичности, и у 13,3% пациенток - четвертую степень по аллопеции. Третья и
