CC BY
23GENE AND CELLULAR THERAPY |
Осложнения после терапии Т-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором у взрослых
Антонина Е. Щекина, Геннадий М. Галстян, Ольга А. Гаврилина, Залина Т. Фидарова, Вера В. Троицкая, Вера А. Васильева, Елена Н. Паровичникова, Михаил А. Масчан
Национальный медицинский исследовательский центр гематологии, Москва, Россия
Введение
Терапия Т-лимфоцитами с химерным антигенным рецептором (САЯ-Т-терапия) является высокоэффективным методом лечения рефрактерных к химиотерапии В-клеточных лимфом и острых лимфобластных лейкозов (ОЛЛ). Однако САЯ-Т-терапия может сопровождаться развитием тяжелых, угрожающих жизни осложнений, среди которых наиболее серьезные - синдром выброса цитокинов (СВЦ) и с иммунными клетками ассоциированный нейротоксический синдром (ИКАНС). Цель работы - установить характер, частоту развития и методы лечения осложнений САЯ-Т-тера-пии у взрослых больных.
Материалы и методы
В проспективный анализ включено 9 процедур САЯ-Т-терапии, которые были проведены у 5 больных (3 женщины, 2 мужчины) В-клеточными лимфомами и В-ОЛЛ в возрасте от 19 до 38 лет (медиана - 29 лет). 1 больному с рецидивом В-ОЛЛ выполнено 4 процедуры САЯ-Т-терапии, у 1 больной с рефрактерной диффузной В-крупноклеточной лимфомой - 2 процедуры. У 3 больных с экстрамедуллярными рецидивами В-ОЛЛ (у 1 больного - нейрорецидив) процедуры САЯ-Т-тера-пии выполнялась однократно. Доза и вид САЯ-Т-тера-пии определялись индивидуально. Все больные перед САЯ-Т-терапией получали тоцилизумаб и наблюдались в отделении реанимации и интенсивной терапии (ОРИТ). Регистрировали сроки возникновения осложнений, виды осложнений на основании принятых кри-териев1, эффективность проводимого лечения осложнений САЯ-Т-терапии.
Результаты
СВЦ развился в 4 из 9 процедур САЯ-Т-терапии. Частота развития тяжелого СВЦ (>3 степени) составила 25%.
У всех больных с СВЦ была лихорадка > 39°С. Артериальная гипотензия была в 3 из 4 случаев СВЦ. В 1 случае развился шок с полиорганной дисфункцией, для лечения которого применялась вазопрессорная терапия, экстракорпоральная сорбция цитокинов, гемодиафиль-трация. Гипоксемия зарегистрирована в 2 из 4 случаев, ни в одном из них не потребовалось проведения искусственной вентиляции легких. Медиана времени развития СВЦ составила +6,5 день (4-7 дни) после трансфузии САЯ-Т-клеток, медиана продолжительности СВЦ -4,5 дня (2-5 дней). Тоцилизумаб (8 мг/кг) применяли в 2 случаях СВЦ в виде однократных введений. В 8 из 9 случаев САЯ-Т-терапии наблюдалась гипофибриногене-мия (медиана 1,2 г/л, разброс 0,8-1,9 г/л). В 6 из 9 случаев отмечена гипонатриемия (медиана 124 ммоль/л, разброс 122-132 ммоль/л). У 1 больного с нейролейкемией на +7 сутки развился ИКАНС 3 степени тяжести. Цитоз ликвора составил 77 клеток/мл, при иммунофенотиро-вании в ликворе обнаружены САЯ-Т-клетки. Проводилась терапия дексаметазоном (20 мг/м2/сут.), реверсия ИКАНС наблюдалась в течение 24 ч после начала терапии дексаметазоном. В 2 из 9 случаев развился синдром лизиса опухоли, в 1 случае развился септический шок, явившийся причиной смерти больного. Общая выживаемость после САЯ-Т-терапии составила 89%.
Выводы
В 55% случаев после САЯ-Т-терапии могут развиваться серьезные осложнения (СВЦ, ИКАНС, септический шок), требующие интенсивной дифференциальной диагностики и лечения.
Ключевые слова
САЯ-Т-терапия, синдром высвобождения цитокинов, синдром нейротоксичности.
GC-12
I Combining bispecifics and CARs: novel design of chimeric antigen receptor with CD3E extracellular domain for redirecting antitumor specificity with bispecific antibodies
Daniil I. Shmidt Ivan N. Gaponenko Nikita D. Yolshin 2, Olga S. Epifanovskaya Tatyana N. Belovezhets 3, Andrey A. Gorchakov 3, Sergey V. Kulemzin 3, Andrey M. Chekalov Elena V. Babenko Albert R. Muslimov Vladislav S. Sergeev Kirill V. Lepik Alexander D. Kulagin 1
1 RM Gorbacheva Research Institute, Pavlov University, St. Petersburg, Russia;2 Smorodintsev Research Institute of Influenza, St. Petersburg, Russia;3 Institute of Molecular and Cellular Biology, SB RAS, Novosibirsk, Russia Contact: Dr. Daniil I. Shmidt, e-mail: daniil.shmidt@yahoo.com, lepikkv@gmail.com
Introduction
Chimeric antigen receptor T cells (CAR-T) and bispecific antibody technologies (BsAbs) became a breakthrough in the therapy of relapsed/refractory B-cell malignancies.
CAR-T cells possess not negligible toxicity that can be fatal in some patients, while their efficiency may be hampered by mechanisms of resistance, such as antigen escape and CAR-T exhaustion. Most of the BsAbs bind CD3 epsilon (CD3s) protein on T-cells alongside with tumor-associated
110 CTT JOURNAL | VOLUME 10 | NUMBER 3 (SUPPLEMENT) | SEPTEMBER 2021
@ cttjournal.com
I GENE AND CELLULAR THERAPY
antigen, lacking important co-stimulatory signals present in CAR structure, which may limit their potential. Introducing CD3 epsilon as an extracellular portion of CAR allows to engage CAR in immune synapse formation using BsAbs. Our approach addresses limitations of both methods, combining potential for control of toxicity by controlling BsAbs infusion, ability to modify antigen-specificity by changing the BsAbs as well as enabling dual or multi-targeting. Moreover, the possibility of making CAR-T cells "rest" by stopping BsAbs infusion may presumably prevent their exhaustion [1].
Materials and methods
cDNA of extracellular domain (ECD) of CD3E gene was derived from healthy donor peripheral blood mononuclear cells (PBMC) mRNA and cloned to pIRES. Then CD3E ECD was inserted in pCDH lentiviral plasmid containing FMC63-CD8stalk-41bbz CAR with NGFR as reporter gene substituting FMC63 (clone 7). Lentiviral preparations were made using HEK293T cells and pMD2.G and psPAX2 packaging plasmids. Lentiviral preparation was titrated using HEK293 cell line. PBMCs of a healthy donor were separated using Fi-coll density gradient centrifugation. Cells were plated at the density of 1-2*106 cells/ml and activated with 0.1 mcg/mL OKT3 antibody with 50 IE/mL of IL-2 for 3 days. On day 3 cells were transduced with lentiviral vector for 2 days. Cells were assessed for NGFR expression on day 5-8 post-activation using flow cytometry. On the next day after determining the percentage of NGFR-positive cells, cytotoxicity test was conducted. For cytotoxicity test Raji cell line stained with CFSE dye were plated with CAR-T cells at different effec-tor:target (E:T) ratio in duplicates; BsAbs - blinatumomab or glofitamab - was added at different concentrations. Percentage of living target cells were determined by flow cytom-etry after 4 or 24 hours. Cytotoxicity was determined by the formula: 100 - cells alive/control cells alive (no effectors). Results. Lentiviral titer was 8x104/^L using HEK293T cells. Efficiency of T-cell transduction ranged from 30 to 90%. Cy-totoxicity tests conducted for 4 and 24 hours with blinatum-omab at concentrations 0, 10, 100 and 200 ng/mL at E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 3:1, 5:1 did not reveal the difference of cytotox-
icity from control T cells. Cytotoxicity with glofitamab was tested at concentrations 0, 1, 10 pM/L with E:T ratio of 0.3:1, 1:1, 5:1 for 24 hours. The most evident difference was seen in 5:1 E:T ratio with increase of cytotoxicity in CAR-T compared to untransduced T-cells at glofitamab concentration 1 pM/L (93% vs 59%) and 10 pM/L (96% vs 74%).
Conclusion
Novel chimeric antigen receptors with extracellular portion of CD3E redirected by bispecific antibody glofitamab, but not blinatumomab may have activity against B-cell lymphoma cells in vitro. These may be explained by the fact that OKT3 antibody fragment, on which blinatumomab is based, can't recognize CD3E as monomer, only as a dimer [2-4]. Therefore, design of CARs with CD3epsilon/CD3gamma and CD3epsilon/CD3delta extracellular domains is warranted.
References
1. Weber EW, Parker KR, Sotillo E, et al. Transient rest restores functionality in exhausted CAR-T cells through epige-netic remodeling. Science. 2021.
2. Salmerón A, Sánchez-Madrid F, Ursa MA, Fresno M, Alarcón B. A conformational epitope expressed upon association of CD3-epsilon with either CD3-delta or CD3-gamma is the main target for recognition by anti-CD3 monoclonal antibodies. J Immunol. 1991.
3. Law CL, Hayden-Ledbetter M, Buckwalter S, McNeill L, Nguyen H, Habecker P, Thorne BA, Dua R, Ledbetter JA. Expression and characterization of recombinant soluble human CD3 molecules: presentation of antigenic epitopes defined on the native TCR-CD3 complex. International Immunology, 2002.
4. Trinklein ND, Pham D, Schellenberger U, et al. Efficient tumor killing and minimal cytokine release with novel T-cell agonist bispecific antibodies. MAbs. 2019.
Keywords
CAR-T, chimeric antigen receptor, cell therapy, B-cell malignancies, bispecific antibodies.
Комбинируя СДЯ-Т и биспецифические антитела: новый дизайн химерного антигенного рецептора с внеклеточным доменом Сй3Е для перенаправления противоопухолевой специфичности с помощью биспецифических антител
Даниил И. Шмидт Иван Н. Гапоненко Никита Д. Ёлшин 2, Ольга С. Епифановская Татьяна Н. Беловежец 3, Андрей А. Горчаков 3, Сергей В. Кулемзин 3, Андрей М. Чекалов Елена В. Бабенко Альберт Р. Муслимов Владислав С. Сергеев Кирилл В. Лепик Александр Д. Кулагин 1
1 НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р. М. Горбачевой, Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова, Санкт-Петербург, Россия;2 НИИ Гриппа им. А.А. Смородинцева, Санкт-Петербург, Россия;3 Институт молекулярной и клеточной биологии, СО РАН, Новосибирск, Россия
Введение
Т-клеточная терапия с использованием рекомбинант-ного химерного антигенного рецептора (САЯ-Т) стала выдающийся терапевтической опцией для лечения некоторых В-клеточных злокачественных новообразований. Однако, примерно у половины пациентов наблю-
даются рецидивы. Важным механизмом устойчивости к CAR-T терапии являются уменьшение экспрессии антигена и истощение CAR-T продукта. Большинство биспецифических Т-клеточных антител (BsAbs) связывают белок СЭ3-эпсилон (CD3s) на Т-клетках вместе с ассоциированным с опухолью антигеном. Использование CD3s в качестве внеклеточного домена CAR
CTT JOURNAL | VOLUME 10 | NUMBER 3 (SUPPLEMENT) | SEPTEMBER 2021 111
