CC BY
31
жденного и взрослого человека, принадлежность крови беременной женщине, установление менструального характера следов крови, изучение пальцевых отпечатков на пот и исследований следов пота в целом, проведение судебно-цитологической экспертизы.
ВЫВОДЫ
• «Порядок организации и производства судебно-медицинских экспертиз в государственных судебно-экспертных учреждениях Российской Федерации», утвержденный Приказом Минздравсоцразвития РФ от 12.05.2010 № 346н в части проведения судебно-биологических исследований практически в каждом разделе содержит рекомендации, не соответствующие современному уровню экспертной практики, с точки зрения взаимосвязи судебно-биологических и молекулярно-генетических методов исследования.
• Часть положений этого «Порядка организации и производства судебно-медицинских экспертиз...» содержат рекомендации, которые при их исполнении могут негативно влиять на качество молекулярно-генетических исследований.
• Данный документ нуждается в неотложной детальной переработке с учетом современного состояния экспертизы биологических следов на вещественных доказательствах.
■ опыт работы с гистологическим и костным мате-риалом в молекулярно-генетической лаборатории гбуз мо «бюро смэ»
Т. А. Смагина
• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно)
• Аннотация: доклад посвящен молекуляр-но-генетическому исследованию костного
и гистологического материала, поступающего в молекулярно-генетическую лабораторию ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» по постановлениям Главного следственного управления Следственного комитета Российской Федерации по Московской области для идентификации личности и установления родства. Проведен анализ объема, характера исследований, полученных результатов, с учетом особенностей представленного материала, методов выделения ДНК.
• Ключевые слова: молекулярно-генетиче-ское исследование, костный материал, гистологический материал, выделение ДНК
ВВЕДЕНИЕ
Внедрение в экспертную практику новых высокотехнологичных решений повышает информативность молекулярно-генетического исследования и обеспечивает существенное увеличение доказательного значения получаемых результатов. В связи с этим возрастает количество и сложность предоставляемых объектов для проведения экспертизы с помощью методов мо-лекулярно-генетической индивидуализации человека с целью судебно-медицинской идентификации (отождествления) личности и установления спорного происхождения детей.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследованию подвергались образцы костного материала (фрагменты ребер, трубчатых костей, черепа,
позвонки, зубы) и гистологического материала (парафиновые блоки, гистологические препараты). Выделение ДНК из костного материала, предварительно измельченного на гомогенизаторе Precellys Evolution (Bertin Technologies, Франция), проводили двумя способами: буфером PrepFiler BTATM Lysis Buffer (Applied Biosystems, США) с добавлением DTT и протеиназы К с применением сорбентных технологий на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System (Applied Biosystems, США) с использованием специализированного набора реагентов PrepFiler Express Forensic DNA Extraction Kit* (Applied Biosystems, США) и с применением технологии очистки геномной ДНК за счет избирательного связывания ДНК с мембраной на основе силики с помощью прибора QIAcube фирмы QIAGEN с использованием набора QlAamp DNA Investigator Kit. Выделение ДНК из гистологического материала (после предварительной стадии депарафинизации с использованием ксилола) проводили на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System (Applied Biosystems, США) с использованием специализированного набора реагентов PrepFiler Express Forensic DNA Extraction Kit* (Applied Biosystems, США).
Анализ матричной активности препаратов ДНК проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием системы количественной эн-зиматической амплификации ДНК Quantifiler® Duo DNA Quantification Kit (Applied Biosystems, США), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицирован-ных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкцией фирмы-изготовителя. Продуктивность полимеразной цепной реакции регистрировали в режиме реального времени с использованием специализированного амплификатора ABI PRISM 7500 Sequence Detection System и программного обеспечения SDS software v. 1.0 (Applied Biosystems, США).
Типирование полиморфных STR-локусов проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием энзиматической амплификации 16-локусной панели AmpFlSTR® Identifiler® Plus PCR Amplification Kit, 24-локус-ной панели GlobalFiler™ PCR Amplification Kit, 25-локус-ной системы AmpF/STR* Yfiler™ Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystems, США), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкциями фирмы-изготовителя. Продукты полимеразной цепной реакции фракционировали электрофоретически с использованием системы капиллярного электрофореза ABI PRISM 3500 (Applied Biosystems, США).
Полученные электрофореграммы анализировали с использованием штатного программного обеспечения GeneMapper ID-X (Applied Biosystems, США) и устанавливали индивидуальные генотипические комбинации аллельных вариантов (профили ПДАФ) типируемых STR-локусов, а также устанавливали индивидуальные ал-лельные варианты полиморфных локусов Y-хромосомы исследуемых объектов.
Оценка полученных результатов проводилась с учетом матричной активности ДНК в исследуемых объектах и картины электрофоретического фракционирования.
ВЫВОДЫ
• При оценке матричной активности ДНК в образцах костного материла в препаратах ДНК, выделенных на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System, концентрация ДНК соответствует требованиям использованной системы не ниже установленного порога чувствительности 0,01 нг/мкл, что свидетельствует о приемлемом уровне матричной активности ДНК исследованных образцов; а в тех же образцах костного материала, препараты ДНК из которых выделены на приборе QIAcube фирмы QIAGEN, концентрация ДНК ниже порога чувствительности используемого метода, что свидетельствует о низком уровне матричной активности ДНК исследованных образцов.
• Методом капиллярного электрофореза с образцами костного материла, препараты ДНК из которого выделены на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System, получен полный амплификаци-онный профиль ДНК; при исследовании соответствующих образцов костного материала, препараты ДНК из которого выделены на приборе QIAcube фирмы QIAGEN, по некоторым локусам получены неустойчивые результаты.
• Полученные результаты позволяют сделать вывод о возможности и целесообразности молекулярно-генетиче-ского исследования костного и гистологического материала в рамках новых высокотехнологичных решений, хотя это и сопряжено с определенными сложностями (предварительные стадии измельчения и депарафини-зации, необходимость дифференциального анализа биологического материала, отбор нескольких препаратов от одного лица, а в случаях с костным материалом и от одного объекта исследования).
■ повышение аоказательственного значения экспертного вывода с помощью пцр и флуоресцентной
детекции аллельных вариантов полиморфныхлокусову-хромосомы,
Т. А. Смагина
• Бюро судебно-медицинской экспертизы Московской области (нач. - д.м.н., проф. В. А. Клевно)
• Аннотация: Доклад посвящен практическим случаям проведения молекулярно-генетических экспертиз в ГБУЗ МО «Бюро СМЭ», в которых для повышения доказательственного значения экспертного вывода, либо для подтверждения родства, проводился анализ STR-маркеров Y-хромосомы. Полученные данные позволяют говорить о целесообразности определения генотипических признаков (гаплотипов) ДНК Y-хромосомы в исследуемых препаратах ДНК для современных постановок идентификационного молекулярно-генетического анализа.
• Ключевые слова: молекулярно-генетиче-ская экспертиза, аллельный вариант, STR-ло-кус, гаплотип ДНК Y-хромосомы
ВВЕДЕНИЕ
Объективная ценность для следствия и суда данных, получаемых при проведении молекулярно-генетических экспертиз, и возрастающая сложность экспертных задач стимулируют внедрение в экспертную практику новых решений для повышения информативности молекуляр-но-генетического исследования и обеспечения существенного увеличения доказательного значения получаемых ре-
зультатов. В случаях, связанных с гражданско-правовыми отношениями и уголовно-наказуемыми деяниями, возрастает количество молекулярно-генетических экспертиз, в которых эксперт устанавливает не только индивидуальные аллельные варианты (профили ПДАФ) STR-локусов аутосомной ДНК исследуемых объектов, но и индивидуальные аллельные варианты полиморфных локусов Y-хромосомы.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Исследованию подвергался биологический материал, поступающий в молекулярно-генетическую лабораторию ГБУЗ МО «Бюро СМЭ» по постановлениям Главного следственного управления Следственного комитета Российской Федерации по Московской области (образцы крови, следы крови, следы спермы, биологические следы на вещественных доказательствах). Выделение ДНК из биологического материала проводили с применением сорбентных технологий на роботизированной станции AutoMate Express DNA Extraction System (Applied Biosystems, США) с использованием специализированного набора реагентов PrepFiler Express Forensic DNA Extraction Kit® (Applied Biosystems, США). Анализ матричной активности препаратов ДНК проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием систем количественной энзиматической амплификации ДНК Quantifiler® Human DNA Quantification Kit, Quantifiler® Duo DNA Quantification Kit (Applied Biosystems, США), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкцией фирмы-изготовителя. Продуктивность полимеразной цепной реакции регистрировали в режиме реального времени с использованием специализированного ам-плификатора ABI PRISM 7500 Sequence Detection System и программного обеспечения SDS software v. 1.0 (Applied Biosystems, США).
Типирование полиморфных STR-локусов проводили с помощью полимеразной цепной реакции с использованием энзиматической амплификации 16-локусной панели AmpFlSTR® Identifiler® Plus PCR Amplification Kit, 25-ло-кусной системы AmpFlSTR® Yfiler™ Plus PCR Amplification Kit (Applied Biosystems, США), руководствуясь Методическими указаниями № 98/253 «Использование индивидуализирующих систем на основе полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) ДНК в судебно-медицинской экспертизе идентификации личности и установления родства» (утверждены Минздравом РФ 19.01.1999) и инструкциями фирмы-изготовителя. Продукты полимеразной цепной реакции фракционировали электрофоретически с использованием системы капиллярного электрофореза ABI PRISM 3500 (Applied Biosystems, США).
Полученные электрофореграммы анализировали с использованием штатного программного обеспечения GeneMapper ID-X (Applied Biosystems, США) и устанавливали индивидуальные генотипические комбинации аллельных вариантов (профили ПДАФ) типируемых STR-локусов, а также устанавливали индивидуальные аллельные варианты полиморфных локусов Y-хромосомы исследуемых объектов.
Оценка полученных результатов проводилась с учетом матричной активности ДНК в исследуемых объектах и картины электрофоретического фракционирования. Для расчета вероятности по аутосомной
