CC BY
43
7. Радзинский, В.Е. Акушерский риск: Максимум информации - минимум опасности для матери и младенца / В.Е. Радзинский, С.А. Князев, И.Н. Костин. - М. : Эксмо, 2009. - 112 с.
8. Роговская, С.И. Папилломавирусная инфекция у женщин и патология шейки матки: (руководство практикующего врача) / С.И. Роговская. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 144 с.
9. Bontkes, H. Human papillomavirus type 16 E2-specific T-helper lymphocyte responses in patients with cervical intraepithelial neoplasia /
H. Bontkes, T. de Gruijl, A. Bijl et al. // J. Gen. Virol. -2009. - 80 (Pt 9). - P. 2453-2459.
10. Hohenleuther, U. Post operative adjuvant therapy with interferon-a 2b following laser surgery of con-
dyloma acuminate / U. Hohenleuther, M. Landtha-ler, O. Braun-Falco // Hautarzt. - 2007. - 41(10). -P 545-548.
11. Tindle, R. Immune evasion in human papillomavirus-associated cervical cancer / R. Tindle // Nat. Rev. Cancer. - 2009. - 2(1). - P 59-65.
12. Turing, S. Treatment of condyloma acuminata with interferon / S. Turing // Semin. Oncol. - 2008. -15(5). - P 35-40.
13. Wang, Z. Detection of HPV DNA and its relationship with peripheral T cell subsets in patients with condyloma acuminate / Z. Wang, L. Li et al. // J. Gen. Virol. - 2001. - 15(3). - P 254-255.
ПРЕГРАВИДАРНАЯ ПОДГОТОВКА ПАЦИЕНТОК С РЕЦИДИВИРУЮЩИМ ГЕНИТАЛЬНЫМ КОНДИЛОМАТОЗОМ
И. И. КУЦЕНКО, И. О. БОРОВИКОВ,
А. Е. ХОРОЛЬСКАЯ, Е. И. НАЗАРЕНКО,
Ю. В. ДЕХТЯРЕНКО
Проведен сравнительный анализ результатов лечения и предгравидарной подготовки 60 больных рецидивирующим генитальным кондиломатозом. Установлено, что использование топической цитокинотерапии в комплексной терапии рецидивов данного заболевания увеличивает эффективность лечения, снижает частоту рецидивов, способствует уменьшению количества осложнений во время беременности и родов и новорожденных с внутриутробной инфекцией.
Ключевые слова: папилломавирусная инфекция, рецидивирующие генитальные кондиломы, предгра-видарная подготовка, цитокинотерапия
PREGRAVIDAL PREPARATION OF THE WOMEN SUFFERED FROM RECURRENT GENITAL CONDILOMATOSIS
KUTSENKO I. I., BOROVIKOV I. O.,
KHOROLSKAYA A. E., NAZARENKO E. I., DEHTJARENKO J. V.
The comparative analysis of the results of two different treatment approaches in pregravidal preparation of 60 patients with recurrent genital condilomatosis was carried out. It was established that local use of recombinant IL-2 increases efficiency of treatment, reduces frequency of relapses, promotes reduction of complications during pregnancy and sorts, reduces quantity of newborns with HPV infection.
Key words: papilloma virus, relapsing genital
condilomatosis, pregravidal preparation, cytokinotherapy
© Коллектив авторов, 2012 УДК 618.11.14-002:616-07
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ИННОВАЦИОННЫХ КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ В ДИАГНОСТИКЕ ЭНДОМЕТРИОИДНЫХ КИСТ ЯИЧНИКОВ
12 1 М. А. Лысенко , В. Б. Метелин , Н. В. Баранова
'Ставропольская государственная медицинская академия
2Российская медицинская академия последипломного образования, Москва
В последние годы наблюдается устойчивая тенденция к увеличению распространенности наружного генитального эндометриоза
Лысенко Марина Анатольевна, кандидат медицинских наук, старший преподаватель кафедры анатомии Ставропольской государственной медицинской академии; тел.: 89034136055; e-mail: mara@mail.ru.
Метелин Владислав Борисович, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Российского государственного медицинского университета; тел.: 89055484347; e-mail: vladlen@rambler.ru.
Баранова Надежда Владимировна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры анатомии
Ставропольской государственной медицинской академии; тел.: (8652)353229; e-mail: mara@mail.ru.
среди женщин репродуктивного возраста. При этом в подавляющем большинстве наблюдений (до 59 %) наиболее частой локализацией процесса при поражении органов малого таза и брюшины являются яичники [1, 2, 11]. Несмотря на большое число исследований, посвященных различным аспектам эндометриоза, до сих пор остаются невыясненными многие этиопатогенетические механизмы данного патологического процесса, дискутируются особенности клинического течения заболевания в зависимости от локализации процесса, эффективность различных методов лечения и вариантов мониторирования для снижения частоты рецидивов.
Оптимальным методом лечения эндометриоид-ных кист яичников (ЭКЯ) остается хирургический,
однако, по данным литературы, частота рецидивов после оперативного лечения составляет практически 14 % [6]. Известно, что высокой диагностической ценностью в алгоритме обследования больных с эндометриозом обладают лапароскопия, ультразвуковое исследование, компьютерная томография, ядерно-магнитный резонанс, кольпоскопия, церви-коскопия и др. В то же время всё большее значение в уточняющей и дифференциальной диагностике эндометриоза приобретают современные неинвазивные компьютерные методы, позволяющие проводить многопараметровый и объективный анализ морфофункционального состояния клеток крови, оценку экспрессии активационных маркеров, гормональных и гуморальных факторов периферической крови [3, 4, 8, 13 ].
Пересматриваются и предлагаются новые биомо-лекулярные маркеры, совершенствуются дополнительные специальные инструментальные и лабораторные методы анализа [2, 7, 9, 10, 12].
В рамках данной проблемы особое внимание уделяется поиску наиболее точных и информативных методов анализа диагностических параметров, разработке универсальных критериев оценки эффективности лечебных мероприятий. Этим требованиям в полной мере отвечают новейшие лазерные оптические диагностические системы, которые позволяют получать результат практически в режиме реального времени.
Цель настоящей работы - оптимизация диагностики рецидивов и оценки эффективности лечения больных с эндометриоидными кистами яичников по результатам мониторинга показателей морфофункционального статуса лимфоцитов периферической крови.
Материал и методы. Проведено обследование 23 больных с эндометриодными кистами яичников (средний возраст 28,7±2,9 лет). Г руппу сравнения составили 20 соматически здоровых женщин репродуктивного возраста (средний возраст 31,8±4,6 лет).
Комплекс лабораторных исследований включал: общий анализ крови, мочи, определение групповой принадлежности и резус-фактора, биохимических и гемостазиологических параметров крови, характера флоры влагалища путем микроскопического исследования мазков. Ультразвуковое исследование проводили с помощью прибора SSD-2000 («Aloka C°», Япония); кольпоскопию - кольпоскопом OCS-3 («Olympus Optical C°», Япония). Все больные были прооперированы лапароскопическим доступом. При проведении хирургических вмешательств использовали телевизионные системы Telecam SL и Tricam SL, электрохирургические генераторы Autcon 200, Autcon 350 и стандартные моно- и биполярные инструменты («Karl Storz GmbH & C°», Германия). После удаления эндометриоидных кист проводили их патоморфологическое исследование. Динамическое наблюдение за больными ЭКЯ проводили в сроки 3 и 12 месяцев после операции. Морфофункциональное состояние иммунокомпетентных клеток оценивали по данным компьютерной фазовой морфометрии (КФМ) с использованием модифицированного интерферометра Линпика. Забор крови (4-5 мл) для морфометрических исследований производили из локтевой вены, кровь стабилизировали гепарином. Мононуклеары выделяли стандартным методом на градиенте плот-
ности для лимфоцитов Ficoll-Paque (р=1,077 г/см3) производства «Amersham Biosciences» (Швеция). Разделение лимфоцитов и моноцитов производили по степени их адгезивности к пластику.
Комплексный алгоритм морфометрии включал автоматическое определение заданных размерных параметров отдельных лимфоцитов, статистическую обработку данных и документирование результатов в виде протоколов I, II и III уровней, включающих визуализацию фазово-интерференционного образа клетки (топограмму, 3й-изображение, профиль, гистограмму распределения фазовых высот), расчет морфометрических показателей отдельных клеток и интегральный анализ клеточной популяции по мерным признакам построения лимфоцитограмм (рис. 1).
г
Визуальный анализ и сканирование лимфоцитов
Получение фазового портрета клетки (преобразование цифрового массива в видимое изображение)
Формирование файла исходных данных для дальнейшей статистической обработки:
V Редактирование (сглаживание, коррекция, усреднение, устранение тренда)
^ Присвоение или изменение атрибутов изображения ^ Архивирование
V_____________________________________________________________/
Формирование текстовой и графической документации
Протокол I уровня Анализ структурно-объёмных параметров клетки (З-Э; профиль; гистограмма) программа ТЫЖ
Протокол П уровня Расчёт морфометрических показателей отдельных клеток (Dmax; Per; Height; Area; Vol.) программа MORPH
Протокол III уровня
Интегральный морфометрический анализ клеточной популяции Построение цитограмм программа StatM
Рис.1. Блок-схема алгоритма витальной компьютерной фазовой морфометрии лимфоцитов
Морфофункциональное состояние лимфоцитов in situ оценивали экспресс-методом витальной компьютерной морфометрии на основе отечественного компьютерного фазово-интерференционного микроскопа «Цитоскан» (МГИРЭА, Москва), позволяющего исследовать нативные клетки [5].
Статистический анализ данных проводили с помощью алгоритмов среды MatLab и математического пакета «Statistica 6». Стандартная обработка выборок включала подсчет значений средних арифметических
величин, ошибок средних, а также величины дисперсии, среднего квадратического отклонения и анализа асимметричности распределения. Различие между сравниваемыми группами рассчитывали по критериям Вилкоксона - Манна - Уитни или Стьюдента. Уровень значимости устанавливался равным 0,05.
Результаты и обсуждение. Лимфоциты как объект привлекают внимание исследователей тем, что наряду с контролем антигенного гомеостаза аккумулируют, хранят и переносят информацию о реализации адаптивных и дезадаптивных процессов в системе иммунитета. Структурно-временная организация лимфоидной системы представлена комплексом биоритмов основных динамических формообразовательных процессов - пролиферации, миграции и метаболизма - с определенными фазовыми и коррелятивными взаимоотношениями внутри данного комплекса. При этом морфоцитохимические свойства лимфоцитов достаточно лабильны и могут изменяться в зависимости от функционального состояния клетки, фазы ее клеточного цикла, возраста, степени дифференцировки и т. д.
На рисунке 2 представлены результаты мониторинга средних в популяции морфометрических (диаметр, периметр, высота, площадь и объем) параметров циркулирующих лимфоцитов больных ЭКЯ в сроки 3 и 12 месяцев после лапароскопической резекции яичников.
D
130
V
■ Контроль
■До операции
■3 месяца после операции
■12 месяцев после операции
Рис. 2. Динамика морфометрических показателей лимфоцитов периферической крови больных с ЭКЯ в послеоперационном периоде (контроль - 100 %): й - диаметр; Р - периметр; Н - высота; А - площадь;
V - объем клеток
Через 3 месяца витальные показатели морфофункционального статуса лимфоцитов всех больных (100 %) имели тенденцию к нормализации, однако не достигали нормативных величин, по-видимому, в связи с иммуносупрессивным действием проводимой противорецидивной гормонотерапии.
Через 12 месяцев обследование выявило, что у 16 больных (69,6 %) практически все морфометрические показатели находились в диапазоне контрольных значений. Параметры лимфоцитов 7 больных имели характерные изменения: наблюдалась тенденция к уменьшению средних диаметра, периметра и площади клеток, увеличению фазовой высоты и объема. Причем величины диаметра, высоты и объема изменялись в пределах 10-15 % (р<0,05). У этих пациенток при ультразвуковом сканировании были выявлены
признаки рецидивирования эндометриоидных образований яичников.
Выявлена высокая степень корреляции морфометрических параметров лимфоцитов с показателями традиционной иммунограммы. Так, величины фазовых диаметра, периметра положительно, а площадь лимфоцитов отрицательно коррелировали с содержанием активированных (HLA-DR+) клеток (г = 0,39, p = 0,09; г = 0,42, p<0,05; г = -0,41, p<0,05 соответственно). Высота отрицательно коррелировала с числом лимфоцитов, имеющих признаки ранней и поздней активации (CD25+ и HLA-DR+) (г = -0,36, p>0,05 и г = -0,36, p>0,05 соответственно). Следовательно, степень увеличения диаметра, периметра и площади при снижении фазовой высоты количественно отражают уровень активности иммунокомпетентных клеток.
Для оптимизации мониторинга иммунореактивности больных ЭКЯ был предложен расчетный индекс, характеризующий функциональное состояние ядерных структур иммунокомпетентных клеток периферической крови - индекс гетерогенности, или индекс клеточной активации (ИКА). Поскольку при компьютерной фазово-интерференционной микроскопии основной физической величиной, определяющей прохождение луча через нативную живую клетку, является показатель преломления, фазовый портрет цитообъекта содержит информацию не только о его геометрических характеристиках, но и оптической плотности. Уровень активации лимфоцитов, связанный с изменением структуры хроматина в ядре клетки, находит объективное отражение в характере изменения фазового портрета и может быть количественно просчитан по степени увеличения диаметра и/или периметра лимфоцита при одновременном снижении его фазовой высоты. При этом чем выше фазовая высота, тем ниже пролиферативный потенциал лимфоцита. Отношение h/d, где h - фазовая высота ядра, d - диаметр ядра, и представляет собой ИКА. Расчетные значения ИКА лимфоцитов периферической крови для соматически здоровых лиц составили 0,20-0,30. Величина индекса ниже 0,20 не менее чем у 20 % циркулирующей популяции мононуклеаров свидетельствовала о гипериммунореактивности, а увеличение более 0,30 - о состоянии гипоиммунореактивности.
Установлено, что для фракции мононуклеаров больных ЭКЯ до операции средняя величина ИКА составила 0,37±0,03. Данный факт характеризует степень подавления реакций клеточного иммунитета при прогрессировании патологического процесса. После 3 месяцев послеоперационного консервативного лечения средние значения ИКА оставались в пределах
0,32±0,05. Через 12 месяцев после операции в группе 7 больных с рецидивами ЭКЯ средняя величина индекса имела тенденцию к увеличению до 0,34±0,03. Тогда как у 16 больных с положительной динамикой наблюдалось уменьшение величины ИКА до 0,27±0,04. Следовательно, индекс клеточной активации, рассчитанный по морфометрическим параметрам лимфоцитов периферической крови больных с ЭКЯ, может быть использован для оптимизации диагностики рецидивов эндометриоидных кист яичников.
Заключение. Представленные результаты продемонстрировали возможности компьютерной фазовой морфометрии по выявлению в режиме реального
P
времени изменений фазовых параметров живых лимфоцитов, связанных непосредственно с их морфофункциональным состоянием. Выбор КФМ в качестве перспективного метода исследований продиктован его преимуществами: возможностью изучения живых нативных клеток крови, не подвергавшихся предварительной обработке, окрашиванию или фиксации; оперативным получением высокоточных и объективных данных на основе компьютерной технологии; использованием универсальных критериев оценки для любых типов клеток, характеризующих как морфологические, так и функциональные их особенности; потребностью малого (не более 5 мл) объема крови. Использование данного метода в медицинской практике для мониторинга иммунореактивности больных может способствовать своевременной диагностике рецидивирования ЭКЯ, снижению частоты запущенных случаев, уменьшению величины материальных затрат на лечение и обследование.
Литература
1. Адамян, Л.В. Генитальный эндометриоз:
этиопатогенез, клиника, диагностика, лечение / Л.В. Адамян, Е.Н. Андреева // Метод. пособие для врачей. - М., 2001. - 37 с.
2. Адамян, Л.В. Генитальный эндометриоз.
Современный взгляд на проблему / Л.В.Адамян, С.А. Гаспарян. - Ставрополь : СГМА, 2004. -228 с.
3. Адамян, Л.В. Эндометриозы : руководство
для врачей / Л.В. Адамян, В.И. Кулаков,
Е.Н. Андреева. - М. : Медицина, 2006. - 411 с.
4. Анциферова, Ю.С. Иммунные механизмы формирования эндометриоидных гетерото-пий различной локализации : автореф. дис. ... д-ра биол. наук / Анциферова Ю.С. - 2004. -32 с.
5. Анциферова, Ю.С. Регуляция экспрессии FAS и FASL молекул эндометриальными стромальными клетками при эндометриозе /
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ИННОВАЦИОННЫХ
КЛЕТОЧНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ В ДИАГНОСТИКЕ
ЭНДОМЕТРИОИДНЫХ КИСТ ЯИЧНИКОВ
М. А. ЛЫСЕНКО, В. Б. МЕТЕЛИН,
Н. В. БАРАНОВА
Представлены результаты мониторирования морфофункционального состояния лимфоцитов периферической крови 23 больных с эндометриодными кистами яичников в течение 12 месяцев послеоперационного периода с целью оптимизации диагностики рецидивов и оценки эффективности оперативного лечения. Описаны возможности использования метода витальной компьютерной фазовой морфометрии в оценке уровня клеточной активности циркулирующих лимфоцитов. Предложен расчетный индекс, характеризующий функциональное состояние ядерных структур иммунокомпетентных клеток периферической крови. Показано, что использование данного метода для мониторинга иммунореактивности больных с ЭКЯ может способствовать своевременной диагностике рецидивирования заболевания, снижению частоты запущенных случаев, уменьшению величины материальных затрат на лечение и обследование.
Ключевые слова: эндометриоидные кисты яичников, лимфоциты, клеточная диагностика, компьютерная фазовая морфометрия
Ю.С. Анциферова, Н.Ю. Сотникова, Л.В. Посисеева и др. // Медицинская иммунология. - 2004. - Т. 6, № 3-5. - С. 373378.
6. Баскаков, В.П. Клиника и лечение эндометриоза / В.П. Баскаков. - Л. : Медицина, 1990. - 240 с.
7. Баскаков, В.П. Диагностика и лечение эндометриоза на современном этапе / В.П. Баскаков, Ю.В. Цвелев, Е.Ф. Кира. - СПб., 1998. - 33 с.
8. Баскаков, В.П. Эндометриоидная болезнь / В.П. Баскаков, Ю.В. Цвелев, Е.Ф. Кира. - СПб., 2002. - 452 с.
9. Бурлев, В.А. Клеточная пролиферация и апоптоз в эутопическом эндометрии у женщин при перитонеальном эндометриозе /
B.А. Бурлев, С.В. Павлович, Н.И. Волков // Проблемы репродукции. - 1999. - № 2. -
C. 43.
10. Гаспарян, С.А. Компьютерная фазовая микроскопия в диагностике и мониторинге больных глубоким инфильтративным эндометриозом / С.А. Гаспарян, Л.В. Адамян, И.А. Василенко // Проблемы репродукции, 2003. - № 1. - С. 2127.
11. Грищенко, В.И. Гормонально-иммунологический гомеостаз у больных эндометриозом /
В.И. Грищенко, Н.А. Щербина, Л.В. Потапова // Международный медицинский журнал. -2001. - № 4. - С. 29-32.
12. Давыдов,А.И. Патогенез,диагностика илечение различных форм генитального эндометриоза : дис. ... д-ра мед. наук / Давыдов А.И. - М., 1995. - 324 с.
13. Давыдов, Ф.И. Генитальный эндометриоз: нерешенные вопросы / Ф.И. Давыдов, В.М. Пашков // Вопросы гинекологии, акушерства и пе-ринатологии. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 53-60.
NEW CELLULAR TECHNOLOGIES
IN DIAGNOSTICS OF ENDOMETRIOID
OVARIAN CYSTS
LYSENKO M. A., METELYN V. B.,
BARANOVA N. V.
The results of lymphocytes morphofunctional condition monitoring in peripheral blood of 23 patients with endometrial ovarian cysts during 12 months after surgery treatment has been reported. Possibilities of vital computer phase morphometry in estimation of the level of cellular activity of the circulating lymphocytes were demonstrated. Index for evaluation of the nuclear structures function in immunocompetent cells of peripheral blood has been proposed. It was shown that new approach to monitoring of immunoreactiveness of the patients with endometrial cysts can promote the timely diagnosis of recurrent cases and decreases the cost of treatment and diagnostcs.
Key words: endometrial ovarian cysts, lymphocytes, cellular diagnostics, computer phase morphometry
