CC BY
23
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 7
мешочков», определенных в 4 изолированных отрезках Для линии mel Kor уровень каспазы-8 составил 45,2 (8 ч), тонкой кишки, составлял 425—829 RLU, максимальный 73,2 (24 ч), 84,9 % (48 ч), каспазы-9 — 37,9 (8 ч), 93,7 (24 ч), уровень 0,08 % от исходного значения. Неспецифическая 98,5 % (48 ч). Для линии mel Ibr уровень каспазы-8 соста-люминесценция среды и следовая люминесценция отрез- вил 9,8 (8 ч), 25,6 (24 ч), 64,5 % (48 ч), каспазы-9 — 6,4 (8 ч), ков кишки после трехкратной отмывки, величины которых 23,4 (24 ч), 65,3 % (48 ч). были предельно малы и колебались от 30 RLU и 50 RLU Заключение. Инкубация клеток с обеими лекарствен-соответственно, не учитывались. ными формами аранозы сопровождалась повышением Заключение. Полученные данные позволяют считать, уровней обеих каспаз, что указывает на активирование что меченый акридином пероральный комплекс Аимпила и внешнего, и митохондриального путей апоптоза. На кле-после однократного введения в инкубационную среду ин- точных линиях mel Z, mel Mtp и mel Mtp clone X, на кото-тернализуется через стенку тонкой кишки крысы в коли- рых отсутствовали рецепторы внешнего пути индукции честве до 0,08 % от введенной концентрации. Незначи- апоптоза, обе лекарственные формы аранозы повышали тельная концентрации препарата, поступающая в организм активность инициаторных каспаз в меньшей степени, при однократном введении, позволяет считать оправдан- чем на СБ95+-линиях клеток mel Ibr и mel Kor. Таким обра-ным эмпирически найденный на животных многократный зом, индукция апоптоза аранозой более выражена при на-терапевтический режим применения комплекса Аимпила. личии рецепторов внешнего пути апоптоза. Д.А. Афанасьева. М.А. Барышникова. О.С. Бурова, Б.Б. Ахмедов, А.К. Аллахвердиев, А.П. Полозкова, Т.Н. Заботина,\А.Ю. Барышников М.М. Давыдов, Б.Е. Полоцкий АКТИВАЦИЯ ИНИЦИАТОРНЫХ КАСПАЗ-8 И -9 ОПЫТ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ ЛЕГОЧНЫХ ПОД ВЛИЯНИЕМ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ АРАНОЗЫ МЕТАСТАЗОВ КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва Введение. Ранее нами было показано, что некоторые Введение. При колоректальном раке (КРР) метастазы клеточные линии меланомы человека устойчивы к аранозе выявляются у 20—25 % больных при установлении диагно-в традиционной лекарственной форме, но чувствительны за, еще у 20—25 % после удаления первичной опухоли. к липосомальной. Подобное поведение клеток может объ- Для большинства пациентов, имеющих метастазы в легких, ясняться существованием различных путей индукции кле- хирургическое их удаление может быть единственной ре-точной гибели. альной надеждой на значительное увеличение продолжи- Цель исследования — определение пути индукции тельности жизни, а иногда и выздоровление. апоптотической гибели клеток после воздействия двух ле- Цель исследования — определить роль хирургического карственных форм аранозы — лиофилизата для приготов- метода в комплексном лечении больных с метастатически-ления раствора для инъекций и липосомальной — по ак- ми опухолями легких. тивации каспаз-8 и -9 в клеточных линиях меланомы Материалы и методы. В торакальном отделении с 2000 человека. по 2014 г. выполнено 146 оперативных вмешательств по по- Материалы и методы. Исследования проводили на двух воду метастазов КРР. СВ95+-клеточных линиях меланомы человека: mel Kor, mel Результаты. Торакотомным доступом оперированы 120 Ibr и на трех линиях, на которых отсутствовала экспрессия (82 %) пациентов, видеоторакоскопически — 26 (18 %). мРНК рецепторов внешнего пути апоптоза: mel Z, mel Mtp Наиболее часто выполнялись атипичные резекции — у 78 и mel Mtp clone X. Клеточные линии сажали на 6-луночные (53 %), лобэктомии — у 59 (40 %), пневмонэктомий выпол-планшеты, через сутки в лунки добавляли лекарственные нено 6 (4 %), сегментэктомий — 3 (2 %). После открытых формы аранозы — лиофилизат для приготовления раство- оперативных вмешательств осложнения составили 6,8 % ра для инъекций (араноза-лио) и липосомальную в кон- (при летальности 1,3 %), после торакоскопических вмеша-центрации 1 ИК50. Контролем служили клетки, которые тельств — 2,3 %. Общая 1-, 3- и 5-летняя выживаемость инкубировали в тех же условиях, но без препарата. Через 146 больных составила 96,7; 73,3 и 61,2 %. При сравне-8, 24 и 48 ч проводили определение активных каспаз с помощью нии результатов хирургического лечения больных КРР Caspase 8 и Caspase 9 (active) FITC Staining Kit (Abcam) с метастазами в легкие анализ показал статистически на проточном цитофлуориметре. достоверное преимущество выживаемости у пациентов Результаты. Под действием аранозы-лио с увеличени- с длительностью безрецидивного периода < 24 мес и раем времени инкубации уровень каспазы-8 и -9 постепенно дикальным удалением всех определяемых метастатиче-повышался до 15 % на клеточных линиях mel Z, mel Mtp ских узлов. Пол, возраст, объем хирургического лечения и mel Mtp clone X. Для линии mel Kor уровень каспазы-8 (атипичная или типичная операция), характер пораже-составил 19,5 (8 ч), 63,7 (24 ч), 64,2 % (48 ч), каспазы-9 — ния (солитарный, единичный) и размер метастазов до-9,4 (8 ч), 93,6 (24 ч), 98,5 % (48 ч). Для линии mel Ibr уро- стоверно не влияли на прогноз. Радикальность хирурги-вень каспазы-8 составил 8,5 (8 ч), 35,3 (24 ч), 72,3 % (48 ч), ческого вмешательства, длительность безрецидивного а уровень каспазы-9 составил 7,7 (8 ч), 25,4 (24 ч), 59,5 % периода < 24 мес и нормальный уровень раково-эмбри-(48 ч). Под действием липосомальной аранозы с увеличе- онального антигена в крови достоверно коррелировали нием времени инкубации уровень каспазы-8 и -9 посте- с более благоприятным прогнозом. Следует отметить, пенно повышался до 15 % на клеточных линиях mel Z что первичные и повторные торакальные вмешательства и mel Mtp, а на mel Mtp clone X — до 21 и 25 соответственно. по поводу метастазов КРР в легкие характеризуются низ-
No 1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
8
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
кими операционно-анестезиологическим риском и послеоперационной летальностью. Наличие экстрапульмо-нальных метастазов, если имеется полная уверенность в возможности их радикального удаления, не является противопоказанием к операции.
Заключение. С учетом устойчивости метастазов КРР ко всем видам консервативной терапии хирургическое лечение, включая и повторные операции, на сегодняшний день является полностью оправданным и единственно реальным эффективным методом лечения.
С. Б. Ахметова
ИЗУЧЕНИЕ ТОКСИЧНОСТИ СЕСКВИТЕРПЕНОВЫХ ЛАКТОНОВ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ НА КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК PARAMECIUM CAUDATUM
КГМУ, Караганда, Республика Казахстан
Введение. В настоящее время такие биологические модели, как инфузории, широко используются в экспериментальной фармакологии в токсикологических исследованиях. Скорее это связано с тем, что парамеции обладают высокой чувствительностью к изменениям внешней среды, как индикаторы дополнительного биоскрининга. Известно, что многие биологически активные вещества способны вызывать развитие реакции в живых клетках, однако исследования диэтилфосфита арглабина, диэтиламиноаргла-бина, диметиламиноарглабина, бромпроизводного аргла-бина, бромкарбен-производного арглабина на подобного рода биологических моделях не проводили.
Цель исследования — оценка фармакологических эффектов сесквитерпеновых лактонов и их производных при совместной инкубации с клетками инфузорий Paramecium caudatum на их жизнеспособность.
Материалы и методы. Для скрининга на одноклеточной модели использовали диэтилфосфит арглабина, ди-этиламиноарглабин, диметиламиноарглабин, бромпроиз-водное арглабина, бромкарбен-производное арглабина. Культуру клеток Paramecium caudatum (дикий штамм) выращивали на среде с добавлением дрожжей Saccharomyces cerevisiae в качестве источника питания. Клетки, взятые в стационарной фазе роста, инкубировали 30 мин с исследуемым веществом в концентрации 10 мкл. Для оценки эффектов действия исследуемых веществ использовали выживаемость клеток, линейную скорость их движения. Концентрацию живых клеток парамеций определяли подсчетом клеток с использованием камеры Горяева, микроскопа и фотонасадки на микроскоп на USB-камеру 14 Мпикс, которая позволяет подсчитывать число инфузорий, попадающих в поле зрения микроскопа, а также линейную скорость их движения. При оценке выживаемости за единицу принимали число клеток в интактной культуре (без индукции арглабина и его производных).
Результаты. При выращивании инфузорий в интакт-ных условиях инкубации с арглабином и его производными препараты в исследуемой концентрации не проявили токсического действия, не влияли на рост и жизнеспособность инфузорий, а также не изменяли скорость их движения, кроме образца бромкарбен-производного арглабина. Инфузории, подвергнутые инкубации с бромкарбен-про-изводным арглабина, обладали существенно более высокой
чувствительностью к действию вещества, изменяли траектории движения по сравнению с интактными парамециями. В то же время бромкарбен-производное арглабина снижало выживаемость инфузорий. Степень выживаемости парамеций при действии бромкарбен-производного арглабина была в 2 раза ниже, чем в контроле.
Заключение. Экспериментальные исследования показали, что инфузории Paramecium caudatum достаточно чувствительны для проведения данного теста, что выражается в гибели части клеток уже после 30-минутной инкубации с бромкарбен-производным арглабина.
Е.М. Бакурова, Б. Г. Борзенко, И. В. Василенко,
Р. Б. Кондратюк, Б. П. Кондратюк
ТИМИДИНФОСФОРИЛАЗА
И ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ТЕРАПИИ
ФТОРПИРИМИДИНАМИ
ДонНМУ им. М. Горького, ДОПЦ, Донецк, Украина
Введение. Препараты группы 5-фторурацила (5-ФУ) широко используются при лечении больных первично и вторично диссеминированными формами аденокарци-ном (АК) различной локализации. Как препараты 1-й линии терапии распространенного рака желудка, кишечника, молочной железы, они могут быть применены и в составе схем, и в виде монотерапии. Выбор препарата и режима его дозирования для пациентов с неблагоприятным прогнозом, имеющих метастатическое поражение печени и/или легких, крайне важен, во многом предопределяет результат лечения и качество жизни больного. Тимидинфосфорила -за (ТФ, ЕС 2.4.2.4, также известная как PD-ECGF (platelet-derived endothelial cell growth factor)) — ангиогенный фермент, реализующий опухолевый катаболизм фторафура, 5-дезокси-5-фторуридина (метаболит капецитабина), фур-тулона в 5-ФУ. Цитотоксическое действие самого 5-ФУ возможно через его трансформацию в 5-фтордезоксиури-динмонофосфат (ингибитор тимидилатсинтазы) при соче-танной трансферазной активности ТФ и тимидинкиназы. Также известно, что индивидуальная эффективность препаратов зависит от ТФ.
Цель исследования — одновременно изучить фосфори-лазную и трансферазную активности фермента в АК.
Материалы и методы. Выполнено спектрофотометри-ческое исследование видов активности ТФ в тканях опухолей (48 АК желудка, кишечника, 40 АК легких) и в контроле (край резекции). Иммуногистохимически определялись специфический маркер эндотелия сосудов (CD34), а также маркер пролиферации Ki-67.
Результаты. Во всех опухолях преобладал лишь один из видов активности ТФ. Например, если ее трансферазная (анаболическая) активность в опухолях превышала контроль (187,48 ± 22,03 и 106,71 ± 15,21 нмоль/мин-мг; р < 0,05), фосфорилазная (катаболическая) активность была низкой. Соответственно, катаболическая активность ТФ в АК желудка составила 21,92 ± 4,60 нмоль/мин-мг (контроль — 57,82 ± 7,99 нмоль/мин-мг; р < 0,01), в АК колоректальном раке — 25,50 ± 5,48 нмоль/мин-мг (контроль — 47,22 ± 6,76 нмоль/мин-мг; р < 0,01), при раке легкого — 33,84 ± 13,87 нмоль/мин-мг (контроль — 62,04 ± 6,40 нмоль/мин-мг; р < 0,01). Это ведет к повышению уровней тимидина — суб-
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
