CC BY
67
УДК: 616.316.1-002 DOI:10.12737/21754
ОПТИМИЗАЦИЯ СКРИНИНГА БЕРЕМЕННЫХ НА НАЛИЧИЕ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ С ПОМОЩЬЮ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ПЦР И МЕТОДА ДВОЙНОГО
ПУЛИРОВАНИЯ
Т.И. МАХОВА*, Т.А. РУМЯНЦЕВА*, Е.Н. ГОЛОВЕШКИНА**, Н.С. РУДНЕВА**, АН. СУХАНОВА*,
А.Е. ГУЩИН*
* ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, ул. Новогиреевская дом 3а, г. Москва, 111123, Россия **ГУЗ Тульский областной клинический кожно-венерологический диспансер МЗ ТО, ул. 1 проезд М. Расковой, д. 1а, г. Тула, 300053, Россия
Аннотация. Инфекции, передаваемые половым путем, играют значимую роль в развитии заболеваний, негативно влияющих на течение и исход беременности и состояние новорожденных. Используемый в России метод для скрининга инфекций, передаваемых половым путем у беременных (микроскопия мазка) имеет сравнительно невысокие показатели диагностической чувствительности, что приводит к ложноотрицательным результатам исследования. В настоящее время для своевременной диагностики облигатных патогенов в отечественных и зарубежных рекомендациях предпочтение отдают молекулярно-биологическим методам. Для увеличения пропускной способности лаборатории и снижения затрат на проведение исследования нами было предложено использование метода объединения нескольких образцов (двойное пулирование) и дальнейшее тестирование пулов с использованием мультиплексной ПЦР. Таким образом, целью нашего исследования стала оценка метода двойного пулирования с последующим тестированием пулов с применением набора для одновременного выявления ДНК четырех возбудителей инфекций, передаваемых половым путем (Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis и Mycoplasma genitalium) и оценка эффективности данной стратегии при скрининге беременных.
Ключевые слова: инфекции, передаваемые половым путем, пулирование, скрининг беременных, полимеразная цепная реакция.
OPTIMIZATION OF THE SCREENING IN PREGNABT WOMEN FOR SEXUALLY TRANSMITTED
INFECTIONS BY MULTIPLEX POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR) AND THE METHOD OF
DOUBLE POOLING
T.I. MAKHOVA*, Т.А. RUMYANTSEVA*, E.N. GOLOVESHKINA**, N.S. RUDNEVA**, L.N. SUKHANOVA*,
А.Е. GUSCHIN*
*FBUN Central Research Institute of Epidemiology of Rospotrebnadzor, Novogireevskaya str., 3a, Moscow, 111123, Russia ** Tula Regional Clinical Dermatovenerologic Dispensary, Raskova str., 1a, Tula, 300053, Russia
Abstract. Sexually transmitted infections (STIs) play a significant role in the development of diseases negative affecting the course and outcome of pregnancy and the condition of the newborn. In Russia the method used to screening for STIs in pregnant women (smear microscopy) has a relatively low sensitivity of diagnostic indicators, this leads to false-negative results of the study. To the timely diagnosis of obligate pathogens, in domestic and foreign recommendations, preference is given to molecular-biological methods. To enhance the efficiency of the laboratory and reduce the cost of the study, the authors proposed the use of a method of combining several samples (double pooling) and further testing pools using multiplex PCR. Thus, the purpose of this study was to evaluate the method of double pooling with subsequent testing pools using a kit for simultaneous detection of DNA of four agents of STIs (Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalisi, Mycoplasma genitalium) and the effectiveness of this strategy in the screening of pregnant women.
Key words: sexually transmitted infections (STIs), pooling, screening of pregnant women, the polymerase chain reaction (PCR).
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 3 - P. 97-105
Введение. Инфекции, передаваемые половым путем (ИППП), вносят существенный вклад в развитие репродуктивных осложнений, снижая показатель рождаемости и увеличивая риск возникновения акушерско-гинекологической патологии. Среди невирусных ИППП наибольшее значение в развитие осложнений у беременных женщин имеют Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis и Mycoplasma genitalium. Заболевания, вызванные одним или несколькими из перечисленных микроорганизмов, в 50-90% случаях протекают бессимптомно или со стертыми клиническими проявлениями [2-4,6,11,14]. В связи с этим распространенность ИППП, влияющих на развитие репродуктивных осложнений, продолжает оставаться на очень высоком уровне. По результатам общемировой практики, распространённость ИППП у женщин в возрасте от 15 до 49 лет в 2012 г. составила 4,2% для C.trachomatis, 5,0% для T.vaginalis, 0,8% для N.gonorrhoeae [17]. Распространенность M.genitalium может колебаться от 0,8 до 16,8% в зависимости от исследуемой группы [26]. В отсутствие своевременных профилактических мероприятий у инфицированных пациенток могут развиваться различные гинекологические и акушерские осложнения, а у детей возможно развитие антенатальной и постнатальной патологии. N.gonorrhoeae, C.trachomatis, T.vaginalis и M.genitalium могут являться причиной тех или иных осложнений, таких как преждевременные роды, спонтанные аборты, несвоевременный разрыв околоплодных оболочек, рождение детей с низкой массой тела, послеродовый эндометрит [5,7,14,15,27].
На территории России скрининг беременных на наличие ИППП регламентирован приказом №572н МЗ РФ. Всем беременным назначают обязательное микроскопическое исследо-ваниедля выявления N.gonorrhoea. Показаниями к обнаружению C.trachomatis, T.vaginalis и M.genitalium у беременных является наличие симптомов инфекций органов репродукции или характерных жалоб. В ранее проведённом нами исследовании было показано, что метод ПЦР позволил выявить в 3,6 раза больше случаев трихомонадной инфекции, чем микроскопический метод прописанный в приказе, а также при использовании микроскопии были пропущены 15 случаев гонококковой инфекции,
которые были обнаружены методом ПЦР (при микроскопии не было выявлено ни одного случая гонококковой инфекции) [0].
Для снижения стоимости исследования и возможности его массового внедрения было предложено использование теста на основе мультиплексной ПЦР в реальном времени совместно с методикой двойного пулирования образцов. Использование ПЦР-мультиплекс позволяет сократить затраты на проведение анализа и дает возможность одновременного выявления сразу четырех основных возбудителей ИППП. Пулирование неоднократно описывалось зарубежными и российскими авторами как метод, предоставляющий возможность экономии средств и времени, практически не снижая показатели диагностической чувствительности и диагностической специфичности, благодаря чему он может являться экономически оправданным подходом во время скринин-говых программ [8,12,23].
Цель исследования - оценка метода двойного пулированияс последующим тестированием пулов набором для одновременного выявления ДНК четырех возбудителей ИППП (Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis и Mycoplasma genitalium) при скрининге беременных.
Материалы и методы исследования. В исследовании использовали биоматериал (уретральные, вагинальные, цервикальные образцы), полученный от 1025 беременных пациенток. Сбор материала проводили в Тульском областном КВД с марта по апрель 2015 года.
Все мазки согласно клиническим рекомендациям РОДВК забирали из уретры, заднебо-кового свода влагалища, шейки матки зондом-тампоном [6] и помещали в пробирки с транспортной средой ТСМ (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора). Хранение и транспортировку осуществляли в соответствии с инструкцией производителя. Образцы доставляли в ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Рос-потребнадзора (Москва), где производили дальнейшие исследования.
При поступлении материала в лабораторию проводили двойное пулирование образцов. Все 1025 образцов разделили на партии по 25 образцов в каждой. Из 25 образцов формировали 10 пулов по 5 образцов в каждом пуле (рис.). Из каждой пробирки отбирали матери-
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 3 - P. 97-105
ал в два пула по 100 мкл. Общий объем пула составлял 500 мкл. Например, 100 мкл первого образца вносили в пул №1 и еще 100 мкл в пул №6, второй образец в пулы № 2 и 6 и т.д. То есть пул №1 состоял из образцов под номерами 1, 6, 11, 16, 21 (рис.). Расположение каждого образца точно фиксировалось для дальнейшей обработки данных.
№ пула 1 ь 2 \ 3 К ' К 4 ь К 5 \
1 0- 2 U- 3 Ü- 4 0 " 5 0-
6 ,0- 7 Р- 8 Р- 9,0" 100" S я д
4+1 11 0- 12 .0" 13 0- 14,0 - 4 о» в чз s а д ц У
16 ,0- 17 ,0" аг>_ оо 19,0 " 20^ а л В" X
21 ,0- 22 ,0- 23.0 - 24,0 - 25^- о
№ индивидуального образца
Рис. Схема расположения образцов при двойном пулировании
Экстракцию ДНК проводили с использованием комплекта реагентов «ДНК-сорб-АМ» (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) в соответствии с инструкцией производителя.
ПЦР в реальном времени с целью выявления ДНК возбудителей ИППП проводили с использованием теста на основе мультиплексной ПЦР в реальном времени «АмплиСенс® N.gonorrhoeae/C.trachomatis/M.genitalium/T.vaginalis - МУЛЬТИПРАЙМ-Р!» (ФБУН ЦНИИЭ Рос-потребнадзора). При обработке результатов использовали табл. 1 и информацию о расположении каждого образца. Положительными считались образцы, находящиеся на пересечение двух перпендикулярных пулов, для которых получен положительный результат, то есть, например, если получен положительный результат на C.trachomatis в пулах №2 и №9, 17 образец являлся положительным (табл. 1).
Далее для подтверждения предположительно положительных образцов и для образцов, для которых получен положительный результат только в одном пуле, проводили индивидуальное исследование образцов, как при рутинном исследовании. Также, если в одной партии находится сразу два или более положительных образца, и не для всех есть возможность достоверно оценить, какие являются положительными (табл. 1) (до повторного тестирования положительными считаются образцы № 7, 9, 17 и 19, после подтверждения - №9 и 17).
Таблица 1
Схема оценки результатов при двойном пулировании
№ пула 1 2 3 4 5
6 1 2 3 4 № индивидуального образца
8 11 12 13 9 14 15
9 16 17 18 19 20
10 21 22 23 24 25
№ индивидуального образца
После тестирования образцов методом двойного пулирования и набором ПЦР-мультиплекс, все 1025 образцов были протестированы индивидуально. Экстракция и амплификация ДНК проводилась с помощью тех же наборов реагентов, что и при проведении двойного пулирования. Далее проводили сравнение результатов, полученных после тестирования пулированных и индивидуальных образцов.
Анализ стоимости исследований для диагностики ИППП. Для оценки потенциальной экономии затрат на расходный материал, наборы реагентов и зарплаты сотрудников за счет снижения количества протестированных образцов была использована формула: Экономия затрат (ЭЗ)=О-(П+ПП)Л>100%, где О - это общее количество протестированных образцов, П - количество позитивных образцов, протестированных с использованием пулирования, ПП -количество образцов, которые необходимо повторно протестировать для подтверждения положительного результата [13,23].
Результаты и их обсуждение. Внедрение массовых обследований беременных женщин на такие социально-значимые инфекции как Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Trichomonas vaginalis и Mycoplasma genitalium, является важным звеном в процессе, направленном на снижение репродуктивных заболеваний и патологии новорожденных. В международных рекомендациях имеются указания на проведение обязательного скрининга беременных с целью выявления урогенитальных инфекций [7,11,14,24,25,27]. По рекомендациям CDC (The Centersfor Disease Controland Prevention) и IUSTI (TheInternational Unionagainst Sexually Transmitted Infections), всем беременным младше 25 лет и женщинам старшего возраста при повышенном риске инфицирования назначают исследования для выявления N.gonorrhoeae и
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2Ql6 - V. 2З, № З - P. 97-lQ5
C.trachomatis [7,11,14,27]. NICE (The National Institute for Health and Care Excellence) предоставляет аналогичные рекомендации только для C. trachomatis [25]. Поданным ASHA (The Australian STI Management Guidelines for use in primary care), до 90% беременных в возрасте до 30 лет проходят обследование для выявления N.gonorrhoeae и C.trachomatis [0]. Исследование для выявления T.vaginalis назначают в случае наличия симптомов, жалоб или повышенного риска. В случае с M.genitalium на данный момент недостаточно изучен вопрос необходимости обязательного скрининга беременных, и рекомендаций к обследованию нет. Однако есть исследования, показывающие, что M.genitalium может повышать риск возникновения спонтанных абортов и преждевременных родов [15]. В зарубежных руководствах среди всех рекомендованных лабораторных тестов для выявления ИППП предпочтение отдается молекулярно-биологическим методам [7,11,14,24,25,27].
В последнее время в РФ появились методические рекомендации,в которых имеются указания на проведение скрининга ИППП у всех пациенток при подготовке к беременности и во время её ведения с использованием метода ПЦР [2-4,6]. Возможность получить результат в короткие сроки, высокие показатели диагностической чувствительности (ДЧ) и специфичности (ДС) молекулярно-биологических методов обеспечивают им преимущество перед методами прямой иммунофлюоресценции (ПИФ), бактериоскопии (БС), культуральным исследованием (КИ) для идентификации облигатно-патогенных микроорганизмов [1].
Стоимость оборудования и валидирован-ных наборов реагентов не всегда дает возможность использовать молекулярно-биологические методы в масштабных скринин-говых программах. Однако использование метода пулирования образцов совместно с тестом на основе мультиплексной ПЦР в режиме реального времени для обнаружения сразу четырех облигатных патогенов может существенно сократить расход средств и времени.
Существуют две основные схемы пулирова-ния, которые отличаются между собой рядом параметров. Самым распространенным методом является одинарное пулирование. При использовании этого метода биологический материал от нескольких пациентов (например, от 4-х, 5-ти,
8-ти или 10-ти) собирается в один пул. Данный способ прост в исполнении и сильно снижает трудовые и денежные затраты, однако требует дополнительных исследований для всех образцов в положительном пуле [8,9,12,13, 19,23]. Для усовершенствования данного метода мы использовали двойное пулирование как потенциально более экономичный метод. Двойное пулирова-ние отличается от одинарного тем, что биоматериал из одного образца помещается в две пробирки, но при выявлении положительного образца не требуется полного повторного тестирования, что сокращает расходы и время проведения исследования. Также осуществляется двойной контроль при получении результата, то есть в случае наличия ДНК возбудителей в образце положительный результат будет получен в двух пулах, содержащих ДНК.
В ранее описанных работах пулирование по 5 образцов в одном пуле показало себя менее затратным методом, чем пулирование по 10 образцов, из-за того что на этапе подтверждения результатов необходимо повторно тестировать меньшее количество образцов [8,23].
В данном исследовании использовался объединенный биологический материал из трех локусов - уретральный, цервикальный и вагинальный. В зарубежных рекомендациях и других работах имеются указания к возможности использованиядля скрининга ИППП только вагинального мазка [7,9,11,14,22,27].
По результатам проведенного двойного пу-лирования, всего была собрана 41 партия из 410 пулов. В 6 пулах была выявлена ДНК N.gonorrhoeae, в 110 - C.trachomatis, в 55 пулах -M.genitalium и в 56 - T.vaginalis. Дополнительное проведение ПЦР для подтверждения результатов двойного пулирования потребовалось 236 образцам: для одной партии не потребовалось повторного тестирования ни одного образца, по 1 образцу тестировали повторно в 7 партиях, по 2 - в 5, по 3 - в 2, по 4 - в 2, по 5 - в 3, по 6 - в 5, по 7 - в 3, 8 - в 1, по 9 - в 5, по 10 - в 2, по 11 - в 1, по 12 - в 2, 14 - в 1, 17 - в 1.
После тестирования каждого образца отдельно среди всех протестированных образцов у 3 (0,29%) пациенток была выявлена N.gonorrhoeae как в индивидуальных образцах, так и в пулах. C.trachomatis обнаружили в 68 (6,7%) образцах, из них в пулах у 67 (6,5%) пациенток. M.genitalium была выявлена у 36 (3,7%)
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 3 - P. 97-105
пациенток в отдельных образцах и в пулах у 34 (3,3%). T.vaginalis была выявлена и в индивидуальных образцах, и в пулах у 29 (2,8%) пациенток (табл. 2).
При использовании метода двойного пу-лирования в нашем исследовании были «потеряны» (не выявлены) 1 (1,4%) образец, содержащий ДНК C.trachomatis и 2 (5,5%) образца, содержащих ДНК M.genitalium. Скорее всего, причиной потери послужила невысокая концентрация клеток микроорганизма [0]. Потерянные образцы составили 2,2% от общего количества положительных образцов.
Таким образом, оценивая ДЧ и ДС мультиплексного набора при использовании двойного пулировання образцов, для N.gonorrhoeae и T.vaginalis чувствительность ПЦР достигает 100%, для C.trachomatis чувствительность определена на уровне 98,5%, а для M.genitalium 94,7%. Специфичность для каждого из патогенов составила 100% (табл. 2). Ранее в исследовании было показано, что ДЧ используемого набора «АмплиСенс® N.gonorrhoeae/ C.trachomatis/ M.genitalium/ T.vaginalis - МУЛЬТИПРАЙМ-FL» для N.gonorrhoeae и T.vaginalis составляет 100%, для C.trachomatis - 97,5%, а для M.genitalium -81,9% [21]. Эти данные показывают, что использование двойного пулирования образцов не снижает ДЧ и ДС мультиплексного набора.
Таблица 2
0,3% соответственно. В сравнении с ранее проведенным исследованием, распространенность M.genitalium выросла за год на 1%, а C.trachomatis - на 1,9% [0]. Для T.vaginalis показатель снизился на 0,4%, распространённость N.gonorrhoeae осталась на том же уровне (табл. 3). Показатель заболеваемости ИППП в Тульской области среди беременных не превышает значений, полученных в других исследованиях (табл. 3) [5,16,17, 20,26]. Поскольку в проведенном нами исследовании выявлялись одновременно четыре инфекции, суммарная распространенность которых составила 13,5%, использование мультиплексного набора для ПЦР в реальном времени совместно с методом двойного пулирования для проведения скрининга беременных может являться рациональным подходом.
Таблица 3
Данные о распространенности возбудителей ИППП
Возбудители ИППП Распространенность среди беременных в Тульской обл., 2014г.[5] Распространенность среди беременных в Тульской обл., 2015 г. [данное исследование] Распространенность в др. исследованиях [16,17,20,26]
C.trachom atis 5,0% 6,7% 0,6-10,7%
M.genitali um 2,7% 3,7% 0,8-16,8%
T.vaginali s 3,2% 2,8% 1,3-13,3%
N.gonorrh oreae 0,3% 0,3% 0,4-0,9%
Результаты, полученные при тестировании индивидуальных образцов и пулов
N.gonorrhor eae С .trachoma tis M.genitali um T.vagina lis
В индивидуальных образцах (1025) 3 68 36 29
В пулах (410+236) 3 67 34 29
Распространенность, % 0,3 6,7 3,7 2,8
ДЧ, % 100,0 98,5 94,7 100,0
ДС, % 100,0 100,0 100,0 100,0
По оценке разных авторов, для C.trachomatis внедрение скрининговых программ с использованием метода пулирования экономически целесообразно, если распространенность инфекции составляет более 3,9% и менее 20% [18,19,23]. По данным, полученным в нашем исследовании, распространенность C.trachomatis составила 6,7%, для M.genitalium, T.vaginalis и N.gonorrhoeae этот показатель составил 3,7, 2,8 и
При применении метода пулирования, по расчетам разных исследователей, экономия расходов на проведение исследований может достигать 37-60% [8,9,13,19,23]. По данным ранее проведенных исследований, для C.trachomatis при распространенности 8% и пулировании по 4 образца экономия расходов составит 39% [12], а при пулировании по 5 образцов при распространенности в 6,6 и 4,4%, экономия расходов составит 53,3 и 60% соответственно [8,23]. По результатам исследования было показано, что одновременное использование набора с определением сразу четырех патогенов и применение двойного пулирования позволило сократить количество тестируемых образцов на 37% (табл. 4).
Таблица 4
Анализ стоимости исследований для диагностики ИППП
Протестировано В индивидуальных образцах В пулах
Всего выделено и протестировано 1025 646
Количество пулов - 410
Количество повторно протестированных образцов - 236
Всего протестировано, % 100 63
Потенциальная экономия затрат исследования, % - 37%
Согласно Приказу 572н, при обследовании беременных женщин обязательным является только микроскопическое исследование для выявления К^опотгНоеае. На момент проведения данного анализа, средняя стоимость микроскопического исследования для выявления К^опоттНоеаев качестве платной услуги в одном из медицинских учреждений г. Москвы составляла 395 рублей на одного пациента, а ПЦР-исследование на 1 инфекцию - 235 рублей (940 рублей - для четырех инфекций). Исследование с помощью «АмплиСенс® Ы^опоггкоеае/ С.ЬгасНошаЫв/ М^епНаНиш/ T.vaginalis -МУЛЬТИПРАЙМ-Р!» - 705 рублей, а при дополнительном использовании двойного пули-рования стоимость анализа для одного образца на четыре инфекции составляет 444 рубля. Следовательно, стоимость ПЦР-исследования для диагностики четырех инфекций в сравнении с микроскопией, позволяющий диагностировать только одну инфекцию, к тому же с крайне низкой чувствительностью, выше всего на 11%, а в сравнении с диагностикой четырех инфекций при использовании методики моноплексной ПЦР ниже на 47%.
Пулирование образцов биологического материала позволяет сэкономить не только прямые финансовые затраты, но и время на этапах выделения ДНК и при постановке ПЦР-реакции. В работах других авторов было показано снижение времени работы лаборанта при использовании метода ПЦР и метода пулиро-вания для выявления C.trachoшatis до 26% [0].Чаще всего, врачи отдают предпочтение анализу для выявления ДНК облигатных патогенов с помощью моноплексной ПЦР. Данная методика не только менее экономически эффективна, но и требует больших временных за-
трат в сравнении с мультиплексной ПЦР. По нашим расчетам, время, затрачиваемое на проведение лабораторных исследований, с учетом полученных результатов о распространенности возбудителей инфекций, при использовании методики мультиплексной ПЦР сокращается на 38% в сравнении с обычной, моноплексной ПЦР (табл. 5). Общее время работы при использовании мультиплексной ПЦР как для индивидуальных образцов, так и для пулирован-ных, приблизительно одинаковое за счет постановки второй реакции амплификации для подтверждения положительных результатов. Однако время работы сотрудника (даже при необходимости повторного тестирования) при использовании мультиплексной ПЦР совместно с пулированием сокращается на 63% в сравнении с моноплексной ПЦР и на 30% в сравнении с тестированием индивидуальных образцов.
Таблица 5
Приблизительный расчет времени для анализа 100 образцов при суммарной распространенности инфекций 13,5%
Примечание: * - Дополнительное время требуется при выявлении ДНК возбудителя для подтверждения результата
Индивиду-альные образцы, ПЦР-на 1 возбудитель Индивиду-аль-ные образ-раз-цы, ПЦР-на 4 возбуди-теля Пулированные образцы, ПЦР -на 4 возбудителя
Подготовка и выделение ДНК, мин 200 200 90
Подготовка реагентов и образцов к ПЦР-реакции, мин 240 60 30
Проведение ПЦР-реакции, мин 106 106 106(+106*)
Обработка данных, мин 120 30 30
Дополнительное тестирование, мин - - 160
Общее время работы, мин 666 396 256/416*
Время работы сотрудника/прибора, мин 560/106 290/10 6 150/106-204/212*
Заключение. При проведении скрининга беременных с целью выявления основных возбудителей ИППП совместное использование метода двойного пулирования образцов биологического материала и мультиплексной ПЦР в реальном времени позволяет сократить материальные затраты и время работы лабораторного персонала. За счет уменьшения количества тестируемых образцов стоимость исследования снижается на 37%. Время, затрачиваемое сотрудником на проведение анализа двойного пулирования с методом мультиплексной ПЦР по сравнению с методикой моноплексной ПЦР
Литература
1. Гущин А.Е., Рыжих П.Г., Хайруллина Г.А., Киси-на В.И. Алгоритм лабораторного обследования пациентов на наличие инфекций, вызванных Neisse-riagonorrhoeae, Chlamydiatrachomatis, Mycoplasma-genitalium, Trichomonasvaginalis, методами полиме-разно-цепной реакции и реакции транскрипционной амплификации // Клиническая дерматология и венерология. 2015. № 3. С. 85-93.
2. Потекаев Н.Н., Кисина В.И., Гомберг М.А., Заби-ров К.И., Гущин А.Е., Колиева Г.Л., Жукова О.В., Заторская Н.Ф. Методические рекомендации (№36). Хламидийная инфекция. Москва, 2014. 20 с.
3. Потекаев Н.Н., Кисина В.И., Гущин А.Е., Гомберг М. А., Забиров К.И., Колиева Г.Л. Методические рекомендации (№8). Синдром патологических влагалищных выделений (трихомониаз, бактериальный вагиноз, кандидозныйвульвовагинит). Москва, 2015. 36 с.
4. Потекаев Н.Н., Кисина В.И., Гущин А.Е., Гомберг М. А., Забиров К.И., Колиева Г.Л. Методические рекомендации (№9). Гонококковая инфекция. Москва, 2015. 16 с.
5. Руднева Н.С., Суханова Л.Н., Долгова Т.И., Аниси-мова Н.С., Гущин А.Е. Опыт организации и проведения скрининга беременных на наличие инфекций, передаваемых половым путем в рамках региональной программы в Тульской области // Вестник новых медицинских технологий. 2015. Т. 22, №4. С. 104-111.
6. Федеральные клинические рекомендации по веде-
снижается на 63%. Показатель ДЧ при использовании двойного пулирования с набором для выявления четырех возбудителей для N.gonorrhoeae и T.vaginalis достигает 100%, для C.trachomatis чувствительность определена на уровне 98,5%, а для M.genitalium 94,7%, ДС для каждого патогена составляет 100%. Применение данного подхода может позволить ускорить внедрение скрининговых исследований с использованием метода ПЦР для беременных женщин на территории РФ.
References
Gushchin AE, Ryzhikh PG, Khayrullina GA, Kisina VI. Algoritm laboratornogo obsledovaniya patsientov na nalichie infektsiy, vyzvannykh Neisseriagonorrhoeae, Chlamydiatrachomatis, Mycoplasmagenitalium, Trichomonasvaginalis, metodami polimerazno-tsepnoy reaktsii i reaktsii transkriptsionnoy amplifikatsii [Algorithm for laboratory examination of patients for infections caused by Neisseriagonorrhoeae, Chlamydiatra-chomatis, Mycoplasmagenitalium, Trichomonasvagina-lis, using polymerase chain reaction, and transcription-mediated amplification reaction]. Klinicheskaya derma-tologiya i venerologiya. 2015;3:85-93. Russian. Potekaev NN, Kisina VI, Gomberg MA, Zabirov KI, Gushchin AE, Kolieva GL, Zhukova OV, Zatorskaya NF. Metodicheskie rekomendatsii (№36). Khlamidiy-naya infektsiya [Guidelines (№36). Chlamydia infection]. Moscow; 2014. Russian.
Potekaev NN, Kisina VI, Gushchin AE, Gomberg MA, Zabirov KI, Kolieva GL. Metodicheskie rekomendatsii (№8). Sindrom patologicheskikh vlagalishchnykh vyde-leniy (trikhomoniaz, bakterial'nyy vaginoz, kandidoz-nyyvul'vovaginit) [Guidelines (№8). Abnormal vaginal discharge syndrome (trichomoniasis, bacterial vaginosis, kandidoznyyvulvovaginit)]. Moscow; 2015. Russian. Potekaev NN, Kisina VI, Gushchin AE, Gomberg MA, Zabirov KI, Kolieva GL. Metodicheskie rekomendatsii (№9). Gonokokkovaya infektsiya [Guidelines (№9). gonococcal infection]. Moscow; 2015. Russian. Rudneva NS, Sukhanova LN, Dolgova TI, Anisimova NS, Gushchin AE. Opyt organizatsii i provedeniya skrininga beremennykh na nalichie infektsiy, pereda-vaemykh polovym putem v ramkakh regional'noy pro-grammy v Tul'skoy oblasti [The aexperience of the organization and the screening of pregnant women for the purpose of detecting sexually transmitted infections, in the framework of the regional program of the tula region]. Vestnik novykh meditsinskikh tekhnolo-giy. 2015;22(4):104-11. Russian.
Federal'nye klinicheskie rekomendatsii po vede-niyu
JOURNAL OF NEW MEDICAL TECHNOLOGIES - 2016 - V. 23, № 3 - P. 97-105
нию больных инфекциями, передаваемыми половым путём, 2015. URL: http://www.cnikvi.ru/docs/clinic_recs/infektsii-peredavaemye-polovym-putem/
7. Bignell C., Unemo M. European STI Guidelines Editorial Board. 2012 European guideline on the diagnosis and treatment of gonorrhoea in adults // Int J STD AIDS. 2013. Vol. 24, №2. Р. 85-92.
8. Butylkina R., Juseviciute V., Kasparaviciene G., Vago-ras A., Pagirskas E., Unemo M., Domeika M. Pooling of urine specimens allows accurate and cost-effective genetic detection of Chlamydia trachomatis in Lithuania and other low-resource countries // Scand J Infect Dis. 2007. Vol. 39, №3. Р. 209-212.
9. Currie M.J., McNiven M., Yee T., Schiemer U., Bow-den F.J. Pooling of clinical specimens prior to testing for Chlamydia trachomatis by PCR is accurate and cost saving // J ClinMicrobiol. 2004. Vol. 42, №10. Р. 4866-4867.
10. Jensen J.S., Björnelius E., Dohn B., Lidbrink P. Use of TaqMan 5' nuclease real-time PCR for quantitative detection of Mycoplasma genitalium DNA in males with and without urethritis who were attendees at a sexually transmitted disease clinic // J ClinMicrobiol. 2004. Vol. 42. №2. Р. 683-692.
11. Jensen J.S., Cusini M., Gomberg M., Moi H. 2015 European guideline on Mycoplasma genitalium infections. DRAFT 12.09.2015
12. Kacena K.A., Quinn S.B., Howell M.R., Madico G.E., Quinn T.C., Gaydos C.A. Pooling urine samples for ligase chain reaction screening for genital Chlamydia trachomatis infection in asymptomatic women // J ClinMicrobiol. 1998. Vol. 36, №2. Р. 481-485.
13. Krepel J., Patel J., Sproston A., Hopkins F., Jang D., Ma-hony J., Chernesky M. The impact on accuracy and cost of ligase chain reaction testing by pooling urine specimens for the diagnosis of Chlamydia trachomatis infections // Sex Transm Dis. 1999. Vol. 26, №9. P. 504-507.
14. Lanjouw E., Ouburg S., de Vries H.J., Stary A., Rad-cliffe K., Unemo M. 2015 European guideline on the management of Chlamydia trachomatis infections // Int J STD AIDS. 2016. Vol. 27, №5. P. 333-348. DOI: 10.1177/0956462415618837.
15. Lis R., Rowhani-Rahbar A., Manhart L.E. Mycoplasma genitalium infection and female reproductive tract disease: a meta-analysis // Clin Infect Dis. 2015. Vol. 616 №3. Р. 418-426.
16. Meites E., Gaydos C.A., Hobbs M.M., Kissinger P., Nyirjesy P., Schwebke J.R., Secor W.E., Sobel J.D., Wor-kowski K.A. A Review of Evidence-Based Care of Symptomatic Trichomoniasis and Asymptomatic Tri-chomonasvaginalis Infections // Clin Infect Dis. 2015. Vol. 61, Suppl 8. P. 837-848.
17. Newman L., Rowley J., Vander Hoorn S., Wijesoo-riya N.S., Unemo M., Low N., Stevens G., Gottlieb S., Kiarie J., Temmerman M. Global Estimates of the Prevalence and Incidence of Four Curable Sexually Transmitted Infections in 2012 Based on Systematic Review and
bol'nykh infektsiyami, peredavaemymi polo-vym pu-tem, 2015. URL:
http://www.cnikvi.ru/docs/clinic_recs/infektsii-peredavaemye-polovym-putem/
Bignell C, Unemo M. European STI Guidelines Editorial Board. 2012 European guideline on the diagnosis and treatment of gonorrhoea in adults. Int J STD AIDS. 2013;24(2):85-92.
Butylkina R, Juseviciute V, Kasparaviciene G, Vago-ras A, Pagirskas E, Unemo M, Domeika M. Pooling of urine specimens allows accurate and cost-effective genetic detection of Chlamydia trachomatis in Lithuania and other low-resource countries. Scand J Infect Dis. 2007;39(3):209-12.
Currie MJ, McNiven M, Yee T, Schiemer U, Bowden FJ. Pooling of clinical specimens prior to testing for Chla-mydia trachomatis by PCR is accurate and cost saving. J ClinMicrobiol. 2004;42(10):4866-7. Jensen JS, Björnelius E, Dohn B, Lidbrink P. Use of TaqMan 5' nuclease real-time PCR for quantitative detection of Mycoplasma genitalium DNA in males with and without urethritis who were attendees at a sexually transmitted disease clinic. J ClinMicrobiol. 2004;42(2):683-92.
Jensen JS, Cusini M, Gomberg M, Moi H. 2015 European guideline on Mycoplasma genitalium infections. DRAFT 12.09.2015
Kacena KA, Quinn SB, Howell MR, Madico GE, Quinn TC, Gaydos CA. Pooling urine samples for ligase chain reaction screening for genital Chlamydia trachomatis infection in asymptomatic women. J ClinMicrobiol. 1998;36(2):481-5.
Krepel J, Patel J, Sproston A, Hopkins F, Jang D, Maho-ny J, Chernesky M. The impact on accuracy and cost of ligase chain reaction testing by pooling urine specimens for the diagnosis of Chlamydia trachomatis infections. Sex Transm Dis. 1999;26(9):504-7.
Lanjouw E, Ouburg S, de Vries HJ, Stary A, Radcliffe K, Unemo M. 2015 European guideline on the management of Chlamydia trachomatis infections. Int J STD AIDS. 2016;27(5):333-48. DOI: 10.1177/0956462415618837.
Lis R, Rowhani-Rahbar A, Manhart LE. Mycoplasma genitalium infection and female reproductive tract disease: a meta-analysis. Clin Infect Dis. 2015;61(3):418-26.
Meites E, Gaydos CA, Hobbs MM, Kissinger P, Nyirje-sy P, Schwebke JR, Secor WE, Sobel JD, Workowski KA. A Review of Evidence-Based Care of Symptomatic Tri-chomoniasis and Asymptomatic Trichomonasvaginalis Infections. Clin Infect Dis. 2015;61(8):837-48.
Newman L, Rowley J, Vander Hoorn S, Wijesooriya NS, Unemo M, Low N, Stevens G, Gottlieb S, Kiarie J, Temmerman M. Global Estimates of the Prevalence and Incidence of Four Curable Sexually Transmitted Infections in 2012 Based on Systematic Review and Global
Global Reporting // PLoS One. 2015. Vol. 10, №12. P. e0143304.
18. Paavonen J., Puolakkainen M., Paukku M., Sintonen H. Cost-benefit analysis of first-void urine Chlamydia trachomatis screening program // Obstet Gynecol. 1998. Vol. 92(2). P. 292-298.
19. Peeling R.W., Toye B., Jessamine P., Gemmill I. Pooling of urine specimens for PCR testing: a cost saving strategy for Chlamydia trachomatis control programmes // Sex Transm Infect. 1998. Vol. 74(1). P. 66-70.
20. Redmond S.M., Alexander-Kisslig K., Woodhall S.C., van den Broek I.V., van Bergen J., Ward H., Uusküla A., Herrmann B., Andersen B., Götz H.M., Sfetcu O., Low N. Genital chlamydia prevalence in Europe and non-European high income countries: systematic review and meta-analysis // PLoS One. 2015. Vol. 10(1). P. e0115753.
21. Rumyantseva T., Golparian D., Nilsson C.S., Johansson E., Falk M., Fredlund H., Van Dam A., Guschin A., Unemo M. Evaluation of the new AmpliSens multiplex real-time PCR assay for simultaneous detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplas-ma genitalium, and Trichomonas vaginalis // APMIS. 2015. Vol. 123(10). P. 879-886.
22. Shafer M.A., Moncada J., Boyer C.B., Betsinger K., Flinn S.D., Schachter J. Comparing first-void urine specimens, self-collected vaginal swabs, and endocervical specimens to detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae by a nucleic acid amplification test. // J ClinMicrobiol. 2003. Vol. 41, №9. P. 4395-4399.
23. Shipitsyna E., Shalepo K., Savicheva A., Unemo M., Domeika M. Pooling samples: the key to sensitive, specific and cost-effective genetic diagnosis of Chlamydia trachomatis in low-resource countries // ActaDermVe-nereol. 2007. Vol. 87(2). P. 140-143.
24. The Australian STI Management Guidelines for use in primary care. Pregnant women. 2014 Nov. (http://www.sti.guidelines.org.au/populations-and-situations/pregnant-women#auditable-outcomes).
25. The National Institute for Health and Care Excellence (NICE). Routine care for all pregnant women. (http://pathways.nice.org.uk/pathways/antenatal-care#path=view%3A/pathways/antenatal-care/routine-care-for-all-pregnant-women.xml&content=view-node%3Anodes-basic-principles-of-antenatal-care).
26. Weinstein S.A., Stiles B.G. A review of the epidemiology, diagnosis and evidence-based management of My-coplasma genitalium // Sex Health. 2011. Vol. 8(2). P. 143-158.
27. Workowski K.A., Bolan G.A. Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines, 2015 // MMWR Recomm Rep. 2015. Vol. 64(RR-03). P. 1-137.
Reporting. PLoS One. 2015;10(12):e0143304.
Paavonen J, Puolakkainen M, Paukku M, Sintonen H. Cost-benefit analysis of first-void urine Chlamydia trachomatis screening program. Obstet Gynecol. 1998;92(2):292-8.
Peeling RW, Toye B, Jessamine P, Gemmill I. Pooling of urine specimens for PCR testing: a cost saving strategy for Chlamydia trachomatis control programmes. Sex Transm Infect. 1998;74(1):66-70.
Redmond SM, Alexander-Kisslig K, Woodhall SC, van den Broek IV, van Bergen J, Ward H, Uusküla A, Herrmann B, Andersen B, Götz HM, Sfetcu O, Low N. Genital chlamydia prevalence in Europe and non-European high income countries: systematic review and meta-analysis. PLoS One. 2015;10(1):e0115753.
Rumyantseva T, Golparian D, Nilsson CS, Johansson E, Falk M, Fredlund H, Van Dam A, Guschin A, Un-emo M. Evaluation of the new AmpliSens multiplex real-time PCR assay for simultaneous detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, Mycoplas-ma genitalium, and Trichomonas vaginalis. APMIS. 2015;123(10):879-86.
Shafer MA, Moncada J, Boyer CB, Betsinger K, Flinn SD, Schachter J. Comparing first-void urine specimens, self-collected vaginal swabs, and endocervical specimens to detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae by a nucleic acid amplification test. J ClinMicrobiol. 2003;41(9):4395-9.
Shipitsyna E, Shalepo K, Savicheva A, Unemo M, Do-meika M. Pooling samples: the key to sensitive, specific and cost-effective genetic diagnosis of Chlamydia trachomatis in low-resource countries. ActaDermVenereol. 2007;87(2):140-3.
The Australian STI Management Guidelines for use in primary care. Pregnant women. 2014 Nov. (http://www.sti.guidelines.org.au/populations-and-situations/pregnant-women#auditable-outcomes). The National Institute for Health and Care Excellence (NICE). Routine care for all pregnant women. (http://pathways.nice.org.uk/pathways/antenatal-care#path=view%3A/pathways/antenatal-care/routine-care-for-all-pregnant-women.xml&content=view-node%3Anodes-basic-principles-of-antenatal-care). Weinstein SA, Stiles BG. A review of the epidemiology, diagnosis and evidence-based management of Mycop-lasma genitalium. Sex Health. 20118(2):143-58.
Workowski KA, Bolan GA. Centers for Disease Control and Prevention. Sexually transmitted diseases treatment guidelines, 2015. MMWR Recomm Rep. 2015;64(RR-03):1-137.
