Оптимизация методических подходов к диагностике и лечению герпесвирусной инфекции Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

диагностических исследований биологического материала и проб объектов окружающей среды на наличие возбудителей опасных инфекционных болезней бактериальной и вирусной природы с использованием методов индикации (МФА, ИФА, МАНК — методы амплификации нуклеиновых кислот) и полного бактериологического анализа применяют автоматизированные и информационные технологии.

Автоматизация методов индикации за счет использования станций выделения нуклеиновых кислот значительно сокращает количество ручных операций и время производственного цикла, повышая биологическую безопасность и снижая риск контаминации. Автоматические системы для ИФА обеспечивают стандартизацию всего процесса исследования и объективный учет результатов. Оптическая система визуализации образцов с возможностью видеодокументирования результатов, позволяет проводить индикацию ПБА с использованием различных меток, в том числе и с флуоресцирующими иммуноглобулинами. Использование препараторов и автоматических разливочных модулей с программным обеспечением на этапах приготовления плотных и жидких питательных сред из сухих коммерческих с соблюдением стандартных условий, повышает их качество и соответственно качество бактериологического анализа.

В настоящее время с помощью автоматических систем проводят идентификацию видовой принадлежности патогена и определение чувствительности его к антибактериальным препаратам, типирование культур возбудителей особо опасных инфекций, секвенирование и фрагментарный анализ нуклео-тидных последовательностей генома.

Все автоматические системы, используемые при выполнении диагностических исследований, имеют возможность интегрирования в общую сеть обмена, формирования и хранения базы данных результатов, что позволяет создать единую автоматизированную линию, обеспечивающую качественно новый уровень диагностики опасных бактериальных и вирусных инфекционных болезней.

АТИПИЧНЫЕ КЛИНИЧЕСКИЕ ФОРМЫ

ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

ПРИ НЕВРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

А.П. Порываева1, Т.С. Некрасова2, Ю.В. Григорьева3

ФБУН «Екатеринбургский НИИ вирусных инфекций» Роспотребнадзора; 2ОГУЗ «Областной кожно-венерологический диспансер» Министерства здравоохранения Свердловской области; 3ЮУ ВПО Уральская государственная медицинская академия Росздрава, г. Екатеринбург

Клиническая диагностика герпесвирусной инфекции тройничного, бедренного и межреберных нервов на основании только симптомов, особенно при отсутствии элементов высыпания, весьма затруднена. Пациенты с такой клинической картиной длительное время наблюдаются либо у невропатологов, либо у ревматологов и получают симптоматическое лечение.

Целью настоящей работы было комплексное клинико-лабораторное обследование группы из 41 пациента в возрасте от 18 до 52 лет, находящихся на лечении у невропатолога с различными диагнозами: невралгия тройничного нерва, невралгия бедренного нерва, межреберная невралгия. У больных отмечено проявление неврологической симптоматики, повышенная температура и общая интоксика-

ция. Типичные элементы высыпания отсутствовали. В сыворотке крови методом ИФА у 90,2% больных были выявлены антитела к вирусу простого герпеса (ВПГ) класса ^О в титрах 1:400—1:1600, при этом только у 36,6% больных были выявлены антитела класса ^М. На культуре клеток ЛЭЧ из крови больных ВПГ был выделен у 41,5% пациентов, из соскоба слизистой рта и глаз — у 12,2% больных с невралгией тройничного нерва. Методом ПЦР у 46,3% пациентов в крови выявлена ДНК ВПГ. При иммунологическом исследовании у 51,2% больных отмечены стойкие нарушения иммунорегуляторной функции в виде снижения Т-лимфоцитов, имеющих поверхностные рецепторы CD4+ и CD8+. Фагоцитарная активность мононуклеарных клеток была снижена в 1,2—1,48 раза. О снижении иммунной защиты и усилении продукции токсинов на фоне вирусной инфекции, как недостаточности компенсаторной защиты организма, свидетельствовало увеличение уровня ЦИК в сыворотке крови до 90,21+2,2 усл.ед. при норме 30,51+0,09. Формирование системного синдрома эндогенной интоксикации подтверждено увеличением в 4,8 раза содержания в сыворотке крови малонового диальде-гида, при норме 2,74+0,02 мкмоль/л. У всех больных наблюдалась выраженная воспалительная реакция: содержание лейкоцитов — 18,3+0,51 109/л, нейтрофи-лов — 68,4+3,31%, лимфоцитов — 24,5+0,1%, СОЭ — 28+1,53 мм/ч, уровень кортизола в сыворотке крови составлял 698,5+47,8 нмоль/мл.

Анализ полученных результатов позволил сделать вывод о том, что у больных с герпетической невралгией при рецидивирующем характере заболевания формируется системное воспаление вирусно-аутоиммунной природы.

ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДИЧЕСКИХ ПОДХОДОВ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

А.П. Порываева1, Т.С. Некрасова2, И.В. Устьянцев1, Н.П. Глинских1

ФБУН «Екатеринбургский НИИ вирусных инфекций» Роспотребнадзора, г. Екатеринбург; 2ОГУЗ «Областной кожно-венерологический диспансер» Министерства здравоохранения Свердловской области, г. Екатеринбург

Многообразие клинических проявлений герпес-вирусной инфекции (ГВИ) требует расширенной диагностики и дифференцируемого подхода к терапии в зависимости от форм течения заболевания и иммунного статуса пациента. В настоящей работе изложена схема клинико-лабораторной диагностики заболевания и апробированная в наших исследованиях тактика лечения хронической ГВИ.

Алгоритм диагностики хронической ГВИ: ИФА — скрининг на антитела ^ М и ^О к ВПГ; ПИФ — скрининг на антиген ВПГ; ПЦР — на выявления вирусной ДНК в клиническом материале; определение иммунологического статуса больного в динамике; выделение ВПГ из клинического материала на клеточной культуре. Алгоритм лечения хронической ГВИ: схемы поэтапного комплексного метода лечения, включающего иммунотерапию — неспецифическую и специфическую, в сочетании с противовирусной терапией при рецидиве заболевания и в стадии ранней реконвалесценции, а также при специфической профилактике рецидивов.

Эффективность использования алгоритма диагностики изучали при обследовании 930 мужчин

Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.

Инфекция и иммунитет

с заболеваниями урогенитального тракта. У 60,2% пациентов диагностирована латентная ГВИ без нарушений иммунного статуса. Хронический рецидивирующий характер с нарушениями иммунорегу-ляторной функции Т-лимфоцитов и фагоцитарной активности мононуклеарных клеток носило заболевание у 7,7% больных. Именно в этой группе больных (72 человека) была дана оценка эффективности лечения противовирусными препаратами в комплексе с иммунотерапией ферровиром. По результатам иммунологического исследования, у 56,9% этих пациентов наблюдался выраженный иммуномодулирую-щий эффект: восстановление зрелых Т-лимфоцитов, Т-хелперов, числа фагоцитирующих клеток. В 85% случаев длительность межрецидивного периода увеличивалась в 2,5—3 раза, с ослаблением клинических симптомов рецидива ГВИ. Побочных эффектов от проводимого лечения не наблюдалось. Отмечалось также улучшение общего состояния организма и повышение жизненного тонуса.

Таким образом, использование в клинической практике испытанных алгоритмов диагностики и лечения ГВИ позволили получить оптимальный результат и улучшить качество жизни пациентов.

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ В СИСТЕМЕ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ЗА КОКЛЮШНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

М.Н. Прадед1, Т.С. Селезнева1, С.В. Малинина2, Н.В. Бирюлева2, Т.Е. Любимова2, Р.А. Панферова3, С.Б. Яцышина1

ФБУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора», Москва; Филиал ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в ВАО г. Москвы; ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в городе Москве» в СЗАО г. Москвы

Вакцинация против коклюша входит в национальные календари прививок большинства стран мира, однако, цель, поставленная ВОЗ — сократить заболеваемость коклюшной инфекцией к 2010 г. до уровня менее 1 случая на 100 тыс. населения, не достигнута ни в одной стране. В РФ за 2008—2011 гг. заболеваемость регистрируется на уровне 2,5—3,8 на 100 тыс. населения, однако, можно предположить, что эти данные существенно занижены. Возможными причинами сохранения неблагоприятной ситуации являются недостатки в лабораторной диагностике коклюша, что выражается в неизвестности истинной распространенности возбудителя среди населения, низком проценте установления источников инфекции, составившем в 2011 г. лишь 11,6% случаев, и связано с отсутствием разрешенных для применения в РФ эффективных и доступных средств быстрой лабораторной диагностики. Не менее важной проблемой являются недостаточный охват прививками, несоблюдение календаря прививок, а также вероятное несоответствие по антигенному спектру вакцинных и современных штаммов. В пользу последнего предположения говорят снижение напряженности иммунитета в отношении коклюша и вовлечение в эпидемический процесс привитых детей, подростков и взрослых. С целью оптимизации лабораторной диагностики в ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора разработан и поставлен на производство набор реагентов «АмплиСенс Bordetella multi-FL», предназначенный для выявления и дифференциации ДНК возбудителей коклюша, паракоклюша и бронхисептикоза в биоло-

гическом материале методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией. Проведены приемочно-технические и клинические испытания набора реагентов. Как было показано на этапе апробации в ФБУЗ ЦГиЭ ВАО г. Москвы при обследовании 364 детей с анамнезом, не исключающем коклюшную инфекцию, диагностическая чувствительность разработанного набора реагентов оказалась в 16 раз выше по сравнению с чувствительностью стандартного бактериологического исследования (17,6 и 1,1% соответственно) при 100% специфичности. ДНК возбудителей коклюшной инфекции (B. pertussis в 52 (14,3%) образцах, ДНК B. parapertussis — в 4 образцах; в 8 образцах видовая принадлежность возбудителя не могла быть уточнена по причине недостаточного содержания микроорганизма в клиническом материале) обнаруживалась с первых дней и до 18 дня болезни. Высокая аналитическая чувствительность набора реагентов (500—1000 ГЭ в 1 мл исследуемого материала) позволит повысить процент установления источников инфекции при работе в очагах и скрининге носителей. С целью изучения антигенных различий современных изо-лятов B. pertussis в сравнении с вакцинными штаммами проведен анализ с помощью MAST (multiple antigen sequence typing) с изучением 3х генов (ptxP, prn и tcfA) генома B. pertussis. Исследованы 3 штамма B. pertussis, использующиеся в вакцине АКДС (305, серовар 1,2.0, выделен в 1957г; 267, серовар 1,0.3 выделен в 1967 г.; и 475, серовар 1,2.3 выделен в 1966г), 29 штаммов (из коллекции ФБУН ЦНИИЭ), выделенные с 1975 по 1998 гг и 33 изолята (серовар 1,0.3.), выделенные в ФБУЗ ЦГиЭ СЗАО за 2010-2011 гг. Результаты молекулярно-генетического анализа трех локусов, косвенно характеризующих антигенные свойства B. pertussis, показали наличие различий по двум локусам — ptxP и prn изолятов, выделенных с 2010 по 2011 гг. (аллели ptxP3, prn2), по сравнению с изолятами прошлых лет (аллели ptxP1, ptxP2, prn1), включая вакцинные штаммы (аллели ptxP1, ptxP2, prn1), что свидетельствует о произошедших изменениях антигенных свойств B. pertussis за время применения вакцинации. При этом результаты изучения напряженности иммунитета к каждому из вакцинных штаммов B. pertussis, полученные при исследовании 100 сывороток от привитых в срок и не болевших коклюшем детей 5-7 лет свидетельствуют об эффективности вакцины: защитные титры (1:160-1:5120) к штамму 267 имели 77% детей, к штамму 305 — 42% детей, к штамму 475 — 40% детей.

АССОЦИАТИВНЫЙ МИКРОБНЫЙ СИМБИОЗ ПОЛОВЫХ ПУТЕЙ ЖЕНЩИН

Т.Д. Примак

ГБОУ ВПО Читинская государственная медицинская академия, г. Чита

Заболеваемость инфекциями репродуктивного тракта за последние годы не имеет тенденции к снижению, при этом не всегда учитываются микробные ассоциации. Проведены количественные исследования резидентной микрофлоры и условно-патогенных микроорганизмов отделяемого цервикального канала. Обследовано 30 сексуально активных здоровых женщин в возрасте 18-25 лет, не имеющих урологических и гинекологических заболеваний, не болевших в течение 6 месяцев острыми инфекционными заболеваниями и не имеющих патологических измене-