CC BY
7СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ (AGRICULTURAL SCIENCE) УДК 58.2.
Гулбоев Д.Т.
магистр 2 курса Самаркандский государственный университет
ОПТИМАЛЬНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ И ВЛИЯНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ ВЕЩЕСТВ НА ПРОРАСТАНИЕ ЗАРОДЫШЕВЫХ КЛЕТОК СЕМЯН ГОРЬКОГО МИНДАЛЯ (AMYGDALUS COMMUNIS)
Аннотация: в данной статье обобщено влияние питательных веществ на прорастание горького миндаля (Amygdalus communis) в лабораторных условиях.
Ключевые слова: гормоны, макроэлементы, микроэлементы, клетки, проницаемость, миндаль, семена, почва, вода, лабораторные условия
Пряный миндаль (Amygdalus communis) принад лежиткпо дсемейству Rosaceae семейства Prunoideae. Он распространен по всей Средней и Западной Азии, включая Ближний Восток, Китай, Средиземноморский регион и Америку. Миндаль используется в качестве декоративного растения, потому что у него красивые белые или розовые цветы.
Горький миндаль содержит 50% жира и 2,5-4% глюкозиды миндалины, 30% белка, а также различные соединения, содержащие сахар и клей. Горькое миндальное масло лечит кашель, пневмонию и болезни почек, а местные жители используют корень горького миндаля для пожелтения тканей и улучшения состояния кожи. Горький миндаль - это не просто еда, а сладкий миндаль - хорошая еда. Пряные сорта миндаля используются для лечения, точечных и солнечных ожогов, а также морщин на лице, и если корень миндального дерева разрезается на мелкие кусочки и прикрепляется к лбу с помощью уксуса или розового масла, это пойдет на пользу кожистой среде. Горькое миндальное масло имеет тот же эффект.
Горький миндаль в сочетании с пшеничным крахмалом побеждает длительную астму (мокроту) и пневмонию, а горький миндаль влияет печень и селезенку, очищает почки и мочевой пузырь и разлагает камни. Улучшить качество семян горького миндаля (Amygdalus communis) путем контролируемого разделения традиционно отобранных клонов. В настоящее время больше миндаля выращивается путем прорастания и прививки, но в настоящее время наблюдается снижение урожайности зародышей миндаля от стеблей нематоз, чтобы предотвратить это, необходимо создать устойчивое к нематодам растение миндаля in vitro. Таким образом, было сделаноисследование прорастания семян в пробирке.
Опыт: при приготовлении питательной среды была выбрана оптимальная питательная среда для прорастания горького миндаля (Amygdalus communis). Были отобранымакро микроэлементы и гормоны, необходимые для деления клеток.Содержание этих веществ в 1 литре стекла определяли по количеству роста и ускорения клеток (таблица 1).
Таблица 1
Состав искусственной питательной среды на литр для выращивания побегов
Горького миндаля (Amygdalus communis)
Компоненты пищи Количество питательных веществ в мг/л
Макро эелементы
NH4NO3 1416
CaCl2 112.5
KH2PO4 256
Ca(NO3)*4H2O 1367
CuSO4 -5H2O 0.25
№2 EDTA 45.4
FeSO4 -7H2O 33.8
Na2MoO4*2H2O 0.39
KH2PO4 265
ZnNOз*6H2O 17
K2SO4 1559
Микроэлементы
HзBOз 4.8
MnSO2 *H2O 33.5
NiSO4*6H2O 000.5
Агар-агар 7
БАМ 1
Сахароза 30
Витамины
Мезионозит 100
pH 5.5
Питательная среда состоит из 6 основных компонентов: макроэлементы; 2)
Микронутриенты; 3) Источник железа (в хелатной форме); 4) витамины; 5) источник
углерода; 6) фитогормоны;
Макро- и микро минеральные соли. Основа питательной среды: нитраты,
нитриты, соли аммония, фосфора и фосфатные соли. Серно-сульфатная и
водорастворимая К+, №+, Ca+2, Mg+2. Железо-хелатная форма используется в сочетании
с ЭДТА (этилендиаминтетрауоксусной кислотой) в качестве соответствующей формы
92
для роста растений. Отличительной особенностью неорганических солей МС от других солей является их высокое содержание нитратов, калия и аммиака. MS растворы неорганических солей готовят 100 раз до конечной концентрации питательных веществ и 10 мл на 1000 мл питательной среды для каждого раствора. Растворы Na, Fe и EDTA должны быть защищены от коричневого стекла или алюминиевой фольги для защиты от света. Концентрированные солевые растворы отбираются перед применением, и питательная среда готовится быстрее. Запасы соли лучше всего хранить в холодильнике, и это хранится в течение нескольких месяцев. Опыты всегда делаются из бутылках дистиллированной или минеральной воды, и все объекты имеют конкретное название и дату. Обычно растворы нитратов осаждают и нагревают до полного растворения перед применением. Не следует использовать, если в каких-либо растворах образуются белые вещества или осадок.
Фитогормоны. Фитогормоны необходимы для дифференцировки (индукции) и деления клеток. Следовательно, питательные среды для прорастания каллуса должны обязательно содержать ауксин (который стимулирует деление клеток).При индукции морфогенеза ствола содержание ауксина в среде может быть уменьшено или полностью устранено.В негормональной питательной среде растут опухшие и «изученные» ткани.Автономность для обеих групп гормонов или для одной из них обусловлена способностью этих клеток синтезировать свои гормоны.
Источником ауксина является 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-D), индол-
3 уксусная кислота (IUK), L-лафтилуксусная кислота (NUK). Более 2,4-D используется
для получения хорошего роста каллуса, потому что IUK в 30 раз слабее, чем 2,4-D [2].
Кинетин, 6-бензоламинопурин (6-BAP), в качестве источника цитокина, добавляемого
в искусственную питательную среду, более активен в отношении индукции кинетики
при росте зеатин-специфических тканей. Некоторые питательные вещества также
содержат аденин. Ауксины (IUK, NUK), цитокины (кинетин, зеат, мочевина),
гиббереллины (гиперрелловая кислота). Группа ауксинов содержит гормоны IAA
(индол-3-уксусная кислота), NAA (нафталинуксусная кислота), 2,4-D (2,4-
дихлорфеноксиуксусная кислота) или IBA (индол-3-масляная кислота), требуюся для
деления клеток и формирования корней. Ауксин может ингибировать морфогенез в
93
высоких концентрациях. 2,4-D ауксин используется для производства большего количества первичного каллуса, а оставшиеся IAA, IVA и NAA используются для индукции корней.
Стерилизация готовой питательной среды производится в 120 атмосфере в автоклаве в течение 2 часов и температура внутри автоклава составляет менее 100°С. Стерилизация оборудования. Инструменты, булавки для скальпеля, иглы стерилизуются путем кипячения при 140°С в сухом тепле или воде в течение 12 часов в сушилке. Железные инструменты не обрабатываются в автоклаве, из-за воздействия паров влаги они ржавеют и становятся непроницаемыми. Перед тем как начать работу и во время работы инструменты ставятся в фарфоровую ёмкость и стерилизуются в 96% этиловом спирте, затем нагреваются на спиртовом пламене. Все прогретые оборудования хранятся в стерильной бумаге. Стерилизованные устройства используются только один раз, а при повторном использовании они снова стерилизуются и нагреваются в огне.
Стерилизация тканей. Хлопчатобумажные, марлевые, хлопчатобумажные ткани, использованные в эксперименте, стерилизуют в автоклаве 25-30 минут в 2 атмосферах.
Стерилизация растительного материала. При стерилизации семян горького миндаля (Amygdalus communis) его внешняя оболочка не удаляется, поскольку это может привести к гибели клеток роговицы в различных стерильных растворах, поэтому семена стерилизовали полюсной частью следующим образом. -70% этанол в течение 5 секунд.
- 1% NaOCl и несколько капель увлажняющего агента (ионы без мыла) в течение 15 минут.
- Промыть в стерильной дистиллированной воде в течение 5 минут.
- формальдегид 3%, 15 минут.
- Промыть три раза в стерильной дистиллированной воде по 5 минут каждый. После стерилизации растение следует многократно промыть в дистиллированной воде, чтобы очистить его. В частности, растительный материал, обработанный бромидом, должен быть тщательно промыт, потому что даже небольшое количество бромида может сжечь клетки растения.
Использованная литература:
Glick B. R., Y. Bashan. Genetic manipulation of plant growth-promoting bacteria to enhance biocontrol of phytopathogens. Biotechnol. Adv. 1997. #15. -P.353-378.
Ibrahim, A. S., El-Shihy, O. M., & Fahmy, A. H. (2010). Highly efficient Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of elite Egyptian barley cultivars. American-Eurasian Journal of Sustainable Agriculture, 4, 403-413.
Li, J. F., Park, E., Arnim, A. G., & Nebenfuhu, A. (2009). The FAST technique: A simplified Agrobacterium-based transformation method for transient gene expression analysis in seedlings of Arabidopsis and other plant species. Plant Methods, 5, 6-21.
Liu, G., & Godwin, I. (2012). Highly efficient sorghum transformation. Plant Cell Reports, 31, 1-9.
Lowe, B. A., Prakash, N. S., Way, M., Mann, M. T., Spencer, T. M., & Boddupalli, R. S. (2009). Enhanced single copy integration events in corn via particle bombardment using low quantities of DNA. TransgenicResearch, 18, 831-840.
Бутенко Р.Г. Биология выших растений invitro и биотехнологих основа.- М.: ФБК-ПРЕСС, 1999..
Шевелуха В.С. и др. Сельскохозяйственная биотехнология. М. Высшаяшкола. 2003.
Ivic-Haymes SD, AC Smigocki 2005 Biolistic transformation of highly regenerative sugar beet (Beta vulgaris L.) leaves. Plant Cell Rep 23:699-704.
McHale NA, RE Koning 2004 PHANTASTICA regulates development of the adaxial mesophyll in Nicotiana leaves. Plant Cell 16: 1251-1262.
Maizel A, MA Busch, T Tanahashi, J Perkovic, M Kato, M Hasebe, D Weigel 2005 The floral regulator LEAFY evolves by substitutions in the DNA binding domain. Science 308:260-263.
