CC BY
52
УДК 612.112:612.15:618.3:578.825.11 А.С.Соловьева
ОПСОНО-ФАГОЦИТАРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БЕРЕМЕННЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕС-ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ В I ТРИМЕСТРЕ БЕРЕМЕННОСТИ
РЕЗЮМЕ
Изучена опсоно-фагоцитарная характеристика лейкоцитов периферической крови у женщин с острым и латентным течением хронической гер-пес-вирусной инфекции (ХГВИ) в I триместре беременности.
В работе использованы методы по определению фагоцитарной и киллинговой функций этих клеток, а также хемилюминесцентный анализ, характеризующий метаболизм лейкоцитов.
Установлено, что обострение ХГВИ вызывает активацию лейкоцитов, сопровождающейся генерацией активных форм кислорода. По-видимому, активация факторов неспецифической защиты организма является компенсаторной реакцией на угнетение специфических реакций во время острого периода ХГВИ.
SUMMARY A.S. Solovieva
OPSONO-PHAGOCYTIC CHARACTERISTICS OF PERIPHERAL BLOOD LEUKOCYTES IN PREGNANT WOMEN WITH CHRONIC HERPES INFECTION DURING THE I TRIMESTRE IN PREGNANT
Opsono-phagocytic characteristics of peripheral blood leukocytes in patients with acute and latent herpes infection (HI) during the I trimestre of gestation period has been studied. The purpose of this study was to determine leukocyte phagocytic and killing ability. It was established that HI causes leukocyte activation which is accompanied by active oxygen generation. Non-specific defense factor activation appears to be compensatory response to specific reaction inhibition in acute HI.
Рождение здорового поколения - проблема огромной социальной значимости, выходящая за пределы медицинской науки. Одной из важных причин перинатальной смертности являются внутриутробные вирусные инфекции. Герпетическая инфекция -одна из самых распространенных вирусных инфекций. В последние годы в отечественной и зарубеж-
ной печати появились тревожные сообщения об эпидемии вируса герпеса, еще недавно считавшегося латентным и «миролюбивым». Установлена возможность проникновения вируса через плаценту и заражение плода [1, 7].
Вирусу простого герпеса (ВПГ) в организме противостоят различные иммунные механизмы, включая цитотоксические Т-лимфоциты, естественные киллеры, гуморальный иммунитет, мононуклеарные фагоциты и цитокины [6]. Первая линия защиты при ВПГ принадлежит неспецифическим факторам, которые представлены в основном полиморфно-ядерными лейкоцитами (ПЯЛ). Инфицированные ВПГ клетки продуцируют факторы, вызывающие активацию ПЯЛ, которые могут угнетать репликацию ВПГ. Показано, что лейкоциты могут проявлять внутреннюю и внешнюю резистентность к ВПГ [4]. Около 10 тыс. вирусных частиц могут быть связаны одним полиморфно-ядерным лейкоцитом. Резистентность нейтрофилов требует вирусспецифических антител и усиливается при участии комплемента. Антителозависимый комплементзависимый фагоцитоз также имеет место при предварительном воздействии фактора некроза опухоли (ФНО) на ПЯЛ. Предполагается, что этот процесс регулируется моноцитами, которые продуцируют ФНО в ответ на ВПГ [6].
Основным стимулом «дыхательного взрыва» обычно служит фагоцитоз. Стимуляция нейтрофилов вызывает резкое (иногда более чем 50-кратное) потребление кислорода. Механизм этого процесса не вполне ясен, однако известно, что в нем принимает участие образование высокореактивного нестабильного промежуточного продукта (супероксида), а также перекиси водорода. Ферментом, необходимым для инициации «дыхательного взрыва», предположительно является оксидаза плазматической мембраны, которая в качестве донора электронов использует НАДФН по следующей схеме:
2О2+ НАДФН^2О2-+ НАДФ+Н+,
2О2-+ 2Н+^Н2О2+ О2.
В то же время глюкоза метаболизируется через гексозомонофосфатный шунт, при этом регенерируется НАДФН, который используется О2--
образующим ферментом и глутатионзависимой системой, обезвреживающей Н2О2. В течение «дыхательного взрыва» клетка секретирует протоны [5]. Хемилюминесценция (ХЛ) вследствие выхода протонов, которая сопровождает «дыхательный взрыв», может использоваться для регистрации этого типа
клеточной реакции. Образующиеся супероксиды и перекись водорода, а затем (что более важно) и гипохлорид (возникающий при катализируемом миелопе-роксидазой окислении Cl- перекисью водорода), гидроксильные радикалы и синглетный кислород являются основными веществами, используемыми ней-трофилами для уничтожения микроорганизмов. Материалы и методы исследования
Обследовано 37 женщин в возрасте от 18 до 36 лет. Первую группу (n=12) составили беременные с латентным течением хронической герпес-вирусной инфекции (ХГВИ) I триместре. Во вторую группу вошли 8 женщин, у которых в этот период беременности отмечалось обострение ХГВИ. Диагноз устанавливался клинически на основании жалоб, анамнестических данных и характерных морфологических элементов высыпаний (локальная эритема, сгрупированные везикулы, эрозии, покрытые сероватым налетом с тенденцией к слиянию). Диагноз подтверждался обнаружением специфических к ВПГ иммуноглобулинов класса М, регистрируемых ИФА-анализом. Группой контроля явились 17 практически здоровых беременных.
В качестве материала исследования взята периферическая кровь вышеописанных групп. Лейкокон-центрат получали путем отстаивания гепаринизиро-ванной венозной крови в термостате (37°С) в течение 20-30 мин. В качестве объекта фагоцитоза взят музейный штамм Sfaphylococcus aureus, предоставленный НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича (г. Москва) в концентрации 500 млн. микр. тел в 1 мл. В пробирку с лейкоцитарной взвесью вносили микробную культуру в рабочем разведении 1:1 и перемешивали однократно пипеткой. Смесь ставили в термостат при 37°С на 30 мин (с целью определения поглотительной способности лейкоцитов) и 2 часа (для определения переваривающей способности). Приготовленные из микробно-лейкоцитарной взвеси, препараты окрашивали по Романовскому-Гимзе и подсчитывали фагоцитарную активность (ФА) и коэффициент завершенности фагоцитоза (КЗФ) [3].
Для проведения ХЛ-анализа 100 мкл приготовленной лейковзвеси (в конечной концентрации 2000 мкл) помещали в кювету для сцинтилляционного счетчика (химилюминометр CL-3603 АО «Диалог») и регистрировали фоновый показатель ХЛ в течение 3-4 циклов. После добавления 40 мкл насыщенного
изоосмолярного водного раствора люминола (5,6.104М, рН - 7,35) и 40 мкл фагоцитирующих частиц (опсонизированный зимозан) определяли, соответственно, базальный показатель интенсивности ХЛ (БПИХЛ) и стимулированный показатель интенсивности ХЛ (СПИХЛ) [2].
Результаты и обсуждение
Анализ значений, характеризующих фагоцитарное звено иммунитета у женщин с ХГВИ в I триместре беременности, показал следующее. Как видно из
Таблица
Показатели фагоцитарной и киллинговой функций нейтрофилов периферической крови беременных с ХГВИ в I триместре беременности
Группы ФА, % КЗФ
1-я группа, n=12 71,4±1,9 83,0±2,1 0,78±0,07 0,68±0,08*
2-я группа, n=8 92,1±1,7 94,4±1,4* 0,70±0,06* 0,78±0,07
Группа контроля, n=17 79,36±1,9 0,95±0,05
Примечание: * достоверность различий с контрольной группой р<0,05; в числителе значение до лечения, в знаменателе - после.
таблицы, у беременных с латентным течением ХГВИ в начале госпитализации отмечалась сниженная фагоцитарная активность нейтрофилов по сравнению с контрольной группой. Коэффициент завершенности фагоцитоза также был снижен по отношению к контролю. К концу лечения поглотительная активность нейтрофилов возросла и достигла уровня этого показателя в контрольной группе. Однако, переваривающая способность нейтрофилов продолжала снижаться. Выявленные изменения, по-видимому, обусловлены хронической антигенной нагрузкой и отражают состояние функционального перенапряжения фагоцитов у больных в период ремиссии.
В группе женщин с острым течением ХГВИ, напротив, исходная фагоцитарная активность нейтро-филов была повышена на 10% по сравнению с аналогичным показателем в группе контроля и на 20% - в группе с латентным течением инфекционного процесса. При этом КЗФ был значительно ниже такового значения у практически здоровых беременных (р<0,05). К концу госпитализации показатели, характеризующие поглотительную и переваривающую функции нейтрофилов имели тенденцию к увеличению. Это позволяет утверждать, что обострение ХГВИ у беременных вызывает активацию изучаемых клеток, которая, однако, не связана с интенсивностью киллинга инфекционных частиц.
Процесс метаболической активности нейтрофи-лов под действием фагоцитоза у женщин с латентно протекающей герпес-вирусной инфекцией носил неоднозначный характер (рис. 1). Исходно невысокий базальный показатель интенсивности ХЛ к концу госпитализации увеличивался, причем, параллельно с временным параметром. Однако, первоначально низкий уровень ХЛ, стимулированной опсонизиро-ванными частицами зимозана, после лечения продолжал снижаться. При этом период подъема и спада кривой был более продолжителен по времени по сравнению с исходными показателями. Увеличение параметра, характеризующего длительность интенсивности плато, по окончании госпитализации можно объяснить более долгим расходованием субстратов, необходимых для образования радикалов во время «дыхательного взрыва».
До лечения После лечения
Рис. 1. Интенсивность хемилюминесценции лейкоцитов периферической крови беременной К. с латентным течением ХГВИ. Здесь и далее: по оси абсцисс - время (в мин); по оси ординат - интенсивность.
До лечения После лечения
Рис. 2. Интенсивность хемилюминесценции лейкоцитов периферической крови беременной Д. с острым течением ХГВИ.
Анализируя ХЛ-анализ в группе женщин с обострением ХГВИ, следует отметить исходно значительно повышенный уровень как базального, так и стимулированного показателей интенсивности по сравнению с данными показателями в 1-й группе (рис. 2).
Причем, время достижения максимального значения СПИХЛ было значительно короче, чем при латентном течении ХГВИ. Это можно объяснить активацией прооксидантных
ферментных систем, отвечающих за образование активных форм кислорода. К концу лечения базальный показатель ХЛ практически не изменился, а уровень СПИХЛ снизился почти в 3 раза.
Таким образом, получены данные существуют об активации системы фагоцитов при остром течении герпес-вирусной инфекции у женщин в I триместре беременности. Усиление фагоцитарной активности нейтрофилов, по-видимому, связано, прежде всего, с повышенной (или дополнительной) экспрессией различных рецепторов, но не сопровождается интенсивностью киллинговой функции этих клеток. При этом происходит усиление ХЛ-ответа нейтрофилов, индуцированного опсонизированным зимозаном. Величина ХЛ, опосредованная образованием кислородных радикалов, отражает не только способность нейтрофилов к фагоцитозу, но и связанное с ним изменение метаболизма, в частности, секрецию. Ней-трофилы могут секретировать в окружающую среду более 100 биологически активных веществ. Известно, что при «метаболическом взрыве» за счет повышения текучести мембраны и локального увеличения концентрации ионов Са2+ происходит мобилизация фосфолипазы А2 и липоксигеназы, которая сопряжена с ферментом НАДФН-оксидазой. В результате активации этого фермента будут происходить также синтез и секреция метаболитов арахидоновой кислоты. Выделяющиеся простагландины, лейкотриены, интерлейкин-1, тромбоксан и др. вещества будут изменять тонус гладкой мускулатуры сосудов, агре-
гацию клеток крови и т.д. Возможно, что такая активация нейтрофилов может быть следствием ингибирования ферментов с антиоксидантной активностью, прерывающих цепи окисления на определенных этапах - супероксиддисмутазы, глутатионперок-сидазы, НАДФН-глутатионредуктазы и каталазы [5].
Суммируя вышеописанное, мы пришли к заключению, что активация факторов неспецифической защиты организма у женщин в I триместре беременности, по-видимому, является компенсаторной реакцией на угнетение специфических реакций во время обострения ХГВИ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Александровский А.В. Клинико-
иммунологическая характеристика новорожденных с герпес-вирусной инфекцией: Дис. ...канд. мед. наук.-М., 1996.
2. Земсков В.М., Барсуков А.А. Изучение функционального состояния фагоцитов человека (кислородный метаболизм и подвижность клеток): Методические рекомендации.- М., 1988.- 19 с.
3. Козлюк А.С., Анисимова Л.А., Шройт И.Г. Иммунологические методы в гигиенических исследованиях.- Кишинев, 1987.- 118 с.
4. Маянский А.Н., Невмятуллин А.Л., Чеботарь И.В. Реактивная хемилюминесценция в системе фагоцитоза // Журнал микробиол., эпидемиол. и им-мунол.- 1987.-№7.-С.109-115.
5. Руководство по иммунофармакологии: Пер. с англ./Под ред. М.М.Дейла, Дж.К.Формена.-М.:Медицина, 1988.-332 с.
6. Сухих Г.Т., Ванько М.В., Кулаков В.И. Иммунитет и генитальный герпес.- Н.Новгород, 1997.224 с.
7. Whitley R.J., Corey Z., Arvin A. et al. Powell NIAID Collabaratiue Antiviral study Grup: Changing Presentation of Herpes simplex virus infection in neo-nates//N.Engl.J.Med.- 1988.- Vol.158.- P.109.
□ □□
