CC BY
6
С. Б. Нарзулаев
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ ЛИЗОЦИМА В СЛЮНЕ И МОЧЕ КАК ПОКАЗАТЕЛЯ ВРЕДНОГО ВЛИЯНИЯ ФАКТОРОВ МАЛОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ
Томский медицинский институт
Лизоцим (мурамидаза) относится к неспецифическим факторам защиты организма. Фермент мурамидаза вырабатывается организмом и содержится в различных органах, тканях, секретах, являясь регулятором проницаемости мембран и тканевых барьеров. В гигиенических исследованиях лизоциму слюны придается достаточно большое значение как показателю, отражающему вредное влияние на организм человека факторов окружающей среды, особенно химических веществ [4]. Активность лизоцима в моче при воздействии неблагоприятных факторов окружающей среды изучена недостаточно, хотя в ряде работ отечественных и зарубежных авторов есть данные об изменении этого показателя при некоторых патологических состояниях [1, 5].
Целью настоящей работы было изучение содержания и активности лизоцима в моче у детей, проживающих вблизи промышленных предприятий, выявление влияния факторов малой интенсивности на активность лизоцима в моче и сравнение этого показателя с содержанием лизоцима в слюне.
Обследованы практически здоровые дети в возрасте 4—6 лет, посещающие организованные .детские коллективы и проживающие не менее 3 лет вблизи крупного нефтехимического комбината. Контрольную группу составили дети, посещающие детский комбинат, расположенный в оздоровительной зоне за городом. Расстояние изучаемого района от нефтехимического комбината составило б км, контрольного — 26 км. Ра-
бота проведена в весенне-летний период. Активность лизоцима в слюне и моче определяли не-фелометрическим методом [3] и выражали в процентах светопропускания.
Проведенные исследования показали, что у детей основной группы активность лизоцима в моче на 40%, а в слюне на 37% меньше, чем в контрольной, что свидетельствует о выражен-ном влиянии вредных факторов малой интен- * сивности. Данный вывод подтверждается более высокой заболеваемостью и более низкими показателями физического развития детей в изученном районе по сравнению с контрольным. Результаты изучения активности лизоцима в слюне согласуются с данными, полученными А. И. Воробьевой и Л. П. Волкотруб [2].
Определение активности лизоцима в моче, а также в слюне может быть использовано при массовых медицинских обследованиях для определения состояния системы неспецифической резистентности у детей.
Литература
1. Бабаян С. С., Журавлева Т. П., Яворский Л. И. // Антибиотики. — 1976. — № П. —С. 1015—1018.
2. Воробьева А. И., Волкотруб Л. П. // Гиг. и сан. — 1987. — № 5. —С. 83—85.
3. Дорофейчук В. Г. /у Лабор. дело. — 1968. — № 1. — С. 28—30.
4. Ляшенко К. С.// Гиг. и сан. — 1977. —№ 1. —С. 40—^ 41. 3-
5. Wilson A., Hadley №. // Pediatric.— 195,0. — Vol. 36.— P. 45—50.
Поступила 09.07.87
•УДК 614.7:546.871-07:616-008.928.7-074:543.253
Г. И. Кривда
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИСМУТА В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ПЕРЕМЕННОТОКОВОИ ПОЛЯРОГРАФИИ
ЦОЛИУВ, Москва
Возрастающие масштабы производства висмута ведут к увеличению численности людей, занятых как в сфере производства, так и в сфере использования соединений этого металла, что в •свою очередь выдвигает проблему гигиенической оценки условий труда работающих. Изучение влияния висмута на организм человека требует решения таких задач, как гигиеническая «оценка производственной среды и установление
основных показателей токсикокинетики висмута в организме, для чего необходим метод, обладающий специфичностью, чувствительностью, точностью и доступностью при проведении систематического контроля за содержанием данного элемента в организме.
По данным литературы, методы, используемые для анализа содержания висмута в биологическом материале, имеют преимущества и не-
достатки. Колориметрические методы [2, 4, 9J не отличаются высокой чувствительностью. Спектральный [5], нейтронно-активационный [7, 8], масс-спектрометрический [12], спектро-флюориметрический [14], атомно-абсорбцион-ный [10, 11] методы, обладая высокой чувствительностью, требуют специальной аппаратуры, что затрудняет их широкое применение. Метод амальгамной полярографии с накоплением на графитовом электроде высокочувствителен [6, 15], однако невысокая воспроизводимость и большая длительность проведения одного замера создают трудности для его применения при проведении массовых анализов.
С целью определения микрогаммовых концентраций висмута нами предложено использовать ^ режим переменнотоковой полярографии на ртут-^ ном капельном электроде.
Стандартный раствор концентрации
готовили растворением навески 1 г металлического висмута (ТУ 093616—74) в 10 мл 25% раствора азотной кислоты при слабом нагревании и доводили объем до 1 л раствором 5 % азотной кислоты. Раствор устойчив в течение месяца. Рабочие растворы с содержанием 10 и 1 мкг/мл готовили с использованием 0,1 н. раствора HCl.
Полярографическому определению предшествует изолирование висмута из биологического материала [1, 3, 12, 13].
В разработанной нами методике озоление биологического материала проводится смесью концентрированной HN03 и НСЮ4 (42%). Метод дает хорошо воспроизводимые результаты и сокращает время проведения озоления по сравнению со временем озоления смесью кислот H2S04 и HN03.
Хорошо измельченную навеску 500—1000 мг биологического материала (печень^^доздоц—ро-ловной мозг,, легкие и т. д.) помещали в кварцевые стака"нчиЩ заливали смесью кислот (6 мл смеси концентрированной HN03 и НСЮ4 в соотношении 5:1), накрывали боросиликат-ным стеклом и выдерживали 1 ч. Затем нагревали на электроплитке при 150°С, постепенно повышая температуру до 300 °С. В процессе озоления к пробам по каплям осторожно добавляли концентрированную HN03 с последующим упариванием до образования сухого белого остатка. К остывшей золе добавляли 5 мл биди-стиллированной воды, 0,5 мл концентрированной HN03, 0,3 мл 30 % раствора Нг02 и упаривали на электроплитке при 100°С досуха (не прокаливая). К. сухому остатку добавляли 0,5 мл концентрированной HCl (плотность 1,19 г/см3) и упаривали досуха. К остатку добавляли 1 мл 1 н. раствора HCl, слегка нагревали, охлаждали, переносили в пробирки на 10 мл, смывая стаканы дважды 2 мл бидистиллированной во-/ ды, доводили объем до 10 мл бидистиллирован-
ной водой. Полученный раствор помещали в полярографическую ячейку, удаляли кислород, пропуская через раствор инертный газ (азот) в течение 5 мин, и затем полярографировали.
При определении содержания висмута в моче 20 мл мочи помещали в кварцевые стаканы, заливали смесью кислот (10 мл концентрировали HN03 и 2 мл 42% раствора HC104), накрывали боросиликатным стеклом и выдерживали ] ч. Озоление проводили на электроплитке, сначала осторожно нагревая, затем усиливая нагрев при 300°С, до образования сухого белого остатка. Остаток охлаждали, добавляли 2 мл концентрированной HCl, нагревали и раствор упаривали досуха. К остывшему остатку добавляли 1 мл 1 н. раствора HCl, образовавшийся раствор фильтровали в градуированные пробирки, смывая тем же раствором кислоты, объем доводили до 1 мл 1 н. раствором HCl, затем доводили объем до 10 мл бидистиллированной водой. Анализируемый раствор помещали в полярографическую ячейку, удаляли кислород, пропуская через раствор азот в течение 5 мин, и полярографировали на приборе ПУ-1. Полярографическое напряжение от —0,3 до 0,1 В. Амплитуда квадратно-волнового напряжения 6 мВ, задержка 3,01 с, скорость развертки 2 мВ, поляризация катодная, диапазон тока 0,5/1 (можно использовать прибор ППТ-1). Высоту пика определяли при потенциале —0,09 В.
Концентрацию висмута в анализируемой пробе измеряли по градуировочному графику. Для построения градуировочного графика к биологическому материалу, не содержащему висмут, добавляли стандартный раствор висмута, помещали пробы в кварцевые стаканы, проводили озоление и обработку сухого остатка описанным выше способом, а затем полярографировали.
Чувствительность определения висмута в органах и тканях 1 мкг, в моче 2 мкг в анализируемом объеме пробы (10 мл). Погрешность определения при концентрации висмута 1 мкг в 10 мл составляет 17,4%, 5 мкг в 10 мл —3,5%.
Расчет концентрации висмута проводили по формуле:
_ а-в-100 с~ б-У
где С — концентрация вещества в пробе ткани (в мкг/100 г) или мочи (в мкг/л), а — концентрация вещества в анализируемом растворе, найденная по градуировочному графику, в мкг/мл; в — общий объем анализируемой пробы, в мл; б — объем раствора, взятый для анализа, в мл; Y — объем пробы (20 мл мочи, 500— 1000 мг ткани).
Разработанный метод использован для оценки содержания висмута в различных органах экспериментальных животных.
Литература
Х.Борисов-Потоцкий С. Л. // Вести, венерол. — 1938. — № 3. — С. 53—56.
2. Власенко Л. М. // Научное о-во судебных химиков и криминалистов: Ленинградск. отделение: Расширенная конф., 2-я: Тезисы докладов.—Л., 1961. — С. 272—273.
3. Крылова А. И. // Сборник трудов по судебной медицине и судебной химии. — Пермь, 1961. — С. 226—232.
4. Крылова А. И. Ц Там же. — С. 222—226.
5 Лифшиц В. М. // Микроэлементы в медицине. — Ивано-Франковск, 1965.— С. 20—21.
6. Мальков Е. М., Харатьян А. М., Султанов У. С. // Лабор. дело. — 1973. —№ 3. — С. 142—145.
7. Поникарова Т. М., Попов Д. Н., Рогозина Э. М. // Микроэлементы в сельском хозяйстве и медицине. — Улан-Удэ, 1966.— Т. 2. — С. 73—74.
8. Свиридова А. И, Кист А. А., Лобанов Е. М., Янков-
ский А. В. // Активационный анализ биологических объектов. — Ташкент, 1967. — С. 39—42.
9. Шор Л. А. II Вопросы дерматологии и венерологии. — Уфа, 1941, —Т. 2, —С. 212—238.
10. Conso F., Bourdon R. el al.//Europ. J. Toxicol.— 1975.— Vol. 8, N 3. — P. 137—141.
11. Djudzman R. et al. //Acta gastro-ent. belg. — 1978.— Vol. 41, N 1—2,—P. 81—86.
12. Fitchett A. W. et al.//Analyt. chem. — 1974. — Vol. 46, N 6.— P. 710—713.
13. Palliere M., Yerner G.// Ann. Pharm. franç. — 1980. — Vol. 38, N 2.— P. 123—126.
14. Ryan D. E„ Pallier H. // Canad. J. Chem. — 1974. — Vol. 52, N 10.— P. 1942—1944.
15. Sinco L. et al.//Microchim. acta. — 1972. — Vol. 2. — P. 163—172.
Поступила 01.06.87
*
УДК 614.76-074:543.544
Л. М. Кедик, И. С. Новикова
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ АНАЛИЗА ВОЗДУШНОЙ СРЕДЫ И ПОЧВЫ
ВНИИ железнодорожной гигиены, Москва
В последние годы метод газовой хроматографии (ГХ) получил широкое распространение в практической работе служб санитарно-химиче-ского контроля. Однако перед химиками-анали-тиками нередко встают задачи определения токсических веществ, которые по каким-либо причинам не могут быть подвергнуты непосредственному хроматографическому анализу (например, сильно полярных, слаболетучих, реакцион-носпособных соединений и т. д.). В этом случае расширить границы применения метода ГХ позволяет использование целенаправленных химических превращений исследуемых веществ в соответствующие производные, поддающиеся хро-матографироваиию (реакционная ГХ).
Реакционная ГХ использована нами при определении чягря^црний впчл-уншпй сррдыи ПОЧГ1ЬТ гербицидами;»— полидимом и трихлорацетатом натрия (ТХАН), применяемыми для борьбы с растительностью на железнодорожном земляном полотне.
В литературе описан только колориметрический метод определения ТХАН [3], который не обладает достаточной чувствительностью и селективностью.
В связи с тем что полидим и ТХАН являются хлорсодержащими веществами, их определение представлялось целесообразным проводить с помощью метода ГХ с использованием селективного детектора по захвату электронов (ДЭЗ). Однако непосредственное хроматографирование этих веществ было невозможно из-за их малой летучести и высокой полярности.
При определении полидима (смесь диметила-минных солей изомерных полихлорбензойных кислот) нами предварительно была про-
ведена этерификация полихлорбензойных кислот в соответствующие метиловые эфиры с помощью диазометана. Такой способ этерифика-ции является наименее трудоемким, быстрым и не требует применения высокотоксичных реагентов. Диазометан получали щелочным разложением И-нитрозо-Ы-метилмочевины [4]. Раствор диазометана в диэтиловом эфире безопасен и может храниться в холодильнике несколько суток.
Пробы воздуха на содержание аэрозоля полидима отбирали на фильтры АФА-ХА-20. После отбора проб полидим с фильтров смывали водой, водные смывы подкисляли до рН 1,0 для пере- ^ вода солей в свободные полихлорбензокные кис-лоты и экстрагировали их диэтиловым эфиром. Из подкисленных образцов почвы полидим также извлекали диэтиловым эфиром с дополнительной очисткой перераспределением в щелочной раствор. Экстракты высушивали, удаляли растворитель на ротационном испарителе, к остатку добавляли эфирный раствор диазометана и через 10 мин хроматографировали на приборе с ДЭЗ.
Для разделения компонентов смеси использовали ГХ-колонку длиной 2 м и диаметром 3 мм, заполненную 15% апиезона Ь на хроматоне Ы-АМУ-ОМСБ зернением 0,125—0,160 мм. Температура термостата колонок 220°С, детектора 250 °С, испарителя 300 °С. Расход газа-носителя (азота) 50 мл/мин. На хроматограммах регистрируются пики 8 метиловых эфиров изомерных полихлорбензойных кислот с временем удерживания от 13 до 52 мин. Градуировку хроматографа проводили с помощью стандартных растворов полихлорбензойных кислот, выделенных из
— 52 —
4
