CC BY
7
показателя клеточных реакций) отражает уровень сенсибилизации подопытных животных, они могут быть использованы не только для выявления аллергенных свойств химических соединений, но и для оценки их аллергенной активности и выяснения сенсибилизирующего эффекта при различных путях воздействия на организм. Применение в реакциях in vitro аллергенных ингредиентов полимерных материалов или других сложных по составу химических продуктов при тестировании животных, сенсибилизированных полными композициями, позволяет подойти к решению вопроса гигиенической регламентации их состава с целью снижения аллергенной активности (3. А. Волкова и соавт.). В то же время зависимость уровня сенсибилизации от дозы химического аллергена и путей его воздействия дает основание для использования специфических иммунологических тестов при гигиеническом нормировании химических соединений с учетом порога аллергенного действия (О. Г. Алексеева и Л. А. Дуева; Т. В. Жукова и Г. Я. Ильченко). При этом более высокая чувствительность реакций in vitro по сравнению с кожными тестами позволяет более строго подойти к величине Limai , тем более что при слабо выраженной сенсибилизации возможно исчезновение замедленной гиперчувствительности при сохранении продукции гуморальных антигаптенных антител. Применение в токсиколого-аллергологическом эксперименте различных специфических иммунологических тестов помогает не только решению гигиенических вопросов, но и более глубокому пониманию механизмов индукции иммунного ответа на воздействие химических аллергенов.
ЛИТЕРАТУРА
Алексеева О. Г., Дуева Л. А. Аллергия к промышленным химическим соединениям. М., 1978.
Алексеева О. Г., Дуева Л. А., Поляк Н. Р. и др. — Гиг. и сан., 1976, № 6, с. 51—53. Волкова 3. А., Дуева Л. А., Зильфян 3. Н. — Там же, 1975, № 4, с. 45—48. Гришина Т. И., Мюллер С. — Бюлл. экспер. биол., 1978, № 4, с. 503—506. Жукова Т. В., Ильченко Г. #. — В кн.: Химический фактор — внешняя среда —
здоровье человека. Ростов-н/Д., 1975, с. 24—26. Русаков Н. В.— В кн.: Гигиена воды и санитарная охрана водоемов. М., 1973, с. 20—21.
Поступила 22/1X 1978 г.
УДК 615.285.7.074:543.544
A.A. Красных, Д. А. Швец ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВАЛЕКСОНА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Воронеж
Валексон (волатон, байтион, ромин) — о,о-диэтилтиофосфорил-о-(а-ци-анобензальдоксим) — инсектицид с широким спектром действия. Для идентификации валексона применяют газожидкостную хроматографию (В. В. Ле-щев и Б. А. Королев) и хроматографические методы (А. И. Быховец; Т. М. Петрова), однако это затруднительно при работе с зерном, травой и почвой, которая содержит большое количество гумуса.
Предлагаемый метод основан на экстракции препарата органическим растворителем, осаждении коэкстрактивных веществ коагулирующим раствором и хроматографировании в тонком слое силикагеля Л5/40м («Хема-пол», ЧССР).
Место локализации пестицида обнаруживают после опрыскивания хро-матограммы одним из следующих проявляющих реактивов:
— 0,2 % раствором хлористого палладия в 0,01 н. HCl. Пластинку после обработки облучают УФ-светом до четкого выявления пятен валексона желтого цвета с коричневой окантовкой;
— 0,2 % раствором 2,6-дибром-Ы-хлор-хинонимином в хлороформе с последующей обработкой хроматограммы парами концентрированной НС1 или нагреванием в сушильном шкафу при 110 °С в течение 10 мин. Валек-
► сон проявляется в виде ярких красных пятен;
— 0,05 % раствором бромфенолового синего с 1 % азотнокислым серебром в смеси вода — ацетон (1 : 3) с последующим обесцвечиванием фона 5 % уксусной кислотой. Пятна инсектицида имеют синюю окраску.
Из 200 мл воды валексон экстрагируют хлороформом или н-гексаном трижды по 15 мин порциями по 80, 50 и 40 мл. Органический растворитель отделяют от воды в делительной воронке и сушат безводным сернокислым натрием. Объединенный экстракт помещают в колбу для отгонки растворителей, концентрируют до объема 0,2—0,3 мл при температуре воды около 50 °С и хроматографируют.
Из 100 г измельченной почвы валексон экстрагируют 90 мл н-гексана или хлороформа путем энергичного встряхивания в течение 2 ч. Экстракт отфильтровывают через складчатый фильтр со слоем безводного сернокислого натрия, колбу дважды промывают тем же растворителем порциями по 20 мл. Объединенный экстракт концентрируют до объема 1—3 мл и переносят на хроматографическую колонку, которую заполняют следующим образом: снизу кладут кусочек ваты, затем слой безводного сернокислого натрия (3—4 г), далее слой окиси алюминия (5 г) для хроматографирова-ния, 2 г активированного угля БАУ и опять слой безводного сернокислого натрия. Колонку промывают 40 мл хлороформа. Валексон элюируют L00 мл хлороформа со скоростью 2,0—2,5 мл/мин. Элюат концентрируют на ротационном испарителе до объема 0,2—0,3 мл и хроматографируют.
Из 20 г измельченной растительной массы (зерно, трава, овощи) инсектицид экстрагируют 40—50 мл гексана, хлороформа или петролейного эфи-^ ра путем встряхивания в течение 1 ч. Экстракт отфильтровывают в колбу для отгонки растворителей, сушат безводным сернокислым натрием. Оставшуюся пробу дважды промывают тем же растворителем порциями по 10 мл. Объединенный экстракт отгоняют досуха. Сухой остаток растворяют в 3—5 мл охлажденного ацетона, затем прибавляют 30—40 мл охлажденной коагулирующей смеси, которую готовят следующим образом: 5 г хлористого аммония растворяют в 100 мл дистиллированной воды, смешивают с 10 мл 85 % ортофосфорной кислоты и доливают до 1 л водой. Раствор фильтруют через плотный бумажный фильтр.
Фильтрат нейтрализуют аммиаком или водным раствором едкого натра, доводят рН до 8,0 по лакмусу. Далее выполняются те же операции, что и при определении валексона в воде.
Пробу помещают на пластинку «Силуфол UV-254» или на стеклянную пластинку со слоем силикагеля, скрепленного гипсом. Колбу несколько раз обмывают небольшими порциями хлороформа, которые наносят в центр пятна. Для дополнительной очистки применяют двумерную хроматографию, используя в качестве 1-й подвижной фазы гексан — хлороформ (1 : 1), а в качестве 2-й — гексан — ацетон (4 : 1). После хроматографирования пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают одним из проявляющих реактивов. Rf валексона в данных условиях хроматографирования 0,6—0,7, при работе с пластинками «Силуфол» — 0,25— 0,30. Количественное определение проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски и размера пятен проб и стандартных растворов. Чувствительность метода 1—3 мкг препарата в пробе. Процент извлечения 90—95.
ЛИТЕРАТУРА
^ Лещев В. В., Королев Б. А. — Химия в сельском хоз-зе, 1975, № 9, с. 50.
Быховец А. И. — В кн.: Актуальные вопросы защиты растений в БССР. Минск, 1974, с. 81.
Петрова Т. М. Определение инсектицидов и продуктов их превращения в растительном материале (Метод, указания). Л., 1978, с. 25.
Поступила 20/III 1979 г.
