CC BY
293
ДОКЛАДЫ АКАДЕМИИ НАУК РЕСПУБЛИКИ ТАДЖИКИСТАН ___________________________________2008, том 51, №11_______________________________
БИОХИМИЯ
УДК616.153.93074:543.544
А.Х.Кадыров, Ф.Х.Мансурова, М.Б.Тошев, М.Р.Суриев
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВЫСШИХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ЗДОРОВЫХ ЛИЦ И БОЛЬНЫХ ЖЕЛЧНОКАМЕННОЙ БОЛЕЗНЬЮ НА РАЗЛИЧНЫХ ЭТАПАХ ЛИТОГЕНЕЗА
(Представлено академиком АН Республики Таджикистан Г.К.Мироджовым 22.05.2008 г.)
Благодаря использованию метода газожидкостной хроматографии стало возможным точное определение состава жирных кислот в биологических объектах, в том числе жирнокислотного состава липидов сыворотки крови, что позволяет получить ценную информацию о состоянии липидного обмена у человека в норме и при патологических состояниях [1-3].
Липиды крови содержат в себе ряд насыщенных и ненасыщенных жирных кислот с длиной углеводородной цепочки от С12 до С22. Учитывая перспективность использования в лабораториях газохроматографических методов исследования, мы попытались усовершенствовать методику экстрагирования липидов и определения жирных кислот на хроматографе «Хром-5» с пламенно-позиционным детектором.
При подборе метода экстракции необходимо принимать во внимание химические свойства липидов. Чтобы предотвратить окисление двойных связей, непосредственно перед проведением экстракции растворители хлороформ, метанол, эфир и гексан перегоняли на ректификационной колонке. Чистоту реактивов контролировали газохроматографическим методом.
Анализ литературы показывает, что до последнего времени отсутствуют сведения о качественном и количественном составе жирных кислот сыворотки крови больных на различных этапах литогенеза.
С целью получения более существенных результатов и установления нормы в качестве объекта исследования использовали сыворотку крови группы практически здоровых людей в возрасте от 26 до 60 лет (15 женщин и 7 мужчин), не страдающих заболеваниями желудочно-кишечного тракта.
Кровь для биохимических исследований брали утром, не менее чем через 12 ч после приёма пищи.
Результаты газохроматографических анализов жирных кислот 22 здоровых и 55 больных людей желчнокаменной болезнью приведены в таблице.
Как видно из данных таблицы и рисунка, в сыворотке крови практически здоровых лиц соотношение суммарных количеств насыщенных жирных кислот (НЖК), мононенасы-щенных (МНЖК) и полиненасыщенных (ПНЖК) жирных кислот равно 1.6:1.4:1.3 и состави-
ло 36.57, 32.58 и 29.75% соответственно. Среди обнаруженных нами четырех насыщенных жирных кислот преобладали пальмитиновая ^16:0, 25.45%) и стеариновая ^18:0, 8.87%), составляющие более 34% насыщенных жирных кислот, причём процентное содержание первой оказалось почти в три раза выше, чем второй.
Что касается мононенасыщенных жирных кислот на примере пальмитоолеиновой (^6:ь 7.17%) и олеиновой (^8:ь 25.4%) кислот, то содержание олеиновой кислоты превышало содержание пальмитоолеиновой почти в 3.5 раза.
Среди полиненасыщенных жирных кислот преобладала концентрация линолевой кислоты, составившая 23.45%.
В сыворотке крови больных желчнокаменной болезнью определено девять жирных кислот. Надо отметить, что по количественному содержанию все идентифицированные в сыворотке крови жирные кислоты можно разделить на три группы: 1 -я группа, составившая 95-97% суммы всех жирных кислот, содержала шесть жирных кислот - пальмитиновую (С16:0), пальмитоолеиновую (С16:1), стеариновую (С18:0), олеиновую (^^0, линолевую (С18:2) и арахидоновую (С20:4); 2-ая группа, составившая 3-4% суммы всех жирных кислот, состояла из семи жирных кислот - С10:4, С14:0, С14:1, С15:0, С15:1, С17:0, С17:1; 3-я группа, не превышающая 1-2% суммы всех жирных кислот, включала 15 жирных кислот - С12:0 ,С13:0, изо-С14:0,
С 14:2 , изо-С16:0, С16:2, С 18:0, С18:3, С19:0 , С20:0, С20:1 , С20: 2, С20:3, С20:5, С 22:0.
Таблица
Содержание жирных кислот в сыворотке крови здоровых и больных желчнокаменной болез-
нью (в % от общего содержания, М±m)
Жирные кислоты Кодовое обозна- чение Практически здоровые (п=22) Больные
физико-химическая стадия (п=30) хирургическая стадия (п=25)
Миристиновая ^4:0 і.39±0.09 2.43±0.09 2.26±0.05
Пентадекановая ^^15 :0 0.86±0.09 0.71±0.03 0.77±0.03
Пальмитиновая ^^16:0 25.5±1.00 30.70±1.35 36.0± 1.16
Пальмитоолеиновая ^^16:1 7.17±0.26 4.29±0.12 5.91±0.13
Стеариновая ^^18 :0 8.87±0.52 16.48±0.18 20.11±0.17
Олеиновая ^^18:1 25.4± 1.00 23.45±0.87 23.26±1.12
Линолевая ^^18 :2 23.5±0.32 18.49±0.13 20.16±0.17
Арахиновая ^0:0 - 9.18±0.29 2.48±0.06
Арахидоновая C20:4 6.30±0.21 5.62±0.21 5.80±0.22
^Насыщенных жирных кислот 36.57± 1.78 59.50±1.70 64.74±1.54
^Ненасыщенных жирных кислот 32.58±1.40 27.74±1.02 29.17±1.27
стадия стадия
Рис. 1. Зависимость содержания жирных кислот от стадии заболевания при желчнокаменной болезни.
Пики этих жирных кислот появляются на хроматограммах непостоянно, и площади этих пиков трудно поддаются количественной оценке. Полученные данные (табл., рис.1), свидетельствуют о том, что у больных физико-химической стадией ЖКБ, по сравнению с контролем, значительно возрастало содержание насыщенных жирных кислот - до 50.32%, в первую очередь за счёт возрастания концентрации пальмитиновой (С16:0) и стеариновой (С18:о) кислот, составившей 47.18%.
При газохроматографическом анализе жирных кислот сыворотки крови при физикохимической стадии ЖКБ идентифицирована арахиновая (С20:0) кислота - до 9.18%, не зарегистрированная в сыворотке крови практически здоровых лиц.
Содержание мононенасыщенных жирных кислот в сыворотке крови больных физико-химической стадией желчнокаменной болезни оказалось умеренно сниженным по сравнению с контролем и составило 27.74±1.02% от общей суммы жирных кислот, среди которых преобладало содержание олеиновой (С 18:1) и пальмитоолеиновой (С16:1) кислот - 27.74%. Однако отмечено заметное снижение концентрации полиненасыщенных жирных кислот - до 24.11±0.85% за счёт уменьшения содержания линолевой (С18:2) и арахидоновой (С20:4) жирных кислот.
Известно, что уровень литогенности желчи у больных коррелирует с интенсивностью ПОЛ (процесс окисления липидов). Как известно, интенсификация ПОЛ приводит к уменьшению содержания полиненасыщенных жирных кислот, деградации фосфолипидов, снижению активности мембраносвязанных ферментов, повышению проницаемости мембран. Поэтому снижение содержания полиненасыщенных жирных кислот при одновременном возрастании содержания насыщенных может способствовать увеличению литогенного потенциала желчи, а также процессам агрегации везикул и росту кристаллов холестерина.
Состав сывороточных жирных кислот у больных физико-химической и хирургической стадиями заболевания (табл., рис.1) оказался сходным.
Хирургическая стадия желчнокаменной болезни отличалась от физико-химической более высокой концентрацией пальмитиновой (С16:0) и стеариновой (С18:0) кислот, составивших 56.2% от общей суммы насыщенных, жирных кислот, составляющих 64.74±1.54%; снижением содержания арахиновой кислоты (С20:2), жирных кислот - до 2.48±0.06% и незначительным возрастанием содержания полиненасыщенных жирных кислот - до 25.96±0.21%. Линоленовая (С18:3) кислота в сыворотке крови на физико-химических и хирургических стадиях желчнокаменной болезни не была обнаружена.
Все проведенные экспериментальные работы по газохроматографическим исследованиям говорят о несомненном преобладании нарушений в содержании жирных кислот в сыворотке крови больных физико-химической стадией заболевания. Изменение количества отдельных жирных кислот у больных хирургической стадией желчнокаменной болезни, вероятно, связано с процессом формирования желчных конкрементов и с дальнейшим накоплением их в камнях.
Как мы отметили, на рис.1 приведены результаты данных, полученных при газохроматографическом исследовании состава жирных кислот в сыворотке крови, и на основании этих результатов построен график зависимости содержания жирных кислот от различных стадий заболевания при желчнокаменной болезни.
Вызывает интерес то, что в сыворотке крови практически здоровых лиц только шесть жирных кислот составляют в сумме 90% от общего содержания жирных кислот. Из них в максимальной концентрации представлена олеиновая (С18:1) кислота, составляющая
25.41±1.00%. Эта жирная кислота активно участвует в процессах метаболизма интактной и патологически изменённой клетки, тем более что, по данным литературы, она является одной из основных её компонентов
На рис. 2 приведена хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот в сыворотке крови у здоровых людей.
Рис. 2. Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот в сыворотке крови у здоровых людей:
1- С10:0, 2. С14:0, 3. С15:0, 4. С 16:1, 5- С16:0, 6.С17:1, 1-Сп-п 8.С18:0, 9.С18:1, Ю.С^^ Н.С^э, 12.С20:4.
Таким образом, на основе выявленной нами закономерности построен график зависимости содержания жирных кислот от различных стадий заболевания желчнокаменной болезнью. В хроматограммах жирных кислот сыворотки крови больных желчнокаменной болезнью доминирующими являются пальмитиновая, стеариновая, олеиновая и арахиновая, концентрация которых значительно возрастает до начала камнеобразования желчных конкрементов. Содержание линолевой и арахидоновой кислот, напротив, снижается.
Институт гастроэнтерологии АН Республики Таджикистан
Поступило 29.05.2008 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Берчфильд Г., Сторрс Э. - Газовая хроматография в биохимии. М.,1964, с.73-76.
2. Муродова М.М. Синтез и свойства некоторых производных холановых кислот. Дисс...канд. хим. наук. Душанбе, 2007, с.22-30.
3. Мансурова И.Д., Султанова УК. - Лаб. дело, 1985, №9, с. 524-527.
А.Х,Додиров, Ф.Х.Мансурова, М.Б.Тошев, М.Р.Суриев МУАЙЯН КАРДАНИ МИЦДОРИ ТУРШОБА^ОИ ОЛИИ КАРБОНЙ ДАР ТАРКИБИ ЗАРДОБИ ХУНИ ОДАМОНИ СИ^АТ ВА БЕМОРОНИ ГИРИФТОРИ САНГИ ТАЛХАДОН ДАР ДАВРА^ОИ ГУНОГУНИ
ЛИТОГЕНЕЗ
Дар мак;ола микдори туршобах,ои олии карбон дар таркиби зардоби хуни одамо-ни сих,ат ва беморони гирифтори санги талхадон дар даврах,ои гуногуни литогенез бо усули хроматографияи газй муайян ва му^оиса карда шудааст.
A.H.Kadyrov, F.H.Mansurova, M.V.Toschev, M.R.Suriev DETERMINATION OF CONTENTS OF HIGH ACIDS IN PLOD SERUM OF HEALTHY PEOPLE AND PATIENTS MITH ON DIFFEVENT STAGES
OF LITHO GENESIS
In this article by gas chromatography method was determined and compared the quantity of high fatty acids in the blood serum of healthy people and the patients with cholelithiasis in different stages of lithogenesis.
