CC BY
10
конъюгат, специфический к вытесняемой сыворотке. Фактом, доказывающим специфичность реакции, служит специфическое свечение второго препарата и отсутствие его в первом.
И, наконец, не менее важным преимуществом МФА перед другими является то, что этот метод приемлем не только для обнаружения всех бактериальных форм микроорганизмов, но и для определения риккетсий и некоторых вирусов. Нам представляется, что еще не исчерпаны все возможности экспрессного МФА, в частности повышения его чувствительности. Только путем 100% фиксации внесенных в препарат микроорганизмов последняя обещает возрасти в 100 раз. Неменьшие результаты принесут методы концентрации бактерий с нативного материала. Мы считаем полезными дальнейшие поиски совершенствования метода флюоресцирующих антител как экспрессного. Для улучшения его в качестве ускоренного перспективны поиски элективно-обогатительных сред.
Выводы
1. Из экспрессных методов индикации бактерий в объектах внешней среды наиболее чувствительным и специфичным является метод флюоресцирующих антител, которых претендует на положение эталонного экспресс-метода.
2. Иммуносуспензионные экспресс-методы индикации малочувствительны, проявляют большую возможность неспецифических показаний, ограничиваются индикацией только отдельных видов бактерий, в связи с чем практически малопригодны.
3. Из ускоренных методов индикации РНФ к кишечной группе бактерий достигает и превосходит чувствительность бактериологического метода. Для чумы чувствительность реакции весьма низкая.
Чувствительность МФА при подращивании проб достигает чувствительности бактериологического метода для кишечной группы и вибриона Мечникова через 4 часа, для чумы и туляремии через 18 часов.
ЛИТЕРАТУРА
Михайлов И. Ф. Ж. микробиол., 1965, № 4, с. 84,— Никитин В. М. Воен.-мед. ж., 1963, № 8, с. 42. — О р л о в А. В. Там же, 1958, № 9, с. 44. — Ш а н-таренкоИ. В. В кн.: Материалы 6-й Всесоюзн. конференции по вопросам санитарной микробиологии. М., 1966, с. 85. — Я ф а е в Р. X. Ж. микробиол., 1963, № 10, с. 83.
Поступила 5/VII 1966 г.
УДК 613.83-07 : 616.153.963.1-074
ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ СИАЛОВЫХ КИСЛОТ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ В САНИТАРНО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ
H.H. Пушкина, Г. Н. Клевцова
Биохимическая лаборатория Института общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина
АМН СССР, Москва
При изучении воздействия малых концентраций химических веществ особенную актуальность приобретает изыскание чувствительных методов выявления функциональных и органических изменений внутренней среды организма. Нередко приходится решать вопрос о функциональном состоянии печени и почек.
4*
51
Некоторые авторы указывают, что заболевания печени и почек сопровождаются изменением содержания гликопротеидов крови и мочи (М. А. Адо, 1964, 1965). Как известно, углеводным компонентом гликопротеидов является нейраминовая кислота, ацильные производные которой называют сиаловыми кислотами. Функция сиаловых кислот в организме еще слабо изучена, однако имеются данные об участии сиаловых кислот в механизмах защиты организма от действия вредных агентов (Э. Г. Ларский). Определение содержания сиаловых кислот в крови используют в клинике для диагностики заболеваний почек, гипертонической болезни, ревматизма и др. (С. Ф. Ахмеров; Т. И. Вольфсон и А. П. Голиков; В. М. Удод и Н. И. Кузьмак, и др.).
Настоящая работа предпринята с целью рекомендации метода определения сиаловых кислот в сыворотке крови при проведении санитарно-токсикологического эксперимента. Одним из достаточно чувствительных (И. В. Цветкова) и не требующих дефицитных реактивов способов исследования сиаловых кислот в сыворотке крови является метод Гесса. Принцип метода основан на образовании розового окрашивания при нагревании сиаловых кислот в смеси с уксусносернокислотным реактивом. Механизм образования окрашенного продукта окончательно не выяснен, однако
известно, что цветная реакция обусловлена наличием в молекуле сиаловых кислот определенных группировок, свойственных моносахаридам.
Метод Гесса непригоден при постановке экспериментов на мелких животных, так как требует не менее 1 мл сыворотки крови. Поэтому мы модифицировали метод Гесса так,
1 _ чтобы для определения сиаловых кислот мож-
/О гО ЗО 40 50 уинг но было ограничиться 0,05—0,1 мл сыворотки
крови. Это потребовало изменения соотноше-Калибровочный график ДЛЯ ния уксусной и серной кислот в реактиве, определения сиаловых кислот, ] ^ _ „ г
построенный по стандартному состоящем из их смеси. По Гессу, ледяную раствору Ы-ацетилнейрамино- уксусную и концентрированную серную кис-вой кислоты (СФ-4, 470 ммк). лоты берут в соотношении 95:5; нами получены наилучшие результаты при соотношении этих кислот, равном 9:1.
Ввиду того что мы предлагаем определять сиаловые кислоты в малом объеме сыворотки крови, для повышения чувствительности метода целесообразно пользоваться спектрофотометром СФ-4.
Рекомендуемый нами метод определения сиаловых кислот заключается в следующем. В пробирку с 0,90—0,95 мл дистиллированной воды прибавляют 0,1—0,5 мл сыворотки крови (без следов гемолиза), перемешивают и добавляют по каплям при тщательном взбалтывании 1 мл 10% раствора свежеприготовленной трихлоруксусной кислоты. Накрыв пробирку специальным колпачком, ее помещают на 5 мин. сначала в кипящую водяную баню, а затем на 5 мин. в лед. После этого центрифугируют в течение 5 мин. при 1000 об/мин.
Затем 0,5 мл надосадочной жидкости переносят в сухую чистую пробирку и добавляют 5 мл уксусносернокислотного реактива (ледяная уксусная и концентрированная серная кислоты в соотношении 9:1). Пробирку снова накрывают колпачком и ставят в кипящую водяную баню на 30 мин. После 5-минутного охлаждения в ледяной воде пробирки вынимают и оставляют в штативе в течение 30 мин. при комнатной температуре.
Содержание сиаловых кислот определяют на спектрофотометре СФ-4 с лампой накаливания при длине волны 470 ммк. Компенсирующей жидкостью служит уксусносернокислотный реактив. Калибровочный график строят по стандартному раствору Ы-ацетилнейраминовой кислоты (см. рисунок).
Для построения калибровочного графика берут 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора Ы-ацетилнейраминовой кислоты, 1 мл которого содержит 100 мкг вещества, что соответствует 10, 20, 30, 40 и 50 мкг Ы-ацетилнейраминовой кислоты в пробах. Объем жидкости в каждой пробирке доводят до 0,5 мл дистиллированной водой и прибавляют 5 мл уксус-носернокислотного реактива.
В случае отсутствия М-ацетилнейраминовой кислоты содержание сиаловых кислот можно выразить в единицах оптической плотности.
Следует учесть, что чувствительность метода зависит не только от соотношения уксусной и серной кислот, но и от качества применяемых кислот. Поэтому калибровочный , график следует строить каждый раз при использовании в реакции новой партии кислот. М-Ацетилнейраминовую кислоту можно выделить из белков сыворотки крови по методу, описанному Е. А. Ро-зенфельд и И. В. Цветковой.
При введении сс-2,4-динитрсфенола в концентрации 1/б 1-Обо в течение 25 дней нами обнаружено увеличение содержания сиаловых кислот в сыворотке крови, которое сопутствовало дистрофическим изменениям паренхимы почек (Т. А. Попов, Н. Н. Пушкина). Необходимо принять во внимание, что а-2,4-динитрофенол является «классическим почечным ядом».
При определении содержания сиаловых кислот в сьторотке крови у крыс, подвергавшихся в течение 80 дней ингаляционному круглосуточному воздействию парахлорфенилизоцианата1, вызывающего, по литературным данным, дегенеративные изменения в печени и почках, мы установили достоверное повышение уровня сиаловых кислот при концентрации 0,03 мг/м3. Пероральное 6-месячное введение фреонового масла2, вызывающего нарушение функции печени, показало увеличение содержания сиаловых кислот в сыворотке крови в зависимости от вводимой дозы (см. таблицу).
Содержание сиаловых кислот в сыворотке крови крыс
Вводимое вещество, доза
Количество животных
Содержание сиаловых кислот (в мг% М-ацетилнейраминовой кислоты)
М±т
/и Р
При ингаляционном воздействии
Чистый воздух (контроль) ПХФЦ; 0,С015 мг/м3 . . ПХФЦ; 0,03 мг/м3 . . .
152,8±4,7
186,7±34,6
263,0±28,0
При пероральном воздействии
Вода (контроль) ......
Вазелиновое масло (контроль) Фреоновое масло; 0,05 мг/кг . Фреоновое масло; 10 мг/кг
5 5
5
6
132,2± 10,8 135,4+17,3 155,7±29,4 350,8±25,5
0,1Я>0,05 3,9Р<0,01
0,5Р>0,05 6,9Р<0,001
Гистологические исследования выявили изменения в печени и отсутствие нарушений в почках крыс, подвергавшихся воздействию ПХФЦ в концентрациях 0,0015—0,03 мг/м3, и фреонового масла в дозах 0,05—100 мг/кг. По-видимому, увеличение содержания сиаловых кислот в сыворотке крови не является специфическим показателем функционального состояния почек, так как в одних случаях указанное увеличение сопровождается изменениями в печени, а в других — в почках. Однако достоверные сдвиги этого показателя, возникающие в ответ на введение не только больших, но и малых доз токсических веществ, несомненно, свидетельствуют об определенных нарушениях внутренней среды организма. Поэтому определение содержания
1 Опыты поставлены И. А. Зибиревой.
2 Опыты поставлены Т. Е. Нагибиной.
сиаловых кислот в сыворотке крови можно рекомендовать в качестве чувствительного показателя для оценки общего состояния и ответной реакции организма на вредное воздействие при проведении санитар но-токсиколо-гического эксперимента.
Выводы
1. Исследования показали возможность определения содержания сиаловых кислот в 0,05—0,1 мл сыворотки крови крыс.
2. Для увеличения чувствительности метода необходимо использовать уксусносернокислотный реактив с соотношением кислот 9:1. Рекомендуется проводить определение на спектрофотометре СФ-4.
3. Определение сиаловых кислот в сыворотке крови может служить неспецифическим показателем для оценки влияния токсических веществ при проведении санитарно-токсикологического эксперимента.
ЛИТЕРАТУРА
А д о М. А. Врач, дело, 1964, № 8, с. 20. - А д о М. А. Вестн. АМН СССР, 1965, № 5, с. 79. — А х м е р о в С. Ф. Казанск. мед. ж., 1963, № 1, с. 21. — В о л ь ф с о н Т. И., Г о л и к о в А. П. Лабор. дело, 1964, № 4, с. 206. — ЛарскийЭ. Г. Вопр. мед. химии, 1961, т. 5, с. 505. — Попов Т. А., Пушкина Н. Н. В кн.: Материалы конференции по итогам научных исследований Ин-та общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина за 1965 г. М., 1936, с. 72. - Удод В. М„ Кузьма« Н. И. Врач, дело, 1966, № 4, с. 142. — Ц в е т к о в а И. В., РозенфельдЕ. Л. Вопр. мед. химии, 1961, в. 5, с. 528. — ЦветковаИ. В. Лабор. дело, 1964, № 4, с. 210. — Н е s s Е., Coburn A.et al., J. clin. Invest., 1957, v. 36, p. 449.
Поступила 28/VI 1966 r.
УДК 614.73-07 : 621.384.668
АВТОМАТИЧЕСКАЯ СТАНЦИЯ ДЛЯ РЕГИСТРАЦИИ уФОНА
И. И. Боровков
Липецкая областная санэпидстанция
Передвижная радиометрическая лаборатория ПРЛ-60-Э, смонтированная Ленинградским научно-исследовательским институтом радиационной гигиены на автомобиле повышенной проходимости УАЗ-450-А, предназначена для определения уровня загрязненности радиоактивными веществами различных объектов внешней среды. Все оригинальные приборы выполнены на транзисторах по блочной системе и могут питаться от любой осветительной электросети переменного тока, стартерного аккумулятора автомобиля и батарей карманного фонаря. Лаборатория высоко оценена как в нашей стране, так и за рубежом. Круг практических задач, решаемых ею при минимальном штате обслуживания, достаточно велик.
С целью круглосуточного использования прибора ПГС-6 лаборатории для автоматической регистрации уровня у-фэна в контрольной точке Липецка нами было изготовлено простейшее программное реле времени (рис. 1, 2) для кратких и периодических включений прибора, во время которых уровень у-фона записывается на ленте самописца. Из-за тепловой инерции пера самописца и уменьшения показаний прибора до нуля во время его выключений эти записи отделены друг от друга, что позволяет привязывать их ко времени наблюдения и легко читать.
