Определение психоактивных веществ в образцах печени и крови методом тандемной масс-спектрометрии Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

70

ТЕЗИСЫ КОНФЕРЕНЦИИ: СУДЕБНО-ХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ствие информации о величинах пороговой концентрации для анализируемых веществ в ИХА.

В итоге следует отметить, что использование иммунных методов в практике судебно-химического отдела на протяжении 14 лет себя оправдало, но выявились некоторые потребности: проводить иммуноанализ не только в моче, но и в других биосредах, расширить спектр анализируемых веществ, автоматизировать системы анализа, что даст возможность получать сходимые результаты и ограничит контакт с инфицированными пробами. Для этих целей в мировой практике используются различные системы иммуноанализа, основанные на различных принципах детекции. Среди них: Architect (Abbott Diagnostics): Viva-E System, Viva-Jr System, Viva-ProE System, Viva-Twin System (Siemens); Evidence (Randox). Из преимуществ последнего - возможность работать с такими биологическими матрицами, как постмортальная кровь, печень; а также с нетрадиционным пока в России биологическим объектом - слюной лиц, находящихся в состоянии наркотического опьянения. Кроме того, этот производитель предлагает широкий набор реагентов, в том числе, на новые «синтетические каннабиноиды» и «дизайнерские наркотики».

I Определение психоактивных веществ в образцах печени и крови методом тандемной масс-спектрометрии

• А. Н. Кирюшин

ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России, Центральная химико-токсикологическая лаборатория НИИ Фармации

Аннотация: Доклад посвящен вопросам количественного определения психоактивных веществ в образцах печени и трупной крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектроме-трии. Разработана методика пробоподготовки образцов печени и крови, оптимизированы хроматографические и масспектрометрические условия анализа. Выполнена валидация методики количественного определения. Ключевые слова: печень, кровь, ВЭЖХ/МС/ МС, количественное определение

Determination of psychoactive substances in the blood and liver samples by tandem mass spectrometry

• A. N. Kiryushin

Abstract: Report focuses on quantifying psychoactive substances in the liver and blood samples using high performance liquid chromatography and tandem mass spectrometry. Sample preparation method for liver and blood samples was developed, chromatographic and mass-spectrometric assay conditions were optimized. Method of quantification analysis was validated. Keywords: liver, blood, HPLC / MS / MS quantification

ВВЕДЕНИЕ

В клинической практике для лечения различных заболеваний широко применяются лекарственные средства, обладающие психической активностью. Среди них наиболее распространены антидепрессанты, нейролептики, противосудорожные средства, антигистаминные препараты, кардиотропные и гипотензивные средства. Несмотря на то, что многие из этих препаратов отпускаются по

рецепту врача и находятся на предметно-количественном учете, они часто используются в немедицинских целях, могут являться причинами отравлений, как случайных, так и злоумышленных.

Для обнаружения лекарственных веществ в физиологических жидкостях и тканях человека требуются селективные, чувствительные методы анализа, способные обеспечить идентификацию веществ и их метаболитов с возможностью их количественного определения. Методы исследования должны обладать достаточно большим диапазоном определяемых концентраций при постоянной чувствительности. Требуются также надежные, производительные методы приготовления проб, применение которых исключало бы возможность потери целевого ана-лита и обеспечивало при этом получение воспроизводимых результатов.

Были выбраны наиболее распространенные представители целевых групп лекарственных соединений. Для них была разработана и валидированна методика идентификации и количественного определения.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

В данном исследовании для приготовления калибровочных образцов и контролей качества были использованы сертифицированные стандарты анализируемых веществ с чистотой более 98%: амитиптилин, кофеин, хлорпрамазин, хлорпротиксен, циталопрам, кломипра-мин, клозапин, папаверин, верапамил, дифенгидрамин, доксиламин, десметиклозапин, норверапамил, окскарба-зепин, пропранолол, метопролол, карбазепин-10,11-эпок-сид, 4-гидроксимидазолам, мидазолам, карведилол, нортриптилин, хинин. Образцы бланковой печени для приготовления модельных смесей.

Пробоподготовка выполнялась с использованием наборов Quechers(Интерлаб), планшетов Ostro (Waters). Хроматомасспектрометрический анализ выполнялся на QTRAP 4500 (AB Sciex) с хроматографом Flexar FX10 (Perkin Elmer). Для апробации валидированной методики были использованы образцы печени и крови человека, полученные от Бюро судебно-медицинской экспертизы г. Ярославль.

ВЫВОДЫ

При выполнении экспериментальных исследований выбран наиболее эффективный метод приготовления образцов печени, основанный на модифицированном методе Quechers, степень извлечения для анализируемых веществ составила от 55% до 95% в зависимости от ана-лита. Для приготовления образцов крови была выбрана методика с использованием планшетов Ostro, со степенью извлечения от 45 до 90% и вариабельностью не более 5%. Колебания выхода веществ не превышают 6%.

Разработана и валидирована методика для количественного анализа веществ с помощью LC/MS/MS. Диапазон измеряемых концентраций составил 1-1000 нг/г для объектов печени и 1-1000 нг/мл для объектов крови. Вариабельность результатов, полученных во время валида-ции, не превышает 15% для всех анализируемых веществ, точность измерений находится в пределах 100±15% во всем диапазоне концентраций. Методика была успешно испытана на реальных образцах печени и крови человека.

журнал СУДЕБНАЯ МЕДИЦИНА наука | практика | образование

www.cудебная-медицина.рф • том 1 №2, апрель 2015