CC BY
148
УДК 543.544:543.645.9
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИРОДНЫХ ТИОФЕНОВ ХРОМАГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
В.И. Дейнека 1 А.М. Григорьев 2 М.Ю. Третьяков 1
1 Белгородский государственный национальный исследовательский университет
Россия, 308015 Белгород,
ул. Победы, 85
E-mail: deineka@bsu.edu.ru
2ГУЗ Бюро судебно-медицинской экспертизы по Белгородской области
Россия, 308017 Белгород, ул. Волчанская, 159
Методом обращено-фазовой ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием исследовано разделение природных политиофенов, характерных для ряда растений рода бархатцы и некоторых других родов семейства сложноцветные. Обсуждаются особенности разделения тиофенов в элюентах с различными органическими составляющими: ацетонитрила, ацетона и 2-пропанола. Количественное содержание тиофенов определено с использованием спектрофотометрического метода, а их строение было подтверждено методом ГЖХ с масс-спектрометрическим детектированием. Исследованы возможности определения тиофенов в экстрактах методом ТСХ на пластинах (силикагелевых) «Сорбфил» с обнаружением по яркой голубой флуоресценции в УФ свете (354 нм).
Ключевые слова: ОФ ВЭЖХ, ТСХ, ГЖХ, спектрофотометрия, масс-спектрометрия, тиофены, Tagetes sp.
Введение
Паразитические нематоды растений отвечают за потерю от 10 до 50% урожая многих сельскохозяйственных культур во всем мире, поэтому для снижения численности этих организмов в почве приходится использовать экологически небезопасные синтетические препараты [1]. Альтернативой использованию таких веществ может служить применение природных тиофенов, накопление которых характерно для корней ряда растений семейства сложноцветные [2], и в первую очередь такого популярного цветкового декоративного растения, как бархатцы (Tagetes) [3]. Особо выделим это растение, поскольку лепестки его цветков являются уникальным сырьем для производства лютеина (и зеаксантина) для медицинской промышленности [4], что позволяет рассчитывать на возможность комплексной утилизации всего растения. Кроме того, для производства тиофенов возможно использование культуральных клеточных технологий [3]. Число различных производных тиофенов довольно велико, но важнейшими из них являются соединения Г-ГУ (схема 1).
Схема 1. Строение важнейших природных тиофенов
Природные тиофены не устойчивы при УФ-облучении: обладают специфической фототоксичностью [5], флуоресцируют синим светом [6]. Для определения тио-фенов с целью уточнения биосинтеза этих соединений в бархатцах известно использование капиллярной газо-жидкостной хроматографии [7, 8], причем комбинация этого метода с масс-спектрометрическим детектированием позволила определять минорные составляющие сложных смесей природных тиофенов. Тонкослойная хроматография на силикагелевых пластинах с флуоресцентным индикатором и с метанолом в качестве подвижной фазы были использованы для качественного анализа тиофенов после
опрыскивания пластин 0.4%-ным раствором изатина в концентрированной серной кислоте в УФ (254 нм) свете [9]. Заметно более простая процедура была использована в работе [8], в которой использована способность тиофенов флуоресцировать при УФ-облучении. Но BЭЖX в аналитических целях используется чаще. В работе, посвященной разработке быстрого метода анализа тиофенов в сложных смесях [і0], предложен обращено-фазовый вариант BЭЖX со сложной подвижной фазой на основе смеси ацетонитрил - вода (72:28), содержащей по іо мМ калий-фосфатного буфера (рН=з.2) и хлорида тетраметиламмония. Впрочем, в других работах использовали смеси ацетонитрила с водой без каких-либо добавок [іі, і2] или метанола с водой [із].
Цель настоящей работы - систематизация хроматографических методов анализа смеси тиофенов в условиях обращено-фазовой BЭЖX и нормально-фазовой TCX.
Материалы и методы исследования
Корни растений трех видов бархатцев: отклоненных (T. patula), прямостоячих (T. erecta) и тонколистных (T. tenuifolia) и других растений сушили на воздухе до воздушно-сухого состояния, измельчали и экстрагировали ацетонитрилом непосредственно в ступке при разминании пестиком. Экстракт отделяли от осадка и переносили в мерную колбу, туда же добавляли вторую порцию экстракта, полученную аналогично из твердого остатка и новой порции экстрагента. Раствор в колбе доводили до метки, и перед введением в хроматограф фильтровали через мембрану фторопластовую гидрофильную МФФК-зГ (0.45 мкм).
В работе использована хроматографическая система, составленная из насоса Al-tex ііоА, крана дозатора Rheodyne 7200 с петлей объемом 20 мкл. Xроматографиче-ская колонка: 4x250 мм, Диасфер-ll0-Cl8, 5 мкм. Детектор - спектрофотометрический с варьируемой длиной волны (детектор Nicolet LC/956з). Для регистрации и обработки хроматограмм использовали ПП МультиXром і.5.
Для разделения тиофенов по фракциям использовали TCX на пластинах «Cорбфилл» (і0хі0 см, силикагель) в подвижных фазах н-гексан - ацетон (і0:і; Rf = 0.59 - фракция і и і0:0.05 Rf = 0.80 - фракция 2 и Rf = 0.84 - фракция з).
Исследование фракций методом TX-MC: Xроматограф: Agilent 6890N. Колонка: кварцевая капиллярная EVDX-5ms (длина 25 м, внутренний диаметр 0.20 мм, толщина пленки неподвижной фазы 0.зз мкм). Газ-носитель: гелий, расход через колонку 0.8 мл/мин. Температурный режим колонки: градиент - начальная температура 50°C, выдержка 0.5 мин, подъем до !00°C со скоростью 99°/мин и выдержка і мин, подъем до зоо°C со скоростью з5°/мин и выдержка 20 мин; время записи хроматограммы 27 мин. Испаритель: режим без деления потока (0.4 мин), температура 270°C, объем вводимой пробы і мкл. Интерфейс детектора: температура 290°C. Детектор: масс-спектрометрический квадрупольный Agilent 5975C. Тип ионизации: электронный удар (70 эВ). Температура ионного источника 2з0°С Температура масс-фильтра !50°C. Диапазон масс: 45-550 а.е.м. ^стема обработки данных: MSD ChemStation Е.0і.00 (Agilent).
Для приготовления подвижных фаз использовали растворители: ацетон ч.д.а. ЗАО «Экос-!», ацетонитрил х.ч., ООО «^ромРесурс».
Результаты исследования и их обсуждение
BЭЖX тиофенов. Xроматограммы экстрактов боковых корней бархатцев трех видов, выращенных в условиях Белгорода, представлены на рис.і.
Очевидно, что набор тиофенов богаче в случае вида T. erecta: кроме одного основного пика, характерного для экстракта корней T. tenuifolia, на хроматограмме детектируются второй и третий компоненты, составляющие конкуренцию веществу II; в экстракте корней T. patula содержание этих компонент несколько меньше. Вещества I-III были идентифицированы с использованием разделения экстракта на три фракции тиофенов с последующим определением соединений методом ГЖХ с масс-спектрометрическим детектированием.
Рис. 1. Разделение тиофенов экстрактов корней растений рода Tagetes 1 - T. tenuifolia; 2 - T. patula; 3 - T. erecta; пунктир ная линия - Echinops sphaerocephalus.
Колонка: 250x4 мм, Диасфер-110-С18, 5 мкм; подвижная фаза: вода - ацетонтрил (2 : 8 об.),
1 мл/мин., детектор: 340 нм
При исследовании хроматографического поведения экстрактов корней бархатцев в различных составах подвижных фаз системы «ацетонитрил - вода» было установлено, что осложнений в разделении трех основных тиофенов (ИП) нет. Т.е. в таких случаях нет необходимости в усложнении состава подвижной фазы введением каких-либо добавок. Поскольку соединения ЦП можно отнести к гидрофобным, то интерес представляла возможность существования общности в аналитической зависимости относительного удерживания пар веществ, характерная для гидрофобных соединений [14]. Такая общность может быть использована для предположительной идентификации соединений при отсутствии стандартных образцов соединений. На карте относительного удерживания [15], в которой в качестве вещества сравнения использовано производное II, представлены данные, полученные при выполнении настоящей работы, и точки, построенные по литературным данным (для других стационарных фаз), рис.2. Относительное удерживание вещества I по данным, полученным в разные дни на протяжении одного года, описывается уравнением с тангенсом угла наклона, близким к единице:
^ОД) = 0.989-^&(П) + 0.090, (1)
с отклонением не более 0.003 логарифмические единицы, хотя были использованы две колонки различной длины (250 и 150 мм) с фазами Диасфер-110-С18 из различных партий сорбента, причем во втором случае колонка была без эндкеппинга. Отсутствие эндкеппинга не привело также и к отклонению точек, полученных для фазы без эндкеппинга, от общего уравнения относительного удерживания соединения III:
^&(Ш) = 0.909-^&(П) - 0.260, (2)
что может свидетельствовать о незначительности вклада водородной связи в суммарное удерживание соединения III, несмотря на наличие сложноэфирной группировки в молекуле.
Относительно согласованности полученных зависимостей с точками, построенными по литературным данным, отметим следующее:
1) относительное удерживание соединения I по данным работы [10] с небольшим для грубого указания времени удерживания (с точностью до одного знака после за-
пятой) соответствует уравнению (1); для данных работ [12] и [13] такое отклонение несколько больше;
Рис. 2. Карта разделения веществ (I - III)
2) относительное удерживание соединения III, напротив, хорошо соответствует уравнению (2) для данных работ [12] и [13]; а по данным работы [10] этому уравнению соответствует удерживание соединения, идентифицированного как вещество IV (^; при этом увеличения удерживания вещества III нельзя объяснить введением в элюент ион-парной добавки. Подобная ситуация больше похожа на ошибку в идентификации тиофенов, тем более, что в экстракте существует соединение, элюирующееся между веществами II и III, хорошо заметное при детектировании при длине волны 290 нм, рис. 3.
Рис. 3. Хроматограммы экстракта корней T. еrecta при различных длинах волн
Подвижная фаза 100% ацетонитрил.
Таким образом, вероятность образования водородных связей между остаточными силанольными группами и веществом III не велика, но иной тип взаимодействия тиофенов со стационарными фазами исключить полностью нельзя. Однако в целом возможность переноса параметров относительного удерживания с одних стацио-
нарных фаз на другие существует, если не игнорировать возможность варьирования вкладов специфических взаимодействий «сорбат - сорбент» для каждой из рассматриваемых стационарных фаз.
Расширение числа объектов исследования на корни других растений семейства сложноцветные (Compositae) показало, что все-таки существует необходимость уточнения состава подвижной фазы. В частности она продиктована тем, что при исследовании тиофенов корней другого растения - Echinops sphaerocephalus выясняется, что в быстрых элюентах под пиком вещества II находился еще один компонент - V, строение которого в настоящей работе не устанавливали. Полное разделение III и V возможно только при содержании воды в водно-ацетонитрильных подвижных фазах более 20 об.%, рис. 4.
тУ II
У I
100 - 80% А /V 1 1/к Л
-
11+ У
50 - Л. «♦ / \
V* 1М’ ** * ' 50% А + 25% В
I 50% А + 30% В
0 - 100% А и
0 5 10 мин
Рис. 4. Разделение веществ экстракта ЕеЫпорз sphaerocephalus На рисунке указаны объемные доли органических модификаторов водных подвижных фаз: А - ацетонитрил; В - ацетон. Условия записи хроматограммы см. рис.1. V - неидентифицированный компонент
Для поиска оптимальных элюентов в настоящей работе исследовали влияние добавок 2-пропанола и ацетона на разделение веществ II и V. При этом по тангенсам углов наклона зависимостей «логарифм фактора удерживания II как функция объемной доли модификатора» было найдено, что элюирующая сила убывает в ряду:
ацетон - 2-пропанол - ацетонитрил.
При этом только добавки ацетона изменяют селективность разделения компонентов II и V, что позволяет разделить эти вещества II и V за меньшее время хроматографирования при прочих равных условиях, рис. 4.
Следовательно, более эффективными элюентами (по сравнению со смесями ацетонитрила с водой) являются смеси воды, ацетонитрила и ацетона (например, состава 20:50:30 по объему, соответственно).
Проблему количественного определения тиофенов мы решали комбинацией спектрофотометрического и хроматографического методов с учетом того, что молярные коэффициенты экстинкции тиофенов (I-III) различаются не более чем на 1-2 % [16]. В работе был использован молярный коэффициент экстинкции для соединения I, £® = 24100 моль-1-дм3-см-1 [17]. Для количественного определения тиофенов в условиях ВЭЖХ выделяли концентрированную фракцию суммы соединений !+П, в получен-
ном концентрате определяли концентрацию тиофенов спектрофотометрическим методом; этот же концентрат затем использовали для градуировки отклика детектора, используя в дальнейшем этот же градуировочный коэффициент для веществ 1-111. Результаты определения тиофенов в некоторых объектах представлены в табл.
Таблица
Содержание тиофенов I—III в корнях бархатцев и мордовника
Объект Содержание тиофенов, г на 100 сухого материала
I II III Сумма
Tagetes tenuifolia (бархатцы тонколистные)
боковые корни (n = 3) 0.079 ± 0.005 0.722 ± 0.012 0.158 ± 0.003 0.959 ± 0.020
T. patula (бархатцы отклоненные)
боковые корни (n = 3) 0.114 ± 0.007 0.535 ± 0.020 0.035 ± 0.005 0.684 ± 0.032
T. erecta (бархатцы прямостоячие)
боковые корни (п = 7) 0.122 ± 0.005 0.172 ± 0.010 0.116 ± 0.010 0.418 ± 0.025
кора основного корня 0.012 0.071 0.827 0.911
основной корень 0.013 0.011 0.114 0.138
Echinops sphaerocephalus L. (мордовник шароголовый)
боковые корни (п = 2) 0.394 ± 0.020 0.957 ± 0.005 0.018 ± 0.002 1.269 ± 0.027
кора основного корня 0.121 4.177 1.482 5.780
основной корень 0.002 0.113 0.041 0.156
Эти данные в целом согласуются с результатами работы [18] при несколько более высоком содержание тиофенов, найденном в нашей работе. Однако, во-первых, более точные результаты могут быть получены только при использовании не доступных нам стандартных образцов тиофенов, поскольку расчет содержания тиофенов при УФ-детектировании осложнен несовпадением максимумов абсорбции этих соединений, рис. 5. Во-вторых, количественные характеристики накопления тиофенов могут в значительной степени зависеть от подготовки материала (корней). Действительно, накопление этих веществ наиболее высоко именно в боковых (hairy) корнях; при этом в основных корнях эти вещества локализованы во внешней части, что не удивительно, если предполагать, что биосинтез тиофенов определяется их защитной функцией. Кроме того, количественное соотношение веществ I—III во всех частях растения не одинаково - во внешней части основного корня преобладает соединение III. Наконец, накопление тиофенов в боковых корнях уменьшается при переходе от бархатцев тонколистных к бархатцам прямостоячим, что качественно также согласуется с выводами работы [19], при этом также совпадают тенденции к изменению соотношения тиофенов в экстрактах корней различных видов бархатцев.
Рис. 5. Спектры соединений І-ІІІ Растворитель: вода - ацетонитрил (20-80 об.). Спектр записан в кювете детектора
Проверяя сообщения о том, что производные тиофенов накапливаются в корнях других растений семейства сложноцветные, мы использовали разработанный метод для анализа экстрактов корней амброзии полыннолистной, пижмы обыкновенной и золотарника канадского. И только в корнях амброзии найдено соединение I - около
0.050 г на 100 г сухого материала (рис. 6.)
0 10 мин
Рис. 6. Хроматограммы экстрактов корней некоторых растений семейства Compositae Растения: 1 - внешняя часть основного корня T. erecta; 2 - Ambrosia artemisiifolia; 3 - Tanacetum vulgare;
4 -Solidago canadensis.
Тонкослойная хроматография
Для быстрого определения тиофенов I—III в растительных объектах очень удобна тонкослойная хроматография на алюминиевых пластинах Сорбфил с силика-гелевым адсорбционным слоем и с проявлением пятен под действием УФ-облучения (354 нм) благодаря интенсивной флуоресценции пятен тиофенов синим светом. Т. е. для обнаружения тиофенов нет необходимости в каких-либо дополнительных обработках пластин. Только нельзя использовать пластины с силикагелем, нанесенным на пластиковую подложку.
В качестве элюентов удобно использование н-гексана с добавками ацетона. Из соединений I-III наивысшей подвижностью обладают вещества I и II, причем хроматографическая подвижность II немногим выше, чем соединения I; эти вещества могут быть разделены только при минимальных добавках ацетона (либо в чистом гексане). Любопытно, что интенсивность флуоресценции пятен увеличивается с ростом числа тиофеновых колец в молекуле, поэтому пятно соединения I на пластине светится интенсивнее, чем пятно соединения II, которого обычно больше в анализируемой пробе.
Использование ТСХ позволяет легко обнаружить тиофены в экстракте ксантофиллов из лепестков цветков бархатцев (рис. 7). Обращенно-фазовая ВЭЖХ в данном случае может быть использована только после специфической пробоподготовки. Она
необходима для отделения сильно ли-пофильных диэфиров лютеина от умеренно липофильных тиофенов, поскольку при использовании безводного ацетонитрила (для обнаружения тиофе-нов) диэфиры лютеина выпадают в осадок.
На фотографии показаны последовательные флеш-фракции, полученные с патрона ДИАПАК с силикагелем, на который была нанесена сумма экстрактивных веществ, экстрагированных н-гексаном из лепестков цветков бархатцев. Слева направо увеличивали содержание ацетона во флеш-фракции. Крайний справа ряд - экстракт корней бархатцев. Метод ТСХ был использован нами для исследования возможности Рис. 7. ТСХ-граммы фракций экстракта лепе- очистки ксантофиллов от тиофенов ме-
стков цветков бархатцев тодом флеш-хроматографии [20].
Этот же метод позволил установить наличие тиофенов в препарате ОРО ГЛО (Кемин, Бельгия), предназначенном для использования в качестве кормовой добавки при кормлении кур-несушек для увеличения накопления ксантофиллов в желтке яиц.
ГЖХ и масс-спектрометрия
Для идентификации тиофенов была использована газовая хроматография на капиллярной колонке (условия см. выше) с масс-спектрометрическим детектированием. Индивидуальные тиофены выделяли из смеси методом обращено-фазовой ВЭЖХ в выше изложенных условиях. Затем полученные фракции исследовали методом ГЖХ, записывая масс-спектры индивидуальных соединений 1-111 (рис. 8).
Молекулярные ионы соединений I-III (и в особенности, I, II) обладают значительной прочностью, что неудивительно ввиду полностью сопряженного характера их структур. Тем не менее, степень их фрагментации является достаточной для использования масс-спектров для расшифровки структур. Так, фрагментация молекулярного иона тримера I происходит через последовательные выбросы серы ([Ci2#8S2]+', m/z 216 и [Ci2#8S]+% m/z 184), а также через ионы [C11H7SJ4-, m/z 203, [CnH7iS]+, m/z 171, и [C5H3S2]+, m/z 127, дающие интенсивные пики в спектре и, по-видимому, образующими прочные циклические структуры. Фрагментация молекулярных ионов соединений II, III в целом протекает с образованием подобных фрагментов; для молекулярного иона соединения III характерно отщепление молекул CO2 ([C13H12SJ4-, m/z 232) и уксусной кислоты ([C12H8S2]+*, интенсивный пик с m/z 216).
Выводы
Таким образом, в настоящей работе выполнено комплексное исследование применимости хроматографических методов для определения природных тиофенов. Показано, что разделение (и определение) природных тиофенов в экстрактах различных частей растений рода Tagetes может быть выполнено с использованием предложенных в работе условий для ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием, ТСХ по флуоресценции пятен в УФ-свете и ГЖХ с масс-спектрометрическим детектированием.
Список литературы
1. Riga E., Hooper C., Potter J. In vitro effect of marigold seed exudates on plant parasitic nematodes // Phytoprotection. - 2005. - Vol. 86. - P. 31-35.
2. Gommers F.J., Voorin’tholt D.J.M. Chemotaxonomy of Compositae related to their host suitability for Pratylenchus penetrans / / Neth. J. Pl. Path. - 1976. - Vol. 82. - P.1-8.
Рис. 8. Масс-спектры тиофенов I - III
3. Mukundan U., Hjorso M.A. Growth and thiophene accumulation by hairy root cultures of Tagetes patula in media of varying initial pH / / Plant Cell Rep. - 1991. - Vol. 9. - P. 627-630.
4. Дейнека В.И, Сорокопудов В.Н., Дейнека Л.А., Третьяков М.Ю. Исследование цветков Tagetes sp. как источника лютеина // Хим.-фарм. ж. - 2007. - Т. 41. - № 10. - С. 30-32
5. Rampone W.M., McCullough J.L., Weinstein G.D., Nail Towers G.H., Berns M.W., Abeyse-kera B. Characterization of cutaneous phototoxicity induced by topical alpha-terthienyl and ultraviolet A radiation // J. Invest. Dermatol. - 1986. - Vol. 87. - P.354-357.
6. Zeichmeister L., Sease J.W. A blue-fluorescing compound, terthienyl, isolated from marigolds // J. Amer. Chem. Soc. - 1947. - Vol. 69. - P. 273-275.
7. Margl L., Tei A., Gyurajan I., Wink M. GLC and GLC-MS analysis of thiophene derivatives in plants and in in vitro cultures of Tagetes patula L. (Asteraceae) // Z. Naturforsch. - 2002. -Band. 57. - S. 63-71.
8. Szarka Sz., Hethelyi E., Lemberkovics E., Kuzovkina I.N., Banyai P., Szoke E. GC and GC-MS studies on the essential oil and thiophenes from Tagetes patula L. // Chromatographia. - 2006. -Vol. 63. - S. 67-73.
9. Benavides M.P., Caso O.H. Plant regeneration and thiophene formation in tissue cultures of Tagetes mendocina / / Plant Cell Tissue Organ Cult. - 1993. - Vol. 35. - P. 211-215.
10. Downum K.R., Towers G.H.N. Analysis of thiophenes in the Tageteae (Asteraceae) by HPLC // J. Nat. Prod. - 1983. - Vol. 46. - P. 98-103.
11. Sutfeld R. Distribution of thiophene derivatives in different organs of Tagetes patula seedlings grown under various conditions / / Planta. - 1982. - Vol. 156. - P. 536-540.
12. Croes A.F., van den Berg A.J.R., Bosveld M., Breteler H., Wullems G.J. Thiophene accumulation in relation to morphology in roots Tagetes patula. Effects of auxin and transformation by Agrobacterium // Planta. - 1989. - Vol. 179. - P. 43-50.
13. Mukundan U., Hjortso M.A. Effect of fungal elicitor on thiophene production in hairy root cultures of Tagetes patula // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1990. - Vol. 33. - P. 145 - 147
14. Дейнека В.И. Экспериментальное обоснование метода относительного анализа удерживания в ВЭЖХ // Ж. физ. химии. -2006. - Т. 80, № 3. - С. 507-510.
15. Дейнека В.И. Карта хроматографического разделения и инкрементные зависимости в методе относительного анализа удерживания в ВЭЖХ // Ж. физ. химии. - 2006. - Т. 80, № 3. - С. 511-516.
16. Norton R.A., Finlayson A.J., Towers G.H.N. Thiophene production by crown galls and callus tissues of Tagetes patula / / Phytochemistry. - 1985. - Vol. 24. - P. 719-722.
17. Sease J.W., Zeichmeister L. Chromatographic and spectral characteristics of some polythienyls. J. Amer. Chem Soc. - 1947. - Vol. 69. - P. 270-273.
18. Munkundan U., Hjorsto M.A. Effect of fungal elicitor on thiophene production in hairy root cultures of Tagetes patula / / Appl. Microbiol. Biotechn. - 1990. - Vol. 33. - P. 145-147.
19. Maritti M., Piccaglia R., Marotti I., Venturi G. Tagetes spp.: a source of biologically active substances / Intern/. South Eur. Symp. Non-Food Crops: From Agriculture to Industry. Bolognia, Italy, 15-16 May 2003 http://www.ienica.net/italyseminar/italyseminarposters.html/
20. Дейнека В.И., Третьяков М.Ю., Сорокопудов В.Н. Флэш-хроматография: Очистка ксантофиллов бархатцев от тиофенов // Хроматография и хромато-масс-спектрометрия. Всероссийский симпозиум. Москва, 14-18 апр. 2008 г., Тезисы. - М.: Граница, 2008. - С. 114.
CHROMATOGRAPHIC METHODS FOR NATURAL THIOPHENES DETERMINATION
V.I. Deineka 1 A.M. Grigoriev 2 M.Yu. Tretyakov 1
1 Belgorod State National
Research
University
Pobedy St., 85, Belgorod, 308015, Russia
E-mail: deineka@bsu.edu.ru 2Belgorod Region Forensic Medical Examination Bureau
Volchanskaya St., 159, Belgorod, 308017, Russia
Reversed-phase HPLC with spectrophotometric detection has been used for the investigation of resolution of natural thiophenes being the Tagetes characteristic substances common for some other Asteraceae plants. Particularities of the resolution in mobile phases with acetonitrile, acetone and 2-propanol are discussed. Quantitative determination of thiophenes has been performed spectrophotometrically, the structure has been proved by GC with MS-detection. Determination of thiophenes by TLC upon “SORBFIL” silica plates may be performed due to blue fluorescence at UV (354 nm) excitation.
Key words: RP HPLC, TLC, GC, spectrophotometry, MS, thiophene, Tagetes sp.
