CC BY
501
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
УДК 615.322.011:582.711
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДЛИННОСТИ ПЛОДОВ И СИРОПА ШИПОВНИКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
В.В. Вершинина, В.А. Куркин, ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»
Куркин Владимир Александрович - e-mail: vakur@samaramaii.ru
Разработаны методики определения аскорбиновой кислоты в плодах шиповника коричного и лекарственном средстве «Шиповника сироп витаминизированный» с использованием тонкослойной хроматографии (ТСХ). Разработанные методики ТСХ-анализа позволяют более объективно оценивать подлинность сырья и препаратов высоковитаминных видов шиповника и отличать их от шиповника собачьего, для которого характерно низкое содержание аскорбиновой кислоты.
Ключевые слова: шиповник коричный, шиповник собачий, Rosa cinnamomea L., Rosa canina L. плоды шиповника, сироп шиповника, аскорбиновая кислота, тонкослойная хроматография.
The methodics of the determination of ascorbic acid in the Rosa cinnamomea L., fruits and preparation «Rosae syrups vitaminized» with the using of thin layer chromatography (TLC) there were development. The development methodics of TLC-analysis make it possible to determine of the identity of the drugs and preparations of high-vitamin Rosae species and to distinguish of their from Rosa canina L., for which is typical the low content of ascorbic acid.
Key words: Rosa cinnamomea L., Rosa canina L., Rosae fruits, Rosae syrups, ascorbic acid, thin layer chromatography.
Введение
Шиповник коричный (Rosa cinnamomea L.) и другие фармакопейные виды шиповника широко применяются как ценный источник поливитаминного сырья, однако содержание одного из важнейших витаминов - аскорбиновой кислоты - в плодах шиповника сильно варьирует [1-6]. В настоящее время для обнаружения аскорбиновой кислоты в плодах шиповника рекомендуются лишь пробирочные реакции с раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, а также с реактивом Фелинга 1 и 2 и раствором серебра нитрата, однако с вышеперечисленными реактивами дают положительную реакцию и другие соединения, способные окисляться или имеющие углеводную природу. Возможно, это обстоятельство и является причиной отсутствия в фармакопейной статье 38 «Плоды шиповника» (ГФ СССР XI издания) раздела «Качественные реакции» [2]. Данная проблема стандартизации не решена и для лекарственных средств, получаемых из плодов шиповника, в частности, препарата «Шиповника сироп витаминизированный», в случае которого обнаружение аскорбиновой кислоты имеет принципиальное значение.
Цель исследования
Целью настоящих исследований является разработка методик качественного анализа аскорбиновой кислоты в плодах шиповника и лекарственном средстве «Шиповника сироп витаминизированный» с использованием тонкослойной хроматографии.
Материал и методы
Материалом исследования явились плоды шиповника коричного (Rosa cinnamomea L.), плоды шиповника собачьего (Rosa canina L.), собранные в Самарской области, а также промышленные образцы плодов шиповника (ОАО Красногорсклексредства» Московской области, ПКФ «Фитофарм» Краснодарского края) и препарата «Шиповника сироп витаминизированный» (ОАО «Фармстандарт-УфаВИТА»).
Экстракцию плодов шиповника осуществляли водой, 40%, 70% и 95% этиловым спиртом.
ТСХ-анализ осуществляли с использованием хроматографических пластинок «Силуфол УФ 254» и «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» (система растворителей: н-бутанол - уксусная кислота - вода, 4:1:2). УФ-спектры раствора рабочего стандартного образца (РСО) аскорбиновой кислоты регистрировали на спектрофотометре «Specord 40» (Analytik Jena). Детекцию аскорбиновой кислоты осуществляли просмотром хроматограмм в УФ-свете (хроматоскоп) при длине волны 254 нм, а также последующим проявлением раствором 2,6 -дихлорфенолиндофенолята натрия.
Результаты и их обсуждение
В качестве оптимального экстрагента для извлечения аскорбиновой кислоты из плодов шиповника выбран 70% этиловый спирт, в случае которого достигается более четкое разделение компонентов, содержащихся в сырье данного растения (рис. 1). Детекцию аскорбиновой кислоты на хроматограммах целесообразно вначале осуществлять в УФ-свете при длине волны 254 нм, принимая во внимание то обстоятельство, что данное вещество имеет четкий максимум при длине волны 261 нм (рис. 2). Затем обнаружение аскорбиновой кислоты на хроматограммах осуществляют проявлением раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята
натрия. При этом на розовом фоне аскорбиновая кислота обнаруживается в виде белого пятна с величиной около
0,5 (рис. 1).
РИС. 1.
Схема тонкослойной хроматограммы извлечений из плодов и сиропа шиповника.
Обозначения: 1. Плоды шиповника коричного (водно-спиртовое извлечение). 2. Плоды шиповника коричного (настой). 3. Раствор РСО аскорбиновой кислоты. 4. Плоды шиповника собачьего. 5. Плоды шиповника (промышленный образец). 6. Сироп из плодов шиповника витаминизированный (ОАО «Фармстандарт-УфаВИТА»).
Длина волны, н
РИС. 2.
УФ-спектр раствора РСО аскорбиновой кислоты.
Методика ТСХ-анализа плодов шиповника. В колбу емкостью 30 мл со шлифом помещают 1,0 г измельченных плодов шиповника, прибавляют 10 мл 70% этилового спирта, присоединяют обратный холодильник и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. Полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр («красная» полоса). На линию старта пластинки «Силуфол УФ 254» или «Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ» микропипеткой наносят 0,01 мл полученного извлечения из плодов шиповника, рядом наносят 0,01 мл 0,1% раствора РСО аскорбиновой кислоты. Хроматографическую пластинку помещают в камеру, которую предварительно насыщают не менее 1 ч смесью растворителей: н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 13 см (силуфол) или 8 см (сорбфил), пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин. и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. На светлом флуоресцирующем фоне на уровне фиолетового пятна стандарта обнаруживается пятно фиолетового цвета с величиной Rf около 0,5 (аскорбиновая кислота).
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
Затем хроматограмму проявляют из пульверизатора раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. При этом на розовом фоне аскорбиновая кислота обнаруживается в виде белого пятна цвета с величиной Rf около 0,5 (допускается наличие других пятен).
Методика ТСХ-анализа препарата «Шиповника сироп витаминизированный». 5 мл сиропа шиповника тщательно перемешивают с 5 мл ацетона, отделяют ацетоновый (верхний) слой и затем его упаривают на водяной бане досуха. К сухому остатку добавляют 2-3 капли 70% этилового спирта и полученный раствор в объеме 0,01 мл микропипеткой наносят на линию старта пластинки «Силуфол УФ 254» или «Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ», рядом наносят 0,01 мл 0,1% раствора РСО аскорбиновой кислоты. Хроматографическую пластинку помещают в камеру, которую предварительно насыщают не менее 1 ч смесью растворителей: н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 13 см (силуфол) или 8 см (сорбфил), пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин. и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм. На светлом флуоресцирующем фоне на уровне фиолетового пятна стандарта обнаруживается пятно фиолетового цвета с величиной Rf около 0,5 (аскорбиновая кислота). Затем хроматограмму проявляют из пульверизатора раствором 2,6-дихлор-фенолиндофенолята натрия. При этом на розовом фоне аскорбиновая кислота обнаруживается в виде белого пятна цвета с величиной Rf около 0,5 (допускается наличие других пятен).
Примечание
1. Приготовление раствора РСО аскорбиновой кислоты.
0,025 г (точная навеска) РСО аскорбиновой кислоты растворяют в мерной колбе вместимостью 25 мл в 10 мл 70% этилового спирта. Доводят объем раствора до метки 70% этиловым спиртом и перемешивают.
2. Приготовление раствора 2,6-дихлорфенолин-дофенолята натрия. 0,22 г 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия растворяют в 500 мл свежепрокипяченной и охлажденной очищенной воды при энергичном взбалтывании (для растворения навески раствор оставляют на ночь). Раствор фильтруют в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки.
Следует отметить, что аскорбиновая кислота четко обнаруживается в плодах шиповника коричного и в лекарственном средстве «Шиповника сироп витаминизированный»,
однако в последнем случае ТСХ-анализу должна предшествовать пробоподготовка в виде обработки сиропа ацетоном.
Интересно, что не во всех промышленных образцах плодов шиповника обнаруживается аскорбиновая кислота (рис. 1). Аналогичный результат наблюдается и в случае шиповника собачьего (рис. 1), что подтверждает литературные данные о низком содержании аскорбиновой кислоты в данном виде.
На наш взгляд, разработанные методики ТСХ-анализа позволят, во-первых, четко различать высоковитаминные виды шиповника от низковитаминных, а во-вторых, объективно обнаруживать аскорбиновую кислоту в витаминизированных или витаминных лекарственных средствах, в состав которых включен данный витамин («Шиповника сироп витаминизированный», «Аскорутин», «Аскорбиновая кислота с глюкозой» и др.).
Выводы
1. Разработаны методики определения аскорбиновой кислоты в плодах шиповника коричного и лекарственном средстве «Шиповника сироп витаминизированный» с использованием тонкослойной хроматографии и РСО аскорбиновой кислоты.
2. Разработанные методики ТСХ-анализа позволяют более объективно оценивать подлинность сырья и препаратов высоковитаминных видов шиповника и отличать их от шиповника собачьего, для которого характерно низкое содержание.
3. Методики ТСХ-анализа рекомендованы для включены в проекты фармакопейных статей на плоды шиповника (раздел «Качественные реакции») и лекарственные средства, содержащие аскорбиновую кислоту (раздел «Подлинность»).
из
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственный реестр лекарственных средств. Т. 1. Официальное издание, М.: ООО «Информационно-издательское агентство «Ремедиум», 2008. 1398 с.
2.Государственная Фармакопея СССР. Одиннадцатое издание. Вып. 2. М.: Медицина, 1990. 400 с.
3.Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов.). 2-е изд., перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. 1239 с.
4. Куркин В.А. Основы фитотерапии: Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2009. 963 с.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Ну^апдеасеае - Иа!огадасеае. СПб.: Наука, 1987. 326 с.
6. ФС 42-2509-95. Сироп из плодов шиповника. М. 1995. 5 с.
