Определение острой токсичности препарата «Эмикон» на карпах Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

DOI: 10.24411/2074-5036-2020-10028 УДК: 619:615.015.35:616-091

Ключевые слова: доклинические исследования, острая токсичность, препарат «Эмикон», крустацеозы, карп, средняя летальная доза (ЛД50)

Key words: preclinical studies, acute toxicity, drug «Emicon», crustaceosis, carp, median lethal dose (LD50)

Толовина Н.А., 2Енгашев С.В., 3Гончарова М.Н., 2Корсакова М.В., хСафронов Д.С.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТРОЙ ТОКСИЧНОСТИ ПРЕПАРАТА «ЭМИКОН» НА КАРПАХ

DETERMINATION OF ACUTE TOXICITY OF "EMICON" ON FISH

'Дмитровский рыбохозяйственный технологический институт (филиал) ФГБОУ ВО «АГТУ» Адрес: 141821, Россия, Московская обл., Дмитровский р-он, п. Рыбное, 36

Dmitrov Fish Farming Industrial Institute (Branch), FSBEI «Astrakhan State Technical University» Address: 141821, Russia, Moscow area, Dmitrov district, Rybnoe, 36 2ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина» Адрес: 109472, Россия, Москва, ул. Академика Скрябина, 23 Moscow State Academy of Veterinary Medicine and Biotechnology named after K.I. Scriabin Address: 109472, Russia, Moscow, Academician Scriabin street, 23 3ООО «НВЦ Агроветзащита» Адрес: 129329, Россия, Москва, Игарский проезд, д. 4, стр. 2

NVT Agrovetzaschita Address: 129329, Russia, Moscow, Igarsky passage, 4, parade 2

Головина Нина Александровна, д. б. н., профессор, заведующая кафедрой «Аквакультура и экология».

E-mail: [email protected]

Golovina Nina Aleksandrovna, PhD in Biological Science, Professor. E-mail: [email protected]. Енгашев Сергей Владимирович, д. в. н., профессор, академик РАН. E-mail: [email protected].

Engashev Sergey Vladimirovich, PhD in Veterinary Science, Professor, academician of the RAS.

E-mail: [email protected]

Гончарова Маргарита Николаевна, кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник.

E-mail: [email protected]

Goncharova Margarita Nikolaevna, PhD of Veterinary Sciences, senior scientist. E-mail: [email protected] Корсакова Мария Валерьевна, аспирант кафедры паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы.

E-mail: [email protected] Korsakova Maria Valeryevna, Postgraduate at the Department of parasitology and veterinary sanitary expertise.

E-mail: [email protected] Сафронов Дмитрий Сергеевич, студент кафедры «Аквакультура и экология». E-mail: [email protected] Safronov Dmitry Sergeevich, Student of Department «Aquaculture and ecology». E-mail: [email protected]

Аннотация. Оценка острой токсичности является необходимым этапом доклинических исследований, направленных на получение доказательств безопасности лекарственных средств. Цель настоящей работы - определение острой токсичности нового противопаразитарного препарата «Эмикон» на карпах. Приготовленную суспензию препарата с помощью катетера вводили рыбам массой 140-150 г в передний отдел кишечника порционно через каждые 2 часа. Регистрировали сроки развития интоксикации карпов с подробным описанием наблюдаемой клинической картины. Патологоанатомическое вскрытие погибших рыб проводили через 5 и 14 суток после введения препарата. При пероральном введении препарата «Эмикон» карпам было установлено значение средней летальной дозы (ЛД50), которое составило 10416,7 мг/кг массы рыб. Согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007 - 76) [2] препарат «Эмикон» может быть отнесён к 4-му классу токсичности - малоопасные вещества.

Summary. Acute toxicity evaluation is an indispensable stage ofpreclinical studies aimed at obtaining evidence of drug safety. The purpose ofthis work is to determine the acute toxicity ofthe new antiparasitic drug "Emicon" on carps. Prepared suspension ofthe drug were injected intragastric into fish weighing 140-150g. via a catheter portionwise every 2 hours. The period ofcarp intoxication progrees was noted with a detailed description of the observed clinical presentation. Pathological autopsy of dead fish was conducted 5 and 14 days after the drug injection. Oral administration of "Emicon" drug into Carp showed the median lethal dose (LD50) which equals 10416,7 mg / kg of fish weight. According to the generally accepted hygienic classification (GOST 12.1.007 - 76) [2], the drug "Emicon" can be assigned to the 4th toxicity class - low hazardous substances.

Введение

Успех современного рыбоводства зависит в значительной степени от обеспечения его эпизоотического благополучия. В природных экосистемах у рыб редко отмечаются массовые заражения паразитическими рачками, тогда как в условиях аквакультуры крустацео-зы способны причинять значительный экономический ущерб рыбоводным хозяйствам [1]. Исходя из этого компанией ООО «Научно-внедренческий центр Агроветзащита» разработан и представлен для исследования противопаразитарный препарат «Эмикон» в форме порошка для орального применения, действующее вещество которого относится к группе авермектинов и обладает активностью в отношении паразитических ракообразных.

К одним из обязательных требований, необходимых для внедрения в ветеринарную практику новых лекарственных средств, относится изучение их безопасности для целевых животных. Острая токсичность, являющаяся токсикометрической характеристикой лекарственного препарата, выражает его способность вызывать гибель животных при введении в течение суток и служит для определения переносимых, токсических и летальных доз фармакологического вещества и причин наступления гибели животных с анализом клинической картины интоксикации [3, 4].

Цель работы - изучение острой токсичности препарата «Эмикон» на карпах при пе-роральном введении и определение токсических параметров.

Материалы и методы

Исследования проводились в условиях ак-вариального помещения Дмитровского рыбо-хозяйственного технологического института (филиал) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Астраханский государственный технический университет» (ДРТИ ФГБОУ ВО «АГТУ»). Схему опыта разрабатывали на основании имеющегося исходного показателя ЛД50 действующего вещества для карпов [5].

При проведении опытов применялись биологические, клинические и патоморфо-логические методы исследований.

В эксперименте были использованы чешуйчатые карпы массой 140-150 г, в возрасте 18 месяцев в количестве 42 экз. Предварительно рыбы содержались в пластиковом бассейне объемом 300 л. Затем было сформировано 6 опытных и 1 контрольная группы рыб по 6 экз. в каждой, которые пересадили в проточные аквариумы объемом 70 л. Рыбам первой опытной группы препарат задавали в дозе 2,5 г/кг, второй - 5,0 г/кг, третьей -7,5 г/кг, четвертой - 10 г/кг, пятой - 12,5 г/кг, шестой - 15 г/кг, а контрольной группе рыб вводили суспензию из вспомогательных веществ в дозе 15 г/кг. Температура на протяжении всего эксперимента составляла +15 ...+17°С, рН - 8,1, содержание кислорода в воде - 8,3-8,7 мг/л. Рыб в контрольной и опытных группах кормили экструдирован-ным кормом для молоди карпа в количестве 1 % от ихтиомассы.

Препарат рекомендован для карповых рыб в дозе 0,15 г на 1 кг массы рыб. Непосредственно перед введением «Эмикон» смешивали с водой до получения густой суспензии. Для подготовки исследуемого образца к введению в передний отдел кишечника было экспериментально выбрано соотношение максимально возможного количества препарата к воде 1 : 5, при котором образуется суспензия, способная проходить сквозь просвет катетера. Аналогичным образом готовили контрольный образец из вспомогательных веществ.

На основании предварительных опытов установлена невозможность однократного введения доз, вызывающих гибель рыб, поэтому суспензии препарата с помощью катетера вводили рыбам в передний отдел кишечника от 2 до 4 раз в течение суток порционно с интервалом 2 часа. Для каждой рыбы производился перерасчет в соответствии с живой массой. Карпам контрольной группы вводили суспензию из вспомогательных веществ.

Расчет ЛД50 произведен по методу Кёрбе-ра с использованием формулы:

где ЛД100 — доза изучаемого вещества, которая вызвала смертельный исход у всей группы рыб;

Е — интервал между каждыми двумя смежными дозами;

Д — среднее арифметическое из числа рыб, у которых наблюдался летальный исход под влиянием каждых двух смежных доз;

N — число рыб в каждой группе;

Е — сумма.

Результаты исследований. Схема и результаты опыта по оценке острой токсичности препарата «Эмикон» на годовиках карпа в лабораторных условиях описаны в таблице № 1. Дозы «Эмикона» 2,5 г/кг и 5,0 г/кг ихтиомассы, введенные за 2 приема, не вызывали гибели и выраженных клинико-пато-логических признаков токсикоза у подопытных рыб. После каждого введения суспензии препарата у рыб в течение первых 2-3-х часов наблюдали незначительное угнетение, вялость, малоподвижность. В дальнейшем общее состояние у большинства рыб восстановилось, только у отдельных рыб координация движений была немного нарушена.

При введении дозы препарата 7,5 г/кг их-тиомассы (1,125 г / экз.) за 3 приема каждые

2 часа, к концу опыта (14 день) погибла 1 из 6 рыб. У всех карпов первые 3-6 дней наблюдали клинические признаки токсического воздействия — замедленное поведение, вздутие брюшка. В конце опыта выжившие рыбы начинали брать корм. Кишечник немного гиперемированный, внутренние органы близки к норме, сдавленные.

При введении дозы препарата 10 г/кг ихтиомассы за 3 приема к концу опыта погибло 3 рыбы с проявлением у погибших и выживших особей таких же клинических признаков токсического воздействия, как и в группе № 2.

При введении дозы препарата 12,5 г/кг их-тиомассы за 4 приема гибель к концу опыта составила 4 экз. из 6 рыб с проявлением у погибших рыб признаков токсикоза — угнетенное и замедленное поведение, сильно вздутое брюшко, которое сохранялось до гибели, внутренние органы и кишечник гиперемиро-ванные, сдавленные.

При введении дозы препарата 15 г/кг их-тиомассы погибли все 6 опытных рыб, при этом 4 из них погибли в первые 5 дней с проявлением клинических признаков острого токсического воздействия.

Таблица 1

Результаты опытов по оценке острой токсичности препарата «Эмикон»

№ группы, кол-во рыб Доза препарата г/кг рыб (одной рыбе) Суммарный объем введения лекарственной суспензии на 1 рыбу Доза однократного введения лекарственной суспензии Количество погибших рыб

через 5 дней через 14 дней Всего

№ 1 6 рыб 2,5 г/кг (0,375 г) 2 мл 1 мл + 1 мл 0 0 0

№ 2 6 рыб 5,0 г/кг (0,75 г) 4 мл 2 мл + 2 мл 0 0 0

№ 3 6 рыб 7,5 г/кг (1,125 г) 5,63 мл 2+2+ 1,63 мл 0 1 1

№ 4 6 рыб 10 г/кг (1,125 г) 7,5 мл 2,5+2,5+2,5 мл 2 1 3

№ 5 6 рыб 12,5 г/кг (1,875 г) 9,38 мл 2,5 мл + 2,5 мл + 2,0 мл + 2,4 мл 2 2 4

№ 6 6 рыб 15 г/кг (2,25 г) 11,25 мл 2,5 мл + 2,5 мл + 2,5 мл + 3,75 мл 4 2 6

№ 7 6 рыб (контрольная) 15 г/кг (2,25 г) 11,25 мл 2,5 мл + 2,5 мл + 2,5 мл + 3,75 мл 4 2 6

Таблица 2

Обработка материала по изучению острой токсичности препарата «Эмикон»

на карпах по методу Кёрбера

Доза мг/кг 5000 7500 10000 12500 15000

Карп экз. 6 6 6 6 6

Из них выжило 6 5 3 2 0

Из них погибло 0 1 3 4 6

Д 0,5; 2,0; 3,5; 5,0

Е 2500;2500;2500; 2500

Е x Д 1,25; 5,0; 8,75; 12,5

ЛД50 = 15000 - (0,5x2500 + 2x2500 + 3,5x2500 + 5x2500) : 6 = 15000 - 27500 : 6 = 10416,7 мг/кг

У контрольной группы рыб, которой по схеме была введена суспензия из вспомогательных веществ в дозе 15 г/кг ихтиомассы, также произошла гибель всех 6 рыб с проявлением у них выраженных клинических признаков отравления в виде сильного вздутия брюшка, гиперемии внешних покровов, кишечника, ануса, кровоизлияний в почках и печени (очевидно в результате их сдавливания).

На основании того, что при введении одинаковых доз препарата и суспензии из вспомогательных веществ (15 г/кг ихти-омассы) наблюдалась сходная динамика гибели рыб, можно заключить, что наличие действующего вещества в испытанной дозе не влияет на увеличение токсичности препарата, а гибель рыб обусловлена не токсическими свойствами активной фармацевтической субстанции, а введением большого объема суспензии препарата.

Исходные показатели для расчета ЛД50 на основании результатов проведенных опытов приведены в таблице 2.

При обработке данных эксперимента при помощи прикладной программы для ПК LD16, LD50, LD84, LD100 évasion V.0.2 Copyright© 2002 НПП «Наука Плюс» получены следующие значения:

LD й = 6987,35 мг/кг;

16 '

LD50 = 10610,08 мг/кг; LD84 = 14232,8 мг/кг; LDiœ = 16044,16 мг/кг.

Таким образом, LD50 = 10610,08 ± 922,68 мг/кг. Оба метода дали близкий результат,

что говорит о достоверности полученных данных.

Заключение

В результате проведенных исследований были изучены токсикологические свойства лекарственного препарата для ветеринарного применения «Эмикон» на целевых животных (рыбах) в условиях острого эксперимента.

При пероральном введении препарата «Эмикон» карпам было установлено значение ЛД50, которое составило 10416,7 мг/кг массы рыб. Таким образом, согласно общепринятой гигиенической классификации (ГОСТ 12.1.007 — 76), исследуемый препарат можно отнести к 4-му классу опасности — малоопасные вещества.

Список литературы

1. Головина Н. А. Ихтиопатология / Н. А. Головина, Ю. А. Стрелков, В. Н. Воронин, П. П. Головин, Е. Б. Евдокимова, Л. Н. Юхименко // М.: Колос, 2010. 512 с.

2. ГОСТ 12.1.007 — 76. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. М.: Стандартин-форм, 2007.

3. Миронов А. Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. / А. Н. Миронов. М.: Гриф и К, 2012. 944 с.

4. Самохин В. Т. Методические указания по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных / утв. дир. института, д. б. н., проф. В. Т. Самохин, ВНИ-ИНБЖ, 1987. 22 с.

5. Уразаева Р. Д. Фармако-токсикологическая оценка и применение филомеда при филометроидозе карпа: Автореф. ... к. б. н. / Р. Д. Уразаева М., 2010. 21 с.