CC BY
35
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГЕНЕТИКИ И ТКАНЕВОГО ТИПИРОВАНИЯ»
Санкт-Петербург 24-25 июня 2015 г.
Кузьминова Е. П., Юшкова А. А., Чугреева Т. П., Хамаганова Е. Г.
ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, Москва
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУЛЕВОГО АЛЛЕЛЯ HLA-C*04:09N СРЕДИ ДОНОРОВ И БОЛЬНЫХ, НУЖДАЮЩИХСЯ В НЕРОДСТВЕННОЙ ТРАНСПЛАНТАЦИИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Введение. Как известно, нулевой или молчащий аллель характеризуется отсутствием способности экспрессировать белок или кодирует нефункциональный белок. Считается, что идентификация нулевых аллелей в генотипах HLA занимает важное место в определении совместимости доноров и реципиентов, нуждающихся в трансплантации. Так, нулевой аллель локуса С — HLA-C*04:09N, расположенный в седьмом экзоне гена, имеет делецию в позиции 1095 в 365 кодоне. Данная мутация сдвигает открытую рамку считывания, что в результате приводит к удлинению цитоплазматического домена тяжелой цепи HLA-Cw4 (добавление 32 аминокислот в С-терминальном конце) и отсутствию поверхностной экспрессии молекулы. При HLA типи-ровании для подбора доноров на неродственную трансплантацию необходимо учитывать такие неэкспрессируемые аллели.
Целью данного исследования было обнаружение нулевого аллеля локуса С (HLA-C*04:09N) среди пациентов, нуждающихся в трансплантации костного мозга, и потенциальных доноров стволовых клеток.
Материалы и методы. В исследовании участвовали пациенты с онкогематологическими заболеваниями, наблюдавшиеся в ФГБУ ГНЦ Минздрава России в период за 2013-2014 годы, а также потенциальные доноры стволовых клеток, включенные в регистр неродственных доноров ФГБУ ГНЦ за период 2014 — начало 2015 годов. Все исследуемые образцы были типированы по генам HLA I и II класса. Типирование локусов HLA-A,— В,— С,— DRB1,— DQB1 проводили методом PCR-SBT, либо PCR-SSP c применением коммерческих наборов фирм Invitrogen (USA), Olerup (Sweden) и Protrans (Germany). Наличие или отсутствие нулевого аллеля HLA-C*04:09N определяли набором «HLA-C high resolution for frequent alleles HLA-C*04:09N» фирмы Olerup. Статистическая обработка данных проводилась согласно общепринятым методикам.
Результаты: В общей сложности было про-типировано 505 человек (337 больных и 168 доноров). Поскольку, согласно литературным данным, аллель HLA-C*04:09N обнаруживается
в составе гаплотипа HLA-B*44:03-C*04:01:01G, то в дальнейшем наше внимание было сосредоточено на индивидах с данным сочетанием. В результате у 20 человек из общей выборки в генотипе было обнаружено сочетание генов В*44-С*04 (3,96 %). Среди них было проведено уточняющее типирование локуса HLA-С для определения наличия или отсутствия нулевого аллеля. В результате, среди носителей В*44-С*04 один образец оказался положительным по наличию нулевого аллеля, что составило 0,2 % от общей выборки. Нулевой аллель HLA-C*04:09N был обнаружен в составе гаплотипа HLA-A*23-B*44-C*04:09N-DRB1*07-DQB1*02.
Выводы. В нашем исследовании частота аллеля HLA-C*04:09N составила 0,2 %, что соответствует основным результатам, опубликованным ранее в работах С. Pinto и B. Moore. Поскольку нулевые аллели выявляются с достаточно высокой частотой, это необходимо иметь в виду при HLA типировании больных и доноров для неродственной трансплантации стволовых клеток, что, в свою очередь, делает определение нулевых аллелей неотъемлемой частью работы клинической лаборатории. Такие аллели невозможно обнаружить серологически, однако, и молекулярно-генетическими методами их можно обнаружить не всегда. Так, метод HLA-SBT для типирования HLA I класса ограничивается секвенированием 2 и 3 экзонов гена. Нулевой аллель C*04:09N, входящий в группу C*04:01:01G, имеет одинаковую последовательность со всеми аллелями данной группы во 2 и 3 экзонах, и отличается наличием делеции в экзо-не 7. В результате, данный аллель может не выявляться методом HLA-SBT (экзон 7 обычно не секвенируется). Таким образом, определение нулевых аллелей, особенно при HLA типировании для трансплантации, требует особого внимания и применения нескольких молекулярно-гене-тических методов. Это связано с тем, что наличие в генотипе неучтенных нулевых аллелей, в частности C*04:09N, может запускать ряд иммунологических реакций, оказывать влияние на приживаемость трансплантата и возможное развитие РТПХ.
