CC BY
46
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА И КЛИНИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА
УДК 618.14-002.2-078 DOI 10.24411/2220-7880-2020-10076
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТАВА ЭНДОМЕТРИЯ МЕТОДОМ СЕКВЕНИРОВАНИЯ 16S рРНК У ПАЦИЕНТОК С ХРОНИЧЕСКИМ ЭНДОМЕТРИТОМ
Лызикова Ю.А.
УО Гомельский государственный медицинский университет, Гомель, Республика Беларусь (246000, г. Гомель, ул. Ланге, 5), e-mail: [email protected]
Для исследования микробиоты у пациенток с хроническим эндометритом в данном исследовании использован метод секвенирования субъединицы 16S рибосомальной РНК (рРНК), уникальной для каждой бактерии и содержащей определенное число вариабельных участков, служащих идентификатором генов. Метод дает возможность провести видовую идентификацию микробных сообществ в полости матки.
Цель исследования: определить микробиологический состав эндометрия у пациенток с хроническим эндометритом с использованием метода секвенирования 16S рРНК.
Проведено проспективное «случай - контроль» исследование, обследовано 128 пациенток репродуктивного возраста. На основании иммуногистохимического исследования эндометрия у 91 (71,09%) пациентки диагностирован хронический эндометрит, они составили основную группу. Группу сравнения составили 37 (28,91%) пациенток без иммуногистохимических признаков хронического эндометрита. Хронический эндометрит ассоциирован с бесплодием у 68 (74,73%) пациенток (х2=20,08, p<0,001), с замершей беременностью - у 15 (16,48%) (х2=4,57, p=0,03), с невынашиванием беременности -у 11 (12,09%) (х2=4,89, p=0,03). Путем секвенирования участков гена 16S рРНК определен генетический материал микроорганизмов в полости матки у 34 (91,89%) пациенток без хронического эндометрита и у 83 (91,21%) пациенток основной группы. У большинства пациенток группы сравнения в полости матки выделен один вид микроорганизмов (х2=31,80, p<0,001), в основной группе у 45 (52,75%) определено сочетание четырех и более микроорганизмов (х2=24,97, p<0,001).
Микробный состав эндометрия у пациенток с хроническим эндометритом представляет собой сочетание более 4 возбудителей различных видов. Полученные данные указывает на необходимость исследования материала из полости матки путем секвенирования 16S рРНК у пациенток с нарушением репродуктивной функции перед планированием беременности.
Ключевые слова: хронический эндометрит, секвенирование 16S рРНК, иммуногистохимическое исследование.
DETERMINING THE MICROBIOLOGICAL COMPOSITION OF THE ENDOMETRIUM BY16S rRNA SEQUENCING IN PATIENTSWITH CHRONIC ENDOMETRITIS
Lyzikova Yu. A.
Gomel State Medical University, Gomel, Republic of Belarus (246000, Gomel, Lange St., 5), e-mail: [email protected]
To study the microbiota in patients with chronic endometritis, the method of sequencing the 16S subunit of ribosomal RNA (rRNA) was used. This subunit is unique for each bacterium and contains a certain number of variable sites that serve as a gene identifier. The method provides species identification of microbial communities in the uterine cavity.
The aim of the study was to determine the microbiological composition of the endometrium in patients with chronic endometritis using the 16S rRNA sequencing method.
A prospective «case-control» study was used, 128 patients of reproductive age were examined. 91 (71.09%) patients with chronic endometritis made up the study group. The comparison group consisted of 37 (28.91%) patients without immune and histo-chemical signs of chronic endometritis. Chronic endometritis is associated with infertility in 68 (74.73%) patients (x2=20.08, p<0.001), with missed abortion - in 15 (16.48%) (x2=4.57, p=0.03), with miscarriage - in 11 (12.09%) (x2=4.89, p=0.03) cases. The genetic material of microorganisms in the uterine cavity was determined in 34 (91.89%) patients without chronic endometritis and in 83 (91.21%) patients of the study group by sequencing of the 16S rRNA gene. In the majority of patients in the comparison group, one type of microorganisms was isolated in the uterine cavity (x2=31.80, p<0.001); in the study group, 45 (52.75%) had a combination of four or more microorganisms (x2=24.97, p<0.001).
The microbial composition of the endometrium in patients with chronic endometritis consists of combination of more than 4 pathogens of different types. The obtained data indicates the need to study the material from the uterine cavity by sequencing 16S rRNA in patients with reproductive dysfunction before planning pregnancy.
Keywords: chronic endometritis, 16S rRNA sequencing, immune-histochemical study.
Введение
Изучение микробиоты матки и ее влияние на успешность имплантации и репродуктивную функцию является предметом научных исследований последних лет [1, 2, 3]. Большая часть работ, описывающих микробиоту репродуктивного тракта, ранее основывались на культуральных методах диагностики. Так, в 2005 году Andrews W. с соавторами провели исследование по изучению состава микрофлоры у пациенток, имевших в анамнезе спонтанные преждевременные роды, индуцированные преждевременные роды и срочные роды. По данным исследователей, не получено существенной разницы в микробной об-семененности эндометрия у обследованных пациенток [4]. Однако характеристика микробных сообществ на основании культуральных методов связана с ограничениями, поскольку среди выявляемых микроорганизмов доминируют быстрорастущие аэробные виды, оставляя незамеченными редкие виды, требующие определенных условий культивирования [5].
Использование молекулярных методов диагностики позволило выявить виды микроорганизмов, не определяемые другими методами, в органах, которые ранее считались стерильными [6, 7, 8]. Так, в 2015 году Mitchell C.M. с соавторами исследовали материал из матки и эндометриальную жидкость, полученную во время гистерэктомий, методом количественной ПЦР. Результаты показали, что анаэробные возбудители обнаруживаются не только в вагинальных образцах, но и в эндометрии. Авторами также были получены различия между вагинальными и эндометриальными образцами. В то время как A.vaginae наиболее часто обнаруживался во влагалище, в эндометрии превалировали L. iners. Следует отметить, что 95% образцов, полученных из полости матки, показали наличие бактериальной флоры [9].
Вместо оценки присутствия определенного вида бактерий при культуральном исследовании и ПЦР-исследовании ампликонное секвенирование гипервариабельной 16S-области рибосомной РНК позволяет идентифицировать все виды микроорганизмов, присутствующие в образце. Метагеномно-молекулярный подход секвенирования 16S рРНК позволяет получить более полное представление, отражающее разнообразие и относительное обилие микробиоты [10]. С появлением методов метагеномного анализа стало возможным установить не только микробный состав биотопов, но и оценить их вклад в развитие патологии репродуктивных органов. Использование метода диагностики с помощью секвенирования фрагмента гена 16S рРНК позволило обнаруживать микробиоту с низкой биомассой, что перевернуло представление о том, что матка является стерильным органом [11].
Не вызывает сомнений тот факт, что фертиль-ность зависит от рецептивного состояния эндометрия, на которое влияют гормональные и анатомические факторы, а также иммунная система. На основании данных последних исследований, на местный и системный иммунитет большое влияние оказывает также микробиота. Соответственно, микро-биом эндометрия обусловливает успех имплантации. Материнская микробная колонизация способствует развитию будущего ребенка за счет обеспечения микроэлементами, метаболизма ксенобиотиков и повышения конверсии энергии [12, 13]. В настоящее время
концепция «стерильной матки», парадигмы, согласно которой плод растет в стерильной среде, все больше подвергается сомнению [14]. В том случае, если бактерии присутствуют в матке еще до беременности, то необходимо изучать, какие микроорганизмы ассоциированы с неблагоприятным исходом беременности и требуется ли их элиминация.
Для исследования микробиоты у пациенток с хроническим эндометритом в данном исследовании использован метод секвенирования субъединицы 16S рРНК, уникальной для каждой бактерии и содержащей определенное число вариабельных участков, служащих идентификатором генов. Метод не является количественным, однако дает возможность провести видовую идентификацию микробных сообществ. Главной целью метагеномики является секвенирова-ние всех геномов для установления видового состава и метаболических взаимосвязей в сообществе. При секвенировании вся ДНК, которая находится в пробирке, используется для исследования. Это позволяет анализировать все микроорганизмы, входящие в состав сообществ данного образца.
Цель исследования: определить микробиологический состав эндометрия у пациенток с хроническим эндометритом с использованием метода секве-нирования 16S рРНК.
Материал и методы
Проведено проспективное «случай - контроль» исследование. Критерии включения в исследование: репродуктивный возраст, наличие нарушений репродуктивной функции, прегравидарная подготовка, информированное согласие пациентки. Критерии исключения: беременность, острые или хронические заболевания в стадии обострения, гормональная терапия, неопластические процессы, антифосфолипид-ный синдром.
Обследовано 128 пациенток репродуктивного возраста. На основании иммуногистохимического исследования эндометрия у 91 (71,09%) пациентки диагностирован хронический эндометрит, они составили основную группу. У 37 (28,91%) пациенток им-муногистохимические признаки хронического эндометрита не выявлены, что позволило включить их в группу сравнения. У всех обследованных пациенток изучен микробный состав эндометрия с помощью метода секвенирования 16S рРНК.
Биопсию эндометрия у пациенток обеих групп производили в зависимости от длительности менструального цикла на 7-9-й день после овуляции или на 20-21-й день менструального цикла с помощью аспирационной кюретки ProfiCombi («Симург», Беларусь).
Для иммуногистохимического исследования на роторном микротоме Microm HM 304E (Thermo Scientific, Германия) из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 3-4 мкм, которые монтировали на обработанные L-полилизином предметные стекла. Иммуногистохимическую реакцию проводили на срезах с использованием высокотемпературных методов восстановления антигенной иммунореак-тивности. В данном исследовании использовали первичные готовые к использованию моноклональ-ные мышиные антитела к CD56 и FoxP3 (Diagnostic Biosystems, США).
Выделение ДНК из биоптатов эндометрия проводили с применением готовых коммерческих наборов согласно инструкции производителя. В качестве положительного контроля использовали паспортизованные чистые бактериальные культуры (Staphylococcus aureus ATCC 25923, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853). Биоптат эндометрия помещали в стерильную транспортную пробирку, содержащую 1 мл бульона с сердечно-мозговой вытяжкой (BD, США) и стеклоша-рики, и транспортировали в микробиологическую лабораторию в термоконтейнере с поддержанием температуры 28-35 °С. Выполняли гомогенизацию образцов путем 2-минутного вортексирования транспортных пробирок (вортекс V-1 plus, Biosan, Латвия).
Предварительную инкубацию выполняли в течение 18-24 часов при температуре 35 °С. После инкубации из пробирки отбирали 200-300 мкл бульонной культуры, переносили в криопробирку и замораживали при температуре -20 °С для проведения дальнейших молекулярных исследований.
Для проведения ПЦР, электрофоретической детекции и рестрикционного анализа использовали реагенты фирмы Thermo Scientific (США). Амплификацию проводили с помощью амплификатора Palm Cycler фирмы Corbett Research (Австралия). Детекцию продуктов ПЦР проводили с помощью горизонтального гель-электрофореза. Для окрашивания применяли раствор бромистого этидия. Программа амплификации: начальная денатурация 95 °С -3 мин.; денатурация 95 °С - 30 с., отжиг 55 °С - 25 с., элонгация 72 °С - 50 с. (в течение 35 циклов).
По результатам ПЦР-анализа, направленного на выявление бактериальной ДНК, для каждого исследованного образца был получен электрофорети-ческий спектр ампликонов, характеризующийся наличием нескольких фракций в диапазоне около 900 пар нуклеотидов, что свидетельствовало о содержании генетического материала более чем одного вида микроорганизмов.
Для идентификации микроорганизмов использовали метод секвенирования по Сэнгеру. Полученные данные о нуклеотидной последовательности в формате FASTA были использованы для поиска c помощью программы BLAST (http://www. ncbi.nlm.nih.gov/blast/).
Исследование выполнено за счет средств инновационного фонда Гомельского областного исполнительного комитета в рамках проекта «Разработать и внедрить алгоритм диагностики и лечения хронического эндометрита у пациенток репродуктивного возраста» (№ госрегистрации: 20164462 от 5.12.2016). Протокол исследования одобрен этическим комитетом УО «Гомельский государственный медицинский университет». Оценка нормальности распределения
Распределение количества видов микроор
признаков проводилась с использованием критерия Шапиро - Уилка. Оценка нормальности распределения количественных признаков показала, что распределение показателей отличалось от нормального (р<0,001). При анализе качественных признаков в группах сравнения использован непараметрический критерий Фишера. Результаты считались статистически значимыми при р<0,05. Статистическая обработка данных проведена с использованием пакета STATISTICA 10.0.
Результаты исследования
Обследовано 128 пациенток репродуктивного возраста, 91 (71,09%) пациентка основной группы и 37 (28,91%) пациенток группы сравнения. Среди обследованных пациенток основной группы у 68 (74,73%) было бесплодие (х2=20,08, р<0,001), замершая беременность - у 15 (16,48%) (х2=4,57, р=0,03), невынашивание беременности у 11 (12,09%) (х2=4,89, р=0,03). Вспомогательные репродуктивные технологии применяли 10 (10,91%) пациенток основной группы. Следует отметить, что у 2 (5,41%) пациенток группы сравнения была одна неэффективная попытка ЭКО, в основной группе у 4 (4,40%) пациенток было две попытки, у 2 (2,20%) пациенток - три попытки, у 3 (3,30%) - четыре, и у 1 (1,10%) - семь. С одинаковой частотой - 1 (2,70%) среди пациенток группы сравнения встречались замершая беременность и антенатальная гибель плода.
Среди пациенток основной группы 9 (10,00%) предъявляли жалобы на тазовые боли, 7 (7,78%) - на обильные выделения из половых путей, 8 (8,89%) - на нарушение ритма менструального цикла, 1 (1,10%) -на обильные менструации, 2 (2,20%) - на скудные менструации. Среди пациенток группы сравнения 4 (12,90%) предъявляли жалобы, с одинаковой частотой - 2 (6,45%) на болезненные менструации и нарушение ритма менструального цикла. Роды в анамнезе были у 52 (57,14%) пациенток основной группы и у 11 (29,43%) группы сравнения (х2=7,91, р=0,005). У 40 (44,44%) пациенток основной группы были одни роды, у 11 (12,22%) - двое родов, у 1 (1,11%) - трое родов. У 9 (29,03%) пациенток группы сравнения были одни роды, у 2 (6,45%) - двое родов.
Путем секвенирования участков гена 16S рРНК определен генетический материал микроорганизмов в полости матки у 34 (91,89%) пациенток без хронического эндометрита и у 83 (91,21%) пациенток основной группы (р=0,72). У большинства пациенток группы сравнения в полости матки выделен один вид микроорганизмов (х2=31,80, р<0,001), в основной группе у 45 (52,75%) определено сочетание четырех и более микроорганизмов (х2=24,97, р<0,001) (табл. 1).
Таблица 1
низмов в составе микробиома эндометрия
Количество видов микроорганизмов Основная группа n(%), N=91 Группа сравнения n(%), N=37 х2, p
Микроорганизмы не обнаружены 8(8,79%) 3(8,11%) Х2=0,02, p=0,90
Монокультура 17(18,68%) 26(70,27%) Х2=31,38, p<0,001
2 вида микроорганизмов 11(12,09%) 5(13,51%) Х2=0,05, p=0,96
3 вида микроорганизмов 12(13,19%) 2(5,41%) Х2=0,49, p=0,48
4 и более видов микроорганизмов 43(47,25%) 1(2,70%) Х2=22,63, p<0,001
Доминирующим видом монокультуры у па- группе лактобактерии как монокультура выделены у
циенток группы сравнения был Lactobacillus spp., 10 (10,99%) пациенток (х2=27,19, p<0,001) (табл. 2). выделенный у 20 (54,05%) пациенток, в основной
Таблица 2
Распределение видов различных микроорганизмов в составе монокультуры микробиома эндометрия
Вид микроорганизмов Основная группа n(%), N=91 Группа сравнения n(%), N=37 x2, p
Lactobacillus spp. 10(10,99%) 20(54,05%) X2=27,19, p<0,001
Staphylococcus spp. 3(3,30%) 2(5,41%) X2=0,31, p=0,17
Streptococcus spp. 2(2,20%) 2(5,41%) X2=0,89, p=0,34
Atopobium spp. - 1(2,70%) X2=2,48, p=0,11
Corynebacterium spp. - 1(2,70%) X2=2,48, p=0,11
Aerococcus spp. 1(1,10%) - X2=0,41, p=0,52
Mobilincus spp. 1(1,10%) - X2=0,41, p=0,52
Два вида микроорганизмов выявлено у 5 (13,51%) пациенток группы сравнения. С одинаковой частотой 2 (5,41%) у пациенток без хронического эндометрита определено сочетание Lactobacillus spp. и Enterococcus spp. и Fusobacterium spp. и
Сочетание микроорганизмов у пациенток основ!
Staphylococcus spp. У 1 (2,70%) пациентки группы сравнения выявлено сочетание Pevotella spp. и Mycoplasma spp. В основной группе у 11 (12,09%) пациенток выявлено два вида микроорганизмов в полости матки (табл. 3).
Таблица 3
й группы с 2 видами микроорганизмов в полости
Сочетание микроорганизмов Частота
Corynebacterium spp., Lactobacillus spp. 1(1,11%)
Streptococcus spp., Lactobacillus spp. 1(1,11%)
Globicatella spp., Lactobacillus spp. 1(1,11%)
Leptotrichia spp., Lactobacillus spp. 1(1,11%)
Capnocytophaga, Lactobacillus spp. 1(1,11%)
Pseudomonas spp., Lactobacillus spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Staphylococcus spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Streptococcus spp. 1(1,11%)
Dialister spp., Lactobacillus spp. 1(1,11%)
Clostridium spp., Streptococcus spp. 1(1,11%)
Enterococcus spp., Corynebacterium spp. 1(1,11%)
В основной группе у 12 (13,19%) пациен- мов в полости матки (табл. 4). ток определено сочетание 3 видов микроорганиз-
Таблица 4
Сочетание микроорганизмов у пациенток основной группы с 3 видами микроорганизмов
в полости матки
Сочетание микроорганизмов Частота
Lactobacillus spp., Leptotrichia spp., Corynebacterium spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Leptotrichia spp., Mycoplasma spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Leptotrichia spp., Staphylococcus spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Porphyromonas spp., Pevotella spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Dialister spp., Pevotella spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Leptotrichia spp., Staphylococcus spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Campylobacter spp., Corynebacterium spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Atopobium vaginae, Corynebacterium spp. 1(1,11%)
Lactobacillus spp., Leptotrichia spp., Bacteroides spp. 1(1,11%)
Bacteroides spp., Fusobacterium spp., Staphylococcus spp. 1(1,11%)
Clostridium spp., Leptotrichia spp., Streptococcus spp. 1(1,11%)
В группе сравнения сочетание трех видов микроорганизмов выявлено у 2 (5,41%) пациенток. У 1 (2,70%) пациентки группы сравнения определено сочетание Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Mycoplasma spp., у 1 (2,70%) - Atopobium spp., Lactobacillus spp., Streptococcus spp.
Свыше четырех и более видов микроорганизмов
в полости матки выявлено у 43 (47,25%) пациенток с хроническим эндометритом, у 1 (2,70%) пациентки группы сравнения (х2=22,63, p<0,001).
У 11 (12,09%) пациенток основной группы в полости матки определено 4 вида микроорганизмов (Х2=4,89, р=0,03),у 7 (63,64%) из них среди выделенных микроорганизмов присутствовали Lactobacillus spp.
Сочетание пяти видов микроорганизмов в полости матки определено у 9 (9,89%) пациенток с хроническим эндометритом (x2=3,94, p=0,05). В основной группе у 6 (6,89%) пациенток выявлено 6 видов микроорганизмов в полости матки, у 4 (4,41%) пациенток - сочетание 7 видов микроорганизмов. С одинаковой частотой 1 (1,11%) в основной группе встречалось сочетание 12 и 13 видов микроорганизмов.
Среди пациенток основной группы с частотой 1 (1,11%) отмечено сочетание 16, 18 и 20 видов микроорганизмов в эндометрии. У 1 (2,70%) пациентки группы сравнения в полости матки выявлено 12 видов микроорганизмов: Lactobacillus spp., Fusobacterium spp., Dialister spp., Megasphaera spp., Veilonella spp., Bacteroides spp., Burkholderia spp., Morganella spp., Pevotella spp., Leptotrichia spp., Sneathia spp., Enterococcus spp.
Обсуждение
В исследуемой группе частота выявления хронического эндометрита составила 71,09%. Следует отметить, что у большинства пациенток заболевание протекало бессимптомно и не отмечено характерного клинического проявления воспалительного процесса в полости матки.
К нарушениям репродуктивной функции, ассоциированным с хроническим эндометритом, относятся бесплодие, замершая беременность, невынашивание беременности. Отмечено, что одним из факторов риска хронического эндометрита являются роды, что, возможно, связано с недиагностированны-ми стертыми формами послеродового эндометрита.
Путем секвенирования участков гена 16S рРНК определен генетический материал микроорганизмов в полости матки у большинства пациенток обеих групп. Таким образом, у большинства пациенток репродуктивного возраста эндометрий не является стерильным
В полости матки у большинства пациенток группы сравнения выделен один вид микроорганизмов, в основной группе у большинства пациенток определено сочетание четырех и более видов микроорганизмов. Доминирующим видом монокультуры у пациенток группы сравнения был Lactobacillus spp., в основной группе лактобактерии как монокультура определялись в 4,91 раза реже.
Заключение
Хронический эндометрит ассоциирован с нарушением репродуктивной функции (бесплодие, замершая беременность, невынашивание беременности) и у большинства пациенток протекает бессимптомно. Микробный состав эндометрия у пациенток с хроническим эндометритом представляет собой сочетание четырех и более возбудителей различных видов. Полученные данные указывают на необходимость исследования материала из полости матки путем секвенирования 16S рРНК у пациенток с нарушением репродуктивной функции перед планированием беременности.
Конфликт интересов. Автор заявляет об отсутствии явного или потенциального конфликта интересов, связанного с публикацией статьи.
Финансирование. Исследование выполнено за счет средств инновационного фонда Гомельского областного исполнительного комитета в рамках проекта «Разработать и внедрить алгоритм диа-
гностики и лечения хронического эндометрита у пациенток репродуктивного возраста» (№ госрегистрации: 20164462 от 5.12.2016).
Литература/References
1. Younes J.A. et al. Women and their microbes: the unexpected friendship. Trends in Microbiology. 2017; 26:16-32. doi: 10.1016/j.ajog.2014.11.043.
2. Лызикова Ю.А. и др. Результаты идентификации микроорганизмов в полости матки с помощью метода секвенирования фрагмента гена 16S рРНК // Проблемы здоровья и экологии. 2018;4(58):24-30.[Lyzikova Yu.A. et al. Results of identification of microorganisms in the uterine cavity by sequencing a 16S rRNA gene fragment. Problemy zdorov'ya i ekologii. 2018;4(58):24-30. (In Russ.)]
3. Tao X. et al. Characterizing the endometrial microbiome by analyzing the ultra-low bacteria from embryo transfer cateter tips in IVF cycles: next generation sequencing (NSG) analysis of 16S ribosomal gene. Human Microbiology Journal. 2017;3:15-20. doi. org/10.1016/j.humic.2017.01.004.
4. Кебурия Д.К. и др. Микробиота полости матки и ее влияние на репродуктивные исходы // Акушерство и гинекология. 2019;2:22-27. doi.org/10.18656/ aig.2019.2.22-27 [Keburia D.C. et al. Microbiota of the uterine cavity and its influence on reproductive outcomes. Akusherstvo i ginekologiya. 2019;2:22-27. doi.org/10.18656/aig.2019.2.22-27. (In Russ.)]
5. Benner М. et al. How uterine microbiota might be responsible for a receptive, fertile endometrium. Human Reproduction Update. 2018;24(4):393-415. doi:10.1093/humupd/dmy012.
6. Доброхотова Ю.Э. и др. Результаты исследования цервико-вагинальной микробиоты методом полимеразно-цепной реакции в реальном времени у беременных с угрожающими преждевременными родами // Акушерство и гинекология. 2018;11:50-57. doi.org/10.18656/aig.2018.11.50-57. [Dobrokhotova Yu. E. et al. Results of the studying of cervico-vaginal microbiota by real-time polymerase chain reaction in pregnant women with threatening preterm birth. Akusherstvo i ginekologiya. 2018;11:50-57.doi.org/ 10.18656/aig.2018.11.50-57. (In Russ.)]
7. Ищенко А.А. и др. Клинико-анамнестические, иммунологические, эхографические и гистероскопические особенности хронического эндометрита, ассоциированного с нарушением репродуктивной функции // Вестник РАМН. 2018;73(1):5-15. doi: 10.15690/ vramn927. [Ishchenko A.A. et al. Clinical-anamnestic, immunological, echographic and hysteroscopic features of chronic endometritis associated with reproductive dysfunction. Bulletin of the RAMS. 2018;73(1):5-15. doi: 10.15690/vramn927. (In Russ.)]
8. Каганова М.А. и др. Особенности микро-биоты цервикального канала при дородовом из-литии околоплодных вод и доношенной беременности // Акушерство и гинекология. 2019;5.77-84. doi.org/10.18656/aig.2019.5.77-84. [Kaganova M.A. et al. Features of the microbiota of the cervical canal in prenatal effusion of amniotic fluid and full-term pregnancy. Akusherstvo i ginekologiya. 2019;5.77-84. doi.org/10.18656/aig.2019;5.77-84. (In Russ.)]
9. Mitchell C.M. et al. Colonization of the upper genital tract by vaginal bacterial species in nonpregnant women. American Journal of Obstetrics & Gynecology. 2015;212:611-619. doi: 10.1016/j.ajog.2014.11.043.
10. Moreno I. et al. Evidence that endometrial microbiota has an effect on implantation success and failure. Journal of Obstetrics&Gynecology .2016; 215(6);684-703.doi.10.1016/j.ajog.2016.09.07.
11. Плотникова Е.Ю. и др. Влияние пробиотиков на внутриутробное программирование микробиоты ребенка // Акушерство и гинекология. 2019;9:174-180. doi.org/10.18656/aig.2019.9.174-180. [Plotnikova, E. Yu. et al. Effect of probiotics on prenatal programming of the baby's microbiota. Akusherstvo i ginekologiya. 2019;9:174-180. doi.org/10.18656/aig.2019.9.174-180. (In Russ.)]
12. Macpherson A.J. et al. How nutrition and the maternal microbiota shape the neonatal immune system. Nature Reviews Immunology. 2017;10:508-517. doi: 10.1038/nri.2017.58.
13. Perez-Munoz M.E. et al. A critical assessment of the 'sterile womb' and 'in utero colonization' hypotheses: implications for research on the pioneer infant microbiome. Microbiome. 2017;5:48.doi: 10.1186/ s40168-017-0268-4.
УДК 616.248 DOI 10.24411/2220-7880-2020-10077
ВЛИЯНИЕ АЛЛЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ C-819T И C-592A ГЕНА IL-10 НА ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ
Руденко К.А., 12Тугуз А.Р.
'ФГБОУ ВО Майкопский государственный технологический университет, Майкоп, Россия (385000, г. Майкоп, ул. Первомайская, 191), e-mail: [email protected] 2ФГБОУ ВО Адыгейский государственный университет, Майкоп, Россия (385000, г. Майкоп, ул. Первомайская, 208), e-mail: [email protected]
Распределение SNP C-592A (rs1800872), C-819T (rs1800871) промоторного региона гена противовоспалительного цитокина IL-10 проанализированы в пилотном исследовании с информированного согласия больных пульмонологического отделения Адыгейской республиканской клинической больницы (n=12, средний возраст - 45) с тяжелыми смешанными формами бронхиальной астмы (БА), диагностированными в соответствии с критериями GINA (2016) в стадии обострения. Группа неродственных доноров подобрана эмпирически (n=24, средний возраст - 25), без клинических проявлений, наследственной отягощенности по исследуемой патологии, сердечно-сосудистым, онкологическим и аутоиммунным заболеваниям.
Полиморфизмы гена IL-10 (C-819T / rs1800871, C-592A / rs1800872) исследованы ПЦР-методом с элек-трофоретической детекцией результатов на коммерческих тест-системах (НПФ «Литех», Москва). Геномная ДНК выделена из периферической крови доноров и больных. Концентрации и качество образцов ДНК тестированы на спектрофотометре NanoDrop 2000c «Thermo Scientific» (USA). Статистически значимые различия (Р<0,05) частот полиморфизмов генов IL-10 (C-819T rs1800871, C-592A rs1800872) и их ассоциации с бронхиальной астмой вычислены с использованием х2 (хи-квадрата), OR (odds ratio -отношения шансов), 95% доверительного интервала (95% СГ).
Несмотря на то что данные полиморфные варианты изменяют уровень продукции IL-10, оказывающего влияние на соотношения Th1/Th2-лимфоцитов, определяя тем самым тип иммунного ответа при БА, ассоциации с риском развития БА у жителей РА не установлено. Отсутствие ассоциации исследованных полиморфизмов гена IL-10 может быть связано с более сложной реализацией иммунологической стадии патогенеза БА, что требует дополнительных экспериментальных исследований.
Ключевые слова: бронхиальная астма, Т-хелперы 1 (Th1), Т-хелперы 2 (Th2), воспаление, противовоспалительные цитокины, IL-10, отек, гиперреактивность, спазм бронхов.
PATHOPHYSIOLOGICAL ROLE OF INSERTION (1607 INS G) OF THE MATRIX METALLOPROTEINASE GENE IN REMODELING THE RESPIRATORY TRACT IN THE CASE OF BRONCHIAL ASTHMA
1Rudenko К.А., 12Tuguz А.Я.
Maykop State Technological University, Maikop, Russia (385000, Maikop, Pervomayskaya St., 191), e-mail: [email protected]
2Adyghe State University, Maikop, Russia (385000, Maikop, Pervomayskaya St., 208), e-mail: [email protected]
The distribution of SNP C-592A (rs1800872), C-819T (rs1800871) of the promoter region of the antiinflammatory cytokine IL-10 gene was analyzed with the help of the pilot research in patients in the pulmonary department of Adygea Republican Clinical Hospital who gave their informed consent (n=12, average age - 45). They had severe mixed forms of bronchial asthma (BA) in the acute stage, diagnosed according to the GINA criteria (2016). The group of donors (non-relatives) was selected empirically (n=24, average age - 25), without reference to clinical manifestations, hereditary burdens on the pathology studied, cardiovascular, oncological and autoimmune diseases.
