Определение иридоидов в траве татарника колючего (Onopordum Acanthium L. , род Onopordum) Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

УДК 615.32:582.998.1:547.29-314.06:543.422.3

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИРИДОИДОВ В ТРАВЕ ТАТАРНИКА КОЛЮЧЕГО (ONOPORDUM ACANTHIUM L., РОД ONOPORDUM)

© Л.Р. Иванова, Л.И. Бутенко , Л.В. Лигай, В.Г. Сбежнева

Пятигорская государственная фармацевтическая академия, пр. Калинина, 11, Пятигорск, Ставропольский край, 357500 (Россия) e-mail: nio@helios.ru

Установлено наличие иридоидов в траве татарника колючего: методом препаративной тонкослойной хроматографии получены три вещества иридоидной природы, одним из которых предположительно является гарпагид; количественное содержание иридоидов 5,76±0,02% соответственно.

Ключевые слова: иридоиды, татарник колючий, гарпагид.

Введение

Татарник колючий (Onopordum Acanthium L.) широко используется в народной медицине, произрастает в европейской части России, Западной Сибири, Украине и Средней Азии. В народной медицине настои из листьев татарника колючего применяют при циститах, уретритах, отеках различного происхождения, при бронхитах, бронхиальной астме, заболеваниях почек, мочевого пузыря, ревматизме и геморрое. Химический состав травы татарника колючего достаточно разнообразен. В растении обнаружены кумарины, полисахариды, флавоноиды, дубильные вещества, органические кислоты. Кроме того, в листьях установлено наличие алкалоидов, сесквитерпенового лактона - аркунопикрина и иридоидов.

Постоянно повышающиеся требования к качеству растительного сырья вызывают необходимость количественной оценки содержания основных действующих веществ, в том числе и иридоидов.

Экспериментальная часть

Сырье. Трава татарника колючего (Onopordum Acanthium L.) собрана во время цветения в ст. Ессентук-ской Предгорного района Ставропольского края. Сырье для получения извлечения готовили согласно требованиям ГФ XI.

Общие экспериментальные условия. Извлечение для определения иридоидов в траве татарника колючего получали методом экстракции смесью хлороформ - этанол (5 : 1). Качественные реакции на иридоиды: 1) гидроксамовая реакция (3,6% раствор гидроксиламина и 1% раствор хлорида железа (III)); 2) реактив Трим-Хилла (10 мл 0,2% раствора CuSO4 + 10 мл НС1(конц.) + 100 мл ледяной СН3СООН).

Методика количественного определения суммарного содержания иридоидов. Аналитическую пробу травы татарника колючего измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий

0,5 мм. Около 0,5 г (точная навеска) измельченного сырья помещали в коническую колбу объемом 200 мл, прибавляли 40 мл смеси хлороформ - этанол 95% (5 : 1), закрывали пробкой и взбалтывали на вибрационном аппарате в течение 45 мин.

Полученное извлечение декантировали с сырья и фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, избегая попадания сырья на фильтр. К шроту прибавляли еще 40 мл смеси и взбалтывали на вибрационном аппарате в течение 30 мин. Извлечение фильтровали в ту же мерную колбу и доводили объем раствора до метки смесью хлороформ - этанол 95% (5 : 1), 20 мл полученного извлечения помеща-

* Автор, с которым следует вести переписку.

132

Л.Р. Иванова, Л.И. Бутенко, Л.В. Лигай, В.Г. Сбежнева

ли в колбу объемом 100 мл, прибавляли 10 мл воды и упаривали под вакуумом при температуре 40-50 °С до водного остатка. Водный раствор фильтровали через бумажный фильтр, смоченный водой, в мерную колбу вместимостью 10 мл, при необходимости доводили объем раствора до метки, перемешивали (раствор А).

5 мл раствора А переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляли 5 мл щелочного раствора гидроксиламина и оставляли на 20 мин. Через 20 мин добавляли 10 мл 1 М раствора кислоты хлороводородной и 5 мл 1% раствора хлорида железа (III) в 0,1 М растворе хлороводородной кислоты, перемешивали (раствор Б).

После перемешивания измеряли оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 512 нм в кювете с толщиной слоя 1 см.

В качестве раствора сравнения использовали смесь из 5 мл раствора А, 5 мл воды, 10 мл 1 М раствора кислоты хлороводородной и 5 мл 1% раствора хлорида окисного железа в 0,1 М растворе хлороводородной (X) кислоты.

Содержание суммы ИР в пересчете на гарпагид и абсолютно сухое сырье (в %) вычисляли по формуле

А-100-10 • 25-100 _ А • 25000

X _---------------------_----------------,

56 • т • 20 • 5 • (100 - Г) 56 • т • (100 - Г)

где А - оптическая плотность испытуемого раствора, т - навеска сырья, г, W - влажность сырья, %, 56 -удельный показатель поглощения продуктов реакции гарпагида с гидроксиламином и хлоридом железа (III).

Обсуждение результатов

Качественными реакциями с гидроксиламином и хлоридом железа (III) (образование красного раствора) и с реактивом Трим-Хилла (образование оранжево-красного раствора) было доказано наличие иридоидов в траве татарника колючего.

В литературе [1, 2] для выделения иридоидов предлагается метод дробной экстракции. Сырье первоначально экстрагируют смесью хлороформ - этанол в соотношении 5 : 1. После удаления растворителя сухой экстракт обрабатывают водой и упаривают до густого экстракта. Наличие иридоидов в густом экстракте доказывали методом бумажной и тонкослойной хроматографии. На хроматограммах (БХ и ТСХ) иридоиды проявлялись в виде трех пятен. На пластинках «Слуфол» пятна проявляли в УФ-свете, а бумажные хроматограммы обрабатывали последовательно растворами гидроксиламина и хлорида железа (III). Оптимальными для разделения иридоидов являются системы №1 (хлороформ - метанол - вода (80 : 2 : 0,1); хлороформ -этанол (20 : 1)).

Методом препаративной тонкослойной хроматографии эти вещества выделены, элюирование осуществляли смесью хлороформ - этанол в соотношении 5 : 1. Для полученных соединений изучены УФ-спектры в этаноле. Результаты исследований приведены в таблице.

Значение Ш" и люминисцентно-хроматографические характеристики, совпадающие с литературными данными [3], позволили вещество 2 идентифицировать как гарпагид.

Результаты хроматографических исследований иридоидов в траве татарника колючего

Характеристики 1-е вещество 2-е вещество 3-е вещество

ТСХ (1) 0,10 0,39 0,69

БХ (1) ТСХ (2) 0,12 0,40 0,75

0,13 0,59 0,70

БХ (2) 0,12 0,60 0,71

Окраска пятен при обработке

1. УФ (ТСХ 1) голубой зеленый зеленый

2. КН2ОШеС13 (БХ 1) красный красный красный

3. Реактив Трим-Хилла (БХ 2) оранжевый розовый розовый

Хтах в УФ свете (нм) 218 216 218 253

ю в иридоидном комплексе (%) 17,17 14,0 4,5

Для количественной оценки содержания иридоидов использовали метод спектрофотометрии продуктов гидроксамовой реакции по усовершенствованной методике [4]. Метод - основа для экстракции сырья смесью хлороформ - этанол (5 : 1), а затем после удаления растворителя проводили экстракцию водой. Смена растворителя позволила исключить влияние сопутствующих веществ на результаты гидроксамовой реакции.

Содержание суммы иридоидов определяли спектрофотометрически при Х=512 нм и рассчитывали в пересчете на гарпагид, а абсолютно сухое сырье - по формуле, приведенной в экспериментальной части. Установлено, что в траве татарника колючего содержание иридоидов составляет 5,76±0,02%.

Выводы

В ходе исследования надземной части татарника колючего впервые изучен иридоидный состав. Установлено, что в траве растения содержание суммы иридоидов составляет 5,76±0,02%.

Иридоидный комплекс представлен в основном тремя веществами, одно из которых предположительно гарпагид.

Список литературы

1. Данчул Т.Ю., Ханин В.А., Шагова Л.И. Биологически активные вещества ресурсных видов // Растительные ресурсы. 2006. Т. 42, №3. С. 48-58.

2. Оленников Д.И., Танхаева Л.Ш. Разработка технологии получения экстракта подорожника большого сухого // Химия растительного сырья. 2006. №1. С. 49-54.

3. Оганесян Б.Б., Галстян А.М., Мнацаканян В.А. Фастигенин, гарпагид и 8-О-ацетилгарпагид из Tencrium orientale // Химия природных соединений. 1986. №6. С. 786-789.

4. Шаменкова Н.В. Усовершенствование определения иридоидов в траве пустырника // Фармация. 2005. Т. 4. С. 15-19.

Поступило в редакцию 2 июля 2009 г.