CC BY
6
дикатора и определяли оптическую плотность. Чувствительность определения составляет I мкг в анализируемом объеме раствора. Определению не мешают неорганические и органические вещества.
Литература. Коренман И. П., Шеянова Ф. Р.
аналит. химии, 1952, № 2, с. 128. Семенов В. А. — Ж. гиг. и сан., 1966, № 4, с. 62—64.
-Ж.
Поступила 23.02.81
УДК 613.632:615.285.7] :543.544
В. Н. Оськина
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФУРАДАНА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ В БИОСРЕДАХ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИИ В ТОНКОМ СЛОЕ
Киевский НИИ гигиены труда и профзаболеваний
Фурадан — системный инсектицид-нематоцид — применяется для обработки таких технически важных культур, как сахарная свекла, кукуруза и картофель. Естественно, имеется возможность загрязнения этих культур препаратом и его продуктами разложения, а следовательно, накопления в организме животных. При изучении динамики накопления и распределения пестицидов в организме теплокровных животных, при диагностике возможных отравлений необходим метод определения ядохимиката в биосферах. В организме животных фурадан (ЛД50 8—14 мг/кг) ме-таболизируется в основном путем гидролиза с образованием 7-фенола (ЛД50 2200 мг/кг). Основным этапом в процессе окислительного метаболизма фурадана является образование 3-окси-карбофурана (ЛД50 18 мг/кг). Затем это соединение может подвергаться гидролизу с образованием З-окси-7-фенола (ЛД50 1350 мг/кг), который далее либо образует комплексы, либо окисляется в З-кето-7-фенол (ЛД50 295 мг/кг). З-Оксикар-бофурадан может также окисляться до 3-кето-карбофурана (ЛД50 69 мг/кг). Этот метаболит тотчас гидролизуется в З-кето-7-фенол (Wong и Fisher).
С учетом данных о токсичности метаболитов фурадана для разработки метода определения выбраны первый, четвертый и пятый метаболиты препарата как наиболее опасные для теплокровных животных. При разработке определения этих соединений в биосредах (кровь и моча) был использован принцип метода определения фурадана в воздухе, ранее разработанный нами и основанный на реакции азосочетания продуктов щелочного гидролиза препарата с п-нитрофенил-диазонием в тонком слое силикагеля (В. Н. Оськина).
В работе использовались препараты с содержанием действующего начала 98,9 %, изготовленные фирмой ФМС.
В качестве реагента для проявления фурадана и продуктов его разложения применяли диазоти-рованный п-нитроанилин, который готовили по следующей прописи: 0,02 % раствор п-нитроани-лина в 0,1 н. соляной кислоте и свежеприготовленный 5,0 % раствор нитрита натрия смешива-
ли перед употреблением в соотношении 10:1. При этих условиях фурадан и его метаболиты тотчас проявлялись в виде окрашенных в сиреневый цвет пятен с различным значением 7?/ на пластинках «Силуфол» (ЧССР). В качестве подвижной фазы для восходящей хроматографии использовали следующие системы растворителей: гек-сан — ацетон (3:1,5), бензол — этилацетат (13:7), бензол — метанол (18:2). Применение указанных систем подвижных растворителей дало положительный результат для разделения фурадана и его метаболитов в крови в тонком слое силикагеля. Так, например, применяя смесь бензола и этилацетата в соотношении 13:7, получали значения для фурадана, 3-оксикарбофурана, 3-окси-7-фенола и З-кето-7-фенола 0,83±0,042, 0,18±0,033, 0,43±0,032 и 0,72±0,012 соответственно.
Одномерная хроматография в тонком слое силикагеля не дала возможности разделить испытуемые и коэкстрактивные вещества в моче, поэтому мы попытались для этой цели использовать двумерную хроматографию. Из ряда смесей органических растворителей выбрали следующие подвижные фазы: для первого метаболита при первом элюировании хлороформ — диэтиловый эфир в соотношении 18:8, при втором — гексан — ацетон (15:10). При этом условии первый метаболит проявляется в виде сиреневого пятна со значением 0,3. Для четвертого и пятого метаболитов выбраны следующие системы: 1-е направление — хлороформ — диэтиловый эфир (25:7), 2-е направление — бензол — этилацетат (19,5:10,5). На пластинке проявляются два сиреневых пятна со значением 7?/ 0,45 и 0,7 соответственно.
Максимальный эффект извлечения достигнут при применении смеси хлороформ — диэтиловый эфир (2:1) для фурадана и его метаболитов из крови 85 — 90 %, мочи 75—80 % при экстракции на шюттель-аппарате в течение 15 мин. Исследования проводили с контрольными пробами крови и мочи, не содержащими пестицидов, и с пробами биологических сред, в которые вводили известное количество препаратов (0,5—20 мкг).
Определение фурадана и его метаболитов в биосредах проводили следующим образом.
При анализе крови цельную кровь собирали в пробирку, смоченную 5 % раствором лимоннокислого натрия. 1 мл цитратной крови помещали в пробирку и приливали 2 мл дистиллированной воды для разрушения эритроцитов, тщательно перемешивали и переливали в делительную воронку емкостью 250 мл. Экстрагировали пробу дважду смесью хлороформа и диэтилового эфира по 8 мл в течение 15 мин на шюттель-аппара-те. После отделения жидкостей нижний слой сливали в круглодонную колбу емкостью 50 мл со шлифом. Экстракт пропускали через слой в 1 см безводного сернокислого натрия, помещенного в воронку. Колбу с объединенным экстрактом подсоединяли к холодильнику и под вакуумом, для создания которого использовали водоструйный насос, при температуре 40°С отгоняли растворитель до объема 0,2—0,3 мл.
Для анализа мочи брали 5 мл из суточного количества мочи. Дважды экстрагировали смесью хлороформа и диэтилового эфира по 8 мл в течение 15 мин на шюттель-аппарате. Эстракт объединяли, высушивая над сернокислым натрием, в колбе емкостью 50 мл и отгоняли под вакуумом до объема 0,2—0,3 мл. Концентрированный экстракт из проб крови и стандартные растворы фурадана и его метаболитов (0,5—20 мкг) при помощи стеклянного капилляра наносили на хроматографическую пластинку «Силуфол». Сосуд, где находился экстракт, тщательно обмывали небольшими порциями ацетона (0,3 мл) и наносили в центр пятна. Пластинку хроматографи-ровали в подвижном растворителе бензол — этил-ацетат в соотношении (13:7) и высушивали на воздухе при комнатной температуре до исчезновения запаха растворителей, затем обрабатывали 15% раствором едкого калия в 60% этанола, через 2—3 мин — раствором п-нитрофенилдиазо-нием.
Исследование экстракта мочи проводили с помощью двумерной хроматографии. На хроматографическую пластинку на расстоянии 15 мм от левого края и 15 мм от нижнего края капилляра с помощью капиллярной пипетки наносили исследуемую пробу. С правой стороны пластин-
ки на расстоянии 15 мм от нижнего края микро-пипетой наносили стандартные растворы фурадана, первого, четвертого и пятого метаболитов. Отделяли пробу от стандарта вертикальной чертой, которая находится на расстоянии 115 мм от левого края пластинки. Пластинку с нанесенными растворами помещали в камеру для хрома-тографирования, куда за 10—15 мин до разгонки наливали смесь растворителей хлороформ — днэтнловый эфир (18:8) для фурадана и первого метаболита, в другую камеру — хлороформ — диэтиловый эфир (25:7) —для фурадана, четвертого и пятого метаболитов. Пластинку ставят левым краем в растворитель так, чтобы она была погружена не более чем на 0,5 см. После того как фронт растворителя поднимется до проведенной черты, пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения растворителя. После того как пластинка высохнет, ее повторно хроматографируют в системе для определения фурадана и 3-оксикар-бофурана гексан — ацетон в соотношении 15:10 для фурадана, З-окси-7-фенола и З-кето-7-фено-ла — бензол — этилацетат (19,5:10,5), повернув на 90° относительно первой разгонки. После того как растворитель поднимется на 10 см от старта, пластинку вынимают и высушивают на воздухе до полного испарения следов растворителя. Пластинку обрабатывают проявляющими реактивами: 15% раствором едкого кали в 60% этаноле, через 2—3 мин — п-нитрофенилдиазонием. При этом на месте локализации препаратов проявляются пятна сиреневого цвета. Применение указанных систем подвижных растворителей позволяет разделить пестициды на хроматограмме.
Количественное определение проводили путем сравнения интенсивности окраски и размеров пятен проб и стандартных растворов. Чувствительность метода 0,5 мкг для фурадана и его метаболитов в анализируемых пробах мочи и крови.
Литература. Оськина В. Н. — Гиг. и сан., 1981, № 9, с. 45—46.
2. Wogn L., Fisher F. M. — J. Agricult. Food Chem., 1975, v. 23, p. 315—316.
Поступила 17.11.81
УДК в13.298:878:74в.22|-074:547.538.Г4|
В. Ф. Новицкий, А. Л. Перцовский
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИКРОКОЛИЧЕСТВ СТИРОЛА В РАСТВОРАХ, ИМИТИРУЮЩИХ ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ
Белорусский НИ санитарно-гигиенический институт, Минск
Материалы, изготовленные из полимерных смол на основе стирола, являются одними из самых дешевых пластмасс и находят широкое применение во многих-отраслях народного хозяйства и в быту. •''>)
Предупредительный санитарный надзор за выделением стирола из бытовых материалов предусматривает допустимую концентрацию мономера (ДКМ) в модельных средах, находившихся как в непосредственном, так и опосредован-
